骨髓基质干细胞-196℃保存的初步研究

目的:探索适合于人骨髓基质干细胞(marrow stromal cells,MSCs)-196℃冷冻保存的条件和方法。方法:体外分离培养人MSCs,以含不同浓度二甲亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)的冻存液和不同浓度的细胞在液氮中保存。3个月后复苏接种培养,观察细胞形态、存活率和贴壁率;通过~3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(~3H-TdR)掺入实验比较细胞分裂增殖能力;~3H-脯氨酸(~3H-Proline)掺入实验检测胶原合成能力;RT-PCR法检测Ⅰ型胶原和骨钙素(osteocalcin,OC)mRNA表达。结果:不同DMSO浓度保存MSCs复苏后的细胞形态和功能有所不同,其中含5%DMSO冻存液组保存效果最差,15%组最佳。15%DMSO冻存液组复苏后MSCs的形态与未冻存组相似,存活率为(86±5)%,贴壁率为(82±3)%。MSCs保持较强的分裂增殖和胶原合成能力,Ⅰ型胶原和骨钙素mRNA表达与5%或10%DMSO冻存液组比较有显著性差异(P<0.05)。冻存MSCs浓度为(5～10)×10~6个/mL组复苏后细胞存活率明显优于(1～2.5)×10~6个/mL组。结论:含15%DMSO的冻存液适合于MSCs长期保存,高浓度组MSCs冻存效果优于低浓度组。     

成骨细胞超低温冻存前后生物学功能变化的研究

目的 观察超低温（液氮,-196 ℃）冻存对幼兔骨髓来源的成骨细胞体外培养的生长特性和生物学功能的影响。方法 自幼兔骨髓获取基质干细胞,体外诱导分化并培养 扩增,部分细胞进行液氮冻存,对冻存前后细胞的形态变化、增殖情况、克隆形成率、碱性磷酸酶（ALP）的合成能力、蛋白质合成能力及体外矿化能力进行对比观察,综合比较低温冻存对细胞功能的影响。结果 冻存复苏细胞的增殖有一定的时间延后性,其大体形态与冻存前基本一致,超微结构略有变化;复苏细胞仍保持典型的成熟成骨细胞的特征,具有较强的合成ALP及蛋白质的能力,两组细胞无统计学差异（P>0.05）;复苏细胞的体外矿化能力无明显变化。结论 超低温保存成骨细胞对其
生物学功能影响甚微,利用复苏细胞进行骨组织工程方面的研究是可行的。     

深低温冻存对牙周膜干细胞膜片增殖和分化能力的影响

目的：研究深低温冻存对牙周膜干细胞膜片增殖和分化能力的影响。方法：将牙周膜干细胞膜片用90％胎牛血清＋10％ DMSO 冻存液冻存3月后复苏,采用甲基噻唑基四唑（MTT）法、von Kossa 染色和油红 O 染色法检测冻存对增殖和分化的影响。结果：冻存牙周膜干细胞膜片与新鲜牙周膜干细胞膜片的增殖率和成骨、成脂分化能力没有明显差异。结论：牙周膜干细胞膜片经深低温保存后可继续保持冻存前原有的增殖能力和多向分化能力。     

兔骨髓间充质干细胞的体外分离培养、低温冻存及复苏研究

目的寻求体外培养、冻存、复苏兔骨髓间充质十细胞（bone marrow mesenehymal stein cell,BMMSC）的方法,观察体外培养BMMSC的形态及生长特性,研究低温冻存对兔BMMSC生长的影响,为兔BMMSC进一步的实验研究打下基础。方法取新西兰白兔胫骨穿刺获取骨髓液,密度梯度离心法联合贴壁培养法体外纯化扩增,并行液氮冻存3个月。通过倒置显微镜观察其生物学表现,并进行细胞增殖活性分析．绘制生长曲线。结果兔BMMSC为贴壁生长,形态为均匀成纤维细胞样,增殖能力强,传代及冻存后细胞仍然保持其生物学特性。结论兔BMMSC可采取密度梯度离心法联合贴壁培养法进行较好地纯化和扩增,并町长期保存于液氮中,在一定的条件下可复苏存活,冻存不影响细胞的增殖能力。     

正常人颌骨组织冻存后活性评估及组织库的建立

目的体外实验评估正常人颌骨冻存后的生物活性变化,初步建立颌骨组织库,探讨骨组织活性冻存后用于骨缺损修复的可能性。方法选择15~80岁的捐献者(于上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔外科行阻生牙拔除术等牙槽手术的患者),术中无菌条件下用超声骨刀取骨。骨块处理后,置于含10%二甲基亚砜（dimethyl Sulphoxide,DMSO）的冻存保护液中,无菌独立包装,行慢速梯度降温至-80℃。登记必要信息后,保存入-80℃深低温冰箱,建立骨组织库。通过检测不同冻存时限（0、1、6、12个月）骨块来源的成骨系细胞爬出时间及集落形成率、形态变化、增殖活力、碱性磷酸酶合成能力、体外矿化能力、成骨相关基因表达能力、凋亡情况、染色体变异情况、细胞衰老情况等,研究低温冻存对骨组织生物活性的影响。使用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果不同冻存时间骨块组织块培养法均能观察到细胞集落形成,形态无明显变化;增殖活力、碱性磷酸酶合成能力、体外矿化能力、成骨相关基因表达能力、染色体变异情况、细胞衰老等与新鲜对照组比较无显著差异（P>0.05）。结论低温冻存对人颌骨组织的体外生物学功能影响甚微,冻存颌骨组织库用于自体骨缺损修复或组织工程骨构建具有可行性。     

荧光活性染料(CM-Dil)对人骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

目的:体外分离、培养人骨髓间充质干细胞(human bone marrow derived mesenchymal stem cells,hBMSCs),探讨应用不同浓度氯甲基苯甲酰氨荧光染料(CM-Dil)对hBMSCs增殖力的影响。方法:采用Ficoll梯密度离心法分离、培养hBMSCs,并促进其分别向成骨细胞、脂肪细胞分化;应用不同浓度CM-Dil分别标记第3代hBMSCs,观察不同浓度标记下细胞的荧光强度、标记效率、活性和增殖能力。结果:采用Ficoll梯密度离心法获得的hBMSCs,成骨、成脂分化染色阳性。不同浓度CM-Dil(5、10、20、30μmol/L)在30 min内均可成功标记hBMSCs,24 h后观察标记效率均达到98%以上(P>0.05)。直到20μmol/L的标记浓度对细胞的活力、增殖能力仍没有影响(P>0.05)。结论:CM-Dil是一种简便、安全的标记骨髓间充质干细胞的方法。     

不同条件下细胞冻存效果比较

目的 :通过比较不同条件下冻存细胞复苏后的贴壁率 ,提高细胞冻存复苏的存活率。方法 :在细胞冻存时 ,同一种细胞设定不同的冻存条件 ,复苏后观察细胞贴壁率。结果 :在三种不同条件下 ,血清和冻存程序的不同对细胞有较大影响 ;DMSO的浓度对细胞影响较小 ;结论 :适当提高血清浓度 ,严格按照规定的冻存程序冻存可以提高细胞存活率     

柚皮苷对犬骨髓基质细胞体外增殖及成骨分化的影响

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)在柚皮苷诱导下定向成骨及成骨分化能力。方法:抽取犬骨髓,贴壁法体外培养,流式细胞仪鉴定,加入不同浓度柚皮苷(1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9 mol/L)诱导,以CCK-8检测药物毒性,定量检测碱性磷酸酶、von Kossa检测钙结节形成。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:经流式细胞仪检测,CD34、CD45低表达、CD90高表达分别为0.126%、0.075%和95.4%;柚皮苷浓度在10-6、10-7 mol/L时,能明显促进细胞增殖;经柚皮苷诱导后,碱性磷酸酶含量显著提高,其中,浓度为10-6 mol/L时,ALP相对值最高(P<0.05);von Kossa钙结节检测呈阳性。结论:犬骨髓基质细胞在柚皮苷诱导下能分化为成骨细胞。柚皮苷浓度为10-6 mol/L时,能明显促进骨髓基质细胞的增殖及分化。     

雌激素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的： 应用17 β-雌二醇（E₂）作用于大鼠骨髓间充质干细胞,研究不同浓度雌激素对细胞增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法：原代培养大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone mesenchymal stem cells,rBMSCs）,加入0、10^-9和10^-7 mol/L不同浓度E₂,CCK-8及Annexin V/PI双染法检测E₂对细胞增殖与凋亡的影响。分别于成骨诱导后第1、3、5、7、11、14和21天,采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性测定、ALP和钙结节染色,以及实时定量PCR等方法检测不同浓度E₂对细胞成骨向分化能力的影响。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果：E₂对大鼠骨髓间充质干细胞增殖与凋亡未见明显影响,并能显著提高干细胞的成骨分化能力,浓度为10^-9 mol/L时促进作用最为明显。与对照组相比,加药组细胞ALP活性升高,钙结节形成增多,成骨相关基因（RUNX2、ALP、COL I、OCN）表达显著升高。结论：17 β-雌二醇能促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化,体外浓度为10^-9 mol/L时,作用最为显著。     

雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响

目的：研究雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响，探讨其对成骨的影响。方法：体外培养4周龄雌性大鼠骨髓基质细胞，以不同浓度雌激素作用于成骨细胞，用噻唑蓝法测定细胞增殖情况；对硝基酚磷酸酯法测定细胞碱性磷酸酶活性；检测培养液中羟脯氨酸含量，了解细胞Ⅰ型胶原的分泌情况；通过矿化结节计数反映细胞的矿化能力。结果：雌激素促进成骨细胞增殖，增加碱性磷酸酶活性；提高培养液中羟脯氨酸含量，峰值浓度为10^-7mol／1，与对照组比较有统计学意义（P〈0．05）；雌激素显著提高细胞的矿化能力，10^-7mol／L浓度作用最显著（＋45．4％，P〈0．05）。结论：雌激素促进成骨细胞增殖和分化，提高其矿化能力，从而刺激骨形成。     

Evidence of the validity of a model of determinants of quality of restorative dental care

A model describing the relationship between self-reported quality of restorative dentistry and dentist characteristics for 119 Montana general dentists is presented. The best predictors formed a significant model explaining 22% of the variance of the quality measure. Results are contrasted with a previous estimation of the model for 102 Washington general practitioners. Evidence for the external validity of the model is presented.     

口底癌34例临床分析

目的探讨口底癌的临床特性、治疗方法及预后。方法对我院自1992—2002年住院治疗的34例口底癌患者进行回顾性分析。结果34例口底癌患者中,男28例(82.4%),女6例(17.6%),男女比为4.7∶1,平均发病年龄58岁。发病部位:前口底22例(64.7%),后口底12例(35.3%)。淋巴结转移率41.2%。单纯手术组、化疗加手术组、放疗加手术组、化疗加手术加放疗组的5年生存率分别为45.5%、60.0%、50.0%、62.5%。结论口底癌以中老年患者好发,男性居多。易发生淋巴结转移,综合疗法疗效较好。     

平阳霉素对血管内皮细胞急性损伤后酶活性变化的实验研究

目的：探讨平阳霉素损伤血管内皮细胞的机制,为临床应用提供组织学依据。方法：选用成年Wistar大白鼠42只（其中6只为正常对照）,经肠系膜静脉分别注入平骒霉素（24只）或鱼肝油酸钠（12只）后,分别于注药后0．5,1,2,4,8,24h,切取肝脏组织,通过酶组化染色法测定肝窦内皮细胞的5’－核苷酸酶,肝细胞的琥珀酸脱氢酶（SDH）及乳酸脱氢酶（LDH）活性,结果：注入药液后,肝窦内皮细胞的5’－核苷酸酶,肝细胞的SDH和LDH活性随时间逐渐下降,其中平阳霉素组下降较轻微,结论：平阳霉素和鱼肝油酸钠都可对血管内皮细胞产生损伤,损伤的性质一样,均为非特异性,但平阳霉素损伤程度轻微,而鱼肝油酸钠严重。     

不同剂型玻璃离子水门汀溶解性比较研究

目的:研究、比较不同剂型玻璃离子水门汀的溶解性和表面微观形态改变,为临床使用提供依据.方法:将3M树脂加强型玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(水粉剂型)及GC玻璃离子水门汀(双糊剂型)分别在人工唾液中浸泡30 d,冷热循环15000次,烘干测重,比较前后质量变化,计算溶解率,并用扫描电镜观察表面微观改变.结果:不同剂型的玻璃离子水门汀溶解率由高到低分别为3M树脂加强型玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(双糊剂型).3种玻璃离子水门汀经浸泡溶解后,SEM扫描表面微观形态可观察到GE玻璃离子水门汀(双糊剂型)表面形态改变较少,其他2组玻璃离子水门汀表面微观改变较多.结论:双糊剂型玻璃离子水门汀理化性能及溶解率均低于传统水粉剂型,是未来临床修复治疗的的良好选择.     

Results of treatment of cancer of the lip

A study was carried out in Sancti Spiritus Province in the 1984-1986 period about the results of the treatment of lip cancer. Male patients were the most affected by lip cancer (CIE 8-140) in our series. The place of the tumor was predominantly the lower lip (p less than or equal to 0.001). Surgical treatment was used in 96.8% of the cases and the cuneiform (wedge-shaped) exeresis was the most commonly used method in the early stages of the disease (T1 y T2). Casta?ón keloplasty was the reconstructive procedure used in 18.7% of the patients. Local sepsis was present in 31.2% of the patients undergoing surgery, occurring most frequently in upper lip tumors.