大鼠肺缺血急性期肺组织microRNA的表达变化

目的检测大鼠缺血肺组织中microRNA（miRNA）表达变化，寻找与肺缺血相关的miRNA。方法将wistar大鼠随机分为假手术组和缺血组，每组6只。缺血组参照改良Eppinger方法建立大鼠肺缺血模型（缺血1h）。建模1h后取材提取RNA，应用miRNA芯片技术检测两组大鼠肺组织中miRNA的表达。结果同假手术组相比，缺血肺组织中有4个miRNA表达上调≥2倍，21个miRNA表达下iN≥2倍。结论在肺缺血过程中，miRNA的表达发生明显变化，可能对缺血肺组织中细胞凋亡起着重要的调节作用。     

大鼠心力衰竭细胞 microRNA 表达谱及生物信息学分析

目的：观察大鼠心力衰竭细胞中microRNA （ miRNA）表达变化,利用生物信息学分析技术探索差异miRNA靶基因的功能。方法18只成年雄性SD大鼠,体质量200～220g,随机数字表法随机分为两组：正常对照组（ CON组）和心力衰竭组（ HF组）。 HF组制备阿霉素致心力衰竭模型, CON组注射等量生理盐水。提取大鼠心脏, Largendorff逆行灌注法分离心室肌细胞,提取总RNA行miRNA表达谱检测,筛选两组差异表达的miRNA,荧光定量RT-PCR 技术验证结果, Targetscan、 miRanda软件预测差异表达miRNA的靶基因,并对靶基因行生物信息学分析。结果芯片检测结果显示,与CON组相比, HF组共有37个miRNA表达发生显著改变,其中22个miRNA上调,15个miRNA下调（均P＜0.01, FDR＜0.05）。荧光定量RT-PCR检测miR-133b-5p （t ＝14.56, P＜0.1）、 miR-6216（t＝9.32, P＜0.1）、 let-7e-5p （ t＝13.92, P＜0.1）表达水平,变化趋势与芯片结果一致。生物信息学分析显示,差异表达miRNA调控的靶基因显著富集于31个基因组（均P＜0.01, FDR＜0.05）和12条信号通路（均P＜0.05, FDR＜0.05）,其中泛素蛋白酶体系统、 MAPK信号通路、 Toll样受体信号通路富集程度较高。结论阿霉素诱导的心力衰竭模型大鼠心肌细胞中miRNA表达谱发生显著改变,这些差异表达miRNA可能通过调控靶基因功能参与心力衰竭的病理生理过程。     

氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中microRNA表达谱分析

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中micro-RNA(miRNA)表达谱的变化,对差异miRNA调控的靶基因进行初步预测。方法:建立体外ox-LDL诱导HUVECs凋亡模型,采用miRNA芯片技术筛选表达变化显著的miRNA,实时荧光定量PCR验证结果,并对差异miRNA调控的靶基因进行生物信息学分析。结果:miRNA芯片检测发现,在ox-LDL诱导HUVECs凋亡过程中有4个表达上调和11个表达下调的miRNA。实时荧光定量PCR对其中2个上调(hsa-miR-142-3p、hsa-miR-365)和2个下调(hsa-miR-590-5p、hsa-miR-33a)miRNA的验证结果与芯片检测所示有较好的一致性。生物信息学分析发现,差异miRNA调控的靶基因与细胞增殖、凋亡、代谢及原癌基因表达等生物学功能相关。结论:经ox-LDL诱导凋亡的HUVECs其miRNA表达谱发生明显改变,提示miRNA可能参与内皮细胞功能障碍和动脉粥样硬化的发生。     

NF-κB与基质金属蛋白酶在骨髓单个核细胞心肌移植后的变化

背景:骨髓干细胞能够修复受损心肌,改善不利的心室重构及恶化的心功能,但细胞移植后对梗死心室重构影响的分子机制仍不清楚.目的:观察骨髓单个核细胞心肌移植后,心肌组织NF-κB、基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的变化.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-07/2007-05在解放军总医院心血管外科实验动物中心和解放军军事医学科学院病原微生物生物安全国家重点实验室完成.材料:成年健康雄性杂种犬24只,随机分为急性心肌梗死对照组、急性心肌梗死移植组、陈旧心肌梗死对照组、陈旧心肌梗死移植组,6只/组.方法:急性心肌梗死对照组、急性心肌梗死移植组在冠状动脉左前降支主干结扎1h,观察缺血梗死区仍然呈暗红色,确认急性心肌梗死模型建立成功.陈旧心肌梗死对照组、陈旧心肌梗死移植组在移植前行超声心动图检查,证实左室前壁和心尖部可见节段性室壁运动异常,确认陈旧心肌梗死模型建立成功.Ficoll分离法获得犬自体骨髓单个核细胞悬液,急性心肌梗死移植组在造模后1h于梗死区及梗死边缘区分多点注射细胞悬液,每点注射0.5 mL,(1～2)×107个细胞/mL;陈旧心肌梗死移植组于造模后4周开胸确认梗死区,同法行细胞移植.主要观察指标:RT-PCR法检测心肌组织基质金属蛋白酶及其抑制因子mRNA的表达,Western免疫印迹法检测心肌组织NF-κB 的表达.结果:移植后6周与相应对照组比较,急性心肌梗死移植组、陈旧心肌梗死移植组的梗死区、梗死周围区基质金属蛋白酶2,9mRNA及NF-κB 表达均显著降低(P<0.01),基质金属蛋白酶抑制因子1,2 mRNA表达均显著升高(P<0.01).结论:犬自体骨髓单个核细胞心肌移植可能通过抑制NF-κB活化,导致基质金属蛋白酶mRNA表达减少及其抑制因子mRNA表达增加,从而抑制梗死后心室重构过程.     

辛伐他汀对大鼠急性心肌梗死心肌细胞凋亡的实验研究

目的:观察辛伐他汀预处理对大鼠急性心肌梗死后心肌细胞凋亡的影响。方法:30只大鼠随机分为三组。假手术组,心肌梗死组,辛伐他汀组(给予40 mg/kg灌胃),每组10只。所有动物均灌胃7 d,1次/d。第7 d,假手术组只开胸不结扎;心肌梗死组和辛伐他汀组结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型。在造模型24 h后,处死动物。用TUNEL法检测心肌组织中凋亡心肌细胞,生化法检测血清肌酸激酶同工酶活性和血脂水平。结果:辛伐他汀组较心肌梗死组凋亡细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。辛伐他汀组较心肌梗死组显著降低血清肌酸激酶同工酶活性,差异有统计学意义(P<0.01)。血脂水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:辛伐他汀具有保护心肌,减少急性缺血对心肌的损伤和心肌梗死后心肌细胞凋亡等作用,本研究为拓宽他汀类药物临床应用范围提供了实验依据。     

大鼠急性心肌梗死后心肌组织中miR-214的表达变化

目的观察大鼠心肌梗死后心室重塑过程中心肌组织中miR-214的表达变化。方法 10只雄性SD大鼠,通过前降支动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,模型制备成功后随机分为心肌梗死后14 d组、28 d组,另设对照组,每组5只动物。抽提梗死周边区心肌组织的RNA及miRNA,应用荧光定量PCR法检测MHC-α、MHC-βmRNA及miR-214的表达。结果心肌组织中MHC-αmRNA表达随着心肌梗死时间延长而逐渐降低。与假手术组比较,心肌梗死术后14 d组MHC-α的表达下降46%(0.54±0.06 vs.1.00±0.09,P<0.01),心肌梗死术后28 d组MHC-α的表达下降63%(P<0.01)。心肌组织中MHC-βmRNA表达随着心肌梗死时间延长而逐渐增加。与假手术组比较,心肌梗死术后14 d组MHC-β的表达增加2倍(P<0.01),心肌梗死术后28 d组MHC-α的表达增加3.22倍(P<0.01)。心肌梗死术后14 d组和28 d组梗死周边区心肌组织中miR-214的表达逐渐增加。与假手术组相比,心肌梗死术后14 d组miR-214的表达增加33%(P<0.01),心肌梗死术后28 d组miR-214的表达增加88%(P<0.01)。结论大鼠心肌梗死后心室重塑过程中心肌组织中miR-214的表达上调,miR-214可能参与调控了心肌梗死后心室重塑。     

人脐带血干细胞移植防治兔急性心肌缺血的实验研究

目的:利用人脐带血干细胞(humanumbilicalcordbloodstemcells,HUCBSC)移植治疗兔急性心肌缺血,探索防治缺血性心脏病的新方法。方法:新西兰白兔40只,雌雄不拘,随机等分为细胞移植组和对照组。两组均结扎冠状动脉左前降支中1/2,复制心肌梗死模型。缺血60min后将108/mlHUCBSC0.3ml注入细胞移植组兔的缺血区心肌组织;对照组兔缺血区心肌组织中注射等体积的人静脉血。3周后观察两组心功能、心肌梗死面积及缺血区心肌内血管计数。用Northern印迹和ELISA法观察缺血区心肌组织中血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblasticgrowthfactor,b-FGF)基因的转录和表达。结果:细胞移植组的左心室收缩压(leftventricularsystolicpressure,LVSP)和左心室最大变化速率(±LVdp/dtmax)均显著高于对照组(P<0.01);其左心室舒张末期压(leftventricularenddiastolicpressure,LVEDP)显著低于对照组(P<0.01);其心肌梗死面积显著小于对照组(P<0.01);缺血区心肌的血管计数显著多于对照组(P<0.01)。Northern印迹和ELISA试验显示,细胞移植组VEGF和b-FGF基因的转录和表达均显著强于对照组(P<0.01)。结论:HUCBSC移植能明显改善兔急性心肌缺血的心功能,促进缺血区心肌细胞和血管的再生,从而显著减小心肌梗死的面积,有望成为防治缺血性心脏病的一种新的治疗策略。     

大鼠背根神经节持续压迫后miRNA差异表达谱的分析及功能研究

摘要 目的：对大鼠背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）持续压迫后所致神经病理性疼痛（neuropathic pain, NP）模型的DRG组织进行miRNA测序,应用生物信息学技术分析差异表达的miRNA及其靶基因在疾病中的定位与功能。 方法：采用随机分组法将大鼠分为2组,每组12只,分别为假手术组、CCD背根神经节持续压迫（chronic compression of the dorsal root ganglion, CCD）模型组,术后进行行为学检测。确定痛觉敏感的天数后重复造模,取材后进行miRNA转录组测序。利用生物信息学手段筛选具有显著性差异的miRNA,预测相关靶基因并对其GO功能及KEGG富集情况进行分析,使用在线数据库对miRNA与靶基因之间的属性关系建立miRNA-靶基因的调控网络。最后,通过qPCR验证差异最为显著的4条miRNA在CCD模型DRG组织中的表达情况。 结果：CCD造模7天后,大鼠痛觉最为敏感。重复造模,在第7天取材并进行miRNA转录组测序。将差异表达的miRNA以|log2（fold change）|>1且P<0.05为阈值,筛选符合要求的miRNA,与假手术组相比,有57种miRNA在CCD模型组表达上调,有17种miRNA在CCD模型组表达下调。差异表达的miRNA对应的靶基因主要富集在外泌体、细胞质、细胞膜、线粒体、内质网等结构,在细胞固有免疫、炎症信号传导、氧化应激等生物学过程中发挥重要作用,在PI3K-AKT、MAPK、JAK-STAT、钙信号等通路上均存在富集。经实验验证,miR-21-3p、miR-675-5p、miR-487b-5p、miR-3585-3p的表达与测序结果一致。 结论：在大鼠背根神经节慢性压迫所致NP模型的DRG组织中,异常表达的miRNA及其富集的相关信号通路可为NP诊断和治疗的新靶点提供新的思路。     

心肌梗死后睫状神经营养因子表达的动态过程与迷走神经支配及重构

目的:探讨睫状神经营养因子在心肌梗死后的表达是否具有动态过程,及其在迷走神经重构中的作用。方法:①实验于2003-08/2004-02在哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室完成。选用健康清洁级Wistar雄性大鼠56只,分为心肌梗死后3,7,30d取材的3个心肌梗死组及相应时间点取材的3个假手术组。心肌梗死模型的制作:将大鼠麻醉后,于左心耳与肺动脉圆锥间环绕左冠状动脉主干标志处结扎冠状动脉。假手术组为穿线后不结扎冠状动脉。②从各组大鼠梗死中心、梗死周边、室间隔和右室取材,通过原位杂交及免疫组化方法检测睫状神经营养因子的mRNA及其蛋白的表达、抗囊状乙酰胆碱转运体的免疫组化方法检测迷走神经支配,并通过图像分析测定心肌中睫状神经营养因子的阳性染色密度及迷走神经支配密度。③组间比较应用t检验,睫状神经营养因子与迷走神经支配的相关性分析采用线性相关分析。结果:术后41只大鼠存活。心肌梗死后3,7,30d组分别为7和8及8只,其余18只大鼠为各假手术组(各组均为6只)。①心肌中睫状神经营养因子mRNA的表达:假手术组中未检测到睫状神经营养因子mRNA的表达。心肌梗死后7和30d组梗死周边明显高于心肌梗死后3d组(t=2.986,3.025,P<0.01);心肌梗死后30d组室间隔明显高于心肌梗死后3d组(t=3.126,P<0.01)。②心肌中睫状神经营养因子蛋白的表达:假手术组中未检测到睫状神经营养因子蛋白的表达。仅在心肌梗后30d组的梗死周边和室间隔心肌中检测到睫状神经营养因子蛋白的表达[(9.54±2.36)%,(11.25±4.60)%]。③心肌中迷走神经支配密度:心肌梗死组中梗死中心区在心肌梗死后不同时间为0。心肌梗死后30d组梗死周边明显高于心肌梗死后3和7d组及相应假手术组(t=2.452～3.186,P<0.05～0.01)。心肌梗死后室间隔和右心室7和30d组明显高于相应假手术组(t=2.327～3.467,P<0.05～0.01);心肌梗死后30d组室间隔和右心室明显高于心肌梗死后3和7d组(t=2.506～3.332,P<0.05～0.01)。④相关性:心肌梗死后7d组梗死周边心肌细胞中睫状神经营养因子mRNA的表达与迷走神经支配呈显著正相关(r=0.51,P<0.05),心肌梗死后30d组室间隔心肌细胞中睫状神经营养因子mRNA的表达与迷走神经支配也呈显著正相关(r=0.65,P<0.05)。结论:①睫状神经营养因子可能主要在心肌梗死等病理状态下发挥一定的作用。②睫状神经营养因子可能在心肌局部发挥其神经营养作用进而参与心肌梗死后的神经重构及神经内分泌的调节过程。     

应用微孔板芯片分析机采血小板常温保存过程中凋亡相关miRNA的表达改变

目的分析机采血小板在常温保存过程中凋亡相关miRNA的表达改变。方法应用miRNA微孔板芯片技术研究常温保存机采血小板在不同保存时间凋亡相关miRNA的差异表达谱,采用生物信息学软件预测发生差异表达的miRNA可能的靶基因及相关生物学功能。结果与新鲜血小板相比,常温保存7 d的血小板,有7种miRNA发生了显著变化。其中miR-16、Let-7b、miR-26和Let-7c的表达上调,miR-7、miR-145和miR-197的表达下调。结论筛选出的差异表达miRNA可能参与了血小板的保存损伤过程。     

利用芯片技术筛选肝癌早期复发密切相关的microRNA

目的:应用miRNA芯片技术筛选肝癌早期复发密切相关的miRNA,为进一步深入探讨miRNA在介导肝癌高侵袭性及术后早期复发中的作用打下基础。方法:从本院肝癌标本库中选取10例肝癌患者进入本研究,其中早期复发组(术后第1年出现肝内复发病灶)和非早期复发组(术后2年以上未出现肝癌复发或转移)各5例,抽提总RNA并分离出小分子RNA进行Cy3荧光标记,将标记的小分子RNA与miRNA芯片进行杂交反应,分析差异表达的miRNA。结果:相对于非早期复发组,早期复发组肿瘤标本中有miR-602、miR-451、miR-144和miR-486-5p等4个miRNAs表达显著上调(上调倍数>2.0);有miR-551b、miR-96和miR-502-3p等3个miRNAs表达显著下调(下调倍数<0.5)。结论:筛选得到肝癌早期复发的miRNA差异表达谱,其可能与肝癌的早期复发发生发展有关。     

A simple procedure for routine RNA extraction and miRNA array analyses from a single thyroid in vivo fine needle aspirate

Abstract

Context. microRNA (miRNA) expression profiling and classification of tissue obtained from fine-needle aspirates (FNA) could be a major improvement of the preoperative diagnosis of thyroid nodules. Objective. Before this can be clinically implemented, a robust and non-toxic method for obtaining sufficient quantity and quality of RNA from single in vivo FNA has to be established. RNAlater is a non-toxic RNA-stabilizing agent. However, due to the high density of RNAlater, pelleting of the tissue samples is difficult, and results in low recovery of RNA that is insufficient for subsequent miRNA array expression analysis. We therefore developed a simple centrifugation method for capturing tissue stored in RNAlater on a 0.45-μm filter. Design. FNA from 24 patients with a solitary cold thyroid nodule was stored in Trizol, liquid nitrogen, or RNAlater. The tissue stored in RNAlater was either pelleted by centrifugation or captured on the 0.45-μm filters. RNA was extracted using the Trizol method. To validate results, FNA from additional 30 patients were analyzed based on the modified RNAlater protocol. Main outcome. Capturing FNA tissue samples on the filters increased the RNA yield 10 fold and maintained RNA purity, permitting miRNA array expression profiling and allowing comparable levels of known miRNA-clusters regardless of preservation technique. Results were confirmed in an additional 30 patients. Conclusion. The modified RNAlater protocol is well suited for isolating RNA from single thyroid in vivo FNA in a clinical setting. Furthermore this permits shipping of FNA samples at room temperature from peripheral centers to a centralized array core facility.     

实时定量PCR检测白血病相关miRNA方法的建立

本研究建立实时定量PCR（RQ-PCR）技术检测白血病相关miRNA的方法,探讨此方法在定量检测miRNA中的应用价值。通过提取82例慢性淋巴细胞白血病（CLL）、70例急性白血病（AL）患者骨髓或外周血标本总RNA,以cDNA为模板进行10倍梯度系列稀释,分别作miRNA及内参U6RNA的标准曲线并计算扩增效率;运用ABF7300定量PCR仪进行定量检测;采用SYBRGreen荧光染料法、以U6RNA作为内参照、循环阈值（ct）比较法进行miRNA表达相对定量分析,以检测CLL患者miR-15a、miR-16-1、miR-29b、miR-181b及AL患者miR．128．1、miR-223、let-7b、miR-155、miR-181a的表达。方法学考核参数包括特异性、线性范围、精密度和重复性。结果表明：RQ—PCR检测miRNA仅需10—50ng总RNA样本,检测下限为0．05ng,miRNA及u6的Ct值均在15—30之间,10倍系列稀释法制作的标准曲线呈现良好的线性关系（R^2〉0．980）,扩增效率均在0．9以上,溶解曲线均为单峰,PCR产物经琼脂糖电泳均显示较亮的目的条带,批内差和批间差分别小于4．8％和6．3％。结论：RQ-PCR技术检测白血病相关miRNA敏感、快速,高通量,节约成本,定量范围宽,极大的方便了对miRNA的定量研究。     

p53基因信号通路的新成员miRNA

p53基因是迄今发现的与人类肿瘤关系较为紧密的基因,几乎在所有的人类肿瘤中均存在p53信号通路的异常。野生型p53基因是肿瘤抑制基因,其功能主要在转录调节方面。微小RNA（microRNA,miRNA）是生物体内重要的非编码小RNA,通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控,导致mRNA的降解或翻译抑制。新近研究发现miRNA成为p53基因活化后下调某些蛋白表达的重要中间机制。本文就miRNA生物合成、功能及其在p53基因信号通路中的研究进展作一综述。     

微小RNA在肝癌耐药Bel-7402/5-FU细胞中的表达分析

目的:通过对比肝癌亲本Bel-7402细胞及其5-FU耐药Bel-7402/5-FU细胞中微小RNA(microRNA, miRNA)的表达差异,探讨miRNA在肝癌细胞多药耐药中的作用。方法:体外培养Bel-7402细胞及其耐药株Bel-7402/5-FU细胞,MTT法检测Bel-7402/5-FU细胞对不同化疗药物的敏感性,miRNA表达芯片检测Bel-7402细胞和Bel-7402/5-FU细胞miRNA的差异表达,qPCR验证差异表达的miRNA。结果:Bel-7402/5-FU细胞对不同的化疗药物均具有耐药性;miRNA芯片检测结果发现,耐药株Bel-7402/5-FU细胞与亲本Bel-7402细胞中,差异表达的miRNA有29个,其中上调14个,下调15个;qPCR验证结果发现,和亲本Bel-7402细胞比较,耐药株Bel-7402/5-FU细胞中miR-10a-5p、-371a-3p、-371a-5p、-372,-373-3p、-146-5p、-6723-5p显著下调,miR-4497、-3148显著上调。结论:肝癌多药耐药的发生与miRNA表达异常有关。     

Intratumoral heterogeneity of microRNA expression in breast cancer

Profiling studies have identified specific microRNA (miRNA) signatures in malignant tumors including breast cancer. Our aim was to assess intratumoral heterogeneity in miRNA expression levels within primary breast cancers and between axillary lymph node metastases from the same patient. Specimens of 16 primary breast cancers were sampled in 8-10 distinct locations including the peripheral, intermediate, and central tumor zones, as well as two to five axillary lymph node metastases (n = 9). Total RNA was extracted from 132 paraffin-embedded samples, and the expression of miR-10b, miR-210, miR-31, and miR-335 was assessed as well as the reproducibility of RNA extraction and miRNA analysis by quantitative RT-PCR. Considerable intratumoral heterogeneity existed for all four miRNAs within primary breast cancers (CV 40%). No significant differences within (CV 34%) or between different tumor zones (CV 33%) were found. A similar variation in miRNA expression was observed between corresponding lymph node metastases (mean CV 40%). In comparison, the variation among different patients showed a CV of 80% for primary tumors and 103% for lymph node metastases. Both miRNA extraction procedures and quantitative RT-PCR showed high reproducibility (CV ≤ 2%). Thus, the intratumoral heterogeneity of miRNA expression in breast cancers can lead to significant sampling bias. Assessment of breast cancer miRNA profiles may require sampling at several different tumor locations and of several tumor-involved lymph nodes when deriving miRNA expression profiles of metastases.     

小RNA在血液肿瘤研究中应用的新进展

小RNA包括siRNA和miRNA两种，前者是伴随着RNAi现象发现的，是对外源基因剪切加工形成的，是生物维持自身基因组稳定性的一种机制，而miRNA是基因组中固有的，是在转录后水平调节基因表达的重要机制。小RNA的作用方式有两种：介导目标RNA降解和抑制蛋白质翻译。前者要求小RNA与目标RNA精确互补，而后者只要求部分互补，采取何种机制取决于互补程度而不是其来源。RNAi作为下调基因表达的手段，在功能基因组学中已有广泛的应用。对血液肿瘤发病相关基因，尤其对染色体易位造成的相关融合基因、凋亡相关基因及多药耐药基因的干扰研究表明，该技术不但是研究机制的有力手段，而且具有临床应用前景。对microRNA的研究发现，它在多种血液肿瘤如多种淋巴瘤和白血病中存在表达的变化，并与多种癌基因相关，提示它广泛参与血液肿瘤的发病机制。本文就RNA干扰和小RNA的发现和作用，以及小RNA在血液肿瘤研究中的应用作一综述。     

Nonisotopic detection of microRNA using digoxigenin labeled RNA probes

MicroRNAs (miRNAs) are an important class of endogenously derived, small approximately 22 nucleotide noncoding regulatory RNAs that have recently become implicated in development, cell regulation and cancers of various tissues. Here we report a nonisotopic Northern analysis method for miRNA detection using 3'-digoxigenin (DIG)-labeled RNA oligo probes. Northern blot analysis was performed using miRNA or total RNA fractions extracted from human leukemic cell lines, and blots were hybridized with either 32P- or DIG-labeled RNA probe for miR-181, miR-155 or miR-16. A labeled probe for U6 small nuclear RNA served as an internal control. The use of DIG-labeled RNA probes was equally sensitive compared to 32P-labeled probes in detecting miRNA quantities as low as 50 ng. The ability to use nonisotopic methods and yet obtain sensitive and reliable results offers an advantage to investigators who prefer to avoid isotopes.     

miRNA在造血调控和骨髓增殖性肿瘤中作用的研究进展

microRNA(miRNA)是一类广泛存在于各种真核生物中大小约为19-25个碱基的单链非编码小分子RNA,miRNA在转录后水平通过促进靶mRNAs的降解或抑制其翻译过程而发挥负调控的作用.已有研究表明,面RNA能参与造血调控,进而与血液系统疾病的发生存在密切的关系.本文就近年来miRNA在血液细胞分化调控中的作用及其与骨髓增殖性肿瘤的发生、发展关系,诸如miRNA与淋巴细胞生成,miRNA与红细胞生成,miRNA与巨核细胞形成,miRNA与粒细胞形成,miRNA与BCL-ABL阳性的骨髓增殖性肿瘤-慢性髓系白血病,miRNA与BCR-ABL阴性的MPN(PV.IMF,ET)等相关研究作一综述.