夏枯草提取物对缺氧/复氧诱导心肌细胞氧化应激损伤保护作用及抗凋亡的机制

目的:观察不同浓度的夏枯草提取物(Prunellae Spica extract,PSE)对心肌细胞H9c2缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R模型。实验分为对照组、H/R组、H/R+PSE 20μg/mL组、H/R+PSE 40μg/mL组和H/R+PSE 80μg/mL组。采用CCK-8法检测H9c2心肌细胞存活率。检测天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、磷酸肌酸激酶(creatine phosphate kinase,CPK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,H/R组H9c2细胞的存活率显著降低(P<0.05),凋亡率显著增加,AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平显著增加,SOD水平显著降低(均P<0.05)。与H/R组相比,PSE能够显著促进细胞存活,抑制细胞凋亡,降低AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平,提高SOD水平(均P<0.05),并呈浓度依赖性。蛋白质印迹法检测显示:与对照组相比,H/R组H9c2细胞Bax和cleavedcaspase-3蛋白的表达显著增加(均P<0.05),Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达显著降低(均P<0.05);与H/R组相比,PSE能够显著抑制Bax和cleaved-caspase-3蛋白的表达(均P<0.05),促进Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达(均P<0.05)。结论:PSE对H9c2心肌细胞的H/R损伤具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤的调节作用

目的 观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)的活性与靶基因表达的变化,探讨其对体外培养的心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia- reoxygenation,H/R)损伤的调节作用.方法 取SD新生大鼠(1～3日龄)分离培养心肌细胞;在培养的第3天将心肌细胞随机分为3组(每组重复6 次):正常对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、甲基乙二酰基甘氨酸组(DMOG+H/R组);建立缺氧/复氧损伤模型,以脯氨酸羟化酶的抑制剂DMOG进行干预;观察各组心肌细胞的搏动频率;应用酶免疫法检测各组心肌细胞培养上清中的肌钙蛋白I(cTnI)含量;采用RT-PCR法检测各组HIF-1α及下游因子血红素氧合酶-1(HO-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)mRNA水平.结果 与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组心肌细胞的搏动频率均明显减少(P﹤0.01),而DMOG+ H/R组心肌细胞的搏动频率又较H/R组明显升高(P﹤0.01);与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组的cTnI含量明显增高(P﹤0.01),且HIF-1α、HO-1、VEGF、GLUT-1 mRNA水平亦明显增高(P﹤0.01或P﹤0.05);与H/R组相比,DMOG+H/R组心肌细胞HIF-1α、HO-1、VEGF、GLUT-1 mRNA水平明显增高,而cTnI含量则明显降低(P﹤0.05).结论 HIF-1的稳定表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用.     

铁死亡抑制剂通过保护膜铁转运蛋白减轻脓毒症相关急性肾损伤

目的 利用脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）构建脓毒症体内外模型，探讨铁死亡抑制剂在脓毒症相关急性肾损伤（sepsis associated acute kidney injury, S-AKI）中的保护作用及可能机制。方法 构建脓毒症小鼠模型，随机分为4组：对照组、LPS组、LPS+铁死亡抑制剂1(Ferrostatin-1, Fer-1)组和LPS+铁死亡抑制剂2(Deferoxamine, DFO)组，每组3只小鼠。LPS组小鼠腹腔注射LPS(15 mg/kg)，铁死亡抑制剂组分别在LPS注射前30 min腹腔注射Fer-1(5 mg/kg)和DFO(100 mg/kg)。24 h后留取小鼠血液和肾脏标本进行肾功能和铁死亡相关标志物检测。体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2），检测100μg/mL LPS刺激后细胞活性和不稳定铁池、脂质过氧化变化情况。使用siRNA转染HK-2细胞敲低膜铁转运蛋白（ferroportin, FPN）后检测铁死亡标志物变化情况。结果 与对照组相比，LPS组小鼠血肌酐、尿素氮明显升高，肾脏病理损伤加重，铁死亡标志物显著增加，而铁死...     

松萝酸通过调节SphK1/S1P信号通路减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨松萝酸（UA）对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 构建H9c2细胞H/R模型,使用0.5～64μmol/L UA分别预处理H9c2细胞,MTT法筛选UA浓度;H9c2细胞随机分为对照组、模型组、UA低剂量组（1μmol/L）、UA中剂量组（4μmol/L）、UA高剂量组（16μmol/L）和UA高剂量+Benzyl butyl phthalate(BBP)组（16μmol/L UA+100 nmol/L BBP）,检测各组细胞增殖活力、细胞凋亡情况,白介素（IL）-1β、IL-6、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）、鞘氨醇激酶1(SphK1)、鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达水平。结果 1μmol/L以上浓度UA可以显著提高H/R H9c2细胞增殖活力。与对照组相比,模型组细胞增殖能力和ATP、SOD含量下降,细胞凋亡率和IL-1β、IL-6、MDA、SphK1、S1PR1、ERK1/2表达增加（P<0.05）;与模型组相比,UA低、中、高剂量组细胞增...     

氧糖剥夺后处理在氧糖剥夺-再灌注损伤中的抗凋亡作用

目的 观察氧糖剥夺后处理在缺氧缺糖再灌注损伤中的抗凋亡作用.方法 应用SK-N-SH细胞进行氧糖剥夺4h,然后恢复氧糖20 h建立氧糖剥夺-再灌注损伤模型,3次循环的氧糖剥夺10 min/复氧糖10 min进行氧糖剥夺后处理;细胞分为对照组、氧糖剥夺-再灌注组(OGD/R组)与后处理组,MTT法与Hoechst33258染色分别检测氧糖剥夺后处理对细胞存活率与凋亡的影响.结果 OGD/R组细胞存活率较对照组下降约43％ (P＜0.01),后处理组细胞存活率比OGD/R组提高约22％(P＜0.01);凋亡计数显示,OGD/R组和后处理组的细胞凋亡率较对照组增高(P＜0.01),而后处理细胞凋亡率低于OGD/R组(P＜0.01).结论 氧糖剥夺后处理能提高氧糖剥夺-再灌注损伤细胞的存活率,可能与其抑制细胞凋亡有关.     

阿普卡林对低氧-复氧乳鼠心肌细胞保护作用的机制

目的探讨低氧/复氧(H/R)对心肌细胞内Ca浓度(犤Ca犦i)的影响,以及阿普卡林减轻H/R过程中钙超载的作用。方法采用SD大鼠乳鼠(n=80)进行心肌细胞培养,用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载30min,然后分3组:(1)正常对照组;(2)H/R组:细胞低氧30min/复氧30min;(3)阿普卡林组:先加入终浓度为100μmol/L的阿普卡林,再行低氧30min/复氧30min。于两个实验组接受低氧处理前及刚开始复氧时、复氧30min后用激光共聚焦显微镜技术检测3个组心肌细胞犤Ca2+犦i的变化。实验重复8次,共观察24个细胞。结果对照组心肌细胞犤Ca2+犦i荧光强度和荧光光密度值较低,分别为645.5U,80.3U及0.5%,0.3%。低氧30min后复氧即刻,犤Ca2+犦i荧光光密度值开始增加,复氧30min后犤Ca2+犦i荧光强度和荧光光密度值显著增高(与对照组比较,P<0.01)。而阿普卡林组细胞内荧光光密度值显著低于H/R组(χ2=20.51,P<0.01)。结论心肌细胞H/R导致钙超载;而阿普卡林有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2+超载的作用,从而保护心肌细胞。     

丹参素对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞损伤和内质网应激的改善作用

目的观察丹参素(DLA)通过抑制内质网应激和凋亡对H9C2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后损伤的保护作用。方法将离体培养的H9C2心肌细胞随机分为3组:对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、DLA+H/R组(DLA组)。H/R组先缺氧6h后复氧24h;DLA组于缺氧时给予DLA(10-6M)培养6h,再复氧24h。对照组心肌细胞正常培养至实验结束。ELISA测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)和丙二醛(MDA)的含量;Western blot检测细胞中内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Caspase-12、Bax、Bcl-2和SOD的蛋白含量。结果与对照组比较,H/R组细胞LDH、CK-MB和MDA的含量显著升高(P<0.05),GRP78、Caspase-12和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),而Bcl-2和SOD的蛋白含量明显降低(P<0.05);给予DLA可明显改善上述指标的变化。结论H/R可诱导H9C2心肌细胞发生凋亡、氧化应激和内质网应激,引起细胞损伤和凋亡;DLA可以通过抑制凋亡、氧化应激和内质网应激,减少细胞损伤,发挥保护细胞的作用。     

Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 探讨Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1(PPI1)对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 用PPI1野生型和活化型突变体表达质粒分别转染乳鼠心肌细胞,并建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧H/R模型,测定各组心肌细胞的存活率、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量、caspase-3活性及超氧化物歧化酶(SOD)活力,此外用流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率,Western blot分析PPI1对凋亡相关蛋白表达及PI3K/Akt信号通路的影响.结果 与正常组比较,模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率增高(P<0.05),细胞存活率和SOD活性降低(P<0.05);PPI1活化型突变体转染组细胞的LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率则降低,细胞存活率和SOD活性升高,与缺氧/复氧组比较各实验指标差异均具有统计学意义(P<0.05).Western blot表明该组细胞P53、Bax 表达下调,pAkt表达上调.结论 PPI1活化型突变体对H/R造成的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与稳定心肌细胞膜、减轻氧自由基损伤及减少细胞凋亡有关.     

利拉鲁肽对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响

[目的]观察新型降糖药物利拉鲁肽对缺氧/复氧(H/R)诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响.[方法]将体外培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞进行分组:单纯H/R组(A组)、利拉鲁肽组+H/R组(B组)、正常对照组(C组),将A,B两组细胞同时进行H/R损伤,复氧后分别检测3组的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛含量(MDA)、超氧化酶歧化酶(SOD)活性及各组心肌细胞凋亡率.[结果]A组与C组比较,其细胞培养液中LDH、MDA含量、细胞凋亡率均增加,SOD活性降低,且差异有显著性(P＜0.01).与A组相比,B组LDH、MDA含量、细胞凋亡率则明显降低(P＜0.01),但仍高于C组,且差异有显著性(P＜0.01);SOD活性较A组增高,差异亦有显著性(P＜0.01).[结论]H/R可以造成心肌细胞的损伤,增加细胞的凋亡;利拉鲁肽作为胰高血糖素样肽-1类似物,其直接作用于心肌细胞,可减轻H/R造成的心肌细胞损伤,抑制心肌细胞的凋亡,具有潜在的心脏保护作用.     

缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:观察缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:取SD新生大鼠(1～3 d)分离培养成心肌细胞;在培养的第3 d将心肌细胞随机分为3组(每组重复6次):正常对照组、H/R组、DMOG+H/R组;建立缺氧/复氧损伤模型,以脯氨酸羟化酶的抑制剂甲基异二酰基甘氨酸进行干预;采用酶免疫法检测各组心肌细胞培养上清液中的肌钙蛋白I含量,采用RT-PCR法检测各组缺氧诱导因子-1α及下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1 mRNA水平。结果:培养4～6 h的乳鼠心肌细胞开始贴壁生长,12～24 h明显增殖,3～4 d后细胞融合成片;心肌细胞由圆形变为梭形、星形、多角形,并出现自发性节律性搏动;与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组的肌钙蛋白I含量明显增高(P<0.01),且缺氧诱导因子-1α、下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1水平明显增高(P<0.01,P<0.05);与H/R组相比,DMOG+H/R组心肌细胞缺氧诱导因子-1α、下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1水平明显增高而肌钙蛋白I含量明显降低(P<0.05)。结论:本...     

Dexmedetomidine attenuates myocardial ischemia-reperfusion injury via inhibiting ferroptosis by the cAMP/PKA/CREB pathway

This study is to investigate the effects of dexmedetomidine on myocardial ischemia-reperfusion (I/R) injury and its molecular mechanisms. H9c2 cell injury model was constructed by the hypoxia/normoxia (H/R) conditions. Besides, cAMP response element-binding protein (CREB) overexpression and knockdown cell lines were constructed. Cell viability was determined by cell-counting kit 8. Biochemical assays were used to detect oxidative stress-related biomarkers, cell apoptosis, and ferroptosis-related markers. Our results showed that dexmedetomidine's protective effects on H/R-induced cell damage were reversed by the inhibition of protein kinase A (PKA), CREB, and extracellular signal regulated kinase 1/2 (ERK1/2). Treatment of dexmedetomidine ameliorated oxidative stress in the cardiomyocytes induced by H/R, whereas inhibition of PKA, CREB, or ERK1/2 reversed these protective effects. Cell death including cell necrosis, apoptosis, and ferroptosis was found in the cells under H/R insult. Interestingly, targeting CREB ameliorated ferroptosis and oxidative stress in these cells. In conclusion, dexmedetomidine attenuates myocardial I/R injury by suppressing ferroptosis through the cAMP/PKA/CREB signaling pathway.     

Eupatilin inhibits the apoptosis in H9c2 cardiomyocytes via the Akt/GSK-3β pathway following hypoxia/reoxygenation injury

Eupatilin, a pharmacologically active flavone derived from the Artemisia plant species, has been reported to have anti-oxidant, anti-inflammatory, anti-allergic, and neuroprotective activities against cerebral ischemia/reperfusion (I/R). However, the role of eupatilin in myocardial I/R injury remains unclear. In the present study, we aimed to investigate the potential molecular mechanisms against hypoxia/reoxygenation (H/R) induced cardiomyocytes apoptosis in vitro. Our results showed that eupatilin markedly improved the cell viability and decreased lactate dehydrogenase (LDH) release. Eupatilin also suppressed oxidative stress and apoptosis in H9c2 cells after myocardial I/R injury. Furthermore, eupatilin obviously increased the phosphorylation of Akt and GSK-3β in H9c2 cells. Our results suggested that eupatilin could provide significant cardioprotection against myocardial I/R injury, and the potential mechanisms might involve inhibition of cardiomyocyte apoptosis through activating the Akt/GSK-3β signaling pathway.     

TRPC6靶向miR-214负调控Caspase-1表达以改善肾缺血再灌注损伤的机制研究

目的探讨TRPC6对肾缺血再灌注损伤（RIRI）的缓解作用及潜在作用机制。 方法建立氧糖剥离再灌注（OGD/R HK-2）模型细胞和缺血再灌注（I/R）模型小鼠后,采用ELISA方法检测白介素（IL）-1β和IL-18水平,通过RT-qPCR、Western blot和免疫组化检测caspase-1表达,并利用CCK-8和流式细胞仪检测细胞活力和焦亡情况。此外,通过双荧光素酶报告基因检测TRPC6与miR-214之间的相互作用。 结果TRPC6在构建的OGD/R HK-2细胞和I/R模型小鼠中表达明显升高。同时,下调caspase-1可增强OGD/R HK-2细胞的活力,抑制炎症水平和细胞焦亡。TRPC6高表达能减轻I/R模型小鼠肾损伤并且下调caspase-1水平。从机制探究,我们发现TRPC6可通过调控miR-214下调caspase-1,并改善RIRI。 结论TRPC6通过靶向调控miR-214下调caspase-1缓解RIRI,TRPC6/miR-214/caspase-1的作用通路可能为RIRI的治疗提供关键线索。     

抑制COX-2表达对心肌缺血再灌注损伤过程中心肌细胞保护作用的研究

目的研究心肌缺血再灌注损伤过程中,环氧化酶-2(COX-2)表达水平与心肌细胞损伤之间的分子机制。方法通过缺氧/复氧(H/R)实验,模拟心肌缺血再灌注过程,在H9C2心肌细胞系中检测COX-2及其相关蛋白的表达水平,并通过COX-2特异性抑制剂NS398抑制其活性,观察细胞变化情况,并研究其作用机制。结果NFκB的激活诱导COX-2表达上调,COX-2促进H/R介导的促炎症因子转录,以及ROS活性增强。结论心肌细胞受到H/R刺激时,NFκB的激活诱导COX-2表达上调,抑制COX-2活性能够降低H/R诱导的促炎症因子转录以及ROS活性增强,从而发挥对心肌细胞的保护作用。     

Neuroprotective effects of ultra‐low‐molecular‐weight heparin in vitro and vivo models of ischemic injury

This study was conducted to demonstrate ultra‐low‐molecular‐weight heparin’s neuroprotective effects on ischemic injury both in vivo and in vitro studies. In vitro, the effect of ultra‐low‐molecular‐weight heparin was tested in cultured PC12 cells exposed to Earle’s solution containing sodium dithionite, to identify its neuroprotection to PC12 cells damaged by oxygen‐glucose deprivation (OGD). The cell injury was detected by the tetrazolium salt 3‐(4,5‐dimethyl‐2‐thiazolyl)‐2,5 diphenyl‐2H tetrazolium bromide (MTT) assay. In vivo, male Wistar rats with middle cerebral artery occlusion were evaluated for infarct volume followed by the treatment with ultra‐low‐molecular‐weight heparin. The results in vitro showed that ultra‐low‐molecular‐weight heparin significantly inhibited PC12 cells damage induced by OGD. Results in vivo showed that vein injection of Ultra‐Low‐molecular‐weight heparin at doses of 0.5 and 1.0 mg/kg exerted significant neuroprotective effects on rats with focal cerebral ischemic injury by significantly reducing the infarct volume compared with the injury group. All the findings suggest that ultra‐low‐molecular‐weight heparin might act as a neuroprotective agent useful in the treatment of cerebral ischemia.     

阿魏酸钠预处理保护成年大鼠心肌细胞缺氧复氧的损伤

背景:阿魏酸钠预处理能对心肌细胞产生保护作用并已在大鼠体外心脏和乳鼠心肌细胞水平得以证实,尚缺乏在成年大鼠心肌细胞水平上的研究。目的:探讨阿魏酸钠预处理对成年大鼠缺氧复氧心肌细胞的保护作用及其K+ATP通道机制。方法:用Langendorff系统灌流心脏,以胶原酶消化法分离纯化成年大鼠心肌细胞并给予模拟缺氧复氧液以及干预因素阿魏酸钠、K+ATP通道阻断剂格列本脲处理,随机分为6组:正常对照组、缺氧复氧组、缺氧预适应+缺氧复氧组、阿魏酸钠+缺氧复氧组、格列本脲+缺氧预适应+缺氧复氧组、格列本脲+阿魏酸钠+缺氧复氧组。结果与结论:①心肌细胞存活率:缺氧复氧组与对照组比较,细胞存活率明显降低(P<0.01);缺氧预适应+缺氧复氧组、阿魏酸钠+缺氧复氧组与缺氧复氧组比较,细胞存活率明显增高(P<0.01);格列本脲+缺氧预适应+缺氧复氧组、格列本脲+阿魏酸钠+缺氧复氧组与缺氧复氧组相比,差异无显著性意义,但明显高于缺氧预适应+缺氧复氧组(P<0.01)。②乳酸脱氢酶活性:各组间乳酸脱氢酶活性比较结果与心肌细胞存活率比较结果吻合。③透射电镜观察:缺氧复氧组心肌细胞线粒体明显肿胀,嵴消失或变形,细胞膜结构破坏,有核边聚现象;缺氧预适应+缺氧复氧组、阿魏酸钠+缺氧复氧组心肌细胞超微结构改变轻微,线粒体排列规则、大小均匀,嵴及内外膜清晰完整,核膜完整,较缺氧复氧组损伤明显减轻;格列本脲+缺氧预适应+缺氧复氧组、格列本脲+阿魏酸钠+缺氧复氧组心肌细胞超微结构改变与缺氧复氧组相似。结果可见阿魏酸钠预处理对成年大鼠心肌细胞具有药理性心肌缺血预适应保护作用且该作用可能与K+ATP通道有关。     

细胞FLICE样抑制蛋白通过抑制程序性坏死减轻心肌缺血-再灌注损伤北大核心CSCD

目的基于RIPK1/RIPK3/MLKL介导的程序性坏死途径,探讨细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein,cFLIP)对心肌缺血再灌注损伤的调节作用。方法通过缺氧4 h/复氧12 h构建心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,通过结扎左前降支30 min/再灌注3 h构建大鼠心肌缺血-再灌注(ischemia reperfusion,I/R)模型,使用CCK-8检测各组心肌细胞活力,使用DAPI/PI双染色检测各组心肌细胞坏死率变化,使用STRING数据库预测cFLIP的蛋白互相作用网络,使用TTC染色检测各组大鼠心肌梗死面积,使用Western Blot检测cFLIPL、cFLIPS、p-RIPK1、p-RIPK3以及p-MLKL的蛋白表达或活化水平。结果在心肌细胞H/R损伤和心肌组织I/R损伤过程中,cFLIPL和cFLIPS的蛋白表达均被显著下调,而程序性坏死的相关蛋白RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平均显著上升。上调cFLIP的蛋白表达可明显地减轻心肌细胞H/R损伤、降低H/R诱导的细胞坏死率并缩小I/R导致的心肌梗死面积。STRING数据库结果显示cFLIP与RIPK1和RIPK3存在直接蛋白相互作用,在心肌细胞H/R损伤模型和心肌组织I/R模型中过表达cFLIP均可显著抑制了RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平。结论过表达cFLIP可显著抑制RIPK1/RIPK3/MLKL介导程序性坏死发生,从而减轻心肌细胞损伤并缩小心肌梗死面积。     

Uqcrc1的 RNA 干扰片段筛选及其对 H9C2心肌细胞耐受缺氧/复氧损伤的影响

目的：筛选泛醇-细胞色素c还原酶核心蛋白（Ubiquinol-cytochrome c reductase core protein 1, Uqcrc1）高效的 RNA 干扰片段,探讨 Uqcrc1基因沉默对大鼠 H9C2心肌细胞耐受缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤的影响。方法制备三种针对Uqcrc1的RNA干扰片段,采用RT-PCR和Western blot检测Uqcrc1 RNA干扰片段转染后Uqcrc1基因和蛋白的表达,从中筛选出最有效的RNA干扰片段及转染浓度,采用MTT法和LDH试剂盒分别检测H/R损伤后H9C2心肌细胞的存活率和LDH漏出率。结果靶序列为CCGUUGCUGUAGCUAACAAdTdT的siUqcrc1片段对Uqcrc1 mRNA的抑制作用最明显,在转染浓度为200 nmol/L时对Uqcrc1蛋白表达抑制最明显。靶向Uqcrc1的RNA干扰片段转染降低了H9C2心肌细胞耐受H/R损伤的能力。与阴性对照组相比,Uqcrc1基因沉默组H9C2心肌细胞H/R损伤后的存活率显著降低,LDH漏出率升高（P＜0.01）。结论 Uqcrc1在心肌细胞耐受H/R损伤中起了重要作用,它可能是心肌保护的又一个关键靶点。