全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中分化抑制因子1表达水平的变化

目的 探讨分化抑制因子1(ID1)在全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化中的作用.方法 运用基因芯片、放线菌酮抑制试验、实时定量RT-PCR和Western blot.方法 检测ID1存ATRA诱导的APL细胞系及原代APL细胞分化过程中表达情况.结果 在ATRA污导的NB4细胞和APL初诊患者原代细胞分化过程巾ID1基因的表达上调,ATRA诱导NB4细胞2hID1表达达高峰,其相对表达水平与对照相比升高359.4±48.7倍;ATRA处理APL患者骨髓细胞ID1表达水平2 h达高峰,其中1例患者晕复3次检测的.结果 为对照的(311.1±48.7)倍.而且ID1基因的上调不需要其他蛋白的合成.而在ATRA处理ATRA耐药细胞系NB4-R2细胞未见ID1的表达发生明显变化.结论 ID1基因可能作为ATRA的靶基因参与了ATRA诱导的粒系分化.     

原发性IgA肾病患者血清miR-181b水平表达与病情严重程度及预后的相关性分析

目的　分析原发性IgA肾病患者血清miR-181b水平表达及与病情严重程度、预后的相关性。方法　回顾性分析上海市市东医院2015年6月~2017年11月收治的原发性IgA肾病患者107例的临床资料。根据患者肾脏病理学检查结果按病情严重程度分为轻度、中度、重度,根据随访结果将预后分为预后良好和预后较差。比较不同病情严重程度和不同预后患者的血清miR-181b水平。采用Spearman相关分析miR-181b水平与IgA肾病病情严重程度及预后的相关性,绘制ROC曲线分析血清miR-181b水平对IgA肾病疾病严重程度及预后的预测价值。结果　107例原发性IgA肾病患者中轻度35例、中度46例、重度26例。轻度、中度和重度患者的血清miR-181b水平分别为(1.47±0.41)×2-△△Ct,(1.89±0.58)×2-△△Ct和(2.69±0.67)×2-△△Ct,差异有统计学意义(F=49.765,P<0.001)。107例原发性IgA肾病患者随访2年后,预后良好88例、预后较差19例。预后良好、预后较差患者的血清miR-181b水平分别为(1.73±0.52)×2-△△Ct和(2.95±0.74)×2-△△Ct,差异有统计学意义(t=5.193,P<0.001)。经Spearman相关分析发现,血清miR-181b水平与患者病情严重程度(r=0.801,P<0.001)、预后(r=0.494,P<0.001)呈显著相关性。血清miR-181b预测IgA肾病病情严重程度的ROC曲线下面积为0.886(95%CI:0.717~0.966),最佳临界值2.25×2-△△Ct,此时灵敏度和特异度分别为0.892,0.731。血清miR-181b预测IgA肾病预后的ROC曲线下面积为0.848(95%CI:0.701~0.925),最佳临界值2.48×2-△△Ct,此时灵敏度和特异度分别为0.873和0.704。结论　血清miR-181b水平与IgA肾病病情严重程度及预后均呈显著相关性,血清miR-181b越高,病情越重,预后越差。可通过检测IgA肾病患者血清miR-181b水平评估患者病情及预测预后。     

21-三体综合征胎儿中孕期母体血清microRNA的表达谱

目的探讨21-三体综合征(DS)胎儿的中孕期母体血清与正常妊娠的中孕期母体血清中的mircoRNA(miRNA)的差异性表达。方法收集DS胎儿(均经羊水细胞G显带核型确认)母体及正常妊娠母体的血清标本各10例,分别等量混合后作为DS组和健康对照组。用低密度芯片技术(TLDA)分析674种已知的人类miRNA在两组血清中的表达,建立两组标本的miRNA表达谱。结果 DS组高丰度(Ct≤25)miRNA表达的有16种,中丰度(2533)miRNA。健康对照组高、中、低丰度表达的miRNA分别为19、69、66种。两组中表达量最高的19种miRNA均为miR-223、miR-16、miR-24、miR-126、miR-17、miR-191、miR-106a、miR-92a、miR-19b、miR-146a、miR-484、miR-320、miR-20a、miR-150、miR-222、miR-30c、miR-135a*、miR-93、miR-126*,且表达量无显著差异(ΔΔCt<2)。与健康对照组比较,DS组miR-125b、miR-99a、miR-100、miR-194、miR-365、miR-215、miR-574-3p、miR-193b、miR192、miR-885-5p和miR-122表达下调;miR-221、miR-15b和miR-199a-3p表达上调(ΔΔCt>2)。结论 DS组与健康对照组血清之间存在明显的miRNA差异表达。     

CSN复合物在ATRA诱导APL细胞分化过程中的表达及其意义

目的:探索CSN复合物在急性早幼粒细胞白血病(APL)患者中的表达及其在全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞分化中的作用。方法:以NB4细胞为实验对象,通过细胞形态学观察及流式细胞术的CD11b检测以监测ATRA诱导分化;用Western blot及逆转录荧光定量PCR检测CSN复合物在细胞分化过程中的变化,并采用实时荧光定量PCR的方法检测APL患者及其治疗缓解后CSN复合物亚基的表达情况。结果:在NB4细胞中ATRA可诱导细胞CD11b表达,细胞在形态上呈明显分化特征;CSN复合物各个亚基的表达水平随细胞分化逐渐下调。APL患者中CSN表达水平明显高于非白血病患者组(P0.05),ATRA诱导缓解治疗后达完全缓解的患者中CSN的表达水平较治疗前明显下降。结论:CSN复合物在APL中高表达,ATRA可以下调CSN复合物的表达,提示CSN复合物在APL发病和治疗中发挥着重要作用。     

砷剂和维甲酸对 NB4细胞组织因子和凝血酶调节蛋白mRNA及促凝活性的影响

为了研究三氧化二砷(As203)和全反式维甲酸(ATRA)对NB4细胞组织因子(TF)和凝血酶调节蛋白(TM)mRNA及其表达的影响,本研究采用体外细胞培养方法,以As2O3、ATRA处理NB4细胞,用ELISA动态测定其TF、TM抗原表达及促凝活性(PCA)变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TF和TM的mRNA转录.结果表明1 μmol/L的As2O3和1 μmol/L ATRA均可使NB4细胞TF抗原及mRNA表达呈时间依赖性渐进性下调;在24、48、72、96和120小时时间点,As2O3组TF抗原的表达水平分别为13.3±1.8,8.6±1.9,10.8±1.5,2.0±0.6和2.6±0.9 ng/107;ATRA组TF抗原的表达水平分别为12.4±1.1,11.3±1.8,5.7±1.7,2.8±0.8和2.0±0.6 ng/107,与对照组比较具有显著性(P＜0.05);在不同的时间点As2O3和ATRA,均可使其PCA下降,As2O3组血凝时间分别为123.5±10.5,156.3±11.6,179.3±15.3,248.9±20.1,312.0±29.8(秒);ATRA组血凝时间分别为76.4±5.6,146.8±10.9,198.2±15.6,265.8±20.6和363.8±31.9(秒);ATRA使NB4细胞TM抗原表达及其mRNA转录上调.结论As2O3、ATRA可降低TF mRNA转录,下调TF蛋白表达,降低NB4细胞PCA;ATRA增高TM转录及表达,缓解APL患者凝血功能异常.     

强直性脊柱炎患者外周血miR-146a、miR-155、miR-181a、miR-223的表达分析

目的探讨miR-146a、miR-155、miR-181a、miR-223在强直性脊柱炎(AS)患者外周血血浆、单个核细胞(PBMC)的表达水平,为研究miRNA在AS发病机制中的调控作用和临床诊断价值提供新的思路。方法收集AS患者、其它关节炎患者及正常人外周血,分离血浆及PBMC,RT-PCR检测miR-146a、miR-155、miR-181a、miR-223的表达量,ROC曲线评价其对AS的诊断灵敏度及特异度。结果 AS患者外周血血浆及PBMC中miR-146a、miR-155、miR-181a、miR-223的表达水平显著升高,同时其在PBMC中的表达高于其在血浆中的表达(P0.01)。ROC曲线分析表明血浆及PBMC中miR-146a、miR-155、miR-181a、miR-223对AS具有较高的诊断灵敏度及特异度。结论 AS患者外周血miR-146a、miR-155、miR-181a、miR-223的表达存在差异,这种差异有望使它们成为AS临床诊断的新标志物。     

APN/CD13对乌苯美司增强全反式维甲酸诱导急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞分化的影响

本研究探讨细胞表面APN/CD13在乌苯美司(bestatin)增强全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞分化过程中的作用.采用四氮唑蓝还原实验检测细胞分化;Western blot检测细胞P38MAPK及p-P38MAPK蛋白表达.结果显示:APN/CD13中和抗体WM-15能够完全阻断乌苯美司对ATRA诱导分化作用的增强效应.WM-15能够部分阻断乌苯美司抑制NB4细胞P38 MAPK磷酸化的作用.100μg/ml乌苯美司呈时间依赖性抑制APL细胞株NB4细胞及MR2细胞的P38MAPK磷酸化水平,l00 μg/ml乌苯美司对CD13表达低下的K562细胞的P38 MAPK磷酸化水平无明显影响.100μg/ml乌苯美司不能恢复MR2细胞及难治复发患者原代APL细胞对ATRA的敏感性.结论:氨肽酶N/CD13抑制剂乌苯美司可能通过细胞表面APN/CD13分子的介导抑制NB4细胞P38 MAPK的磷酸化,从而增强ATRA诱导NB4细胞分化的作用.     

miR-181a在急性淋巴细胞白血病患儿中的表达及其功能研究

目的 检测microRNA-181a(miR-181a)在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中的表达水平,并研究其在ALL细胞株CCRF-CEM细胞及耐药株CEM-C1细胞中的功能.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测ALL患儿骨髓样本、ALL细胞株CCRF-CEM细胞及其耐药株CEM-C1细胞中miR-181a的表达水平.采用电穿孔转染的方法抑制耐药株CEM-C1细胞并上调非耐药株CCRF-CEM细胞中miR-181a的表达,予不同浓度梯度(终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100、1 000 ng/ml)喜树碱处理后,采用CCK-8法观察各浓度梯度喜树碱处理后细胞的存活情况,绘制细胞增殖抑制曲线并计算半数抑制浓度(IC50).结果 初诊-复发组患儿初诊及复发骨髓样本miR-181a相对表达水平(4.84±2.71及6.53±2.20)均高于对照组(1.41±0.53)(P=0.017、0.001),初诊-完全缓解组患儿初诊骨髓样本miR-181a水平(7.58±2.50)较对照组明显升高(P=0.000),而完全缓解后miR-181a水平下降至1.35±0.35,与对照组比较差异无统计学意义(P=0.863).CEM-C1细胞miR-181a相对表达水平(-4.39±0.08)较CCRF-CEM细胞(-2.32±0.03)明显升高(P=0.000).转染miR-181a抑制剂CEM-C1细胞较转染阴性对照组增殖抑制率明显升高(P＜0.05),IC50分别为30.61、2 255.00 ng/ml,耐药指数(RI) =73.67.miR-181a过表达CCRF-CEM细胞较阴性对照组增殖抑制率明显降低(P＜0.05),IC50分别为126.60、1.34 ng/ml,RI=94.26.结论 ALL患儿骨髓及CEM-C1细胞中miR-181a异常高表达,抑制CEM-C1细胞中miR-181a的表达可明显增加CEM-C1细胞的药物敏感性,在CCRF-CEM细胞中上凋miR-181a的表达能明显增加CCRF-CEM细胞的耐药性.     

微小RNAs与造血调控及血液系统肿瘤的关系

微小RNAs（microRNAs，miRNAs）是一类长约22个核甘酸的非编码RNAs，在动、植物中广泛存在，主要在基因转录后水平对动、植物发育起重要的调节作用。近年陆续发现miR-181、miR-223、miR-142、miR-290～miR-295和miR-342等miRNAs可影响造血细胞的定向分化，并发现miRNA15、miRNA16、miRNA142和miRNA155与白血病、淋巴瘤的发病有关。本文就此作一综述。     

微小RNAs与造血调控及血液系统肿瘤的关系

微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一类长约22个核甘酸的非编码RNAs,在动、植物中广泛存在,主要在基因转录后水平对动、植物发育起重要的调节作用。近年陆续发现miR-181、miR-223、miR-142、miR-290～miR-295和miR-342等miRNAs可影响造血细胞的定向分化,并发现miRNA15、miRNA16、miRNA142和miRNA155与白血病、淋巴瘤的发病有关。本文就此作一综述。     

手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937和HL-60细胞凋亡

目的 研究法尼酰基转移酶抑制剂手霉素（Manumycin）诱导白血病细胞凋亡的机制。方法 用2μmol／L手霉素处理白血病细胞系U937和HL-60细胞不同时间，用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、caspase9、caspase8、caspase3的表达。用荧光染料JC-1检测法测定线粒体膜电位（Δψm），并用caspase抑制剂Z—VAD—fmk阻断caspase的活化，探讨caspase在手霉素诱导白血病细胞凋亡中的作用。结果 2μmol／L手霉素处理U937和HL-60细胞16h，Δψm显著下降，相对值分别是0．51±0．07和0．41±0．06（P〈0．01）。手霉素诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质，激活caspase-9、caspase8和caspase-3。50μmol／L的Z—VAD—fmk可完全阻断caspase激活，但仅部分阻断手霉素诱导的U937和HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率分别减少51．69％和56．47％。结论 手霉素通过线粒体途径诱导U937和HL-60细胞凋亡。     

生长抑制因子4基因表达对K562细胞生长的影响

目的 研究生长抑制因子4（ING4）基因表达对K562细胞增殖的影响。方法 将经过定点突变技术人源化改造的ING4（鼠→人）生长抑制因子4基因酶切并连接到pAdTrack-CMV转移质粒上，然后与腺病毒质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌，获得重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack—CMV—hING4，将它转染QBI-293A细胞后收获重组腺病毒Ad—hING4（以下简称为Ad-ING4）。将Ad-ING4感染K562细胞，光学显微镜下观察病毒感染前后细胞形态的变化，免疫细胞化学分析凋亡因子的改变，激光扫描共聚焦显微镜观察K562细胞的凋亡，流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率。结果 成功构建了人ING4腺病毒质粒，获得高滴度的重组腺病毒Ad-ING4，用它感染K562细胞72h后，FCM法测定细胞凋亡率为19．7％，与空病毒对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01），ING4基因能下调K562细胞bcl-2的表达并上调bax的表达，多种方法检测结果表明ING4基因能抑制K562细胞生长，诱导凋亡。结论 重组腺病毒Ad—ING4可以显著抑制K562细胞的生长。     

WT1基因表达模式改变对NB4细胞分化的影响

目的探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化的影响及其分子机制。方法用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株。通过形态学观察,细胞周期动力学检测,NBT还原试验,细胞表面分化抗原CD11b的检测了解外源性WT1基因异构体WTA在全反式维甲酸(ATRA)诱导下对NB4细胞分化的影响。用RT-PCR检测细胞中PML/RARα、p21、c-myc基因表达的改变。结果ATRA处理细胞48h,对照组(转染空载体的NB4/CMV和未转导WTA的NB4细胞)细胞分化明显,NB4/WTA细胞只出现部分分化。流式细胞术检测NB4/WTA细胞CD11b相对荧光强度(4.63±1.63)低于对照组(8.15±1.84),ATRA作用24h后CD11b相对荧光强度(31.42±5.65)与对照组(71.95±9.36)相比差异更为明显。NB4/WTA细胞NBT还原能力较对照组下降,经ATRA处理后两组细胞之间的NBT还原能力的差异更加明显。RT-PCR提示NB4/WTA细胞PML/RARα、p21、c-myc基因的表达较对照组升高。结论增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型能部分抑制ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与PML/RARα、p21、c-myc基因表达上调有关。     

抗CD44单抗IM7对慢性粒细胞白血病CD34+细胞黏附和迁移能力影响的体外研究

目的 探讨抗CD44单抗IM7在体外对慢性粒细胞白血病(CML)干细胞(LSC)黏附和迁移的影响及其机制.方法 取20例初诊CML患者骨髓及20名健康新生儿脐血标本,用免疫磁珠分离法分离纯化CML患者骨髓和正常人脐血CD34+细胞,流式细胞术检测CD123和CD44的表达情况,MTT法检测CD44单抗IM7孵育前后细胞的黏附能力,体外跨内皮迁移实验检测其迁移能力.结果 ①CML患者骨髓CD34+细胞(CML-CD34+细胞)中CD34和CD123双阳性细胞率为7.5%,CD44阳性细胞率为(86.60±2.10)%;脐血CD34+细胞中CD44阳性细胞率为(25.40±1.70)%,两组之间比较差异有统计学意义(P<0.05).②与IM7孵育后的CML-CD34+细胞与血管内皮细胞黏附能力为0.34±0.07[吸光度(A)570值],未经IM7处理组为0.62 ±0.11,CML-CD34+细胞经IM7处理后的黏附能力显著下降,而脐血CD34+细胞IM7处理前后无明显变化.③跨内皮迁移实验显示经IM7处理后的CML-CD34+迁移能力明显受到抑制,抑制率为46%～63%,而CD34+细胞迁移抑制不明显.④经IM7处理后的CML-CD34+细胞与骨髓基质细胞黏附能力明显降低,而脐血CD34+细胞IM7处理前后无明显变化.结论 CML患者来源的CD34+细胞与脐血CD34+细胞为性质不同的造血干细胞,抗CD44单抗IM7在体外能有效抑制CML-CD34+的黏附和迁移,从而为白血病的靶向治疗提供依据.     

人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞对共培养内皮细胞的作用

目的 在体外共培养体系中研究人多发性骨髓瘤(MM)细胞对人正常内皮细胞的作用.方法 建立人MM细胞株RPMI8226细胞与正常人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外共培养体系;以同期单独培养的HUVEC为对照,用电子显微镜和光学显微镜对与RPMI8226细胞共培养的HUVEC进行细胞超微结构和细胞形态学观察;用刮痕迁移实验、管状结构形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力;并以Western blot和流式细胞术分别检测脑源性神经营养因子(BDNF)、Endoglin与TrkB、Tie2、β3,整合素、血管细胞黏附分子-1蛋白的表达.结果 与同期单独培养的正常内皮细胞对照相比,共培养后的部分内皮细胞胞体伸展并首尾排列成一行;超微结构出现胞核增大、核仁增大、核质比例增大,内质网疏松、变形,细胞表面纤毛减少;共培养体系中细胞管状结构形成数量和迁移细胞数较单独培养体系分别增加了112%和136%;BDNF、Endoglin、TrkB、Tie2、β3整合素和血管细胞黏附分子-1蛋白的表达亦明显上调.结论 MM细胞与人正常内皮细胞共培养后,内皮细胞有明显的趋瘤特征和较强的血管新生能力,推测MM患者骨髓中骨髓瘤细胞通过对相邻内皮细胞的作用促进血管新生,且新生血管的内皮细胞性质与行为不同于正常内皮细胞.     

盐霉素聚合物颅内局部给药对大鼠胶质细胞瘤的治疗作用

目的探讨盐霉素对大鼠9L 胶质肉瘤细胞系的体内、外生长和增殖的抑制作用。方法将盐霉素加入体外培养的大鼠9L 胶质肉瘤细胞系中检测其对细胞生长、增殖活动的影响。对40只 Fisher 344大鼠行颅内9L 细胞注射，以制备载瘤大鼠模型。将盐霉素与可生物降解的药物基质聚酸酐类聚合物对羧基苯氧丙烷－癸二酸共聚物（pCPP∶SA）溶解并真空干燥后塑性，制成圆形药物聚合物颗粒。对载瘤大鼠行开颅手术，于瘤腔内植入聚合物颗粒，以观察盐霉素聚合物体内抗肿瘤效果，记录大鼠存活时间，进行进一步生存分析。结果盐霉素对9L 细胞具有明显抑制作用，并表现出剂量依赖性特点。盐霉素聚合物颗粒具有良好生物相容性，能够短时间内稳定释放盐霉素进入局部组织。接受盐霉素聚合物治疗的大鼠，其中位生存期较对照组显著增加；采用30％盐霉素比例聚合物能够在延长大鼠生存时间的同时，降低盐霉素的使用剂量。结论盐霉素对9L 胶质肉瘤细胞具有强大的抑制杀伤作用，采用盐霉素聚合物肿瘤局部给药的方式具有重大临床潜在研究和应用价值。     

黏附分子CD44表达对白血病细胞黏附、迁移及浸润的影响

目的 探讨黏附分子CD44表达对白血病细胞黏附、迁移、浸润的影响.方法 选择对数生长期的白血病细胞株SHI-1、THP-1、NB4、K562细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各种白血病细胞株CD44 mRNA和蛋白的相对表达水平,并将各株白血病细胞分为对照组(加入同种同型IgG)和实验组(加入CD44单抗),然后观察白血病细胞与人静脉内皮细胞系ECV304细胞的黏附率;用包被ECV304细胞的Transwell小室培养法观察细胞迁移率;用包被人工基质膜Matrigel的Transwell小室培养法观察白血病细胞穿过人工基质膜的浸润能力.结果 SHI-1、THP-1、NB4细胞均表达CD44 mRNA和蛋白,而K562细胞CD44 mRNA和蛋白表达量少甚至不表达;SHI-1、THP-1 、NB4细胞CD44 mRNA的相对表达水平分别为0.0731±0.0072、0.0827±0.0151、0.1473±0.0365,与K562细胞(0.0002±0.0000)相比,差异均有统计学意义(P值均<0.01).黏附实验结果显示:实验组SHI-1、THP-1、NB4细胞黏附率均较对照组下降(分别为72.78%、64.09%、57.42%),而实验组K562细胞黏附率为106.16%.迁移实验结果显示:对照组SHI-1、THP-1、NB4细胞迁移率分别为55%、29%、25%,实验组细胞迁移率下降(分别为32%、18%、12%),而两组中K562细胞无明显变化(均为2%).浸润实验显示:对照组SHI-1、THP-1、NB4细胞穿过Matrigel的细胞率分别为24%、15%、13%,实验组均有所下降(分别为12%、8%、4%),而两组中K562细胞不能穿过.结论 CD44抗原可能通过改变细胞的黏附、迁移及浸润能力,参与白血病细胞的髓外浸润过程.     

周期性拉伸应力与人永生化角质形成细胞的黏附和铺展

背景：皮肤组织所处的力学环境以及上皮细胞的铺展状态与伤口愈合和瘢痕形成过程关系密切。目的：分析胞外力学刺激对细胞铺展的作用,并检测细胞的增殖状态进一步分析铺展形态对细胞增殖等生理活动的影响。方法：通过FX-4000柔性基底加载系统对人永生化角质形成细胞(HaCaT)进行周期性拉伸应力正弦波加载,加载程式0.2 Hz,10%拉伸幅度。在0,24,48 h对细胞的铺展形态进行对比,利用流式细胞仪检测分析细胞的增殖,并利用免疫荧光染色方法对比分析纽蛋白在细胞内的分布。结果与结论：HaCaT细胞在加载24 h后分裂期细胞较多,铺展形态无明显变化;加载48 h后HaCaT细胞形态发生较为明显的变化,分裂期细胞较静态对照组略有减少;拉伸应力作用下纽蛋白的分布由细胞核周围的膜区域向细胞边缘集中。结果表明：适度的力学加载能够在保持细胞铺展和黏附状态下,促进细胞增殖;周期性持续拉伸应力的作用时间是HaCaT细胞铺展形态和与基底黏附位点的重要影响因素。     

转染VEGF-C cDNA对NB4细胞增殖、分化与凋亡的影响

目的探讨转染血管内皮生长因子(VEGF)-C cDNA 对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞增殖、全反式维甲酸(ATRA)诱导分化及化疗药物介导的细胞凋亡作用的影响。方法采用脂质体法将重组表达载体(pcDNA3.1-VEGF-C)和 pcDNA3.1转染 NB4细胞建立稳定细胞株;采用MTT 法及集落形成实验分析转染 VEGF-C cDNA 对 NB4细胞增殖的影响;NB4/VEGF-C 细胞经 ATRA诱导后涂片经瑞特-姬姆萨染色作形态学分析,实时荧光定量 PCR 检测调控粘细胞分化基因 C/EBPα相对表达水平,同时以流式细胞术检测细胞表面的 CD11b 表达量;Annexin V/PI 双染流式细胞术检测NB4/VEGF-C 细胞经鬼闩乙叉甙(Vp16)诱导的细胞凋亡;并以实时荧光定量 PCR 检测 bcl-2基因相对表达水平,均以 NB4/pcDNA3.1细胞为对照。结果成功转染获得稳定表达 VEGF-C 的细胞株 NB4/VEGF-C,其增殖能力显著高于 NB4/pcDNA3.1细胞;NB4/VEGF-C细胞对抗 ATRA 介导的早幼粒细胞分化成熟,CD11b 表达量低于对照组,C/EBPα基因含量仅为对照组的1/32;NB4/VEGF-C 细胞经Vp16介导后 bcl-2基因表达约为 NB4/pcDNA3.1细胞的2.28倍,而凋亡的 NB4/VEGF-C 细胞百分率(7.20±2.52)%明显低于凋亡的 NB4/pcDNA3.1细胞的(16.07±3.58)%(P=0.005)。结论 VEGF-C 通过 VEGF 受体3(VEGFR-3)信号途径促进白血病细胞增殖,抑制分化诱导剂介导的 NB4 细胞分化及化疗药物介导的细胞凋亡,推测 VEGF-C/VEGFR-3信号途径在白血病疾病进展中发挥重要作用并可望作为白血病治疗的靶点。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导白血病细胞凋亡中抵抗机制的初步探讨

目的初步探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病细胞发生凋亡过程中可能存在的抵抗机制。方法用流式细胞仪检测经 TRAIL 处理后,白血病细胞系 K562、CEM 凋亡情况及线粒体跨膜电位的改变;采用 Western blot 检测 TRAIL 处理后细胞凋亡相关蛋白 Bcl-xL、Bax 及内源性半胱天冬酶(caspase)-8表达情况;并用 ELISA 法检测核转录因子(NF)-kB 活性变化。结果经TRAIL 处理后,K562、CEM 细胞出现不同程度的凋亡,其凋亡指数分别为29.98%、14.1%,后者显著低于前者(P<0.001);线粒体跨膜电位下降,分别为73.25%、25.4%(P<0.01);CEM 细胞中内源性caspase-8的表达水平低于 K562细胞,并且两者均表现出 Bcl-xL 表达上升、Bax 表达下降,在 CEM 细胞中 Bcl-xL/Bax 比例为18.8,显著高于 K562细胞 Bcl-xL/Bax 的比值(5.1);并且在 TRAIL 处理 CEM细胞后早期(2 h)即表现出 NF-kB 活性增加(0.48 μmol·L~(-1)·mg~(-1)蛋白),高于 K562细胞(0.326μmol·L~(-1)·mg~(-1)蛋白(P<0.001)。结论 TRAIL 诱导白血病细胞凋亡过程中,CEM 细胞对药物抵抗原因可能与 CEM 细胞内源性 caspase-8表达水平较低、线粒体内膜敏感程度降低、NF-kB 活性早期增加以及 Bcl-2家族蛋白的表达变化有关。