急性冠脉综合征单核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体δ的表达及其与血清基质金属蛋白酶-9和白细胞介素-10的相关性

目的：观察急性冠脉综合征（ACS）患者外周血单核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）的表达及其与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、白细胞介素-10（IL-10）的相关性。方法：52例ACS患者为研究组和46例健康者为健康对照组。分离其外周血单核细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测PPARδ的表达;采用酶联免疫吸附试验检测血清MMP-9和IL-10的水平。结果：ACS患者外周血单核细胞中PPARδ的表达水平显著低于健康对照组（P〈0.01）;ACS患者血清MMP-9水平高于健康对照组（P〈0.01）,而IL-10水平低于健康对照组（P〈0.01）;PPARδ表达水平与MMP-9呈负相关（r=-0.421,P〈0.05）,而与IL-10呈正相关（r=0.637,P〈0.05）。结论：PPARδ可能在ACS的发病中具有重要的促进作用。     

过氧化物酶增殖体激活受体β激动剂对急性肺损伤NF-κB信号通路的影响

目的:研究过氧化物酶增殖体激活受体β(PPARβ)的激动剂对失血性休克诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织NF-κB信号通路产生的影响。方法:复制失血性休克大鼠ALI模型,按完全随机原则将18只SD大鼠分为正常对照组(对照组)、失血性休克致ALI模型组(模型组)和PPARβ激动剂给药组(实验组)3组,每组6只大鼠。对照组不做任何处理;模型组先给大鼠静脉注射10%DMSO 3ml/kg,再复制失血性休克致ALI模型;实验组先给大鼠静脉注射PPARβ激动剂3ml/kg,再复制失血性休克致ALI模型。观察记录3组大鼠一般情况,观察动脉血气、肺湿/干(W/D)比值、肺组织病理改变,ELISA方法检测肺组织匀浆上清中IL-1和IL-10浓度水平,并使用Western blot方法检测肺组织NF-κB p65蛋白水平变化。结果:复制模型后1、2h,实验组大鼠PaO2高于模型组(P0.05)。实验组和模型组大鼠W/D比值明显高于对照组(P0.01),且实验组大鼠W/D比值明显低于模型组(P0.01)。苏木精-伊红染色显示,对照组大鼠肺泡结构清晰,未见明显炎性细胞浸润和渗出;模型组大鼠肺泡腔内有大量炎性细胞浸润,可见微血栓及透明膜形成;实验组大鼠肺泡腔内有少量炎性细胞浸润,可见少量微血栓及透明膜形成。实验组和模型组大鼠肺组织匀浆中IL-1浓度水平均高于对照组(P0.05),且实验组大鼠肺组织IL-1浓度水平低于模型组(P0.05)。实验组大鼠肺组织匀浆中IL-10浓度水平高于对照组和模型组(P0.05)。Western blot检测结果显示,模型组NF-κB p65蛋白相对表达量高于对照组(P0.05),实验组NF-κB p65蛋白相对表达量低于模型组和对照组(P0.05)。结论:PPARβ激动剂能明显抑制ALI后NF-κB的表达,抑制炎性反应,可能对ALI具有治疗价值。     

六味补气胶囊对COPD模型大鼠JAK/STAT通路及炎性反应的影响及相关机制研究

目的探讨六味补气胶囊对COPD模型大鼠JAK/STAT通路及炎性反应的影响及相关的分子机制。方法体外构建大鼠COPD模型,45只大鼠随机分为3组,对照组,模型组和实验组,每组15只。对照组只灌胃处理等量0.9%氯化钠溶液。模型组利用香烟暴露法制作大鼠COPD模型,灌胃处理等量0.9%氯化钠溶液。实验组在造模成功后采用六味补气胶囊对COPD模型大鼠进行灌胃治疗2周。利用Western blot法检测JAK2/p-JAK2和STAT3/pSTAT3的蛋白表达,利用ELISA法检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)水平,以及化学定量法检测基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-12水平。结果 Western blot结果显示,与对照组比较,模型组大鼠JAK2/p-JAK2和STAT3/p-STAT3的蛋白表达显著提高,与模型组比较,六味补气胶囊显著抑制COPD模型大鼠JAK2/p-JAK2和STAT3/p-STAT3的蛋白表达(P0.05);ELISA结果显示,与对照组比较,模型组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6以及IFN-γ水平显著提高,六味补气胶囊显著下调COPD模型大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6以及IFN-γ水平(P0.05);化学定量法检测结果显示,与对照组比较,模型大鼠MMP-9、MMP-12水平显著提高,而六味补气胶囊显著下调COPD模型大鼠MMP-9、MMP-12水平(P0.05)。结论六味补气胶囊能显著抑制COPD大鼠炎症反应,其分子机制可能与抑制JAK/STAT通路相关。     

过氧化物酶增殖体激活受体β对失血性休克大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 观察过氧化物酶增殖体激活受体β对失血性休克大鼠急性肺损伤的保护作用及机制.方法 复制失血性休克大鼠ALI模型,随机(随机数字法)将96只SD大鼠分为5组,每组分为1h、2h、4h、6h四个时相点,每个时相点6只老鼠.观察记录在1、2、4、6h取肺组织测定PPARβ受体表达,行病理学检查、肺干湿重比系数作为检测肺损伤程度的指标;检测肺组织超氧化物酶SOD、GSH-Px活性氧化产物8-iso-PGF2α含量来评估机体氧化应激状态.然后,给予PPARβ受体拮抗剂(GSK 0660)进行预处理,观察其对失血性休克所致急性肺损伤过程中后动物各项指标的影响,并初步探讨炎症因子、氧化抗氧化系统及细胞凋亡在其中的作用.结果 ①失血性休克致伤组大鼠超氧化物酶SOD、GSH-Px活性较假手术组显著升高(P＜0.01).②GW0742激活剂使ALI肺组织中超氧化物酶SOD、GSH-Px活性在各时相点较单纯失血性休克致伤组有不同程度降低,以2h、4h升高最显著(P＜0.01).③单独使用GW0742能改善PaO2、大鼠肺组织W/D比值、肺组织病理积分,抑制肺组织SOD、GSH-Px活性(P＜0.01)及降低8-iso-PGF2α的含量;使用拮抗剂GSK0660使上述作用减轻(P＜0.叭).结论 ①失血性休克ALI大鼠模型,肺组织SOD、GSH-Px活性显著升高,提示失血性休克处于急性氧化应激状态.②GW0742能显著上调ALI大鼠肺组织SOD、GSH-Px的活性,降低氧化产物8-iso-PGF2α的含量.③推测GW0742通过可能通过抑制TNF-α基因和蛋白的表达,降低肺组织SOD活性对ALI肺组织起到一定程度的保护作用,减轻ALI肺组织的炎症,改善PaO2,可能是通过阻止NF-κB的活化起作用的.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对脊髓损伤后大鼠自噬相关蛋白表达的抑制作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对脊髓损伤后大鼠自噬相关蛋白表达的抑制作用。 方法将60只大鼠分为假手术组、模型组、激动剂组及抑制剂组，每组各15只。通过椎板切除术暴露脊髓，用无菌动脉夹在T6-T7节段硬膜外压迫脊髓造成脊髓损伤模型。假手术组大鼠只接受椎板切除术，激动剂组及抑制剂组大鼠分别在脊髓损伤后腹腔注射PPARγ激动剂罗格列酮和PPARγ抑制剂GW9662（2 mg/kg，每2小时1次）。假手术组和模型组大鼠给予腹腔注射等剂量的等渗NaCl溶液。使用Tarlov’s评分法评估各组大鼠脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d后肢运动功能。采用Western-blotting检测脊髓损伤区组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1及组织蛋白酶D蛋白的表达水平。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测脊髓损伤区PPARγ mRNA的表达水平。 结果4组大鼠在各时间点运动功能评分比较，差异具有统计学意义（F = 25.674，P < 0.001）。与假手术组相比，其余各组大鼠脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d运动功能评分均显著降低（P均< 0.05）。激动剂组大鼠在脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d运动功能评分均高于模型组及抑制剂组大鼠（P均< 0.05）。4组大鼠脊髓损伤后3 d自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1、组织蛋白酶D的蛋白及PPARγ mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（F = 238.213、28.268、172.563、32.492，P均< 0.001）。与假手术组比较，模型组、激动剂组及抑制剂组大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1、组织蛋白酶D的蛋白及PPARγ mRNA表达水平均显著升高（P均< 0.05）。且与激动剂组比较，模型组及抑制剂组大鼠LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PPARγ mRNA均显著降低，而beclin-1及组织蛋白酶D的蛋白表达均显著升高（P均< 0.05）。 结论大鼠脊髓损伤后，PPARγ激动剂可以通过下调自噬相关蛋白的表达，促进神经功能的恢复。     

甲泼尼龙醋酸酯对重组白细胞介素-1β介导的颞下颌关节炎症损伤大鼠软骨细胞MMPs表达的影响

目的探究甲泼尼龙醋酸酯对重组白细胞介素-1β(rh IL-1β)介导的颞下颌关节炎大鼠软骨细胞中基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法以雄性SD大鼠作为研究对象,采用关节腔注射rh IL-1β法制备颞下颌关节炎大鼠模型,HE染色法观察颞下颌关节变化;对照组不进行任何处理。模型制备后将大鼠分为模型组、甲泼尼龙醋酸酯低剂量组(5 mg/kg)、中剂量组(15 mg/kg)、高剂量组(30 mg/kg),每组10只。对照组、模型组经腹腔静脉注射1 ml生理盐水,甲泼尼龙醋酸酯各剂量组分别经腹腔静脉注射甲泼尼龙醋酸酯。HE染色、番红染色观察各组颞下颌关节组织变化,采用Mankin's评分对颞下颌关节炎程度进行评定。RT-PCR法、Western Blot法、免疫组化法检测软骨组织中MMP-1、MMP-3、MMP-9的表达。结果 HE染色显示模型组大鼠颞下颌关节滑膜出现炎症细胞浸润、血管扩张、细胞黏附。与对照组相比,模型组Mankin's评分升高,与模型组相比,给药物组评分降低,且随着药物浓度的升高,评分逐渐下降(P 0. 05)。与对照组相比,模型组MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA、蛋白表达量均升高,与模型组相比,给药组MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA、蛋白表达量均降低,且随着药物浓度的升高,三者表达量均逐渐降低(P 0. 05)。免疫组化结果显示,模型组阳性细胞表达率高于对照组,经药物处理后MMP-1、MMP-3、MMP-9阳性细胞表达率随药物剂量的增加呈剂量性降低(P 0. 05)。结论甲泼尼龙醋酸酯能够缓解rh IL-1β介导的颞下颌关节炎,其作用机制可能与下调软骨细胞中MMP-1、MMP-3、MMP-9的表达有关。     

竹叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后TNF-α、IL-1β、ICAM-1表达的影响

目的探讨竹叶提取物对大鼠急性脑缺血再灌注后脑组织损伤的保护作用。方法取SD大鼠96只,以颈总动脉插入线栓法致大鼠急性脑缺血,缺血60 min后拔线栓造缺血再灌注损伤模型;随机分为假手术组（不插入线栓）、模型组和给药组（缺血前1周、术后,将竹叶提取物按20 mg/kg溶于2 ml生理盐水中腹腔注射）各32只;各组再分为缺血再灌注后6、12、24、48 h 4个亚组,用免疫组化法检测脑组织中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、细胞间黏附因子-1（ICAM-1）浓度。结果模型组各个时点脑组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1含量较假手术组均明显升高（P均〈0.01）,TNF-α、IL-1β和ICAM-1分别于12、6、24 h达高峰,以后逐渐降低,48 h时仍高于正常（P均〈0.01）。给药组与模型组相应时点比较各指标均明显下降（P〈0.01或P〈0.05）。结论竹叶提取物可能通过抑制TNF-α、IL-1β、ICAM-1的过度表达,对缺血再灌注后脑组织损伤起保护作用。     

急性心肌梗死患者单核细胞PPARδ、MCP-1和MMP-9表达及其与冠状动脉病变关系

目的:探讨急性心肌梗死患者单核细胞中过氧化物酶体增殖激活受体δ(peroxisome proliferator_activated receptors δ,PPARδ)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和基质金属蛋白醇-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及与冠状动脉病变的关系.方法:46例急诊行冠状动脉介入治疗的急性心肌梗死患者和46例冠状动脉造影排除冠心病者(对照组),分离其周围血单核细胞,应用蛋白免疫印迹法检测PPARδ、MCP-1和MMP-9的表达;分析其与冠状动脉病变程度的相关性.结果:急性心肌梗死患者血单核细胞中PPARδ表达水平低于对照组(P<0.01),MCP-1及MMP-9表达高于对照组(P<0.01);PPARδ表达水平与冠状动脉病变程度呈负相关,MCP-1、MMP-9与冠状动脉病变程度呈正相关,PPARδ表达水平与MCP-1、MMP-9呈负相关.结论:PPARδ可通过抑制炎症介质MCP-1及MMP-9的表达,发挥抗动脉粥样硬化及稳定粥样斑块的作用.     

肝X受体β在电针治疗慢性脑缺血炎性损伤中的作用研究

目的探讨肝X受体β（LXRβ）在电针治疗慢性脑缺血炎性损伤中的作用。 方法将40只雄性大鼠采用随机数字表法分为假手术组、模型组、激动剂组和电针组,每组各10只。假手术组大鼠麻醉切开颈部皮肤后,仅分离双侧颈总动脉,不进行结扎。模型组、激动剂组和电针组大鼠均给予经典二血管闭塞（2-VO）制备慢性脑缺血大鼠模型,激动剂组大鼠造模成功后喂食LXRβ激动剂T0901317（1 mg/kg,每日1次,连续7 d）,电针组大鼠造模成功后给予电针治疗,持续1周。于术后2周从各组中分别选取1只大鼠采用快速断头取脑法进行模型病理性评估。各组大鼠于术后第4周采用Morris水迷宫考察认知功能情况。水迷宫实验结束5 d后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠脑组织海马CA1区的病理形态变化,采用酶联免疫吸附测定检测海马CA1区白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平,采用Western-blotting法检测海马CA1区LXRβ、核因子κB1（NF-κB1）P50及NF-κB1 P105蛋白表达。 结果各组大鼠在定位航行实验中的平台距离与爬上平台所需时间（F = 2.960、2.945,P = 0.045、0.046）,在空间探索实验中第一次到达平台时间与穿越平台的次数间比较（F = 7.627、3.512,P = 0.001、0.024）,差异均有统计学意义。且与模型组相比,电针组及激动剂组大鼠平台距离均减小[（1 136 ± 857）、（760 ± 629）、（699 ± 702）cm],爬上平台所需时间[（49 ± 41）、（36 ± 28）、（34 ± 33）s]及第一次到达平台时间[（38 ± 19）、（29 ± 25）、（24 ± 18）s]均缩短（P均<0.05）,但在穿越平台的次数上仅电针组大鼠显著增多[（2.0 ± 1.4）vs.（3.9 ± 1.8）,P<0.05]。HE染色提示模型组大鼠海马CA1区神经元胞核染色加深,排列松散,细胞层数减少;电针组与激动剂组大鼠的神经元细胞形态结构有明显改善,神经元数量增多,细胞层数显著增多。各组大鼠海马CA1区脑组织IL-1β（F = 18.350,P < 0.001）、IL-6（F = 4.235,P = 0.018）和TNF-α（F = 4.190,P = 0.019）水平的比较差异均有统计学意义。且与模型组相比,电针组和激动剂组大鼠IL-1β[（357 ± 38）、（278 ± 45）、（232 ± 54）ng/L]、IL-6[（287 ± 45）、（188 ± 54）、（213 ± 54）ng/L]和TNF-α[（383 ± 45）、（236 ± 54）、（251 ± 91）ng/L]表达水平均显著下降（P均<0.05）。Western-blotting显示,各组大鼠海马CA1区脑组织LXRβ及NF-κB1 P50蛋白的比较,差异均无统计学意义（F=0.661、0.315,P=0.586、0.815）。而各组间NF-κB1 P105蛋白表达的比较,差异有统计学意义（F=3.940,P=0.023）,且与模型组相比,电针组及激动剂组的NF-κB P105蛋白表达显著减少[（4.0 ± 0.7）× 10^-2、（2.8 ± 1.0）× 10^-2、（2.7 ± 1.1）× 10^-2,P均<0.05]。 结论LXRβ受体的激活在抑制慢性脑缺血过度炎症反应过程中发挥重要作用,电针能起到抑制慢性脑缺血炎性损伤的作用,但电针不具备上调LXRβ表达的作用。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠气道成纤维细胞过表达HSG基因对Wnt和MAPK信号通路的影响

目的 研究在慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmoriary disease, COPD）大鼠气道成纤维细胞中过表达HSG基因（MFN2）对Wnt信号通路的影响。方法 采用蛋白酶诱导的方式构建大鼠COPD模型，然后原代分离COPD模型大鼠气道成纤维细胞。构建HSG基因的表达载体，转染大鼠气道成纤维细胞，得到过表达HSG的大鼠气道成纤维细胞。实验一，采用Wnt信号途径激动剂佛波醇酯（TPA）处理细胞，WB、qPCR检测转染后HSG、Wnt5a的表达；实验二，采用MAPK信号途径激动剂EGF因子处理细胞，WB、qPCR检测转染后HSG、ERK1/2的表达；而且每个实验都进行ELISA检测细胞培养液中TGF-β1、PDGF、MMP-9的含量，流式检测细胞凋亡情况。结果 COPD模型大鼠气道成纤维细胞分离成功。实验一二中，WB、qPCR检测显示过表达HSG能抑制基因Wnt5a和ERK1/2的表达，受相应激动剂处理后，这些基因表达上调而HSG表达受抑制；而ELISA检测结果显示，过表达HSG能降低TGF-β1、PDGF、MMP-9的含量，受相应激动剂处理后TGF-β...     

膜联蛋白 A1 蛋白在异丙酚对脓毒症大鼠肠保护作用中的机制

目的观察膜联蛋白 A1（Annexin A1）蛋白在异丙酚对脓毒症大鼠肠保护作用中的机制。 方法采用大鼠股静脉注射脂多糖复制脓毒症模型,按完全随机化原则分为 6 组:正常对照组、内毒素组、异丙酚组、脂肪乳组、内毒素+异丙酚组、内毒素+脂肪乳组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1β）、白细胞介素-1（IL-6）的表达; Western Blot 检测肠组织中 Annexin A1 表达;HE 染色比较各组肠组织形态。 结果与对照组相比,脂多糖组 IL-1β,IL-6,TNF-α 表达明显升高,Annexin A1 表达明显降低;脂多糖+异丙酚组 IL-1β,IL-6,TNF-α表达明显降低,Annexin A1 表达明显升高（P＜ 0.05）。 结论异丙酚对脓毒症大鼠肠道有明显的保护和抗炎作用,且该作用可能与膜联蛋白 A1 蛋白相关。      

头痛宁对偏头痛大鼠硬脑膜及三叉神经节IL-1β表达影响

目的:研究头痛宁对反复发作性偏头痛大鼠硬脑膜及三叉神经节IL-1β(interleukin-1beta)表达的影响。方法:选择健康成年雄性SD大鼠60只,初始质量180~220 g。先取20只随机分为4组,每组5只,分别为生理盐水7天组(sham)、致炎剂(inflammatory soup,IS)1天组(IS1)、致炎剂3天组(IS3)和致炎剂7天组(IS7),建立反复发作性偏头痛大鼠模型;再取25只随机分为5组,每组5只,分别为致炎剂7天对照组(IS7)、0.375 g/kg头痛宁干预组(T1)、0.75 g/kg头痛宁干预组(T2)、1.5 g/kg头痛宁干预组(T3)和3.0 g/kg头痛宁干预组(T4),取硬脑膜及三叉神经节进行IL-1β蛋白免疫印迹分析(western blot)及IL-1βm RNA实时荧光定量PCR检测。最后取15只,随机分为3组,每组5只,分别为生理盐水7天组(sham)、致炎剂7天组(IS7)和3.0 g/kg头痛宁干预组(T4),灌流固定后各组分别取大鼠硬脑膜及三叉神经节进行IL-1β蛋白免疫荧光检测。结果:(1)与生理盐水7天组比较,致炎剂7天组IL-1β的表达在硬脑膜(P<0.01)及三叉神经节(P<0.01)均明显升高;(2)与致炎剂7天组相较,在大鼠硬脑膜/三叉神经节,0.75 g/kg头痛宁干预组(P<0.01/P<0.01)、1.5 g/kg头痛宁干预组(P<0.01/P<0.05)和3.0 g/kg头痛宁干预组(P<0.01/P<0.01)IL-1β表达均明显降低,0.375 g/kg头痛宁干预组IL-1β表达下降不明显;(3)与致炎剂7天组相较,3.0 g/kg头痛宁干预组三叉神经节神经元细胞胞质内免疫荧光斑点数明显减少,大鼠硬脑膜未能成功染色;(4)与致炎剂7天组相较,3.0 g/kg头痛宁干预组在硬脑膜(P<0.01)及三叉神经节(P<0.05)IL-1βm RNA表达均减少。结论:头痛宁抑制硬脑膜及三叉神经节IL-1β基因转录,下调IL-1β的表达可能是其治疗偏头痛的机制之一。     

针刺对偏头痛大鼠脑内降钙素基因相关肽基因表达的影响

目的 探讨偏头痛大鼠脑内降钙素基因相关肽（CGRP）的表达强度及针刺对CGRP基因表达的调控机制及针刺防治偏头痛的作用机制。方法 参照Knyihar-Csillik方法复制大鼠偏头痛模型，将动物随机分成正常对照组，模型对照组，针刺预防组和针刺治疗组，每组10只，采用放射免疫分析法测定CGRP浓度；采用RT－PCR法测定CGRP mRNA表达。结果 颈静脉血CGRP含量；正常大鼠保持低水平恒定量，模型对照组大鼠CGRP含量显升高（P＜0．01），针刺预防组及针刺治疗组与正常大鼠相近，但与模型对照组比较，显降低（P＜0．01）；脑干及三叉神经节CGRP mRNA的表达变化；正常对照组表达在较低水平，模型对照组表达显增强（P＜0．01），针刺治疗组及针刺预防组与模型对照组比较，表达显减弱（P＜0．01）。结论 实验性偏头痛大鼠脑内CGRP的过度表达，可能是偏头痛发作的分子机制之一，针刺调控CGRP mRNA表达可能是针刺防治偏头痛的机制之一。     

脉冲电磁场对大鼠椎间盘退变及A2A腺苷受体介导的活性氧/PI3K/Akt信号通路的影响

目的 观察脉冲电磁场（PEMF）对椎间盘退行性病变（IDD）大鼠髓核A2A腺苷受体（A2AR）的调控效应,并探讨其对A2AR介导的活性氧（ROS）/PI3K/Akt信号通路的影响。 方法 采用随机数字表法将50只SD大鼠分为对照组、椎间盘退行性病变组（简称模型组）、A2AR激动剂CGS-21680治疗组（简称激动剂组）、PEMF组和PEMF联合CGS-21680治疗组（简称观察组）。除对照组外,其余各组大鼠均制成IDD动物模型。制模后激动剂组向L5-6椎间盘组织注射100 μl CGS-21680,PEMF组给予PEMF干预,观察组注射CGS-21680后再给予PEMF干预,PEMF干预时间为14 d。培养大鼠原代髓核细胞,将其分为对照组、IL-1β模型组(简称IL-1β组)、激动剂组、PEMF组和观察组,各组细胞干预方法同上。于制模8周后采用HE染色评估各组大鼠椎间盘组织病理形态变化,采用TUNEL染色评估髓核细胞凋亡情况,采用免疫组化/免疫荧光法测定8-OHDG表达,采用ELISA试剂盒等检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及ROS含量,采用Western blot技术检测A2AR、PI3K、AKT及p-AKT蛋白水平。 结果 模型组大鼠髓核细胞明显皱缩、坏死,纤维环断裂;观察组纤维环完整,髓核结构基本趋于正常。激动剂组、PEMF组及观察组SOD水平及A2AR、PI3K、p-AKT、AKT蛋白含量均较模型组明显升高,MDA、ROS及8-OHDG表达均显著降低（P＜0.05）;并且观察组ROS水平亦显著低于激动剂组及PEMF组（P＜0.05）,p-AKT磷酸化水平则显著高于激动剂组及PEMF组（P＜0.05）。细胞实验结果显示,激动剂组、PEMF组及观察组髓核细胞SOD水平、A2AR、PI3K、p-AKT、AKT蛋白含量均显著高于IL-1β组,MDA、ROS及8-OHDG水平均明显降低（P＜0.05）;并且观察组ROS表达亦显著低于激动剂组和PEMF组（P＜0.05）,A2AR蛋白含量及p-AKT磷酸化水平则明显高于激动剂组及PEMF组（P＜0.05）。激动剂组、PEMF组及观察组髓核细胞Bax水平均较IL-1β组显著降低,Bcl-2表达则明显升高（P＜0.05）,并且观察组细胞凋亡率亦显著低于激动剂组和PEMF组,Bcl-2表达则显著高于激动剂组及PEMF组（P＜0.05）。 结论 PEMF可通过上调A2AR活性,减少ROS生成,从而发挥抗氧化应激作用;联合A2AR激动剂能进一步激活PI3K/Akt磷酸化,下调促凋亡蛋白Bax水平,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,从而抑制髓核细胞凋亡,减缓IDD恶性进展。     

已酮可可碱对内毒素血症大鼠肝损伤的保护作用

目的探讨已酮可可碱（PTX）对内毒素血症大鼠肝损伤的保护作用。方法Wistar大鼠18只随机分成三组：假手术组、内毒素组和PTX治疗组，每组6只。测定各组动物血清TNF—α、IL-1β水平，肝组织ICAM-1蛋白表达。结果内毒素组血清TNF—α和IL-1β水平与假手术组比较明显增强（P〈0．01），肝组织ICAM-1蛋白表达与假手术组比较也明显增强（P〈0．01）。PTX治疗后，血清TNF—α、IL-1β水平和肝组织ICAM-1蛋白表达与内毒素组比较明显减弱（P〈0．01）。结论TNF-α，IL-1β和肝组织ICAM-1在内毒素急性肝损伤发病机制中起重要作用，PTX可以作用于TNF-α、IL-1β和肝ICAM-1，下调其表达，减轻内毒素对肝组织造成的损伤，保护肝组织。     

白细胞介素-1β和基质蛋白酶-2、基质蛋白酶-9/基质蛋白抑制因子-1在左室重构中的动态表达及内在联系

目的研究白细胞介素-1β(IL-1β)和基质蛋白酶-2(MMP-2)、基质蛋白酶-9/基质蛋白抑制因子-1(MMP-9/TIMP-1)mRNA在左室重构中的动态表达,探讨其内在联系和作用机制。方法将98只SD大鼠,随机分为对照组(14只)和实验组(84只),实验组通过开胸结扎左冠状动脉前降支,制作大鼠心肌梗死模型,于结扎后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d、14 d分别处死12只取材。对照组只开胸不结扎冠状动脉,分别在实验组各个时间点处死2只。进行HE染色、IHC和原位杂交检测IL-1β、MMP-2、MMP-9和TIMP-1的表达情况,并分析其在左室重构中的关系及作用机制。结果①HE染色示:实验组建立成功,各个时间点的呈现不同的病理学变化,从炎细胞浸润到纤维母细胞增生及瘢痕形成;对照组未出现心肌梗死表现。②在免疫组化和原位杂交结果中,实验组和对照组具有一致性。实验组中IL-1β、MMP-2、MMP-9、TIMP-1表达与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。经过统计学分析显示,IL-1β与MMP-2、MMP-9呈正相关,并且IL-1β与MMP-9呈高度正相关,IL-1β与TIMP-1呈负相关。结论IL-1β、MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达异常与左室重构具有高度的相关性且相互之间存在一定的内在联系。     

鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制

目的探究鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制。方法选择30只雄性SD大鼠根据随机数字表法分为3组,每组10只。对照组为没有粉尘接触的健康SD大鼠;模型组采用一次性除尘方法建立大鼠矽肺模型;治疗组采用一次性除尘方法建立大鼠矽肺模型,每天灌服鸡内金提取物0.2 g。定量逆转录PCR(RT-qPCR)分析自噬相关基因(Beclin、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ)和凋亡相关基因(Bcl-2)的mRNA表达。培养后6、12、24 h,MTT检测巨噬细胞的活力。培养后12、24 h,通过划痕实验测定细胞的划痕间隙距离。酶联免疫吸附试验法检测促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。蛋白质印迹检测大鼠肺部纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-12(MMP-12)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和重组人精氨酸酶1(Arg1)的蛋白表达。结果模型组大鼠Beclin、LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达、IL-1β和TNF-α水平以及纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9、MMP-12蛋白和iNOS蛋白表达水平均较对照组显著升高,Bcl-2 mRNA和Arg1蛋白表达水平均较对照组显著降低(P<0.05),治疗组大鼠Beclin、LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达、IL-1β和TNF-α水平以及纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9、MMP-12蛋白和iNOS蛋白表达水平均较模型组显著降低,Bcl-2 mRNA和Arg1蛋白表达水平均较模型组显著升高(P<0.05)。培养后6、12、24 h,模型组较对照组细胞活力降低(P<0.05),治疗组大鼠较模型组细胞活力升高(P<0.05)。培养后12、24 h,模型组大鼠细胞划痕间隙距离较对照组降低(P<0.05),治疗组大鼠细胞划痕间隙距离较模型组升高(P<0.05)。结论鸡内金提取物通过诱导肺泡巨噬细胞自噬而发挥抗炎和抗纤维化作用。自噬通过抑制纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9和MMP-12的表达,来保护肺泡巨噬细胞免受二氧化硅诱导的细胞凋亡,从而进一步减少由二氧化硅颗粒引起的炎症因子的分泌和最终的纤维化。     

PPARγ对多器官功能障碍综合征大鼠炎性反应的影响

目的:观察过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)及其激动剂罗格列酮注对多器官功能障碍综合征(MODS)大鼠炎性反应的影响。方法:50只大鼠随机分为5组:A组(正常对照组),B组(MODS损伤1d组),C组(MODS损伤3d组),D组(PPARγ激动剂预处理1d组),E组(PPARγ激动剂预处理3d组)。观察5组大鼠从致伤开始后1、3d的各脏器功能的生化指标,病理组织学,大鼠外周血单个核细胞内转录因子PPARγ、NF-κBp65的表达及血清TNF-α、IL-6的表达。结果:经股静脉途径注入PPARγ激动剂罗格列酮可降低MODS大鼠总胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平;减轻大鼠病理组织学损伤,降低血液中TNF-α、IL-6的水平。结论:通过股静脉途径注入PPARγ激动剂,抑制了NF-κB的活化,阻断其所调控的炎症因子的合成,从而消除炎性细胞在体内的大量聚集,阻断炎症反应的恶性循环,成为治疗MODS新的方向。     

化橘红对糖尿病心肌病心肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的干预作用

目的 观察化橘红对糖尿病心肌病（DCM）大鼠心肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的干预作用。 方法 （1）构建DCM大鼠模型,将40只大鼠用链脉佐菌素处理后,15只血糖浓度<16.7 mmol/L的大鼠纳入空白对照组,剩余的25只血糖浓度>16.7 mmol/L的大鼠随机分为DCM组（n=11）与化橘红组（n=14）。化橘红组大鼠给予化橘红400 mg/(kg·d)灌胃,DCM组和对照组给予等量生理盐水灌胃。测量各组大鼠不同时间点血糖（1、8、16、22周）;测量心功能相关指标;光镜下观察心肌形态学改变,电镜下心肌纤维化定量分析;测定心肌胶原总量;免疫组化测定心肌胶原;Western印迹检测心肌细胞TGF-β1、Smad、MMP-9、MMP-2、TIMP-1等蛋白含量;RT-PCR检测TGF-β1、MMP-9、MMP-2、TIMP-1等蛋白的mRNA表达。（2）构建心肌成纤维细胞增殖模型,随机分为两组,化橘红预处理组为血清培养基加0.5 mmol/L化橘红,而对照组为等量血清培养基。检测两组一氧化氮变化、TGF-β1蛋白、c-fos蛋白、p27蛋白,iNOS蛋白、Cyclin D蛋白表达情况。 结果 化橘红组的大鼠各时间点血糖、心肌纤维化、心肌胶原总量及各型胶原较DCM组显著下降,心收缩、舒张功能明显改善（P<0.05）,TGF-β1、Smad、MMP-9、MMP-2、TIMP-1蛋白的表达明显下调（P<0.05）,相关蛋白的mRNA表达也明显抑制（P<0.05）。化橘红预处理组一氧化氮、TGF-β1蛋白、c-fos蛋白、p27蛋白,iNOS蛋白、Cyclin D蛋白表达情况较对照组相比明显下降（P<0.05）。 结论 化橘红对DCM中TGF-β1/Smad通路起到了抑制作用,从而调控其下游的MMPs/TIMPs等通路,改善DCM的心肌纤维化进程,抑制心肌肥厚,减少心肌的损伤。       

肿瘤坏死因子样微弱凋亡诱导因子对骨关节炎软骨细胞作用实验研究

目的研究肿瘤坏死因子样微弱凋亡诱导因子（TWEAK）对体外培养骨关节炎（OA）软骨细胞的作用,同时探讨炎性细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）与TWEAK之间的关系。方法体外培养OA患者原代软骨细胞,分别用TWEAK（75ng/mL）,TWEAK（75ng/mL）和IL-1β（5ng/mL）,TWEAK（75ng/mL）和TNF-α（5ng/mL）作用细胞48h,MTT检测细胞因子对软骨细胞的增殖作用影响;ELISA检测细胞培养上清液中MMP-13、IL-6和Fas的分泌表达。结果 MTT结果表明细胞因子刺激软骨细胞后对细胞增殖无明显影响。TWEAK和IL-1β组诱导MMP-13表达增加（P〈0.05）;TWEAK和IL-1β组,TWEAK和TNF-α组均诱导IL-6表达增加（P〈0.05）。3组Fas分泌表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 IL-1β与TWEAK,TNF-α与TWEAK分别诱导OA软骨细胞MMP-13和IL-6表达增加,可能参与关节软骨损伤和OA的病程发展。