TL-Ⅰ号方镇静作用的实验研究

目的研究TL-Ⅰ号药方的镇静作用.方法 72只健康ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、大剂量治疗组、中剂量治疗组、小剂量治疗组,用尾悬挂法和动物行为-自发活动分析系统测定偏头痛模型小鼠的活动行为.结果 TL-Ⅰ号方能延长偏头痛模型小鼠尾悬挂的静止时间,能使模型小鼠在自主活动箱中的活动路程和活动时间缩短.结论 TL-Ⅰ号方具有一定的镇静作用.     

干眼症小鼠模型自噬水平变化及其对炎症反应的调节作用研究

目的 探究干眼症小鼠模型自噬水平变化及其对炎症反应的调节作用研究.方法 选取6～8周龄无特定病原级雄性小鼠120只,随机数字表法分为正常组、假手术组、手术对照组、雷帕霉素组4组,每组各30只.通过切开双侧睾丸和附睾制备干眼症小鼠模型,正常组小鼠不做任何处理,假手术组小鼠手术只切开阴囊而不切除睾丸,手术对照组小鼠于建模后...     

JAK-STAT通路抑制剂和自由基清除剂联合应用对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用研究

目的 研究联用Janus激酶信号转导及转录激活因子(JAK-STAT)信号通路抑制剂AG490和自由基清除剂二甲基硫脲(DMTU)对大鼠局灶忭脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用及其剂蹙-效应关系.方法 制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型.选择雄性SD大鼠.按照随机数字表法分组,每组10只.实验1 设I/R模型组、二甲亚砜(DMSO)对照组、生理盐水(NS)对照组、AG490组、DMTU组以及AG490联合DMTU(A+D)组;实验2分为模型组及高、中、低剂量联合组.于I/R 24、48和72 h对各组人鼠进行神经行为学评分(NBS);72 h后处死动物,测量其脑梗死体积.结果 I/R 24、48和72 h A+D组、AG490组和DMTU组NBS明显高于I/R模型组,脑梗死体积明显小于I/R模型组,其中A+D组脑梗死体积较AG490组和DMTU组明显减小(P均＜0.05).高、中剂链联合组NBS明显高于低剂量联合组和模型组.脑梗死体积明显小于后两组,其中高剂量联合组脑梗死体积较中剂量联合组明显减小(P均＜0.05).而低剂量联合组与模型组之间差异无统计学意义.结论 AG490和DMTU有明显的协同脑保护作用,并呈现剂量依赖性.     

异甘草酸镁对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

目的:探讨异甘草酸镁(MgIC)对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用.方法:60只成年雄性昆明小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、MgIG小剂量治疗组、MgIG大剂量治疗组.正常对照组每天予0.4 mL生理盐水灌胃,其余3组予56°白酒16 mL/(kg·d)连续灌胃10d造成急性酒精性肝损伤模型.正常对照组和模型对照组在灌胃前30 min予0.25 mL生理盐水腹腔注射,MgIG小剂量治疗组和MgIG大剂量治疗组灌胃前预防性给予MgIG[剂量分别为15、45mL/(kg·d)].第10天处死小鼠,通过检测死亡率、死亡时间、肝功能生化指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)]的变化及肝组织病理变化评价MgIC对急性酒精肝损伤的保护作用.结果:MgIG能降低急性酒精性肝损伤小鼠的死亡率、延长动物存活时间,降低模型对照组、MgIG小剂量治疗组、MgIG大剂量治疗组小鼠血清中AST及ALT的含量,改善肝脏病理变化.结论:MgIG对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的保护作用.     

玉竹提取物A对1型糖尿病小鼠的免疫干预作用

目的:观察百合科黄精属中草药玉竹经水醇法提取而来的玉竹提取物A对链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠血糖、T淋巴细胞亚群及外周血细胞因子的影响。方法:①实验于2004-05/2004-12在锦州医学院医学实验中心完成。选用C57BL小鼠60只。随机抽取9只作为正常对照组小鼠(只注射等体积枸橼酸钠缓冲液),其余小鼠应用4g/L链脲佐菌素溶液,按40mg/kg剂量腹腔注射制备1型糖尿病模型,1次/d,连续5d,以血糖≥11.4mmol/L,尿糖以上2周,为造模成功,低于此值弃去,造模成功36只。将其随机分为4组,每组9只:模型组,玉竹提取物A1,2,4g/kg组。②正常对照组与模型组腹腔注射生理盐水0.5mL,1次/d,共4周;玉竹提取物A1,2,4g/kg组,分别按1,2,4g/kg剂量腹腔注射0.5mL玉竹提取物A(由锦州医学院免疫教研室潘兴瑜教授提供,玉竹的干燥根茎经水醇法提取而得),1次/d,共4周。③用药4周监测血糖变化,应用流式细胞仪检测用药后1型糖尿病小鼠脾T淋巴细胞亚群含量变化;采用酶联免疫分析法检测用药后1型糖尿病小鼠血清白介素4、白介素10、干扰素γ水平变化。④组间比较采用方差分析。结果:造模失败15只,正常小鼠9只及造模成功小鼠36只进入结果分析。①空腹血糖水平:用药前各组差异不明显(P>0.05),用药后,玉竹提取物各剂量组明显低于模型组(P<0.05～0.01)。②CD4 T淋巴细胞含量和CD4 与CD8 T淋巴细胞比值:模型组明显高于正常对照组和玉竹提取物各剂量组(P<0.05～0.01),CD8 T淋巴细胞含量:模型组明显低于正常对照组和玉竹提取物各剂量组(P<0.05～0.01)。③血清白细胞介素4和10水平:模型组明显低于正常对照组和玉竹提取物各剂量组(P<0.05～0.01),血清干扰素γ水平:模型组明显高于正常对照组和玉竹提取物各剂量组(P<0.05～0.01)。结论:玉竹提取物A经腹腔注射能明显降低1型糖尿病小鼠血糖,其机制与恢复CD4 和CD8 T淋巴细胞亚群平衡,调节发病过程中细胞因子水平有关。     

不同剂量魔芋葡甘聚糖对青年和老年小鼠肠道运动功能的影响

目的分析不同剂量魔芋葡甘聚糖(KGM)对青年和老年小鼠肠道运动功能的影响。方法取青年小鼠(6周龄)与老年小鼠(60周龄)各40只,均分为8组:空白对照组(正常小鼠,未进行用药)、模型组(给予硫糖铝灌胃13. 40 g/kg建立便秘模型)、KGM对照组(给予KGM 0. 90 g/kg)、低剂量干预组(给予硫糖铝灌胃13. 40 g/kg建模联合KGM 0. 18 g/kg进行灌胃)、高剂量干预组(给予硫糖铝灌胃13. 40 g/kg建模联合KGM 0. 90 g/kg进行灌胃),每组均为6只,比较各组青、老年小鼠首次排便时间、12 h排便量及病理染色结果的差异。结果在青年小鼠中,模型组首次排便时间较空白对照组明显增加(P 0. 01),低剂量干预组首次排便时间较模型组明显减少(P 0. 01),高剂量干预组首次排便时间较空白对照组、模型组均明显增加(P 0. 01),KGM对照组、高剂量干预组12 h排便量较空白对照组均明显减少(P 0. 01)。在老年小鼠中,KGM对照组和高剂量干预组首次排便时间较空白对照组均明显增加(P 0. 01),低剂量干预组12 h排便量较空白对照组、模型组均明显增多(P 0. 01),KGM对照组与高剂量干预组12 h排便量较空白对照组、模型组均明显减少(P 0. 01)。经苏木素-伊红染色结果可见,高剂量干预组的老年小鼠容易出现结肠炎性细胞集聚和小肠结构完整性受损。结论应用大剂量的KGM可能是老年小鼠肠道蠕动功能减弱而导致排便困难的主要原因。     

不同剂量博莱霉素致小鼠肺纤维化模型的比较

背景:经气管注射博莱霉素是制作动物肺纤维化模型最常用的方法,但博莱霉索最佳造模剂量目前国内外尚无统一定论.目的:对比观察不同剂量的博莱霉素对小鼠肺纤维化模型的效果,寻找一种较为合理可靠的小鼠造模剂量.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-09/2008-04在上海市发育生物学重点实验室完成.材料:SPF级健康雌性C57BU6J小鼠60只,体质量18～22 g,用于制备小鼠肺纤维化模型.方法:60只小鼠随机数宁表法分为博莱霉素组(n=45)和对照组(n=15),博莱霉素组各选15只动物分别气管内注射不同剂量(2,3.5,5 mg/kg)的博莱霉素,对照组气管内注射相同体积的生理盐水,所有小鼠于造模后第28天处死并取其左肺叶制作病理切片,右肺叶作羟脯氨酸含量测定.主要观察指标:小鼠28 d内的存活情况;光镜观察肺部炎症和纤维化程度;取右肺叶做羟脯氨酸测定.结果:①实验开始后前7 d,博莱霉素组和对照组均无小鼠死亡,第8天博莱霉索组小鼠死亡率高丁对照组(P<0.05);博莱霉素3个剂量组之间死亡率由高到低分别为5,3.5,2 mg/kg博莱霉素组,但差异无显著性意义(P>0.05).②光镜下可见对照组肺泡形态正常,问质中无炎症细胞浸润;博莱霉素组可见肺实变和胶原沉积,剂量越高,肺纤维化程度越重,以5 mg/kg博莱霉素组最明显.③各组小鼠肺组织中羟脯氨酸含量从高到低依次为5 mg/kg博莱霉素组、3.5 mg/kg博莱霉素组、2 mg/kg博莱霉奈组和对照组.结论:经气管注射博莱霉素制作小鼠肺纤维化模型应兼顾造模效果和动物的存活率,3.5 mg/kg是较为理想的小鼠造模剂量.     

右美托咪定通过调节线粒体分裂和耗氧量减轻细支气管肺炎小鼠肺损伤的机制

目的 探讨右美托咪定通过调节线粒体分裂和耗氧量减轻细支气管肺炎小鼠肺损伤的机制.方法 50只无特定病原体级雄性白化小鼠为研究对象,将所有小鼠按照实验设置分为5组:对照组、阴性对照组、低剂量右美托咪定组、中剂量右美托咪定组和高剂量右美托咪定组,各10只.除对照组外,其余4组通过人工感染铜绿假单胞菌的方法构造小鼠细支气管肺...     

维拉帕米抗戊四唑诱导小鼠惊厥的实验研究

目的研究维拉帕米抗惊厥的治疗效果,为临床治疗惊厥提供新方法。方法将实验小鼠60只分为模型对照组、硫酸镁(MgSO4)组和实验组(维拉帕米低、中、高剂量组),每组12只。预先给予相应的治疗药物之后,腹腔注射戊四唑制造惊厥模型;造模成功后观察并记录小鼠的惊厥发生时间、存活时间、惊厥发生率和死亡率等。结果与模型对照组相比,硫酸镁组和维拉帕米各剂量组惊厥发生所需时间均有所增加(P<0.01),硫酸镁组小鼠的存活时间显著延长且死亡率降低(P<0.01);维拉帕米各剂量组小鼠的存活时间延长(P<0.01),低、中剂量组死亡率明显降低(P<0.01)。结论低、中剂量维拉帕米对于戊四唑所致的惊厥模型有较好的疗效;高剂量维拉帕米不宜用于抗惊厥治疗。     

大豆异黄酮对心理应激所致小鼠卵巢氧化损伤的保护作用

目的从抗氧化的角度探讨大豆异黄酮（SI）对心理应激导致的小鼠卵巢氧化损伤的保护作用。方法以束缚法建立动物的心理应激模型。将50只刚刚性成熟的健康雌性昆明小鼠,按随机数字表法分为5组：对照组、应激模型组、SI低剂量组（83 mg.kg-1）、SI中剂量组（167 mg.kg-1）和SI高剂量组（333 mg.kg-1）,每组10只小鼠。SI组应激的同时给与SI处理。SI组和应激模型组束缚持续30 d,束缚结束后,检测各组小鼠血清皮质醇含量,卵巢组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活...     

鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制

目的探究鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制。方法选择30只雄性SD大鼠根据随机数字表法分为3组,每组10只。对照组为没有粉尘接触的健康SD大鼠;模型组采用一次性除尘方法建立大鼠矽肺模型;治疗组采用一次性除尘方法建立大鼠矽肺模型,每天灌服鸡内金提取物0.2 g。定量逆转录PCR(RT-qPCR)分析自噬相关基因(Beclin、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ)和凋亡相关基因(Bcl-2)的mRNA表达。培养后6、12、24 h,MTT检测巨噬细胞的活力。培养后12、24 h,通过划痕实验测定细胞的划痕间隙距离。酶联免疫吸附试验法检测促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。蛋白质印迹检测大鼠肺部纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-12(MMP-12)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和重组人精氨酸酶1(Arg1)的蛋白表达。结果模型组大鼠Beclin、LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达、IL-1β和TNF-α水平以及纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9、MMP-12蛋白和iNOS蛋白表达水平均较对照组显著升高,Bcl-2 mRNA和Arg1蛋白表达水平均较对照组显著降低(P<0.05),治疗组大鼠Beclin、LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达、IL-1β和TNF-α水平以及纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9、MMP-12蛋白和iNOS蛋白表达水平均较模型组显著降低,Bcl-2 mRNA和Arg1蛋白表达水平均较模型组显著升高(P<0.05)。培养后6、12、24 h,模型组较对照组细胞活力降低(P<0.05),治疗组大鼠较模型组细胞活力升高(P<0.05)。培养后12、24 h,模型组大鼠细胞划痕间隙距离较对照组降低(P<0.05),治疗组大鼠细胞划痕间隙距离较模型组升高(P<0.05)。结论鸡内金提取物通过诱导肺泡巨噬细胞自噬而发挥抗炎和抗纤维化作用。自噬通过抑制纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9和MMP-12的表达,来保护肺泡巨噬细胞免受二氧化硅诱导的细胞凋亡,从而进一步减少由二氧化硅颗粒引起的炎症因子的分泌和最终的纤维化。     

氙气后处理对脊髓缺血再灌注损伤的效果：Akt信号通路和自噬机制

目的 探讨氙气后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)后自噬的影响及其与苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路的关系。方法 30只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和氙气后处理组(Xe组),每组10只。后两组通过夹闭腹主动脉85 min,再灌注4 h建立大鼠SCIRI模型。于再灌注1 h时,Xe组经呼吸机吸入50%氙气+50%氧气混合气1 h。其余两组吸入50%氮气+50%氧气混合气1 h。再灌注4 h时,对大鼠行BBB评分和斜板试验后,收集L_3-5脊髓,Nissl染色计数正常神经元数量,Western blotting检测脊髓组织中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、自噬蛋白[p62、Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)Ⅰ和LC3Ⅱ]的表达,逆转录实时定量聚合酶链反应检测脊髓组织中p62、Beclin 1和LC3Ⅱ mRNA的表达。结果 与Sham组相比,I/R组后肢BBB评分明显降低(P <0.01),斜板试验最大倾斜度明显减小(P <0.01),正常神经元数量明显减少(...     

脂质沉积性肌病中自噬和泛素相关蛋白表达研究

[目的]探讨自噬相关蛋白和泛素相关蛋白的表达对脂质沉积性肌病(lipid storage myopathy,LSM)的影响.[方法]选择2010年1月至2015年12月在本院就诊的LSM患者30例作为本次临床研究对象,采用随机数据表法选择其中15例作为观察组,选取同时段于本院进行健康体检且年龄性别相匹配的15例正常体检者作为对照组,采用Western Blot检测上述两组骨骼肌中自噬相关蛋白和泛素相关蛋白的表达情况.[结果]观察组骨骼肌中自噬相关蛋白p62、LC3 Ⅰ的表达水平显著高于对照组,而LC3 Ⅱ的表达水平显著低于对照组,且观察组骨骼肌中LC3 Ⅰ/LC3 Ⅱ的比值明显高于对照组;此外,观察组骨骼肌中泛素蛋白连接酶MuRF1、Astrogin-1和锌指蛋白ZNF216的表达水平均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论]人体自噬功能的抑制以及泛素化相关蛋白表达水平的升高对脂质沉积性肌病的发生发展具有诱导作用.     

大黄通过改善线粒体自噬缓解急性胰腺炎大鼠内质网应激和脂质代谢障碍的机制

目的探讨大黄通过改善线粒体自噬缓解急性胰腺炎大鼠内质网应激和脂质代谢障碍的机制。方法选取100只SD大鼠,按随机数字表法分为空白对照组、模型组、大黄低(0.5 mL/kg)、中(1.0 mL/kg)、高(2.0 mL/kg)剂量组,每组20只,除空白对照组其余各组均构建急性胰腺炎模型。蛋白质印迹法检测线粒体自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬相关蛋白5(ATG5)]、内质网应激相关蛋白[磷酸化α亚基的真核起始因子2(p-eIF2α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)以及转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)]的表达。全自动生化分析仪测定各组大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平以及炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠线粒体自噬相关蛋白(LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和ATG5)和内质网应激相关蛋白(p-eIF2α、GRP78、CHOP)相对表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,大黄低、中、高剂量组大鼠线粒体自噬相关蛋白和内质网应激相关蛋白相对表达量均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL-C、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α水平均显著升高,HDL-C、SOD和GSH水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,大黄低、中、高剂量组大鼠TC、TG、LDL-C、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α水平显著降低,HDL-C、SOD和GSH水平显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05),且大黄的作用呈剂量依赖性。结论大黄能够通过改善线粒体自噬来缓解急性胰腺炎大鼠内质网应激和脂质代谢障碍水平,且2.0 mL/kg的大黄效果最佳。     

自噬对肾小管细胞毒性损伤后线粒体功能的影响及相关机制研究

目的研究自噬对肾小管细胞毒性损伤后线粒体功能的影响及相关机制。方法将人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)分为杂化siRNA组(对照无关序列片段siRNA转染细胞)、杂化siRNA+顺铂组(对照无关序列片段siRNA转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)、沉默Pink1+顺铂组(Pink1沉默转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)和沉默Parkin+顺铂组(Parkin沉默转染细胞+10μmol/L顺铂溶液)。培养12 h后,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定各组细胞存活率,JC-1法检测线粒体膜电位,荧光法检测各组细胞内三磷酸腺苷(ATP)的含量,Western blotting和免疫荧光探针检测自噬相关蛋白的相对表达。结果杂化siRNA+顺铂组的细胞存活率为(88.2±2.7)%,显著低于杂化siRNA组[(101.3±3.1)%](P<0.05);沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的存活率为(80.1±2.3)%、(79.4±3.0%),显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的线粒体膜电位和ATP含量为(0.90±0.01)、(0.82±0.01)nmol/mg,显著低于杂化siRNA组[(1.01±0.02)、(1.00±0.04)nmol/mg](P<0.05);沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的线粒体膜电位(0.79±0.02、0.77±0.02)和ATP[(0.66±0.05)、(0.66±0.02)nmol/mg]含量显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的Pink1、Parkin、Beclin蛋白的相对表达量和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.68±0.04、1.80±0.05、1.87±0.05、2.01±0.04)显著高于杂化siRNA组(1.00±0.04、1.00±0.05、1.01±0.01、1.04±0.02)(P<0.05);而沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的Pink1、Parkin、Beclin蛋白的相对表达量和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.17±0.05、0.69±0.05、1.37±0.05、1.43±0.02;1.22±0.04、0.57±0.06、1.39±0.03、1.38±0.10)显著低于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。杂化siRNA+顺铂组的自噬阳性点数为(12.2±0.7)个,显著多于杂化siRNA组[(2.4±0.3)个](P<0.05);而沉默Pink1+顺铂组和沉默Parkin+顺铂组的荧光点数[(5.3±0.8)、(5.6±0.5)个]显著少于杂化siRNA+顺铂组(P<0.05)。结论顺铂处理可诱导HK-2细胞的线粒体自噬作用,从而改善顺铂引起的肾小管细胞毒性损伤和线粒体功能,其作用机制可能与Pink1/Parkin蛋白的表达情况有关。     

钠钾泵Scr复合体通过调控自噬影响幼年哮喘大鼠气道重塑的机制研究

目的制备哮喘幼年大鼠模型,观察钠钾泵Scr复合体对哮喘幼年大鼠炎性因子及自噬的影响,探讨钠钾泵Scr复合体调控自噬改善幼年哮喘大鼠气道炎症、气道重塑的机制。方法幼年SD大鼠100只随机分为空白对照组、模型组及钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组各20只。模型组及钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组制备哮喘模型。造模成功后,模型组不作任何干预;钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组分别尾静脉注射钠钾泵Scr复合体5、10、20 mL/(kg·d),连续14 d。空白对照组不制备模型,不作任何干预。药物处理后,5组大鼠行支气管肺泡灌洗检查,采集肺泡灌洗液检测白细胞总数及嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞比率和白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-6水平;采集尾静脉血检测血清IL-4、IL-6水平;之后处死大鼠取肺组织,行HE染色,测定并计算支气管管壁面积/支气管内周长(WA/Pi)、支气管平滑肌面积/支气管内周长(S/Pi)、支气管平滑肌细胞核数目/支气管内周长(N/Pi),采用Western blot法检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)、结节性硬化症因子1(tuberous sclerosis complex 1,TSC1)、caspase-8 mRNA相对表达量。结果模型组及钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组支气管肺泡灌洗液白细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞比率,血清及肺泡灌洗液中IL-4、IL-6水平和肺组织W/Pi、S/Pi和N/Pi均高于空白对照组(P<0.05),模型组高于钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组(P<0.05),钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组依次降低(P<0.05)。模型组及钠钾泵Scr复合体低、中剂、高剂量组肺组织α-SMA(0.796±0.121、0.676±0.271、0.368±0.132、0.210±0.091)、TGF-β(0.723±0.213、0.598±0.213、0.476±0.271、0.381±0.108)、LC3Ⅰ(0.621±0.381、0.562±0.211、0.518±0.132、0.459±0.208)、LC3Ⅱ蛋白(0.298±0.112、0.564±0.213、0.413±0.224、0.309±0.152)相对表达量均高于空白对照组(0.121±0.004、0.083±0.022、0.445±0.223、0.211±0.098),ASK1 mRNA(8.465±1.923、5.983±0.389、2.731±0.442、1.980±0.672)、TSC1 mRNA(13.498±0.223、4.719±0.831、6.073±0.521、8.229±0.983)、caspase-8 mRNA(10.755±0.036、9.056±0.024、6.283±0.035、4.401±0.042)相对表达量均高于空白对照组(0.963±0.221、9.605±0.452、2.308±0.024)(P<0.05),模型组肺组织α-SMA、TGF-β、LC3Ⅰ蛋白及ASK1 mRNA、TSC1 mRNA、caspase-8 mRNA相对表达量高于钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组(P<0.05),LC3Ⅱ蛋白相对表达量低于钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组(P<0.05);钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组肺组织α-SMA、TGF-β、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白及ASK1 mRNA、caspase-8 mRNA相对表达量依次降低(P<0.05),TSC1 mRNA相对表达量依次增高(P<0.05)。结论钠钾泵Scr复合体通过调控自噬水平改善大鼠的气道炎症及气道重塑,且呈剂量依赖性。     

重症溃疡性结肠炎患者血清NOD样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1和核因子κB mRNA表达水平及临床意义

目的探讨重症溃疡性结肠炎（UC）患者血清NOD样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1（CASP1）和核因子κB（NF-κB）mRNA表达水平及临床意义。 方法选取温州市中西医结合医院消化内科收治的重症UC患者116例作为重症UC组,同期健康体检者50例作为对照组,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测受试者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测所有受试者血清白细胞介素1β（IL-1β）、IL-18表达水平,采用Pearson相关分析重症UC组患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β、IL-18表达的相关性。 结果重症UC组患者血清NLRP3 [（6.3 ± 1.1）vs.（1.2 ± 0.3）]、CASP1 [（5.4 ± 1.1）vs.（1.1 ± 0.3）]和NF-κB [（6.73 ± 1.13）vs.（0.51 ± 0.15）mRNA表达水平均显著高于对照组（t = 32.016、27.873、38.710,P均< 0.001）。重症UC组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级患者NLRP3 [（2.4 ± 0.6）、（4.5 ± 1.1）、（6.8 ± 1.2）]、CASP1 [（2.2 ± 0.4）、（3.9 ± 1.0）、（5.9 ± 1.1）]及NF-κB [（2.5 ±0.6）、（5.4 ± 1.2）、（7.2 ± 1.4）] mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义（F= 49.852、43.224、33.293,P均< 0.001）。进一步两两比较发现,Ⅱ级、Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅰ级患者（P均< 0.05）,Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅱ级患者（P均< 0.05）。重症UC组患者血清IL-1β [（90 ± 7）ng/L vs.（69 ± 7）ng/L]、IL-18 [（121 ± 4）ng/L vs.（102 ± 6）ng/L]表达水平较对照组均显著升高（t= 16.555、24.249,P均< 0.001）。重症UC患者血清NLRP3 mRNA与CASP1、及NF-κB mRNA表达均呈正相关（r= 0.767、0.676,P均< 0.001）,而CASP1 mRNA与NF-κB mRNA表达无相关性（r= 0.263,P= 0.175）。重症UC患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β表达均呈正相关（r= 3.372、3.724、3.424,P= 0.035、0.011、0.026）,与IL-18表达亦均呈正相关（r= 2.963、3.513、3.312,P= 0.043、0.018、0.023）。 结论重症UC患者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平均显著升高,且NLRP3 mRNA与CASP1、NF-κB mRNA表达呈正相关。NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA参与重症UC病理过程,临床上可通过检测NLRP3、CASP1和NF-κB表达水平判断UC病程进展。     

氟桂嗪对沙鼠脑缺血后脑内转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体基因表达的影响

背景氟桂嗪和转化生长因子β(TGF-β)都具有抗脑缺血损伤作用,但两者之间是否存在某种联系,目前还不明确.目的通过研究氟桂嗪对沙鼠脑缺血再灌注后脑内转化生长因子Ⅰ型,Ⅱ型受体(TβRⅠ,Ⅱ)基因表达的影响,探讨氟桂嗪与TGFβ信号转导途径在抗脑缺血损伤方面的联系.设计随机对照的实验研究.地点和对象实验在中南大学湘雅二医院中心实验室完成.健康雄性蒙古沙鼠60只,9月龄,体质量(90±5)g,随机分为脑缺血组、氟桂嗪治疗组、假手术组、正常对照组,其中脑缺血组、氟桂嗪治疗组各有缺血再灌6 h,1,3,7 d组,共计10组,每组6只.干预夹闭双侧颈总动脉法制作沙鼠脑缺血再灌注模型,氟桂嗪治疗组实验前1 d给沙鼠喂食氟桂嗪[按20 mg/(kg·d)].采用原位杂交检测TβRⅠ,Ⅱ基因表达情况,用苏木精-伊红染色方法观察脑组织病理变化.主要观察指标脑组织病理变化,及脑内TβRⅠ,Ⅱ mRNAs的表达.结果氟桂嗪治疗组在再灌注各个时间点脑组织损伤程度均明显轻于脑缺血组.各组沙鼠脑组织的神经元和胶质细胞胞浆均有TβRⅠ,ⅡmRNAs阳性表达.棕褐色颗粒主要位于神经元和胶质细胞胞浆中,但表达程度有所不同.假手术组的TβRⅠ,Ⅱ mRNAs的表达较正常对照组稍高但无明显差异(P＞0.05).氟桂嗪治疗组中缺血再灌注6 h,1 d,3 dTβRⅠ,ⅡmRNAs表达较脑缺血组稍高,但无明显差异(P＞0.05),7 d时同脑缺血组相比TβRⅠ mRNAs的表达下降[每1 000个细胞中可见阳性细胞数为(78.87±1.48)个比(85.23±1.71)个](P＜0.01),而TβRⅡ mRNAs表达增高[每1 000个细胞中可见阳性细胞数为(75.40±2.19)个比(49.28±2.32)个](P＜0.01).结论氟桂嗪能抑制缺血再灌注后TβRⅠmRNAs的过度表达,避免TβRⅠ和Ⅱ mRNAs表达比例失调,可能有利于TGF-β的信号传递,有利于抵御脑缺血再灌注造成的脑细胞延迟性损伤.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对脊髓损伤后大鼠自噬相关蛋白表达的抑制作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对脊髓损伤后大鼠自噬相关蛋白表达的抑制作用。 方法将60只大鼠分为假手术组、模型组、激动剂组及抑制剂组，每组各15只。通过椎板切除术暴露脊髓，用无菌动脉夹在T6-T7节段硬膜外压迫脊髓造成脊髓损伤模型。假手术组大鼠只接受椎板切除术，激动剂组及抑制剂组大鼠分别在脊髓损伤后腹腔注射PPARγ激动剂罗格列酮和PPARγ抑制剂GW9662（2 mg/kg，每2小时1次）。假手术组和模型组大鼠给予腹腔注射等剂量的等渗NaCl溶液。使用Tarlov’s评分法评估各组大鼠脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d后肢运动功能。采用Western-blotting检测脊髓损伤区组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1及组织蛋白酶D蛋白的表达水平。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测脊髓损伤区PPARγ mRNA的表达水平。 结果4组大鼠在各时间点运动功能评分比较，差异具有统计学意义（F = 25.674，P < 0.001）。与假手术组相比，其余各组大鼠脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d运动功能评分均显著降低（P均< 0.05）。激动剂组大鼠在脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d运动功能评分均高于模型组及抑制剂组大鼠（P均< 0.05）。4组大鼠脊髓损伤后3 d自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1、组织蛋白酶D的蛋白及PPARγ mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（F = 238.213、28.268、172.563、32.492，P均< 0.001）。与假手术组比较，模型组、激动剂组及抑制剂组大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1、组织蛋白酶D的蛋白及PPARγ mRNA表达水平均显著升高（P均< 0.05）。且与激动剂组比较，模型组及抑制剂组大鼠LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PPARγ mRNA均显著降低，而beclin-1及组织蛋白酶D的蛋白表达均显著升高（P均< 0.05）。 结论大鼠脊髓损伤后，PPARγ激动剂可以通过下调自噬相关蛋白的表达，促进神经功能的恢复。     

视网膜神经节细胞中AKAP1的丢失与青光眼小鼠病情发展的相关性及机制研究

目的探究视网膜神经节细胞中A激酶锚定蛋白1(AKAP1)的丢失与青光眼小鼠病情发展的相关性及机制。方法选择无特定病原体(SPF)级C57BL/6小鼠,通过硬膜外静脉阻塞并烧灼建立具有慢性高眼压的小鼠青光眼模型,然后按照眼压高低分为青光眼早期组(相对低眼压+造模后7 d)、青光眼中期组(相对中眼压+造模后15 d)和青光眼晚期组(相对高眼压+造模后28 d),每组6只,另选取6只正常小鼠作为对照组(造模后7 d)。手持眼压计检测各组小鼠眼内压;蛋白质印迹分析各组AKAP1的蛋白表达;苏木精-伊红染色用于分析视网膜的病理变化;CCK-8试剂盒与TUNEL分析检测细胞的活力与凋亡;免疫组织化学分析检测细胞自噬相关蛋白的表达水平;RT-PCR实时分析磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)的mRNA表达。结果与对照组相比,青光眼早期组、中期组和晚期组的AKAP1的蛋白表达、IPL和GCL厚度和细胞活力均显著降低,眼内压、细胞凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin水平均显著升高(P <0.05),且随着病情发展,3组青光眼小鼠的AKAP1的蛋白表达、IPL和GCL厚度和细胞活力逐渐降低,眼内压、细胞凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin水平均逐渐升高,组间差异均有统计学意义(P <0.05)。结论视网膜神经节细胞中AKAP1的丢失与青光眼小鼠病情发展负相关,AKAP1的低表达,抑制了PI3K/Akt/AMPK途径,促进了视网膜神经节细胞的凋亡和自噬,因此与青光眼的发病机制密切相关,有助于AKAP1针对青光眼的定向诊断和治疗。