生长抑素类似物抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子表达及诱导细胞凋亡的研究

目的:探讨生长抑素类似物抑制肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达和阻止癌细胞增殖及诱导其凋亡的作用.方法:将小鼠随机分为两组,每只小鼠于腋窝皮下注射小鼠肝癌细胞株细胞.A组皮下接种肿瘤24 h后予生长抑素奥曲肽[100μg/(kg·d)]腹腔注射,连用20 d;B组予以相同容积的无菌生理盐水腹腔注射,连用14 d.20 d后处死小白鼠,检测肿瘤大小、VEGF.另将10μg/mL的奥曲肽置入经体外培养的肝癌细胞SMMC-7721中,经RNA酶消化和DNA-Stain染色后,用流式细胞仪式测定细胞DNA含量,并做细胞周期分析,计算凋亡卒.结果:皮下接种7 d及14 d后,A组皮下肿瘤的体积均明显小于B组(P<0.05,P<0.01),A组VEGF表达明显低于B组(P<0.05);A组微血管密度MVD亦较B组为低,但差异无显著性(P=0.075).另将奥曲肽置入经体外培养的肝癌细胞SMMC-7721后,癌细胞增殖停留在G0/G1期,同时S期和G2/M期的细胞数量减少,出现癌细胞增殖能力降低和凋亡率升高.结论:奥曲肽可以抑制肝癌细胞VEGF的表达,还可以降低癌细胞的增殖能力并诱导其凋亡.     

薏苡仁酯对人喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用

目的:观察不同浓度薏苡仁酯对人喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用。方法:实验于2005-12/2006-04在锦州医学院药理教研室完成。选用人喉癌细胞株Hep-2(北京同仁耳鼻喉研究所),培养于含体积分数为0.1的胎牛血清的RPMI1640培养基中,置37℃,体积分数为0.05的CO2孵箱中培养并传代。实验分4组,每8孔细胞为1组。对照组(加入等体积的无菌蒸馏水),5,10,20μmol/L薏苡仁酯(商品名:康莱特注射液,浙江康莱特药业有限公司,规格100g/L)组。应用四甲基偶氮唑蓝法观察不同浓度薏苡仁酯对Hep-2细胞增殖的抑制情况,测定其吸光度值;采用流式细胞术方法观察不同浓度薏苡仁酯对Hep-2细胞凋亡率的改变。结果:①四甲基偶氮唑蓝法测定:5,10,20μmol/L薏苡仁酯组作用48h后吸光度值(A540)明显低于对照组(分别为1.673±0.015,1.362±0.148,1.019±0.036,1.807±0.042,t=1.10,P<0.01),且呈现一定的浓度依赖性,各个剂量组之间的差异也存在显著性。②流式细胞仪测定:5,10,20μmol/L薏苡仁酯组作用48h后抑制Hep-2细胞的细胞凋亡率高于对照组,并能诱导Hep-2细胞凋亡,且呈浓度依赖性[(6.49±0.27)%,(11.33±0.12)%,(13.56±0.47)%,(0.08±0.06)%,t=16.27,P<0.05]。结论:薏苡仁酯可促进喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡,并呈浓度依赖性,为薏苡仁酯用于喉癌临床治疗提供了部分依据。     

人参皂带Rh2联合顺铂应用对人喉癌细胞Hep-2的作用

目的探讨人参皂甙Rh2与顺铂(Cisplatin,DDP)联合应用对喉癌细胞Hep-2的的作用。方法体外培养的喉癌细胞Hep-2分别加入终浓度为0.51、.0、2.0、5.0μg/ml的DDP、终浓度为10、20、30、40μg/ml的Rh2,以及终浓度为20μg/ml的Rh2分别联合终浓度为0.5、1.02、.0、5.0μg/ml的DDP,设空白对照组,待药物作用48小时后,分别用光学显微镜、MTT法、流式细胞仪(Flowcytometry,FCM)、荧光显微镜检测培养细胞的作用效果。结果光镜下可见正常喉癌细胞细胞生长密集,细胞呈梭型或多角型,细胞彼此之间相接触。在低剂量Rh2组和DDP组,可见细胞数量略减少,细胞形态无明显改变。在高剂量Rh2组和DDP组,细胞数量明显减少,可见细胞碎片。而低剂量Rh2和低剂量DDP联合应用后,可获得与高剂量Rh2组和DDP组相同的效果。MTT结果显示Rh2、DDP单独应用和联合应用都呈剂量依赖性增加抑制喉癌细胞的生长。低剂量Rh2和低剂量DDP联合应用,可明显抑制喉癌细胞生长。FCM显示Rh2和DDP单独应用,可诱导细胞凋亡,而联合应用可获得较单独应用更为明显的诱导细胞凋亡效应。吖啶橙染色显示各用药组均可见细胞胞膜出芽、染色质凝集、核片段化及凋亡小体等典型的细胞凋亡特征。结论人参皂甙Rh2及DDP均可诱导喉癌细胞凋亡,二者联合应用后,呈现出协同作用,可发挥更为明显的抗癌作用。     

RNA干扰环氧化酶-2抑制人表皮样喉癌细胞系增殖和侵袭的研究

目的构建沉默环氧化酶-2(COX-2)基因重组慢病毒,观察其体外侵袭的抑制作用,从而探讨干扰COX-2抑制喉癌细胞增殖的作用机理,为喉癌的治疗提供新的思路。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2基因在人表皮样喉癌细胞(Hep-2)中的表达情况。利用上海吉凯公司RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体系统,构建针对COX-2基因慢病毒RNAi表达载体。转染Hep-2细胞,干扰COX-2基因的表达,实时定量PCR检测干扰前后基因表达变化。利用生长曲线测定干扰载体转染前后细胞生长速度变化。流式细胞仪检测细胞的生长周期。Boyden侵袭小室法测定体外侵袭力。结果成功构建了COX-2慢病毒RNAi表达载体,并建立了干扰COX-2基因的Hep-2细胞系。实时定量PCR检测COX-2基因在Hep-2细胞系中过表达被显著抑制。生长曲线测定,COX-2基因干扰后细胞增殖明显变慢。流式细胞仪检测细胞的生长周期可见干扰组诱导Hep-2细胞凋亡,转染G0～G1期细胞数量明显上升,S期细胞减少,表明siRNA干扰Hep-2细胞后,细胞由G0～G1期进入到S期受到阻滞,细胞增殖速度下降。体外侵袭实验中,Hep-2-AS侵袭细胞数(31.0±1.8)显著低于Hep-2细胞(104.0±2.6)及Hep-2-P细胞(99.0±2.7),差异有统计学意义(P<0.05)。结论喉癌中过表达的COX-2基因被干扰后表达明显降低并显著抑制细胞的生长速度和侵袭能力。同时验证了COX-2基因RNA干扰在进行抗肿瘤的治疗中潜在的应用前景。     

Vinorelbine对肺癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响

目的探究长春瑞滨(Vinorelbine)对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响以及可能作用机制。方法采用前瞻性研究通过不同浓度长春瑞滨(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)作用于肺癌A549细胞。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法分析细胞的凋亡率,流式细胞术检测细胞周期变化,Caspase-3活性检测试剂盒观察含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的水平。结果与对照组相比,不同浓度长春瑞滨显著增加细胞的增殖抑制率(P0.05),且其抑制作用随着浓度的增加而增强;与对照组相比,长春瑞滨显著升高细胞的凋亡率(P0.05),上调细胞周期G2/M期和Casapse-3活性(P0.05),明显增加Bax/Bcl-2(P0.05)。结论长春瑞滨抑制肺癌细胞增殖,诱导其凋亡,阻碍细胞周期G2/M期,可能通过Caspase-3信号通路发挥作用。     

姜黄素诱导Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响

目的探讨姜黄素对Hep-2（人喉癌细胞株）细胞诱导分化机制，为喉癌治疗提供理论依据。方法应用MTT（塞唑兰）比色法和流式细胞仪检测Hep-2细胞增殖抑制率及细胞周期各时相的变化和凋亡率，并通过电子显微镜观察经姜黄素诱导分化后的亚细胞结构改变。结果姜黄素对Hep-2细胞增殖有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性，流式细胞仪分析，G1期细胞增多，S期细胞减少，C2／M期细胞相对增多，亚细胞结构、细胞空化，染色质趋边凝集。结论姜黄素能够抑制Hep-2细胞增殖，阻止G1期细胞向S期的进程，促进Hep-2细胞凋亡。     

肝星状细胞活化增殖和凋亡及奥曲肽的影响

背景:肝星状细胞的活化增殖在肝硬化的发生发展中起关键作用,临床广泛应用的生长抑素衍生物奥曲肽有多种生物学效应,但它对肝星状细胞的活化增殖及凋亡有何影响尚不清楚。目的:观察奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响。方法:实验选用肝星状细胞株HSC-T6的传代细胞。MTT法检测不同浓度(1×10-2,1×10-3,1×10-4,1×10-5,1×10-6,0mmol/L)奥曲肽干预24,48,72h对肝星状细胞增殖的影响;TUNEL凋亡检测试剂盒荧光显微镜方法检测不同浓度(0,1×10-5,1×10-2mmol/L)奥曲肽干预24h对肝星状细胞凋亡的影响。结果与结论:奥曲肽浓度越高、作用时间越长对培养的肝星状细胞增殖抑制越明显,呈现浓度和时间依赖性;奥曲肽对培养的肝星状细胞凋亡随奥曲肽浓度的增加而增加。结果可见奥曲肽对培养的肝星状细胞增殖抑制呈浓度(0～10-2mmol/L)和时间(24,48,72h)依赖性,并能诱发其凋亡。     

苯乙酸钠联合热疗诱导Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响

目的探讨苯乙酸钠（sodium phenylacetate,NaPA）联合热疗诱导人喉癌细胞株（Hep-2细胞）的增殖抑制率、细胞凋亡率及其对细胞周期进程的影响,旨在为喉癌的综合治疗提供理论依据。方法应用MTT比色法检测不同条件下对Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化,荧光显微镜检测Hep-2细胞的细胞凋亡率。结果单纯热疗组、NaPA组及联合组对Hep-2细胞的抑制率分别为24.8%,27.5%和45.3%,与对照组相比差异显著,P〈0.01;流式细胞仪结果显示G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,组间比较差异显著;荧光染色结果：单纯热疗组与NaPA组细胞凋亡率无差异,但联合组效果明显。结论 NaPA联合热疗能显著提高Hep-2细胞的增殖抑制率,抑制Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡。     

去甲斑蝥素对骨肉瘤模型裸鼠的抑瘤作用及对IL-2、TNF-α和s VCAM-1的影响

目的研究去甲斑蝥素体内外对人骨肉瘤Saos-2细胞生长的抑制作用。方法培养Saos-2细胞,24 h后随机分为空白对照组和去甲斑蝥素组(5～160μg/ml),分别于培养24 h、48 h、72 h后MTT法检测细胞增殖情况;培养细胞,随机分为空白组和去甲斑蝥素组(10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml),流式细胞术检测Saos-2细胞凋亡率;建立Saos-2细胞裸鼠异种移植瘤模型,随机分为阴性对照组,5-Fu阳性对照组以及去甲斑蝥素组(10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml),连续腹腔注射给药12 d后处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率;处死前取血,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和可溶性血管粘附分子(s VCAM-1)含量。结果去甲斑蝥素六个剂量体外均能明显抑制Saos-2细胞的生长,具有剂量和时间依赖性;可明显促进Saos-2细胞凋亡;体内抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长;提高血清IL-2和TNF-α水平,降低s VCAM-1水平,差异均具有统计学意义。结论去甲斑蝥素体内外均可抑制Saos-2细胞的生长,其抑瘤作用可能通过诱导Saos-2凋亡及上调机体血清IL-2、TNF-α细胞因子水平,下调s VCAM-1水平而发挥作用。     

人参皂甙—Rh2对人胃癌MGC—803细胞凋亡的影响

目的 研究人参皂甙-Rh2(CS-Rh2)对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响。方法 应用流式细胞仪检测GS-Rh2对人胃癌MGC-803细胞凋亡的诱导作用以及对细胞周期的影响。结果 流式细胞仪证实GS-Rh2的诱导凋亡作用，细胞凋亡率(AR)随GS-Rh2浓度升高和作用时间延长而升高，当GSRh2浓度由12．5μg/ml增加至50μg/ml时，AR由16．5％升至28．6％；但GS-Rh2浓度由50μg/ml进一步增至100μg／ml后，AR未见相应升高；GS-Rh2可将细胞周期阻滞于G1期。结论 GS-Rh2能诱导体外培养的MGC-803细胞凋亡；GS-Rh2诱导胃癌MGC-803细胞凋亡可能与细胞周期阻滞有关。     

米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究探讨米托蒽醌对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将米托蒽醌作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT-PCR检测BCL-2、BAX及caspase-3 mRNA表达量的变化,Western blot检测BCL-2、BAX和caspase-3 mRNA蛋白表达量变化。结果表明,米托蒽醌可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0.924）和浓度（r=0.947）依赖性增强。米托蒽醌作用24 h后在光学显微镜下可见米托蒽醌组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,可见凋亡细胞;在48 h后电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,在米托蒽醌组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h后,在低浓度1.0μg/ml组RPMI8226细胞阻滞于G2/M期（P〈0.05）,在高浓度2.0μg/ml组RPM I8226细胞阻滞于S期（P〈0.05）;米托蒽醌作用48 h,BCL-2 mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0.05）,BAX、caspase-3mRNA及蛋白表达量增加（P〈0.05）。结论：米托蒽醌可诱导RPM I8226细胞凋亡,此细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡的通路有关。     

应用shRNA抑制Skp2表达对喉癌化疗的增敏作用研究

目的探讨shRNA(small hairpin RNA)抑制S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)基因表达对化疗后喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法将喉癌细胞分为空质粒对照组、Skp2 shRNA组、Skp2 shRNA加化疗组、空质粒加化疗组及化疗组。应用脂质体将Skp2 shRNA转染到人喉癌Hep-2细胞,6 h后加入顺铂,培养48 h后流式细胞术检测Skp2、p27蛋白表达和细胞凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,并进行比较。结果 Skp2 shRNA组与空质粒对照组比较,Skp2蛋白表达明显降低,p27蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。Skp2 shRNA加化疗组与空质粒加化疗组比较,各剂量顺铂(0 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L)作用下细胞增殖抑制率均明显增高,差异均有统计学意义(P均0.01);与空质粒加化疗组(2 mg/L顺铂)比较,Skp2 shRNA加化疗组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P0.01)。结论 Skp2 shRNA可选择性阻断细胞Skp2基因表达,联合化疗可能为喉癌的综合治疗提供新的途径。     

姜黄素抑制Hedgehog信号诱导胃癌细胞凋亡

目的探讨姜黄素对胃癌细胞MKN45的作用及可能机制。方法不同浓度的姜黄素作用胃癌细胞MKN45后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot技术检测索尼克刺猬信号(Shh)、脑胶质瘤相关癌基因1(GLI1)的表达水平。结果不同浓度的姜黄素与胃癌细胞MKN45共培养后,随着姜黄素浓度的逐渐增加,MKN45细胞的增殖抑制也逐渐增加,经统计学分析发现,姜黄素5μmol/ml组与对照组比较,姜黄素10μmol/ml组与对照组比较,姜黄素20μmol/ml组与10μmol/ml组、5μmol/ml组、对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=16.24、14.57、21.16、25.00、38.20,P均<0.05)。胃癌细胞MKN45经姜黄素处理后,姜黄素20μmol/ml组的细胞凋亡率与10μmol/ml组、5μmol/ml组、对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=57.05、59.93、61.98,P均<0.05)。经姜黄素处理的MKN45细胞,Shh和GLI1表达均明显降低,与对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.76、3.55,P均<0.05)。结论姜黄素能通过抑制Hedgehog信号通路,抑制胃癌细胞的增殖,诱导其凋亡。     

睾丸孤核受体4对前列腺癌PC-3细胞依托泊苷化疗敏感性的影响

目的研究睾丸孤核受体4（TR4）基因对前列腺癌PC-3细胞依托泊苷（VP16）化疗敏感性的影响。方法观察VP16处理后PC-3细胞TR4基因的表达变化;建立TR4过表达的PC-3细胞系,利用MTT法测药物半数抑制剂量（IC50）、细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,观察不同TR4表达水平的PC-3细胞VP16化疗敏感性的差异。结果VP16处理后,PC-3细胞TR4基因表达升高[（0．42±0．02）vs（0．58±0．08）;t=3．30,P〈0．05]。TR4过表达的PC-3细胞VP16IC50升高[（30．83±1．32）μg/ml vs（98．89±4．21）μg/ml;F=20．38,P〈0．05]。VP16作用下,TR4过表达PC-3胞存活率较普通PC-3细胞升高,细胞凋亡则下降[（0．49±0．06）vs（0．18±0．04）;t=7．80,P〈0．05]。结论TR4降低前列腺癌PC-3细胞对化疗药物VP16的敏感性。     

siRNA靶向沉默hTERT基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的研究hTERT—siRNA对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。方法利用RNAi技术靶向沉默Capan-2的hTERT基因表达，应用细胞直接计数法和流式细胞术（FCM）检测Capan-2细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化。结果在hTERT-siRNA的使用浓度为50nm、Lipo转染浓度为3μl／2ml转染体积和hTERT沉默效率为100％的条件下，转染hTERT—siRNA24h后，细胞生长已明显减慢，抑制细胞增殖率为26．39％（P〈0．05），第2、3、5、7天抑制细胞增殖率分别为46．77％、70．61％、84．71％和85．99％（P〈0．001）。随着转染细胞按常规培养时间的延长，早期凋亡细胞明显增多（P〈0．001），以24h后更明显；活性细胞明显减少（P〈0．001），而损伤细胞明显增多（P〈0．001），以6h后明显；死亡细胞明显增多（P〈0．001），以24h后更明显。siRNA组与阴性对照组和Lipo对照组均有明显差异（P〈0．001）。G0-G1期细胞明显增多（P〈0．01），S期细胞明显减少（P〈0．01），以24h后明显；G2～M期细胞明显减少（P〈0．01），以48h后明显；晚期凋亡细胞增多（P〈0．05），以48h后明显。结论hTERT—siRNA可抑制人胰腺癌Capan-2细胞生长，使较多的细胞停留在G0～G1期，而进入G2～M期和S期的细胞减少，可促进细胞凋亡。     

多西他赛对人骨髓瘤细胞RPMI8226增殖与凋亡的影响

本研究旨在观察多西他赛对人骨髓瘤细胞系RPM18226增殖和凋亡的影响,探讨其作用的分子机制。采用MTT法检测骨髓瘤细胞增殖抑制率,光学显微镜及电子显微镜观察多西他赛对骨髓瘤细胞形态的影响,Annex-in-VFITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,PI染色流式细胞术检测骨髓瘤细胞周期分布情况,半定量RT-PCR检测多西他赛对B观-2、caspase-8及caspase-3mRNA表达影响,Westernblot法检测多西他赛作用前后骨髓瘤细胞BCL-2蛋白表达变化。结果显示：0．25-8．0μg／ml终浓度的多西他赛均可抑制RPM18226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0．927）和浓度（r=0．726）依赖性;多西他赛处理组光学显微镜下可见细胞数量明显减少,排列紊乱,高倍镜可见凋亡细胞,偶见坏死细胞;电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变以及少数坏死细胞;多西他赛可明显诱导骨髓瘤细胞凋亡（P〈0．01）,主要将细胞阻滞于G2／M期（P〈0．01）,作用48h时BCL-2mRNA与BCL-2蛋白表达量减少（P〈0．05）,caspase-8、caspase-3mRNA表达量增加（P〈0．05）。结论：多西他赛通过诱导细胞凋亡可抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡可能与细胞周期阻滞,激活细胞内、外源性凋亡通路有关。     

舒林酸对结肠癌SW1116细胞生长的影响

目的观察选择性环氧化酶－2（COX－2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）与非选择性COX抑制剂舒林酸（sulindac）对结肠癌细胞株SW1116前列腺素E2（PGE2）释放的影响,以及舒林酸对细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响,以探讨非甾体抗炎药（NSAIDs）的抗癌机制。方法采用放射免疫法检测尼美舒利和舒林酸作用前后细胞上清液中PGE：水平的变化;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察舒林酸对结肠癌细胞SW1116增殖的抑制作用;流式细胞术（FCM）分析舒林酸对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果放免检测发现,尼美舒利、舒林酸作用1h即可出现细胞上清液中PGE2水平下降,且呈剂量依赖性,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;MTT比色法显示舒林酸呈时间和剂量依赖性抑制细胞的增殖（P〈0．05或P〈0．01）;FCM分析结果显示舒林酸能促进细胞的凋亡且改变细胞周期的分布（降低G0／G1期细胞的比例、增加S期和G2／M期细胞的比例）,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论NSAIDs能抑制结肠癌SW1116细胞的生长,其机制可能与阻滞细胞周期的进程、促进细胞凋亡、抑制PGE2的释放等有关。     

TIEG1对K562细胞凋亡及BCL-2/BAX、PTEN表达的影响

本研究旨在观察TIEG1诱导K562细胞凋亡及BCL-2/BAX、PTEN表达的变化.用TIEGl0、1、5、10和20ng/ml处理K562细胞,MTT法检测细胞生长抑制率.TIEG1 10.00 ng/ml处理K562细胞后流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测BCL-2/BAX及PTEN的表达.结果表明,T1EG1对K562细胞增殖具有抑制作用,且呈时间及剂量依赖性（r=0.52,P＜0.05）;处理细胞6、12、24和48 h后TIEGl IC50值分别为48.19、18.72、9.5和3.85 ng/ml.TIEG1 10.00 ng/ml处理K562细胞0、6、12、24和48 h后凋亡率分别为（2.13±0.42）％、（7.79±0.71）％、（11.17±1.37）％、（24.66±0.29）％和（48.60±1.38）％,各组凋亡率相比较统计学差异具有显著性（P＜0.05）.在TIEG1诱导K562细胞凋亡过程中,BCL-2表达逐渐减少（r=0.48,P＜0.05）,而BAX（r=0.69,P＜0.05）及PTEN（r=0.57,P＜0.05）表达逐渐增加.结论：TIEG1诱导K562细胞凋亡并抑制其增殖,且呈时间、剂量依赖性.在TIEG1诱导K562细胞凋亡的过程中,BCL-2/BAX及PTEN表达变化与K562细胞凋亡相关.     

双靶向TRAIL过表达联合辐射对乳腺癌MDA—MB-435细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Egr-1和hTERT双靶向介导TRAIL过表达联合辐射对乳腺癌细胞增殖和凋亡的作用,为肿瘤基因一放射治疗提供必要的参考。方法实验分为正常对照组（Contr01）、CRAd．pEgr-1-TRAIL组、2．0Gy照射组及CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy照射组。病毒感染和X射线照射后,分别采用CCK-8试剂盒和AnnexinV—FITC试剂盒检测细胞增殖和细胞凋亡。结果随着时间延长,各组细胞均表现增殖状态,control和CRAd．pEgr-1-TRAIL组MDA-M昏435细胞增殖较快,且无明显差异,而2Gy和CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组细胞增殖较慢,且以CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组更明显,48h时甚至出现增殖抑制;2．0Gy组（24和48h）和CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组（12,24和48h）均较control组显著增加（P〈0．05,P〈0．01）,而且CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组（24和48h）也较2．0Gy组显著增加（P〈0．05,P〈0．01）。与control组比较,CRAd．pEgr-1-TRAIL组细胞凋亡无显著变化,而2．0Gy组和CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组细胞凋亡显著增加（P〈0．05,P〈0．01）,尤其以CRAd．pEgr-1-TRAIL＋2．0Gy组更明显,与2．0Gy组比较,具有统计学差异（P〈0．05）。结论电离辐射能诱导MDA—MB-435细胞增殖抑制和凋亡增加,双靶向介导的TRAII．过表达能增强这种作用。     

H2-B1基因转染对小鼠内皮细胞凋亡与增殖的影响

目的转染pEGFP-N1-H281质粒载体至小鼠血管内皮细胞（VEC）,观察H2-B1基因对小鼠VEC凋亡与增殖的影响,探讨借鉴母胎免疫耐受模型预防心脏移植术后免疫排斥反应的机制。方法0.5μg/ml空质粒、0．5μg／ml H2-B1质粒、1.0μg/ml H2-B1质粒转染小鼠VEC后,采用实时荧光定量PCR、流式细胞仪、酶标仪检测不同时间质粒的转染效率、H2．B1基因mRNA的相对表达量、转染VEC的凋亡与增殖情况。结果荧光定量PCR结果显示,0．5μg/ml、1．0μg／ml H2-B1质粒组的H2-B1基因mRNA表达量均高于对照组（P〈0．05,P〈0．001）。H2-B1基因促进VEC凋亡,转染48h、72h后1．0斗g／mlH2一B1质粒组与空白对照、0．5μg／ml空质粒比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。H2-B1基因抑制VEC增殖,转染24h、48h、72h后0．5μg／ml H2-B1质粒组、1．0μg／ml H2-B1质粒组分别与空白对照组、0．5μg／ml空质粒组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论pEGFP—N1-H281质粒载体转染小鼠VEC后,能够有效促进其凋亡,抑制其增殖,减弱小鼠VEC活性,诱导免疫耐受。