顺铂与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的研究顺铂与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7 901和BGC-823细胞体外增殖的影响。方法使用MTT法测定细胞增殖,确定顺铂的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24 h和48 h时的细胞生存率,根据Veleriote法判断热化疗联合24 h或48 h的作用效果;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况。结果以24 h时IC40~IC50的药物浓度作为试验的工作浓度,确定CDDP对SGC-7 901和BGC-823细胞的工作浓度分别为5μg/mL和1μg/mL。单纯的43℃热疗60 min在24 h时对2个细胞系均有抑制作用(P<0.05),在48 h时没有显著抑制作用。CDDP 5μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时对SGC-7 901细胞均有显著的抑制作用(P<0.01),CDDP 5μg/mL与热疗联合作用24 h时呈明显的协同作用,在48 h时呈次加作用。CDDP 1μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时均对BGC-823细胞都有显著的抑制作用(P<0.01),CDDP 1μg/mL与热疗联合作用24 h和48 h均呈明显的协同作用;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况发现,CDDP化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P<0.01)。结论CDDP 5μg/mL与43℃热疗60 min联合在24 h时对SGC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用,在48 h时呈次加作用;CDDP 1μg/mL与43℃热疗60 min联合对BGC-823细胞的增殖抑制在24 h和48 h时均呈明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关。     

黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及周期的影响

目的:从细胞水平观察黄芪皂甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响,拟验证黄芪皂甙对系膜细胞增殖影响与其浓度的相关性.方法:实验于2006-12/2007-07在辽宁医学院生理实验室完成.取高糖培养的第4～7代大鼠肾小球系膜细胞,随机分为对照组,黄芪皂甙50,100,200mg/L组4组,分别给予等量的高糖培养液及50,100,200mg/L黄芪皂甙,在给药后培养48 h,用MTT比色法检测细胞增殖程度,流式细胞仪检测细胞周期.结果:①MTT法显示培养48 h后,黄芪皂甙50,100,200mg/L组的吸光度值A490nm低于对照组(P＜0.01),且随黄芪皂甙浓度增加而递减.②流式细胞仪检测显示培养48h后,黄芪皂甙50,100,200mg/L组的G0/G1值高于对照组(P＜0.01),且随黄芪皂甙浓度增加而递增.结论:在一定质量浓度范围(50～200 mg/L)内,黄芪皂甙可抑制肾小球系膜细胞增殖,阻止细胞周期进程.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人非小细胞肺癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人非小细胞肺癌细胞增殖的作用及机制。方法人肺癌A549细胞随机分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别用含0μM、50μM、100μM浓度EGCG的DMEM培养液处理,24 h、48 h后CCK-8检测细胞增殖指数,流式细胞术检测细胞凋亡指数,48 h后流式细胞术检测细胞周期,24 h、48 h后蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白表达水平。结果细胞处理后24 h、48 h,实验2组与实验1组细胞增殖指数显著低于对照组(P 0. 05),实验2组也显著低于实验1组(P 0. 05)。实验2组48 h的细胞增殖指数显著高于24 h,其余两组在这两个时间点的对比无显著差异。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、Caspase-3蛋白相对表达水平显著高于对照组(P 0. 05),实验2组也显著高于实验1组(P 0. 05)。对照组48 h的细胞凋亡指数显著高于24 h,其余各组的细胞凋亡指数及三组的Caspase-3表达在这两个时间点的对比无显著差异。细胞处理后48 h,实验2组与实验1组的G1期细胞比率显著高于对照组(P 0. 05),G2期细胞比率显著低于对照组(P 0. 05)。结论表没食子儿茶素没食子酸酯呈剂量依赖式抑制人非小细胞肺癌细胞的增殖,促进其凋亡,调节其细胞周期,促进Caspase-3的表达,可发挥潜在的抑瘤作用。     

羟基喜树碱与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的研究羟基喜树碱与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC7901和BGC823细胞体外增殖的影响。方法使用MTT法测定细胞增殖,确定羟基喜树碱的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24h和48h时的细胞生存率,根据Veleriote法判断热化疗联合24h或48h的作用效果;24h时流式细胞仪检测BGC823细胞的凋亡情况。结果以24h时IC20～IC30的药物浓度作为试验的工作浓度,确定HCPT对2株细胞系的工作浓度均为3μg/mL。单纯43℃热疗60min在24h对2株细胞系均有抑制作用(P<0.05),在48h时没有显著的抑制作用。HCPT在24h时对SGC7901细胞有显著的抑制作用(P<0.01),与43℃热疗60min联合后在24h和48h时均有显著的抑制作用(P<0.01),HCPT3μg/mL与热疗联合作用24h或48h对SGC7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用。HCPT化疗或与热疗联合在24h和48h时均对BGC823细胞有显著的抑制作用(P<0.01),HCPT3μg/mL与热疗联合作用24h时对BGC823细胞的增殖抑制具有次加作用,在48h时呈明显的协同作用;24h时流式细胞仪检测BGC823细胞的凋亡情况发现,热疗组、HCPT化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P<0.05)。结论HCPT3μg/mL与43℃热疗60min联合在24h和48h时对SGC7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用;对BGC823细胞的增殖抑制在24h时呈次加作用,在48h时呈明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关。     

TRPV4对HeLa细胞增殖的作用

目的 观察瞬时感受器电位离子通道香草素受体4（TRPV4）与宫颈癌HeLa细胞增殖的关系.方法 采用宫颈癌HeLa细胞系,用Western blot技术检测HeLa细胞中TRPV4的表达量;并分别用TRPV4阻滞剂RN1734干预体外培养HeLa细胞,通过细胞计数法、LDH检测及流式细胞技术观察TRPV4通道调控对HeLa增殖和细胞周期进展的影响.结果 与对照组W12细胞系相比,宫颈癌HeLa细胞系中TRPV4呈高表达.TRPV4阻滞剂干预48和72 h后,HeLa细胞增殖较未干预组降低（P＜0.05）;而TRPV4阻滞剂干预24h和48 h时,处于S期细胞的百分率明显低于未干预组;处于G0/G1期细胞的百分率则明显高于未干预组（P＜0.05）.结论 TRPV4抑制可以阻滞体外培养宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞周期进展.     

顺铂与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的 研究顺铂与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823细胞体外增殖的影响。方法 使用MTT法测定细胞增殖，确定顺铂的工作浓度。并以该浓度进行化疗或与热疗联合，计算24h和48h时的细胞生存率，根据Veleriote法判断热化疗联合24h或48h的作用效果；24h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的调亡情况。结果以24h时ICA0-IC50的药物浓度作为试验的工作浓度，确定CDDP对SGC-7901和BCK3-823细胞的工作浓度分别为5μg／mL和1μg／mL。单纯的43℃热疗60min在24h时对2个细胞系均有抑制作用（P〈0．05），在48h时没有显著抑制作用。CDDP5μg／mL化疗或与热疗联合在24h和48h时对SGC-7901细胞均有显著的抑制作用（P〈0．01），C73DP5μg／mL与热疗联合作用24h时呈叫显的协同作用，在48h时呈次加作用。CDDP1μg／mL化疗或与热疗联合在24h和48h时均对BGC-823细胞都有显著的抑制作用（P〈0．01），CDDPμg／mL与热疗联合作用24h和48h均呈明显的协同作用；24h时流式细胞仪检测BGC＋823细胞的凋亡情况发现，CDDP化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论 CDDP5μg／InL与43℃热疗60min联合在24h时对SCiC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用，在48h时里次加作用；CDDPμg／mL与43℃热疗60min联合BGC-823细胞的增殖抑制在24h和48h时均呈明显的协同作用，这可能与细胞凋亡的增多有关。     

熊果酸对人卵巢癌 SKOV3细胞增殖与凋亡的影响

【目的】探讨熊果酸(Ursolic acid,UA)对人卵巢癌 SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。【方法】常规培养人卵巢癌 SKOV3细胞,应用 UA 浓度为5、10、20、40和80μmol/L 分别干预12 h、24 h 和48 h,采用 MTT 法检测细胞增殖;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,应用 Western blot 技术检测细胞周期相关蛋白 P21、CyclinD1的表达水平。【结果】与空白对照组(0μmol/L UA)比较,40和80μmol/L UA 分别作用 SKOV3细胞12 h、24 h 和48 h 后 OD 值均显著降低(P <0.05);10、20和40μmol/L UA 作用24 h 后 SKOV3细胞早期凋亡率、晚期凋亡率和 G0/G1期比率较对照组升高,20和40μmol/L UA 作用24 h 后 SKOV3细胞周期蛋白 Cyclin D1明显降低而 P21水平显著升高(P <0.05)。【结论】体外实验中,UA 可抑制人卵巢癌 SKOV3细胞增殖和促其凋亡,其机制可能与细胞周期蛋白 Cyclin D1表达降低和 P21表达升高有关。     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

姜黄素和Wortmannin联用对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的 探讨姜黄素和Wortmannin联用对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 培养人胃癌SGC-7901细胞,CCK8实验检测10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L姜黄素和10 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L、500 nmol/L、1 000 nmol/L的Wortmannin分别作用于细胞24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况,计算半数抑制浓度(IC50);根据IC50选择最佳的姜黄素及Wortmannin作用浓度;将接下来的试验分为对照组、姜黄素组、Wortmannin组、姜黄素+Wortmannin组,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Cleaved caspase3、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果 不同浓度的姜黄素和Wortmannin处理细胞24 h、48 h、72 h后的细胞存活率均显著低于0 h细胞存活率(P0.05或P0.01),选择30μmol/L姜黄素和170 nmol/L的Wortmannin做后续研究。姜黄素组、Wortmannin组、姜黄素+Wortmannin组细胞存活率及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01);姜黄素+Wortmannin组细胞存活率及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于姜黄素组和Wortmannin组,胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于姜黄素组和Wortmannin组(P0.01)。结论 姜黄素和Wortmannin均能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,姜黄素和Wortmannin联用对细胞增殖凋亡的影响强于单独用姜黄素和Wortmannin。     

miR-223对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的 观察miR-223对结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 PLL3.7-miR-223和PLL3.7-miR-EV质粒转染SW480细胞,Real-time PCR检测转染24h后miR-223的表达变化,CCK-8试剂盒检测转染12、24、48 h后细胞的增殖能力,流式细胞仪分析转染48 h后细胞周期和凋亡情况,Western blot检测IGF-1R、AKT蛋白表达情况.结果 转染24 h后,Real-time PCR检测结果显示PLL3.7-miR-223转染组miR-223的表达量（6.55±2.04）较PLL3.7-miR-EV（以其miR-223的表达量为1）明显上调（P＜0.01）.与对照EV组相比,SW480细胞在转染miR-223后生长明显受到抑制,细胞周期在G1期发生阻滞[（61.61±4.02）％vs.（35.99±1.62）％],凋亡增加明显[（67.43±4.75）％vs.（44.23±3.11）％],均P＜0.01,并且能够降低生长相关蛋白IGF-1R及细胞凋亡相关蛋白AKT的表达.结论 miR-223可以通过调节IGF-1R和AKT的表达影响结肠癌细胞SW480的增殖、细胞周期和凋亡.     

猫眼草提取物对胃癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的研究猫眼草提取物对不同胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823增殖的影响并探讨其可能的机制。方法不同胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823分别给予猫眼草提取物10．0、5．0、1.0、0．1mg／L培养48h,采用MTT法和台盼蓝染色法检测猫跟草提取物对不同胃癌细胞株增殖的影响。结果MTT法测定结果显示,猫眼草提取物各浓度组对AGS、SGC-7901、BCG-823细胞增殖均有明显抑制作用且具有良好的量效关系（P〈0．05）;台盼蓝法计数结果显示,给予猫眼草提取物后,活细胞数随培养时间的延长而减少,对胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BGC-823增殖的抑制具有良好的时效关系（P〈0．05）。结论猫眼草提取物对胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823增殖均具有明显的抑制作用,其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增。     

CyclinL2在化疗药物杀伤胃癌细胞的增敏作用

目的:探讨cyclinL2基因在化疗药物顺铂(DDP)、氟尿嘧啶(5-Fu)和多西紫杉醇(Doc)诱导下的胃癌细胞凋亡中的作用。方法选用胃腺癌BCG-823细胞,MTT法检测DDP、5-Fu和Doc不同药物浓度对胃癌细胞生长的抑制作用,以及CyclinL2转染、反义cyclinL2转染后对该细胞生长的抑制作用的影响,同时利用流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果不同浓度的化疗药物对该胃癌细胞生长均有明显的抑制作用,并有浓度的依赖性。细胞凋亡率和cyclinL2基因表达率成正相关。结论CyclinL2基因在化疗药物诱导胃癌细胞凋亡中起重要作用。     

倍半萜类化合物Chabranol对胃癌细胞BGC-823细胞活性的影响

目的 探讨倍半萜化合物Chabranol影响人低分化胃癌细胞BGC-823的增殖、细胞周期、凋亡和自噬的可能机制,为Chabranol用于临床抗肿瘤治疗提供实验依据.方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测Chabranol对BGC-823的增殖抑制作用;流式细胞仪检测BGC-823的细胞周期;透射电子显微镜（TEM）观察其亚细胞结构;凋亡细胞电泳检测细胞凋亡.结果 Chabranol对BGC-823增殖有明显抑制作用,并且表现为时间和剂量依赖性;Chabranol干预后,BGC-823细胞发生G1-S期阻滞、凋亡和自噬.结论 倍半萜化合物Chabranol对BGC-823具有潜在的抗肿瘤活性,有可能成为治疗低分化胃癌的新药物.     

新城疫病毒HN基因重组体对人胃癌细胞BGC-823凋亡作用机制研究

目的本实验研究旨在探讨含新城疫病毒HN基因的重组质粒对人胃癌细胞BGC-823凋亡的联合作用机制。方法将含有HN基因的重组质粒pIRVP3IL-18HN经脂质体介导转染人胃癌细胞BGC-823，通过MTT方法检测细胞活力；电镜下观察细胞形态；罗丹明123和DCFA染色测定线粒体跨膜电位（△ψ）和活性氧（ROS）水平变化；底物染色反应检测Caspase-3活性。结果重组质粒pIRVP3IL-18HN转染人胃癌细胞BGC-823后，MTT法结果显示致肿瘤细胞死亡率升高，细胞活力下降；电镜观察肿瘤细胞呈现明显凋亡状态；与阴性空白质粒对照显示，线粒体△ψ下降，ROS水平升高；Caspase-3活性被激活。结论含新城疫病毒HN基因的重组质粒可以诱导人胃癌细胞BGC-823进入特定的凋亡程序，从而导致人胃癌细胞BGC-823的凋亡。     

STAT3反义寡核苷酸对HepG2肝癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的 探讨STAT3反义寡核苷酸对HepG2细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的诱导作用。方法： HepG2细胞体外培养，人工合成并硫代修饰STAT3 ASODN，通过脂质体转染进入HepG2细胞，倒置显微镜下观察细胞形态学变化、 MTT法检测细胞增殖抑制程度，原位末端标记（Tunel）法检测细胞凋亡指数（AI）， RT-PCR检测细胞中STAT3 mRNA 的表达水平，流式细胞仪检测细胞周期的变化和细胞凋亡率。结果： STAT3 ASODN各浓度组对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用，能明显诱导细胞凋亡。结论： STAT3 ASODN能够诱导HepG2细胞凋亡。     

多西苯醌联合塞来昔布对结肠癌细胞抑制作用的研究

目的通过体外实验对比研究单独及联合应用多西苯醌（AA-861）与塞来昔布对结肠癌的抑制作用。方法体外分组培养的结肠癌HT-29细胞,通过倒置相差显微镜观察AA．861与塞来昔布单独及联合应用48h后细胞形态变化;通过细胞增殖试验（MTr）检测细胞吸光度,以此检测细胞增殖状态;应用免疫荧光染色方法在共聚焦显微镜下观察细胞内VEGF表达变化。结果倒置相差显微镜观察到各药物组细胞形态发生明显变化,其中AA-861与塞来昔布联合应用组变化最明显;MTY结果提示两种药物联合应用组细胞增殖率最低;免疫荧光染色实验观察到细胞内VEGF表达减少,两种药物联合应用组VEGF表达量最低。结论多西苯醌与塞来昔布联合应用比单独应用,更能有效抑制结肠癌,并且可能与抑制VEGF表达有关。     

MYCN-siRNA和神经生长因子联合诱导神经母细胞瘤细胞分化凋亡的实验研究

目的:探讨应用MYCN-siRNA和神经生长因子(NGF)联合诱导神经母细胞瘤细胞分化凋亡的分子机制。方法:实验分组包括MYCN-siRNA与NGF联合诱导组、NGF诱导组、siRNA诱导组和空白对照组。观察各实验组神经母细胞瘤细胞的形态学变化及细胞的增殖变化,通过Real-TimePCR检测MYCN-mRNA和NSE的表达、Western Blot检测MYCN基因沉默后MYCN蛋白的表达情况。结果:神经母细胞瘤MYCN基因沉默后,RT-PCR检测IMR-32细胞MYCN-mRNA表达的抑制率达到89%;Western Blot检测IMR-32转染MYCN-siRNA后的第3天MYCN蛋白的表达率达到最低,表达率下降至26.6%。在NGF和MYCN-siRNA的共同作用下,神经母细胞瘤细胞出现了较明显的细胞形态学分化,细胞的增殖能力明显下降,IMR-32细胞NSE的表达明显下降。结论:MYCN-siRNA和NGF联合诱导神经母细胞瘤细胞,可使MYCN-mRNA的表达和NSE的表达均明显下降,并促进神经母细胞瘤细胞分化凋亡。     

二磷酸氯喹对K562细胞增殖与凋亡的影响

本研究探讨二磷酸氯喹对K562细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。用细胞增殖试验（MTT法）检测不同浓度二磷酸氯喹对K562细胞的增殖抑制作用；应用细胞形态学检查、流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测细胞凋亡；以罗丹明123（Rhodamine 123）为细胞染色剂，采用流式细胞术检测不同浓度二磷酸氯喹处理后K562细胞线粒体膜电位（△Ψm）的变化。结果表明：用不同浓度二磷酸氯喹（1.5625、3．125、6．25、12．5、25、50、100μmol／L）分别作用于K562细胞24、48和72小时后，细胞生长活力明显降低，具有剂量依赖性；典型的细胞形态学改变、亚G1峰的测出、梯形条带的显现共同证实了二磷酸氯喹能诱导K562白血病细胞凋亡；Rhodamine 123染色显示二磷酸氯喹处理的K562细胞线粒体膜电位强度下降。结论：二磷酸氯喹对K562细胞有生长抑制、诱导凋亡作用，其作用可能与细胞线粒体膜电位（△Ψm）下降有关。