(1,3)-β-D葡聚糖检测和半乳甘露聚糖检测的临床应用价值

正(1,3)-β-D葡聚糖检测(G试验)主要检测真菌细胞壁的(1,3)-β-D-葡聚糖(BDG)成分,适用于除隐球菌和接合菌以外的所有深部真菌感染的早期诊断,尤其适用于侵袭性念珠菌和曲霉感染的诊断;半乳甘露聚糖检测(GM试验)用于曲霉细胞壁半乳甘露聚糖成分的检测,主要适用于曲霉的早期诊断;两者联合应用不仅降低了每个试验的假阳性率和假阴性率,而且增加了检测的灵敏度,有更高的临床应用价值。     

免疫转印法检测白色念珠菌丝组分蛋白抗体

目的：为了探讨血清中白色念珠菌菌丝相蛋白组分抗体的实验室诊断意义。方法 应用超声粉碎和Ｃｏｎ Ａ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析除去细胞壁甘露糖和甘露糖蛋白后，收集蛋白抗原，通过免疫转印技术，检测血清标本中相应抗原的抗体。结果：血库血清４０份中，１例阳性；白色念珠菌培养阳性的９０名患者，抗体阳性５８例；热带念珠菌培养阳性的１７名患者，１０例抗体阳性，使用大量抗菌药物和／或免疫抑制剂治疗而培养阴性的     

甘露聚糖检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值

目的探讨甘露聚糖对侵袭性念珠菌病的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测53例侵袭性念珠菌病患者、30例细菌感染患者、28例皮肤黏膜念珠菌病患者和20名健康体检者(正常对照组)血清甘露聚糖浓度。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价甘露聚糖诊断侵袭性念珠菌病的性能。采用冻融实验评价血清样本的稳定性。结果根据试剂盒的阳性临界值(≥1.0μg/L),侵袭性念珠菌病组甘露聚糖阳性率明显高于细菌感染组、皮肤黏膜念珠菌病组和正常对照组(P0.01)。ROC曲线分析显示,当采用试剂盒推荐的阳性临界值(≥1.0μg/L)时,甘露聚糖诊断侵袭性念珠菌病的敏感性为66.1%,特异性为96.2%;当采用根据ROC曲线得出的阳性临界值(≥0.6μg/L)时,甘露聚糖诊断侵袭性念珠菌病的敏感性为73.6%,特异性为87.1%,曲线下面积为0.829(95%可信区间0.749~0.908)。冻融1~4次后血清样本的甘露聚糖浓度逐次下降。结论甘露聚糖可作为临床诊断侵袭性念珠菌病的指标之一。     

免疫转印法检测白色念珠菌菌丝组分蛋白抗体

目的　为了探讨血清中白色念珠菌菌丝相蛋白组分抗体的实验室诊断意义。方法　应用超声粉碎和ConA Sepharose4B亲和层析除去细胞壁甘露糖和甘露糖蛋白后 ,收集蛋白抗原 ,通过免疫转印技术 ,检测血清标本中相应抗原的抗体。结果　血库血清 40份中 ,1例阳性 ;白色念珠菌培养阳性的 90名患者 ,抗体阳性 5 8例 ;热带念珠菌培养阳性的 17名患者 ,10例抗体阳性。使用大量抗菌药物和 /或免疫抑制剂治疗而培养阴性的 14名患者中 ,抗体阳性 7例。抗体阳性的 75例结果中 ,15例出现 2 9ku和 47ku条带 ,5 1例单独出现 47ku条带 ,9例仅出现 2 9ku条带。结论　免疫转印法检测抗体可作为深部念珠菌感染的参考指标 ,并可提供抗体动态变化模式 ,为深入研究打下基础。     

用白念珠菌菌丝相蛋白抗原诊断白念珠菌病的探讨

目的建立一种特异性强的检测白念珠菌血清抗体方法，协助临床诊断侵袭性念珠菌病。方法应用超声粉碎和ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析法去除细胞壁甘露糖和糖蛋白后，ＰＡＧＥ电泳显示４７０００部分是主要的胞浆蛋白抗原，用４７０００～２９０００或全菌抗原建立ＥＬＩＳＡ法测血清抗体。结果全菌抗原，８０份正常血清７５份阳性，４０份患者血清３７份阳性；４７０００～２９０００蛋白抗原，８０份正常血清２份阳性，４０份患者血清３６份阳性。结论检测血清中抗白念珠菌菌丝相蛋白抗体，有助于诊断侵袭性白念珠菌感染。     

用噬菌体模拟抗原检测白念珠菌菌丝蛋白抗体的研究

目的 用噬菌体展示文库技术制备白念珠菌菌丝蛋白模拟抗原，建立测定白念珠菌抗体的酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法 用抗白念珠菌菌丝蛋白P47的单克隆抗体从噬菌体随机12肽库中筛选能与之免疫学结合的肽，即模拟抗原表位。将该模拟抗原包被微孔板，用于酶联免疫吸附测定法测定病人血清白念珠菌菌丝蛋白抗体。结果 用噬菌体模拟抗原建立ELISA，其敏感性、特异性及重复性良好，测定了10份确诊白念珠菌侵袭性感染的病人血清，全部阳性，与用纯化的菌丝蛋白抗原P47测定结果一致；服用免疫抑制剂患者血清阳性率33％，健康人群阳性率为2％。结论 用抗白念珠菌菌丝蛋白单克隆抗体从噬菌体展示随机肽库筛到的噬菌体模拟抗原可代替白念珠菌P47抗原进行抗体测定。     

血清LAM-IgG与PPD-IgG检测对肺结核的诊断价值

目前,结核病血清学诊断技术已成为结核病的重要辅助诊断手段,其方法在临床上常用的有检测血清中脂阿拉伯甘露聚糖的IgG抗体(LAM-IgG,即结明试验)及酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测PPF-IgG.为了解两种方法对肺结核诊断价值,     

免疫转印法检测白色念珠菌菌丝组分蛋白抗体

目的 建立免疫转印检测方法探讨血清中白色念珠菌菌丝相蛋白组分抗体的实验室诊断意义。方法 应用超声粉碎和Ｃｏｎ Ａ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析除去细胞壁甘露糖和甘露糖蛋白后，惧蛋白抗原通过免疫转印技术，检测相应抗原的血清抗体。结果 血库血清４０例，１例阳性：白色念珠菌培养阳性的９０例中５８例阳性；热带念珠菌２阳性１７例，１０例阳性。使用大量抗菌药物和／或免疫抑制剂治疗而培养阴性１４例７例阳性。     

白色念珠菌抗体ELISA检测法及初步临床应用

测定血清中白色念珠菌(下称白念菌)甘露聚糖(Mannan)抗原,是白念菌病的早期特异的诊断方法,但敏感性较低。动物感染白念菌一周后即可产生保护性抗体,并随感染量、时间呈进行性递增。因而测定患者血清中白念菌抗体在临床上有诊断价     

P47模拟多肽抗原在诊断侵袭性白色念珠菌感染中的应用

目的利用噬菌体肽库来源的P47模拟抗原建立的ELISA法,探讨该模拟抗原在侵袭性白色念珠菌病血清学诊断中的应用价值。方法收集经培养确诊的各类念珠菌侵袭性感染和浅表感染的病人血清130份,用模拟抗原包被ELISA微孔板,测定抗P47抗体,考察该方法能否区分白色念珠菌侵袭性感染和浅表感染,以及与其他念珠菌感染的交叉反应。结果经细菌培养鉴定确证为白色念珠菌侵袭性感染的病人血清35份,抗P47抗体阳性率为100%,浅表感染者阳性率为4.8%(2/42),热带念珠菌侵袭性感染者抗P47抗体阳性率为16.7%(3/18)。光滑念珠菌、近平滑念珠菌以及未能鉴定到种的念珠菌侵袭性和浅表感染者血清,均未检测到抗P47抗体。结论用白色念珠菌菌丝蛋白P47模拟抗原建立ELISA检测抗P47抗体,虽然与热带念珠菌侵袭性感染有部分交叉反应,但仍可用于白色念珠菌侵袭性感染的血清学诊断。     

侵袭性曲霉感染特异性抗体的筛选及其初步临床应用研究

目的 筛选出可用于侵袭性曲霉感染实验室早期诊断的特异性单克隆抗体.方法 应用单克隆抗体技术制备针对不同曲霉抗原的特异性抗曲霉单克隆抗体,根据单抗识别表位不同,初步筛选出两组灵敏度高、特异性强的单抗组合,并分别建立了双抗体夹心ELISA检测法.通过检测常见临床和环境分离曲霉株、马尔尼菲青霉及念珠菌培养液,感染动物模型标本,临床标本,初步评估检测方法的敏感性和特异性.并应用WB对抗体所识别靶标进行初步鉴定.结果 获得32株稳定分泌曲霉单抗的杂交瘤细胞株,建立了2种双抗体夹心ELISA法,第1种方法可识别环境和临床分离的19种曲霉.第2种方法仅特异性识别临床和环境分离的烟曲霉,与其他曲霉抗原无交叉.对同一种烟曲霉培养液而言,第1种方法可检测稀释度为第2种方法的10倍.WB分析显示该组单抗识别的靶标为相对分子质量在25 000～75 000之间的甘露聚糖蛋白.结论 本研究获得了可用于侵袭性曲霉感染实验室诊断的特异性单克隆抗体,单抗识别的抗原为相对分子质量在25 000～75 000之间的甘露聚糖蛋白.该抗原是侵袭性曲霉感染早期诊断的潜在标志物.     

医师问答

问:患者痰或尿标本中培养出真菌,需要使用抗真菌药进行治疗吗?答:只有痰、清洁中段尿涂片镜检真菌菌丝阳性,才能认为存在真菌感染的可能。同时存在其他情况,如症状、体征和影像学检查相应的发现,才有必要进行抗真菌治疗。如果只是痰或尿培养真菌阳性,大多为真菌在呼吸道、泌尿道的定植,不需要进行治疗。问:临床上真菌感染难以诊断,有何较新的诊断方法?答:下列两项试验已被欧美批准用于血液、肿瘤等免疫受损患者中的侵袭性真菌感染的诊断。①曲霉半乳甘露聚糖检测(GM试验):检测曲霉细胞壁上的半乳甘露聚糖成分。判定标准:>0.8或2次>0.5为阳性。使用半合成青霉素、食用牛奶制品等可出现假阳性,隐球菌感染也可出现假阳性。②1,3-β-D葡聚糖检测(G试验):1,3-β-D葡聚糖存在于念珠菌、曲霉等真菌细胞壁中,能特异性激活鲎成分中的凝血因子G,故也称为G试验。连续2次阳性才可以作为诊断依据。使用Fungitec G试剂盒,>20pg/μL为阳性;Fungi-tell试剂盒,>80pg/μL为阳性。口咽部念珠菌病或真菌定植时,呈现阴性,因此其阳性具有临床意义。静脉使用白蛋白或丙种球蛋白可呈假阳性,隐球菌感染、接合菌感染呈假阴性。问:什么...     

血清LAM-IgG与PPD-IgG检测对肺结核的诊断价值

目前,结核病血清学诊断技术已成为结核病的重要辅助诊断手段,其方法在临床上常用的有检测血清中脂阿拉伯甘露聚糖的IgG抗体(LAM-IgG,即结明试验)及酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测PPD-IgG.为了解两种方法对肺结核诊断价值,本院对116例活动性肺结核患者的上述两项指标分别进行检测,并与230例非结核性肺疾病,92例健康查体者进行对比.现将结果报道如下. 　　……     

用酶联免疫吸附试验检测弓浆虫病患者的抗虫体多糖成分的抗体

弓浆虫病的血清学甚为复杂。由于低滴度阳性血清广泛存在,所以临床上就需要用一些定量试验,以确定近期感染或急性感染。一般说来,近期感染的抗体滴度高;对急性和先天性的患者说来,IgM抗体的检测也有极重要意义。酶联免疫吸附试验(ELISA)可进行抗弓浆虫抗体的定量,并可鉴定被检抗体的类别,还可以用寄生虫的可溶成分做抗原。本文用弓浆虫富于糖成分的高分子组分(a sugar-rich macromolecular fraction)为抗原,还同时用虫体的全蛋白提取物为抗原进行ELISA,以资比较。被检血清共83份〔曾以弓浆虫病其他血清学方法检测,包括间接荧光抗体技术(IgG和IgM)、     

关注分子技术在临床微生物检验中的应用

本期"微生物分子诊断专题"精心组织了6篇文章,包括1篇综述和5篇专著。内容主要围绕临床常见的细菌、真菌和分枝杆菌感染等的诊断、治疗(耐药)、预防和控制问题,重点介绍了分子生物学技术在临床微生物标本的直接检测、基因分型、耐药基因研究、抗原制备及血清学诊断等方面的应用研究。血流感染是一种严重的全身感染性疾病,但血培养存在检验周期长、阳性率低等问题,应用分子生物学技术能够对血流感染中的常见或少见病原菌、分枝杆菌、苛养菌等进行快速鉴定及耐药分析,可以缩短检验周期。艰难梭菌是一种重要的医院感染病原菌,引起抗菌药物相关性腹泻,GeneXpert实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)能够直接检测粪便标本中的艰难梭菌,具有快速、操作简便等优点。光滑念珠菌可引起血流感染等多种感染,且耐药性强,是医院感染中常见的侵袭性真菌,微卫星多态性分析法简便快速,分辨力高于多位点序列分析(MLST),可作为临床实验室光滑念珠菌基因分型方法。近年来白念珠菌对唑类抗真菌药的耐药性有增高趋势。"白念珠菌对唑类耐药的机制和生物膜相关基因的表达"一文提示ERG11基因的过度表达为白念珠菌对唑类耐药的重要机制。菌丝细胞壁蛋白HWP1基因的高表达与白念珠菌生物膜形成相关。肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药的主要机制是产生质粒介导的2型肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC-2),"同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌质粒blaKPC-2基因"一文建立的λred同源重组法能可靠敲除其质粒上的blaKPC-2,为进一步研究blaKPC-2在肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物耐药中所起的作用奠定基础。"结核分枝杆菌rdESA7-6抗原在耻垢分枝杆菌中的制备及其血清学诊断研究"一文研究制备的结核分枝杆菌融合蛋白-6用于结核病血清学检测具有较好的敏感性和特异性,可用于结核病患者的血清学诊断。     

痰培养联合血清学半乳甘露聚糖抗原检测对侵袭性曲霉感染患者诊断效能的影响

目的:探讨痰培养联合血清学半乳甘露聚糖(GM)抗原检测对侵袭性曲霉感染患者诊断效能的影响。方法:选取2015年11月-2017年9月我院侵袭性曲霉感染患者43例设为研究组,另选取同期于我院进行健康体检者43例设为对照组,抽取所有受检者3 ml全血标本进行血清GM测定,并进行痰培养,统计分析痰培养及血清GM单独与联合诊断侵袭性曲霉感染应用价值。结果:联合诊断敏感度(97. 67%)、特异度(93. 02%)、准确度(95. 35%)较痰培养高,敏感度、准确度较血清GM高,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:联合采取痰培养和血清学半乳甘露聚糖抗原检测,可有效提高侵袭性曲霉感染诊断准确度及敏感度,减少漏诊及误诊。     

不同抗原用于酶联免疫法对结核病的诊断价值

目的：探讨采用不同抗原的酶联免疫法对结核病的诊断价值。方法：分别以人型结核菌纯蛋白衍化物（PPD）与脂阿拉柏酸甘露聚糖（LAm）作为抗原,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清结核分枝杆菌抗体在各类结核病及非结核病患者中的敏感性和特异性。结果：以PPD为抗原ELISA方法的敏感性为79.7%,特异性为53.2%;以LAm为抗原ELISA方法的敏感性为86.4%,特异性为82.2%。结论：酶联法检测抗结核抗体的主要关键在于抗原。     

Rv0222/ESAT-6融合蛋白对结核病的诊断价值

目的:探讨Rv0222/ESAT-6融合蛋白对结核病的血清学诊断价值。方法:表达、纯化重组Rv0222/ESAT-6融合蛋白,以其为抗原包板、以酶标抗体为二抗、采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结核患者、人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染合并结核患者、非结核患者以及正常人血清,评价该融合蛋白对结核病的诊断价值。结果:以结核分枝杆菌感染T淋巴细胞斑点试验(T-SPOT,简称T-SPOT)为金标准,将Rv0222/ESAT-6融合蛋白作为抗原的ELISA诊断结核病的敏感性为86%,特异性为100%;T-SPOT与ELISA对结核病的阳性检出率差异无统计学意义。结论:以Rv0222/ESAT-6融合蛋白作为抗原的ELISA对结核病(包括HIV合并结核病)的血清学诊断有一定价值。     

两种结核分枝杆菌抗原在结核病血清学诊断中应用价值的比较

目的研究结核分枝杆菌脂多糖抗原(LAM)和结核分枝杆菌重组38KD蛋白抗原(r38KD)在结核病血清学检测中的效果,探索更有价值的结核血清学诊断方法。方法应用酶联免疫吸附试验对100例结核病患者血清、100例健康人血清中的抗结核抗体进行检测,并对检测结果进行统计分析。结果结核组中抗LAM抗体和抗38KD抗体均显著高于非结核对照组(P0.05),且两种抗原对结核病检测具有互补性。结论将LAM和38KD两种不同的结核分枝抗原进行组合可提高检测的特异度,有利于结核病的血清学诊断。     

过敏原特异性IgE抗体实验室检测及其临床应用

摘要：过敏原特异性IgE(sIgE)抗体检测对过敏性疾病的诊断和治疗具有重要价值。从待检抗体角度分析，sIgE抗体检测分为sIgE抗体物质含量检测和sIgE抗体病理活性检测，前者采用免疫化学(血清学)方法，后者采用细胞生物学方法。血清学检测为临床实验室常用方法，涉及斑点-酶免疫吸附试验(Dot-ELISA)、ELISA和荧光酶免疫分析(FEIA)等标记免疫技术。从已知抗原角度分析，sIgE抗体检测分为混合组分诊断(MRD)和单一组分诊断(CRD)。CRD可获得sIgE抗体谱结果，为临床提供更丰富的诊断信息。无论采用何种标记免疫技术，sIgE抗体实验室检测已从定性分析发展到定量分析，且分析灵敏度不断提升，这将逐渐满足临床诊断的需求，提高过敏性疾病的诊断和治疗水平。