七氟醚对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制

目的:探究七氟醚与乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移的关系以及作用机制。方法:采用不同浓度七氟醚处理MDA-MB-231细胞6 h,分为对照组、1.7%给药组、3.4%给药组、5.1%给药组,划痕实验和Transwell小室法观察细胞的迁移、侵袭能力,采用Western印迹法检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)、MMP-9、钙黏蛋白E(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)的水平。结果:与对照组相比,七氟醚处理MDA-MB-231细胞迁移率和侵袭细胞数随着浓度的增加而降低(P0.05)。MDA-MB-231细胞经七氟醚干预后,细胞中MMP-2,MMP-9,E-cadherin,β-catenin蛋白水平显著降低(P0.05),且随着浓度的增加逐渐降低;Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl作用于5.1%七氟醚干预6h的细胞,细胞中β-catenin和E-cadherin蛋白水平明显增加,侵袭、迁移能力显著提高。结论:七氟醚可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响MMP-2,MMP-9蛋白水平,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭、迁移能力。该效应具有浓度依赖性,为乳腺癌的治疗提供新的理论基础。     

山豆根提取物体外抗肿瘤实验研究

目的:研究山豆根提取物对人非小细胞肺癌A549细胞的体外抗肿瘤作用。方法 :采用MTT法检测山豆根提取物对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期的变化;ELISA检测Bax、Bcl-2蛋白表达的变化。结果 :山豆根提取物可明显抑制肿瘤细胞的增殖(P0.05);山豆根提取物对A549细胞处理48 h后,细胞周期阻滞在G0/G1期。与对照组相比,山豆根组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:山豆根提取物体外对A549细胞有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期分布有关。     

JAK/STAT3通路在瘦素促进肺癌细胞增殖机制中的作用

目的:探讨瘦素在促进肺癌细胞增殖过程中的可能机制,并探讨其在肺癌发生发展中的作用.方法:MTT法检测瘦素对肺癌A549细胞的促增殖作用.流式细胞术检测不同浓度瘦素处理组肺癌A549细胞的增殖率.免疫细胞化学法检测经不同浓度瘦素处理的A549细胞中STAT3、p-STAT3及Bcl-2蛋白的表达.结果:STAT3、p-STAT3及Bcl-2蛋白在A549细胞中均有表达.瘦素处理后的A549细胞中STAT3、p-STAT3及Bcl-2的表达随着处理浓度增加而增强,且100ng/mL瘦素处理组表达增加最明显,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05);瘦素刺激A549细胞24h后增殖效应最明显,且100.ng/mL组G2/M期细胞所占的比例较对照组和10ng/mL组显著增加(P＜0.05).结论:瘦素可能通过JAK/STAT3通路,活化STAT3介导抗凋亡基因Bcl-2的过度表达而使肺癌细胞呈持续增殖.     

沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响

目的:观察沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响。方法:以Lipofectamine 2000介导miR-21抑制剂转染Ishikawa/DDP细胞株,同时设置阴性组和耐药组。采用反转录PCR检测miR-21、多药耐药基因MDR1、促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的表达。采用蛋白印迹法检测多药耐药蛋白P-gp、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。采用噻唑蓝比色法检测细胞对顺铂的敏感性。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与耐药组和阴性组比较,抑制剂组miR-21,MDR1和Bcl-2mRNA表达显著下调(P0.01),而Bax mRAN表达显著上调(P0.001);抑制剂组P-gp和Bcl-2蛋白表达显著低下调(P0.05),而Bax蛋白表达显著上调(P0.001)。与耐药组和阴性组比较,顺铂对抑制剂组的IC50值显著(P0.001);顺铂对抑制剂组细胞的诱导凋亡率显著增加(P0.001)。结论:沉默miR-21可显著提高Ishikawa/DDP细胞株对顺铂的敏感性,并促进细胞凋亡,其具体机制可能与下调MDR1,P-gp和Bcl-2表达,以及上调Bax表达有关。     

β-榄香烯联合热疗和顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞HSP70及耐药基因的影响

目的探讨β-榄香烯联合顺铂和热疗对A549细胞中HSP70、MDR1、Bax/Bcl-2基因表达的影响。方法 15μg/ml和60μg/ml榄香烯分别联合热疗和顺铂处理细胞后,RT-PCR及WesternBlot法检测HSP70-1、MDR1基因mRNA转录和蛋白表达;RT-PCR检测Bax/Bcl-2基因mRNA转录水平。结果各实验组HSP70-1基因mRNA转录水平差异无统计学意义,而各实验组HSP70蛋白表达水平除了37℃下顺铂4μg/ml组、榄香烯15μg/ml、顺铂4μg/ml联合60μg/ml榄香烯组外其余各组均显著升高,差异有统计学意义(t分别=7.48～55.76,P均<0.05);37℃下各实验组MDR1基因mRNA转录多数降低,顺铂4μ/ml联合榄香烯15μg/ml与37℃对照组相比,差异有统计学意义(t=93.38,P<0.05),42℃下顺铂4μg/ml联合15μg/ml榄香烯组与42℃对照组比较,差异具有统计学意义(t=7.99,P<0.05)。各实验组MDR1蛋白表达均较低,与对照组比较,差异无统计学意义;部分实验组Bcl-2基因mRNA水平降低,与对照组比较,差异具有统计学意义(t分别=4.41、3.97、5.11、3.43、4.88、4.52,P均<0.05),而Bax基因mRNA水平未见明显变化。结论 37℃下高浓度榄香烯联合顺铂可能是通过抑制MDR1、Bcl-2等耐药相关基因协同杀伤细胞,而42℃下低浓度榄香烯和顺铂主要是通过抑制Bcl-2基因活性起到协同杀伤效应。     

肺癌患者外周血miR-214表达及对肺癌细胞凋亡和多药耐药的影响

目的探讨miR-214在肺癌患者外周血中的表达及其对肺癌细胞存活、凋亡、多药耐药的影响。方法小细胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)患者30例为SCLC组,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者30例为NSCLC组,30例体检健康者为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测3组外周血miR-214相对表达量。取对数生长期人SCLC H446细胞、人NSCLC A549细胞,人正常肺上皮BEAs-2B细胞,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞miR-214相对表达量;H446、A549细胞转染miR-214 mimics质粒,BEAs-2B细胞不转染miR-214 mimics质粒,于转染24 h采用CCK-8法检测3组细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein, LRP)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein, MRP) mRNA相对表达量,Western blot法检测P-gp、LRP、MRP蛋白表达,MTT比色法检测阿霉素、长春新碱、依托泊苷、顺铂、吉西他滨处理48 h的半数抑制剂量(the half maximal inhibitory concentration, IC_(50))。结果 SCLC组、NSCLC组、对照组外周血miR-214相对表达量(0.572±0.024、0.711±0.048、1.001±0.001)依次增高(P0.05);H446细胞、A549细胞、BEAs-2B细胞miR-214相对表达量(0.476±0.078、0.710±0.042、1.000±0.001)依次增高(P0.05);转染24 h,H446细胞、A549细胞、BEAs-2B细胞存活率[(43.5±5.2)%、(73.3±4.5)%)、(100.0±0.1)%]依次增高(P0.05),细胞凋亡率[(18.221±1.721)%、(13.523±1.825)%、(5.296±0.331)%]依次降低(P0.05);转染24 h,A549、H446、BEAs-2B细胞P-gp mRNA相对表达量(0.683±0.047、0.817±0.021、1.002±0.005)、LRP mRNA相对表达量(0.415±0.062、0.678±0.077、1.001±0.002)和MRP mRNA相对表达量(0.502±0.072、0.708±0.049、1.000±0.003)依次增高(P0.05),P-gp蛋白相对表达量(1.225±0.022、1.763±0.021、2.401±0.032)、MRP蛋白相对表达量(1.325±0.072、1.662±0.068、1.872±0.074)依次增高(P0.05);LRP蛋白相对表达量在A549、H446细胞(1.214±0.121、1.342±0.054)低于BEAs-2B细胞(1.825±0.0354)(P0.05),A549细胞与H446细胞比较差异无统计学意义(P0.05);阿霉素、长春新碱、依托泊苷、顺铂、吉西他滨作用48 h,H446、A549细胞IC_(50)值低于BEAs-2B细胞(P0.05)。结论肺癌患者miR-214表达增高,miR-214可抑制肺癌细胞的增殖和多药耐药性,促进肺癌细胞凋亡。     

99Tcm-MIBI在癌组织中的摄取与跨膜电位或肺耐药蛋白相关性

目的探讨99Tcm-MIBI检测肺腺癌A549DDP细胞的耐药性的机制.方法用MTT法检测顺铂对敏感A549细胞的IC50及有或无顺铂再处理后的A549DDP细胞的IC50.将上述细胞注入裸鼠皮下建立模型后,用99Tcm-MIBI进行SPECT显像,以免疫组化方法检测移植瘤细胞的LRP蛋白表达,流式细胞仪检测癌细胞的跨膜电位.结果顺铂对A549细胞、A549DDP细胞的IC50分别为24、325、182 μM.A549裸鼠99Tcm-MIBI 显像可见瘤块放射性浓聚影,A549DDP裸鼠亦可见瘤块的放射性浓聚影,其放射性浓度较前者明显减淡(P<0.05).A549移植瘤细胞LRP蛋白呈阴性,无顺铂再处理的A549DDP移植瘤细胞LRP蛋白表达呈阳性,顺铂再处理的A549DDP移植瘤细胞LRP蛋白表达呈强阳性,三者间有显著性差异(P＜0.01).各组细胞的LRP蛋白的表达与99Tcm-MIBI摄取值呈弱的负相关(r＝-0.59,P＜0.05).三种细胞跨膜电位有显著性差异,跨膜电位与99Tcm-MIBI 摄取值呈较强的负相关(r＝-0.71,P＝0.005).结论 99Tcm-MIBI检测肺腺癌耐药的A549DDP细胞的耐药性与细胞的跨膜电位关系密切,能在某种程度上反映肺癌LRP蛋白的表达.     

miR-23b-3p靶向PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的研究miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的作用及机制。方法将肺泡上皮细胞A549细胞分为对照组、感染组、转染组、感染组+转染组;对照组A549细胞常规培养,感染组用1×108 CFU/mL肺炎链球菌培养A549细胞,转染组转染不同载体,感染组+转染组在A549细胞被肺炎链球菌处理前48h进行转染。qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和paralemmin-3(PALM3)mRNA的水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中PALM3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax),酶联免疫法(ELISA)检测肺炎链球菌诱导后细胞培养上清中白介素-6(interleukin 6,IL-6)和白介素-10(interleukin 10,IL-10)的含量;双荧光素酶报告系统验证miR-23b-3p与PALM3的关系。结果与对照组相比,感染组A549细胞中miR-23b-3p、IL-10、Bcl-2含量明显降低(P0.05),PALM3、IL-6、Bax水平及细胞凋亡率明显升高(P0.05);过表达miR-23b-3p和干扰PALM3表达均可抑制肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症;miR-23b-3p靶向负调控PALM3的表达;过表达PALM3逆转了过表达miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症的作用。结论 miR-23b-3p靶向PALM3抑制肺炎链球菌诱导的A549炎症和细胞凋亡。     

百草枯经P53介导的线粒体凋亡途径诱导人肺Ⅱ型上皮样细胞A549凋亡

目的:探讨百草枯(PQ)诱导人肺Ⅱ型上皮样A549细胞凋亡过程中P53的作用及其作用机制。方法:实验分为对照组、PFT-α预处理组、PQ处理组和PFT-α预处理+PQ组。各组细胞培养24h、48h后,检测细胞凋亡、线粒体膜电位、Caspase-3/-9活性以及P53、Bax、Bcl-2蛋白表达的改变。使用P53依赖的转录抑制剂PFT-α来评价P53的作用。通过Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率以及Rh-123染色法检测线粒体膜电位;采用检测试剂盒测定Caspase-3和-9的活化程度;Western Blot检测P53、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与PQ处理组比较,PFT-α预处理+PQ组显著减弱了PQ诱导的细胞凋亡,抑制了线粒体膜电位的降低,降低了Caspase-3和-9的活化程度、P53蛋白的表达以及Bax/Bcl-2相对蛋白水平比例。对照组与PFT-α预处理组各方面比较差异无统计学意义。结论:PQ可通过P53介导的线粒体凋亡途径诱导A549细胞凋亡。     

肺炎链球菌通过Wnt信号通路介导肺腺癌细胞A549损伤的机制研究

目的研究肺炎链球菌刺激对肺腺癌细胞A549损伤的影响及作用机制。方法体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,分为对照组和肺炎链球菌R6刺激组。R6刺激组将肺炎链球菌按照1×10~8个/ml的量加入A549细胞中进行刺激,对照组加入等体积的曲古抑素A(TSA)处理作为对照。分别处理8 h、16 h、24 h、32 h,MTT检测处理各时间点A549细胞存活情况;流式细胞仪检测R6刺激24 h后A549细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测R6刺激24 h后炎症因子白介素6(IL-6)、IL-10含量变化;Western-blot检测R6刺激24 h后A549细胞凋亡相关蛋白及Wnt通路蛋白表达。结果 R6刺激显著抑制A549细胞存活,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05),R6刺激24 h对A549细胞存活抑制效果最明显。R6刺激24 h后,A549细胞凋亡率增高,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。R6刺激24 h后促炎因子IL-6含量显著增加,抗炎因子IL-10含量明显降低,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。Western-blot结果显示R6刺激后,促凋亡因子Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,抑凋亡因子Bcl-2表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05),Wnt通路蛋白β-catenin、p-GSK-3β表达明显升高,p-β-catenin、GSK-3β表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。结论肺炎链球菌刺激会对肺腺癌细胞A549损伤造成损伤,这一过程与Wnt信号通路的激活有关。     

2-脱氧-D-葡萄糖逆转七氟醚引起胚胎干细胞自我更新能力下降的机制研究

目的探讨2-脱氧-D-葡萄糖在逆转七氟醚引起胚胎干细胞自我更新能力下降的机制。方法采用鼠胚胎干细胞(m ESCs)作为研究七氟醚对孕早期胚胎毒性的模型,随机分成4组:对照组(暴露于5%CO2及21%O2的环境中)、七氟醚组(4.1%七氟醚的密封塑料盒中处理6 h)、2-DG组(10 mmol/L 2-DG处理6 h)、2-DG+七氟醚组(4.1%七氟醚+10 mmol/L 2-DG处理6 h)。各组干预6 h后,通过从形态学观测细胞宏观改变,荧光测定细胞内活性氧自由基(ROS)水平,qRT-PCR检测干性基因的mRNA表达情况和免疫萤光染色直接观察干性基因的水平四个方面比较七氟醚组与对照组在ROS水平和自我更新能力方面的差异。结果与对照组相比,七氟醚组细胞呈现高ROS水平,干性基因及其表达也有显著降低(P0.05);对照组和2-DG组上述指标则无显著差异(P0.05);2-DG+七氟醚组较七氟醚组ROS水平低,干性基因及其表达显著升高(P0.05)。结论七氟醚通过诱导细胞内ROS产生从而导致了m ESCs的自我更新能力的下降。2-DG缓解其引起的高水平ROS从而逆转其对胚胎干细胞自我更新能力的抑制。     

紫草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的研究紫草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法利用四甲基偶氮唑盐(MTT比色法研究不同剂量紫草素(0μm、5μm、10μm、20μm)对肺癌A549细胞的增殖作用;通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)染色法进行细胞形态学分析;采用流式细胞术进行细胞凋亡分析; Western blot方法检测细胞色素C、Bcl-2/Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved Caspase-9)及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达变化;构建人非小细胞肺癌A549细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分析不同剂量的紫草素的抑瘤作用。结果 MTT检测发现0μm、5μm、10μm、20μm紫草素处理后的A549细胞生长受到显著抑制,且表现出明显的剂量依赖性[(96. 25±3. 18)%、(87. 62±3. 21)%、(73. 57±2. 89)%和(59. 58±1. 87)%](P 0. 05);形态学染色和流式细胞术表明紫草素能够诱导肺癌A549细胞发生剂量依赖性凋亡[(1. 25±0. 78)%、(12. 37±3. 23)%、(22. 89±2. 23)%和(37. 62±5. 23)%](P 0. 05); Westernblot结果显示紫草素能够促进细胞色素C的释放,抑制Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved-caspase-9及cleaved-caspase-3蛋白表达量(P 0. 01);荷瘤鼠模型显示随着剂量的增加,移植瘤的质量明显降低(P 0. 05),抑瘤率显著增高(P 0. 05)。结论紫草素能够呈剂量依赖性促进人非小细胞肺癌A549细胞色素C的释放,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调Bax、cleaved-caspase-9及cleaved-caspase-3蛋白表达量,激活细胞线粒体凋亡途径,诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖。     

丙戊酸逆转人肺癌细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)对人肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的逆转作用。方法:MTT法分析VPA单用以及联合顺铂对A549/DDP细胞增殖的影响,流式细胞术检测VPA和DDP联合诱导细胞凋亡和对细胞周期的影响。结果:VPA对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,其IC50为8mmol。VPA和顺铂联合干预A549/DDP细胞结果显示,低剂量VPA和顺铂联合对A549/DDP细胞生长有明显的抑制作用,显示VPA逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药作用。细胞周期结果显示,VPA联合顺铂作用36 h可见细胞周期受阻,G2/M期细胞比例明显增加,48 h时可见明显的细胞凋亡。结论:VPA不仅具有抑制人肺癌耐顺铂细胞增殖的作用,而且能够明显提高A549/DDP对顺铂的敏感性,有效地逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其作用机制与阻滞细胞周期有关。     

Vinorelbine对肺癌细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响

目的探究长春瑞滨(Vinorelbine)对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响以及可能作用机制。方法采用前瞻性研究通过不同浓度长春瑞滨(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)作用于肺癌A549细胞。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法分析细胞的凋亡率,流式细胞术检测细胞周期变化,Caspase-3活性检测试剂盒观察含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的水平。结果与对照组相比,不同浓度长春瑞滨显著增加细胞的增殖抑制率(P0.05),且其抑制作用随着浓度的增加而增强;与对照组相比,长春瑞滨显著升高细胞的凋亡率(P0.05),上调细胞周期G2/M期和Casapse-3活性(P0.05),明显增加Bax/Bcl-2(P0.05)。结论长春瑞滨抑制肺癌细胞增殖,诱导其凋亡,阻碍细胞周期G2/M期,可能通过Caspase-3信号通路发挥作用。     

miR-802对叉头框转录因子M1抑制A549/DDP细胞顺铂耐药性的靶向调控作用

目的探讨miR-802抑制非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性及其对叉头框转录因子M1(forkhead box protein M1, FoxM1)的靶向调控作用。方法 A549、A549/DDP细胞采用反转录PCR法检测miR-802相对表达量。将A549/DDP细胞分为空白转染组和miR-802过表达组(过表达组),分别转染miR-NC和miR-802类似物(miR-802 mimics),转染24、48、72、96 h后,采用反转录PCR法检测2组细胞miR-802相对表达量,并采用CCK-8法检测2组细胞增殖率;转染48 h后,CCK-8法检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性,采用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率和细胞周期,采用Western blot法检测转染后A549/DDP细胞内FoxM1蛋白相对表达量。结果 A549/DDP细胞miR-802相对表达量(0.21±0.03)低于A549细胞(0.85±0.12)(P<0.05);转染24、48、72、96 h,过表达组细胞miR-802相对表达量依次增高(P<0.05),且均高于空白转染组(P<0.05);转染48、72、96 h,空白转染组细胞增殖率依次增高(P<0.05),且均高于过表达组(P<0.05);转染48 h,过表达组细胞半数抑制浓度[(35.28±2.17)mg/L]和细胞早期凋亡率[(17.2±1.1)%]均高于空白转染组[(14.22±1.28)mg/L、(9.0±0.8)%](P<0.05),S期和G2/M期细胞比率[(21.30±0.20)%、(8.35±0.33)%]及细胞内FoxM1蛋白相对表达量(0.21±0.04)均低于空白转染组[(27.54±0.52)%、(14.67±0.70)%、0.44±0.06](P<0.05)。结论 miR-802可能通过抑制FoxM1表达而降低非小细胞肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性。     

薯蓣皂苷元对三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖及凋亡的影响

目的探讨薯蓣皂苷元对人三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖及凋亡的影响。方法对数生长期人三阴乳腺癌HCC1937细胞株分为空白组(培养液)、实验1组(培养液+10mg/L薯蓣皂苷元)、实验2组(培养液+25mg/L薯蓣皂苷元)。采用MTT法观察薯蓣皂苷元培养24、48、72h时HCC1937细胞生长抑制率;流式细胞仪检测薯蓣皂苷元培养48h时HCC1937细胞周期及细胞凋亡;Western blot法检测薯蓣皂苷元培养48h时Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、P53、caspase3蛋白表达;Transwell实验观察薯蓣皂苷元培养24h时HCC1937细胞侵袭能力。结果薯蓣皂苷元培养24、48、72h,HCC1937细胞生长抑制率在实验1组分别为(6.86±2.56)%、(15.57±1.86)%、(14.84±4.64)%,在实验2组分别为(11.78±2.16)%、(24.48±3.70)%、(31.38±3.76)%,均高于空白组[(3.34±2.56)%、(8.47±1.86)%、(7.73±4.64)%](P0.05),且实验2组高于实验1组(P0.05);薯蓣皂苷元培养48h,实验1组G_1期细胞比例、细胞凋亡率分别为(36.21±3.12)%、(21.99±2.36)%,实验2组分别为(50.26±2.36)%、(26.17±3.46)%,均高于空白组[(28.35±2.54)%、(17.25±1.23)%](P0.05),实验2组高于实验1组(P0.05);薯蓣皂苷元培养24h,实验1组、实验2组HCC1937侵袭细胞数目[(64.00±11.01)%、(30.33±6.11)%]低于空白组[(146.00±9.16)%](P0.05),实验2组低于实验1组(P0.05);薯蓣皂苷元培养48h时,实验1组、实验2组HCC1937细胞Bcl-2表达量低于空白组,Bax、caspase3表达量高于空白组(P0.05),实验1组Bcl-2表达量低于实验2组,Bax、caspase3表达量高于实验2组(P0.05),3组P53蛋白表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论薯蓣皂苷元可抑制人三阴乳腺癌细胞系HCC1937增殖与侵袭,可能机制为使肿瘤细胞G_1期阻滞,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白Bax、caspase3表达。     

miRNA-9过表达对Aβ损伤的PC12细胞的保护作用

目的:探讨micro RNA-9(mi R-9)过表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤的PC12细胞及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法:PC12细胞分为mi R-9过表达组(E组)、空转染对照组(NC组)、不转染的损伤细胞模型组(NT组),采用CCK-8法检测细胞增殖;采用Annexin-V-PE检测细胞凋亡;采用RT-q PCR检测Bcl-2、Bax m RNA的表达,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与NC组及NT组比较,E组的PC12细胞转染48 h后增殖增加,凋亡率降低,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P0.05)。结论:mi R-9过表达可保护Aβ损伤的PC12细胞。     

HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系

目的：探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默缺氧诱导因子2α（hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF2α）基因表达后,人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的变化.方法：构建靶向HIF-2α基因的siRNA真核表达载体并转染A549细胞,采用Reαl-time PCR检测HIF-2α mRNA的表达,采用Western blotting检测HIF-2α及多药耐药基因1（multidrug resistance-1,Mdr-1）蛋白的表达,采用MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率.结果：在HIF-2α siRNA转染A549细胞后24、48 h后,HIF-2α在mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相比均显著下调（均P＜0.01）,Mdr 1蛋白的表达水平也明显降低（均P＜0.05）.与空白对照组相比,HIF-2α siRNA组细胞对顺铂的敏感性明显增加,各时间点的IC50值均显著降低,差异有统计学意义（均P＜0.01）.结论：靶向HIF-2α的siRNA表达载体能够有效抑制HIF-2α基因的表达,从而逆转A549细胞对顺铂的化疗耐药性.     

阿霉素联合顺铂对人胃癌组织增殖和凋亡影响作用的研究

目的研究阿霉素联合顺铂对人胃癌组织增殖和凋亡的影响作用,初步探讨阿霉素联合顺铂治疗胃癌的可能机制。方法常规培养人胃癌细胞株SGC-7907,用不同浓度的阿霉素、顺铂分别单独及联合用药作用于细胞。采用MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布、凋亡的变化;Western blot检测相关蛋白的表达。结果阿霉素和顺铂能抑制SGC-7907细胞的增殖,两种药物联合应用时抑制率远远高于单药组(P0.01)。流式细胞测定仪显示单用阿霉素、单用顺铂以及联合用药在24 h内对SGC-7907细胞细胞凋亡率分别为(11.89±1.25)%、(19.51±1.33)%、(30.02±2.49)%,联合用药组明显高于单独用药组(P0.01)。Western blot检测显示,联合用药组Bax增加和Bcl-2减小更为明显,caspase-3蛋白的表达显著增强,与单药组相比差异显著(P0.01)。结论阿霉素与顺铂联合用药效果明显,可抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,其作用可能与激活Bax、抑制Bcl-2和活化caspase-3有关。     

TIGAR调节肺癌细胞的增殖和侵袭能力研究

目的探讨P53下游基因TIGAR在肺癌细胞A549增殖、迁移及侵袭中的作用。方法采用siRNA技术在A549细胞中干扰TIGAR的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,小室法检测细胞迁移,肿瘤细胞侵袭实验检测细胞侵袭,免疫印迹杂交检测相关蛋白水平变化。结果在A549细胞中成功干扰TIGAR后,细胞增殖显著降低(P0.05),细胞迁移和侵袭能力显著减弱,侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达量均下调。结论 TIGAR促进肺癌细胞A549的增殖,并促进细胞的迁移和侵袭能力。