载玻片代替MACRO精子计数板可行性分析

目的探讨计算机辅助精液分析（CASA）中以普通载玻片代替MACRO精子计数板的可行性。方法对前来就诊的患者按要求留取精液，液化后分别取适量标本放在MACRO精子计数板和普通载玻片上采用WLJY-9000伟力彩色精子质量检测系统分别测得其密度、活率及活力等参数。结果在少精组（精子密度每毫升小于20×10^6）、弱精组（精子活率小于50％）、少弱精组（精子密度每毫升小于20×10^6，且精子活率小于50％）和正常组（精子密度每毫升大于20×10^6，且精子活率大于50％）间分别用MACRO精子计数板和普通载玻片测得其密度、活率及活力各参数间差异无统计学意义。结论CASA中以普通载玻片代替MACRO精子计数板操作简便、结果可靠、经济实用。     

用于精子活力筛选的微流控芯片设计与优化

目的 对微流控芯片微管道的深度和筛选时间进行优化,构建有效的精子活力筛选器件.方法 设置深度分别为25、50、100、200 μm的微管道,在管道入口池分别加入2.5μl小鼠精子悬液,比较不同深度管道的出口池中精子活力和精子相对数量的差异.选取最适深度的芯片用于筛选时间的优化,分别在加入小鼠精子后5、15、30、60 min记录出口池的精子相对数量和精子活力,比较不同筛选时间所得到的精子活力和精子相对数量的差异,以寻找最适的筛选条件.结果 深度为25、50、100、200μm的4组管道出口池中精子活力分别为(85.4±2.3)%、(85.8±5.8)%、(87.2±2.8)%、(76.5±2.8)%,差异有统计学意义(F=5.8,P＜0.05),在深度为25～100μm的3组管道之间变化不明显,而在深度为200 μm管道中该指标明显下降;4组不同深度管道出口池中的精子相对数量分别为(5.2±2.0)%、(7.2±2.5)%、(12.3±2.0)%、(7.7±1.1)%,差异有统计学意义(F=6.9,P＜0.05),在25～100 μm范围内随深度的增加而增大,在100μm深度时达到最大值,管道深度增至200 μm时该指标反而下降,综合考虑精子相对数量和活力2项指标,100μm深度的管道为精子活力筛选的最适管道.加入精子后5、15、30、60 min,出口池中精子活力逐渐下降,分别为(99.6±0.7)%、(87.2±2.8)%、(79.3±2.2)%、(62.6±8.0)%,差异有统计学意义(F=37.3,P＜0.01);而出口池中精子相对数量在此过程中提高,分别为(5.8±1.1)%、(10.6±0.9)%、(12.1±1.7)%、(17.9±3.4)%,差异有统计学意义(F=17.8,P＜0.01),加入精子后15～30 min是理想的精子活力筛选时间.结论 本研究对微流控芯片管道的深度和筛选时间进行了优化,构建了有效的精子活力筛选器件,为在芯片上实现健康精子的筛选奠定了基础.     

SCA自动精子分析仪对男性不育患者精子活力、运动参数的分析

目的 探讨生理盐水稀释对男性不育患者SCA自动精子分析仪分析精子活力、运动参数的影响.方法 对6 069例患者根据精子密度分为(2.0~50)×106/mL和(50~200)×106/mL两组,对精子各参数进行检测及分析.结果 精子数(2.0~50)×106/mL组中,精子活动率和非前向运动精子百分率(NP%)稀释组比未稀释组升高,差异有统计学意义(P<0.05).其余精子平均曲线运动速度(VCL)、平均路径速度(VAP)、平均直线运动速度(VSL)、精子头侧摆幅度(ALH)、精子平均鞭打频率(BCF)六项运动参数结果差异均无统计学意义(P>0.05);精子数(50~200)×106/mL组中,未稀释组和稀释组比较,所有动力学相关参数差异有统计学意义(P<0.05).稀释后结果表现为精子活动率平均降低12.78%、前向运动精子百分率(PR%)平均降低8.57%、非前向运动精子百分率(NP%)平均降低4.21%,其余VCL、VAP、VSL、ALH和BCF均比未稀释组升高.结论 进行计算机辅助精液(CASA)分析时,精子密度在(2~50)×106/mL之间的标本,直接采用原精液更能准确检测运动精子动力学参数.对高精子密度标本用预温生理盐水1∶3稀释后进行测定,精子活力、运动参数更加客观准确.     

广州地区不同检测系统精子浓度和精子活动力参考区间的建立及验证

目的按不同地域人群及检测系统建立精液常规分析主要指标(精子浓度、精子活动力)的参考区间,并验证其是否适用于广州地区的人群。方法根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)C28-A3文件,分别采用3种不同的检测系统[计算机辅助精液分析系统(CASA)、Marker计数板、改良牛鲍计数板]检测145名体检健康男性的精子浓度和精子活动力并建立各自的参考区间,另收集20名健康男性个体,用于验证参考区间的适用性。结果 CASA、Marker计数板、改良牛鲍计数板检测精子浓度的参考区间分别为≥27.6×106/m L、≥35.4×106/m L、≥31.0×106/m L。CA S A、M a r k er计数板测定精子总活动力的参考区间分别为≥40.9%、≥49.4%,前向活动力的参考区间分别为≥32.2%、≥35.0%。结论建立的精子浓度和精子活动力参考区间适用于广州地区的人群,亦可推广到本地区内的其他实验室。     

计算机辅助精子质量分析与常规精液分析的对比性研究

目的评估常规精液分析方法(SRA)和计算机辅助精子质量分析(CASA)各项参数的可信度。方法对145例精液标本在进行CASA的同时,进行SRA分析。SRA按WHO规定的标准和方法进行检测,CASA采用WLJY-9000型伟力彩色精子质量检测系统分析。结果平均精子密度CASA和SRA分别为73.36×106/ml和74.03×106/ml,在分组对60例指标正常精液标本和85例指标异常精液标本的CASA与SRA的精子密度分析中,结果无差异(分别为96.63×106/ml、96.78×106/ml和60.13×106/ml、62.39×106/ml)。对精子活力的分析SRA和CASA则表现出一定差异,145例精液标本CASA精子活力分级为a级25.56%、b级19.58%、c级13.19%、d级41.66%,SRA为a级22.16%、b级20.44%、c级13.71%、d级44.07%,CASA检测a级活力精子比例偏高,d级活力精子偏低,而SRA则相反。结论无论SRA还是CASA对精子密度的分析是可信的,而对精子活力分析时则有差异。因此在判断精子活力时不能仅靠CASA,应同时进行肉眼观察。     

男性不育患者精子核蛋白组型转换与精子密度及活力分析

目的探讨男性不育患者精子核蛋白组型转换与精子密度及活力的关系,为男性不育的治疗提供资料。方法精液常规分析后,按精子密度、活力的不同进行分组。分别检测各组精子核蛋白组型转换率。利用t检验对结果进行统计学分析。结果不同精子密度组（〈20×10^6／mL、20×10^6／mL40×10^6／mL、40×10^6／mL～60×10^6／mL、≥60×10^6／mL）精子核蛋白组型转换率分别为：（81．43±10．01）％、（83．30±11．23）％、（79．57±10．49）％、（81．71±9．14）％。不同精子活力组（〈10％、10％～30％、30％～50％、50％～70％、≥70%）精子核蛋白组型转换率分别为：（77．86±12．80）％、（79．76±12．22）％、（81．74±9．48）％、（79．45±10．58）％、（84．72±10．25）％。统计学分析结果表明,不同精子密度组与不同精子活力组比较,差异无统计学意义。结论男性不育患者精子核蛋白组型转换与精子密度及活力无关,精子核蛋白组型转换可能是影响男性不育的一个独立性因素。     

计算机辅助精子分析用精液样本的稀释条件及标准化研究*

摘要:目的探讨计 算机辅助精子分析( CASA)系统检测高浓度精液样本的稀释条件及标准。方法当精子浓度<50x10*/mL时不稀释;当≥50x10*/mL时,按1:[n/ (50x10*)]的比例[n为精子浓度,n/(50x10*)向下取整]用生理盐水稀释至50x 10/mL 以下。采用CASA系统和10 μm深度一次性计数板检测精液样本,分为未稀释组(组1:精子浓度<50x 10/mL) .50x 10*/mL≤精子浓度< 100x 10*/mL组(组2)、精子浓度≥100x 10*/mL组(组3),稀释前后分析各组精子浓度、前向运动精子百分率 (PR)、非前向运动精子百分率(NP)精子活动率(PR+NP)和不活动精子百分率(IM)等,比较稀释前后结果的一致性。采用ROC曲线预测最佳稀释阈值。结果随着精子浓度的增加 ,稀释前后各参数差异逐渐增大。ROC曲线分析结果显示,分别用精子浓度、PR+NP、PR、NP、IM預測时,精液标本的最佳稀释阈值分别为133.05 x 10*/mL.101.75x 10*/ml.118.60x 10*/mL.90.90x10/m111.83x10*/mL.结合高浓度精液样本未稀释检测时对精子浓度和NP的影响最大,确定最佳稀释固值为125.08x10/ml。结论建议 当精子浓度>125x 10/mL时,应对精液样本进行生理盐水稀释。     

精子形态差异对活力的影响研究

目的：研究精子形态差异对活力的影响.方法：采用精子形态检测系统下人工修正方法分析精子形态,计算机辅助精子分析（CASA）系统进行精子活力分析.结果：精子形态异常组的精子活力低于精子形态正常组,两组比较有显著性差异（P＜0.01）.结论：精子形态异常导致精子活力的降低.     

不同方法学及实验室间精子密度检测结果比较

目的：分析清华同方计算机辅助精液分析（CASA ）系统与血细胞计数板法精子密度检测结果的一致性，以及不同实验室检测结果的一致性。方法选择2013年4～7月于本院接受精子密度检测的男性受试者100例，由本院检验科进行CASA 和血细胞计数板法精子密度检测，同时由沈阳市生殖医学中心精液检测中心进行CASA精子密度检测，分析不同方法及不同实验室的检测结果。结果血细胞计数板法、CASA（本院检验科）、CA-SA （沈阳市生殖医学中心精液检测中心）精子密度检测结果分别为（101．52±75．56）、（104．45±73．57）、（101．60±73．71）·10^9/L ，不同方法及不同实验室检测结果比较差异均无统计学意义（ P＞0．05）。不同方法检测结果相关系数为0．944。结论 CASA检测精子密度具有较好的结果准确性和一致性，适用于精子密度检测。     

血清抑制素B检测在评价男性睾丸生精功能中的应用价值

目的 研究血清抑制素B与睾丸生精功能的关系,探讨血清抑制素B检测在评价男性睾丸生精功能中的应用价值.方法 按WHO人类精液检查与处理实验室手册(第五版)方法对精液进行常规分析,根据精子密度将研究对象分为无精子症组、精子密度≤5×106/ml组、精子密度(6～14)×106/ml组、精子密度(15～20)× 106/ml组及精子密度＞20×106/ml组.根据睾丸穿刺活检病理结果将无精子症组分为梗阻性无精子症组及非梗阻性无精子症组.采用ELISA法分别对上述各组进行血清抑制素B的检测.利用方差分析对组间均值进行统计学分析.结果 精子密度≤5×106/ml组、精子密度(6～14)×106/ml组、精子密度(15～20)×106/ml组及精子密度＞20×106/ml组、梗阻性无精子症组及非梗阻性无精子症组血清抑制素B浓度分别为:62.28±21.64pg/ml、70.52±23.24pg/ml、114.39±35.46 pg/ml、132.42±40.98 pg/ml、102.64±32.79 pg/ml及22.34±10.58pg/ml.统计学分析结果表明,精子密度(15～20)× 106/ml组、精子密度>20×106/ml组及梗阻性无精子症组间血清抑制素B浓度无显著性差异,但均显著高于精子密度≤5×106/ml组、精子密度(6～14)× 106/ml组及非梗阻性无精子症组,差异具有统计学意义.精子密度≤5×106/ml组及精子密度(6～14)×106/ml组血清抑制素B浓度无显著性差异,但均高于非梗阻性无精子症组,差异具有显著性.结论 血清抑制素B检测不仅可作为评价睾丸生精功能的一项指标进行应用,也可用于对无精子症睾丸活检结果进行预测,从而避免不必要的损伤.     

精液参数对宫腔内人工授精妊娠率的影响

目的探讨处理后前向运动精子总数（PTMS）及精子正常形态对宫腔内人工授精（IUI）妊娠率的影响。方法收集接受了共417周期IUI治疗的216对不孕夫妇。按处理前精子形态,将其分为形态正常组（正常形态精子百分比：〉15%,n=45）、轻度畸形组（正常形态精子百分比：〉10%-15%,n=103）、中度畸形组（正常形态精子百分比：〉5%-10%,n=186）和重度畸形组（正常形态精子百分比：≤5%,n=83）。根据PTMS将其分为5组,第Ⅰ组：PTMS〈2×106,第Ⅱ组：2×106≤PTMS〈5×106,第Ⅲ组：5×106≤PTMS〈10×106,第Ⅳ组：10×106≤PTMS〈20×106,第Ⅴ组：PTMS≥20×106。比较各组妊娠率。结果 216对不孕夫妇临床妊娠73例,周期临床妊娠率17.50%。第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组患者的临床妊娠率分别为3.3%、15.8%、24.1%、15.0%和21.4%。形态正常组、轻度畸形组、中度畸形组和重度畸形组患者的临床妊娠率分别为20.0%、20.4%、19.4%和8.4%。结论当PTMS〈5×106或正常形态精子百分比低于5%时,IUI妊娠率显著下降。     

计算机辅助精子分析与常规精液分析的比较研究

目的研究计算机辅助精子分析（CASA）和常规精液分析（SRA）各项参数是否具有可比性。方法对213例精液标本同时行CASA和SRA分析。CASA采用西班牙SCA精液质量分析仪进行检测,SRA按世界卫生组织（WHO）推荐的标准化方法进行检测。结果当精子密度介于（5-80）×10^6/mL时,CASA和SRA分析的平均精子密度、精子活动力的差异无统计学意义（P〉0.05）;当精子密度〈5×10^6/mL时,CASA分析的平均精子密度高于SRA（P〈0.05）,精子活动力的差异无统计学意义（P〉0.05）;当精子密度〉80×10^6/mL时,CASA分析的平均精子密度高于SRA（P〈0.05）,且CASA检测a级精子比例偏高,d级精子比例偏低（P〈0.05）;用生理盐水按一定比例将精液稀释后分别进行CASA和SRA,平均精子密度、精子活动力的差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论当精子密度介于（5-80）×10^6/mL时,CASA和SRA对精子密度和活动力的分析具有可比性;当精子密度〈5×10^6/mL时,CASA的误差较大,需进行SRA;当精子密度〉80×10^6/mL时,需用生理盐水稀释精液后行CASA或SRA分析,两者结果具有可比性。因此,当用CASA进行精液分析时,应同时结合显微镜镜检。     

平喘固本合剂对哮喘小鼠气道慢性炎症及重塑的影响及其作用机制

目的 探讨平喘固本合剂对哮喘小鼠的气道慢性炎症及重塑的作用及其相关作用机制.方法 24只昆系小鼠建立哮喘小鼠模型,按随机数字表法分为3组：正常对照组、哮喘模型组、平喘固本合剂治疗组,每组各8只.对各组支气管肺泡灌洗液（BALF）中各种细胞进行分类并计数,肺组织病理切片行HE染色后观察气道重塑情况并检测气道管壁厚度,采用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子（VEGF）、核转录因子κB（NF-κB）的表达情况.结果 （1）肺组织形态学变化：HE染色显示平喘固本合剂治疗组较哮喘模型组炎症细胞浸润、平滑肌肥厚及黏膜气道组织水肿、上皮细胞脱落等表现明显减轻.（2）各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞分类计数：哮喘模型组嗜酸性粒细胞计数[（2.15 ±0.44）×108/L]、气管壁厚度[（16.66±1.52） μm2/μm]、气道上皮组织中NF-κB、VEGF表达水平（36.01±4.78、35.87±4.92）明显高于正常对照组嗜酸性粒细胞计数[（0.03 ±0.03）×108/L]、气管壁厚度[（6.61±1.14） μm2/μm]、气道上皮组织中NF-κB、VEGF表达水平（12.78±1.47、11.57±1.64）,两组比较差异有统计学意义（P均＜0.01）.平喘固本合剂治疗组BALF中嗜酸性粒细胞数[（0.35±0.12）×108/L]、气管壁厚度[（11.57±1.26） μm2/μm]及NF-κB（29.13±1.92）、VEGF （28.28±2.02）明显低于哮喘模型组,两组比较差异有统计学意义（P均＜0.01）.结论 平喘固本合剂可以下调哮喘模型小鼠气道组织中NF-κB和VEGF的表达,达到抑制哮喘气道慢性炎症及重塑的作用.     

微流控芯片上的精子自然优选

目的 在微流控芯片上模拟精子与宫颈粘液相互作用过程,发展一种接近生理状态的精子优选方法. 方法 按功能构建微流控芯片,使精子在灌注有宫颈粘液的通道中运行.同时在芯片上集成在线精子检测池,对精子的各项参数进行在线测定.用微流控芯片法和常规上游法对照分析35例标本并比较分选效果. 结果 芯片法和上游法分选都可以显著改善精子的质量（P〈0.01）.实验对两种方法分选后精子的各项参数进行了比较.与上游法相比,芯片法分选精子在精子活力（93.41±6.02% vs 70.66±10.81%）、正常形态百分率为（22.28±7.42%vs 15.05±6.57%）、平均轨迹速度（41.81±15.87μm/s vs 34.58±6.15μm/s）、前向性比例（85.02±12.18%vs 70.85±9.03%）等方面均具有显著性差异（P〈0.01）,而两种方法分选获得的精子在直线运动速度（35.08±16.32μm/s vs 23.18±5.75μm/s）比较中没有显著差异（P〉0.05）. 结论 本研究在微流控芯片上实现了精子的自然优选.这种基于芯片的精子分选方法可以显著改善精子质量.与传统上游法相比,芯片法精子分选在多项参数上均具有优势.     

解脲脲原体和血清抗精子抗体对精液质量的影响

目的分析解脲脲原体（Uu）和血清抗精子抗体（AsAb）对精液质量的影响。方法选取62例男性不育患者,以Uu选择培养基对其分泌物培养鉴定,以酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其精浆和AsAb、IgM、IgG和IgA,以精液分析仪进行精子密度、存活率、a＋b级活力和畸形率分析;然后根据结果不同,分为Uu阴性和Uu阳性不育组、AsAb阴性和AsAb阳性不育组,分别加以比较。结果 Uu阳性不育组精子畸形率为（25.62±17.90）%,较Uu阴性不育组的（12.81±8.46）%明显增高（P〈0.05）,而两组间精子密度、精子存活率和精子活力差异无统计学意义（P〉0.05）;AsAb阳性不育组精子密度、精子存活率和精子活力分别为（37.21±42.95）×106/mL、（23.82±20.30）%、（11.79±12.62）%;AsAb阴性不育组分别为（90.01±83.52）×106/mL、（52.25±30.10）%、（35.28±23.46）%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,而两组间精子畸形率差异无统计学意义（P〉0.05）;AsAb各亚型间精子存活率和精子活力差异有统计学意义（P〈0.05）,而各亚型间精子畸形率和精子密度差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 Uu和AsAb严重影响精液质量,这对男性不育类型的鉴别诊断和选择治疗方案具有重要意义。     

精液白细胞数量、液化时间及精子活力的关系探讨

目的通过对精液常规检查结果的分析,探讨白细胞数量与精液液化时间及精子活力的关系。方法回顾性分析8 666例精液常规检验结果,将有精液标本按白细胞数量差别分为3组,A组:白细胞计数不高于1×10~6/mL,B组:白细胞计数为(1~4)×10~6/mL,C组:白细胞计数大于4×10~6/mL。比较3组精液液化时间和精子活力。结果 8 666例精液分析标本中,无精子标本164例(1.9%),有精子标本8 502例(98.1%)。A、B、C 3组分别有7 419例、1 014例和69例。3组中活力正常分别有5 323例、740例和50例;活力异常分别有2 096例、274例和19例。3组中精液液化时间正常分别有4 593例、608例和43例;液化时间异常分别有2 826例、406例和26例。经统计学分析,白细胞数量与液化时间之间无相关性(P=0.712),白细胞数量与精子活力间无相关性(P=0.486)。液化正常组中精子活力正常和异常分别为1 217例和4 027例,液化异常组中精子活力正常和异常分别为1 172例和2 086例,差异有统计学意义(P=0.0000.05)。结论精液中白细胞数量与精液液化及精子活力无关,液化时间与精子活力有关。     

血清骨形态发生蛋白-7与2型糖尿病肾病病变程度的临床研究

目的探讨血清骨形态发生蛋白-7(BMP-7)水平与2型糖尿病肾病(DN)病变程度的关系,检测BMP-7能否作为反映DN早期的预测指标。方法选择2型糖尿病患者207例,根据尿白蛋白排泄率(UAER)水平,将其分为非DN组56例(A组),UAER<20μg/min;早期DN55例(B组),UAER:20²00μg/min;临床期DN肾功能正常组52例(C组),UAER>200μg/min;临床期DN肾功能异常组44例(D组),UAER>200μg/min,肾功能为慢性肾衰竭代偿期(血清肌酐Cr:133200μg/min;临床期DN肾功能正常组52例(C组),UAER>200μg/min;临床期DN肾功能异常组44例(D组),UAER>200μg/min,肾功能为慢性肾衰竭代偿期(血清肌酐Cr:133¹77μmol/L);另选55例健康体检者作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定BMP-7水平;采用电化学发光法测定尿白蛋白的值,再根据UAER(μg/min)=(尿白蛋白浓度μg/ml×尿量ml)/1 440 min;采用常规方法检测空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及糖化血红蛋白(HbA1c);并做相关分析及使用Stepwise行多因素逐步回归分析。结果各组BMP-7的值分别为:(326.49±30.46)pg/ml,(400.06±39.37)pg/ml,(289.48±37.66)pg/ml,(167.37±29.53)pg/ml,(69.76±30.2)pg/ml,差异有统计学意义;各组BMP-7与UAER的相关系数分别为:-0.274,0.316,0.771,0.723,0.512;各组UAER与BMP-7、FPG、2 h PG及HbA1c的回归方程分别为:UAER=9.197+0.015×BMP-7,UAER=3.563+0.756×HbA1c,UAER=34.208+0.488×BMP-7,UAER=112.305+0.555×BMP-7,UAER=254.321+0.415×BMP-7。结论血清BMP-7在DN的不同病变阶段水平不同,BMP-7与UAER具有相关性,BMP-7比FPG、2 h PG及HbA1c对UAER的影响更显著。