碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的敏感性及分子特点分析

目的分析碳青霉烯耐药非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae without producing carbapenemase,CRKPPC)的抗菌药物敏感性、β-内酰胺酶基因和外排泵基因的分布及外排泵抑制剂的抑制作用。方法收集2012—2014年我院碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌108株,用Mastdiscs combi Carba plus纸片系统检测碳青霉烯酶表型。用微量肉汤稀释法测定CRKPPC菌株对抗菌药物的敏感性;用PCR和DNA测序技术检测β-内酰胺酶耐药基因,包括超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamase,ESBL)和质粒介导的头孢菌素酶(Amp C)编码基因及外排泵基因acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH;外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)和利血平抑制试验分析外排泵在碳青霉烯耐药中的作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36的表达。结果碳青霉烯不敏感肺炎克雷伯菌菌株中有26株细菌为CRKPPC;这26株细菌对β-内酰胺类药物高度耐药,对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率均较高,但对替加环素、多黏菌素、头孢他啶/阿维巴坦和氨曲南/阿维巴坦等有很好的敏感性; blaCTX-M和blaSHV检出率依次为76.9%和57.7%;外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36均有不同程度的缺失,缺失率分别为57.7%和19.2%;80%以上的细菌中存在acr AB-tolC、kex D、kde A、kpn EF和kpn GH基因; CCCP对碳青霉烯类药物具有显著的抑制作用,而利血平没有明显的抑制作用。结论替加环素、多黏菌素可以作为CRKPPC联合用药的基础药物。CRKPPC菌株中存在Amp C、ESBLs及不同程度的外膜孔蛋白Omp K35和Omp K36缺失,但外排泵对碳青霉烯类药物的外排作用是CRKPPC对碳青霉烯耐药的主要机制,外排泵抑制剂可能在这种细菌引起的感染治疗中有重要价值。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的探讨2014年该院收集的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制。方法采用纸片扩散法或者Vitek 2Compact全自动药敏分析系统初筛亚胺培南非敏感菌株,琼脂稀释法确证亚胺培南非敏感肺炎克雷伯菌;通过Carba NP确证试验检测碳青霉烯酶表型;通过PCR扩增及测序检测碳青霉烯酶基因、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因、质粒携带的AmpC基因在菌株中携带情况;外膜蛋白SDS-PAGE分析菌株外膜蛋白的改变;外排泵抑制剂羰酰氰氯苯腙(CCCP)抑制试验检测不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌中是否存在针对碳青霉烯类抗菌药物的外排泵。结果琼脂稀释法验证30株为碳青霉烯非敏感菌株,其中19株为Carba NP表型试验阳性,其中18株产KPC-2,1株产NDM-1。11株Carba NP表型试验阴性的不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌的ESBLs、AmpC酶的携带率为blaCTX-M 72.7%,blaSHV 27.3%,blaTEM 72.7%,blaDHA 27.3%。SDS-PAGE结果显示编号2368、2875、3050的菌株OmpK36缺失,其余菌株未发现外膜蛋白缺失。CCCP存在时,11株不产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最小抑菌浓度值均明显降低。结论碳青霉烯酶产生,尤其是产KPC-2是该院CRKP的主要耐药机制,外排泵的高表达,外膜蛋白的缺失合并产AmpC酶也发挥了重要作用。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制及实验室检测研究进展

肠杆菌科细菌是重要的人类感染病原菌,近年来,由于抗菌药物的大量、不合理使用,导致耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌在临床上的分离率逐年增加,耐药情况日趋严重,其耐药机制包括产碳青霉烯酶、外膜蛋白的缺失或合并产AmpC酶或超广谱β-内酰胺酶、青霉素结合蛋白对碳青霉烯类药物亲和力下降及药物外排泵高度表达。该文就耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药机制及实验室检测研究进展进行综述。     

替加环素和其他广谱抗菌药物对产丝氨酸碳青霉烯酶和金属β内酰胺酶的肠杆菌科细菌的抗菌活性:SENTRY监测网络的报告

肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性可以由过量产生AmpC酶且同时外膜孔道蛋白大量缺失和（或）外排泵过量表达,或产生能水解碳青霉烯类的β内酰胺酶引起。这些碳青霉烯酶可以分为金属β内酰胺酶（MSL）和丝氨酸碳青霉烯酶两类。替加环素是一类半合成的甘氨酰环素类抗菌药物,对其他类抗生素耐药的细菌通常对替加环素无交叉耐药。     

摩根摩根菌对碳青霉烯类药物耐药机制的研究

目的分析从外科重症监护病房(SICU)分离的对碳青霉烯类药物耐药的3株摩根摩根菌(M1、M2和M3)的耐药机制和传播方式。方法采用琼脂稀释法进行药物敏感性试验;肠杆菌科基因间重复性一致序列(ERIC)-聚合酶链反应(PCR)用于分析菌株的分子流行病学特征;特异性PCR扩增检测细菌编码β-内酰胺酶的基因;接合试验和提取质粒进行酶切分析耐药基因可传递性和耐药质粒的同源性;耐药基因两边序列测序分析耐药基因的遗传背景;提取外膜蛋白电泳分析菌株外膜蛋白的改变。结果 3株分离菌和对应的接合子均扩增出介导碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)-2型基因,其中M1和M2为相同克隆株;质粒接合试验成功传递了对碳青霉烯类药物的耐药性,KPC-2基因被携带在酶切后片段完全不同的3个质粒上,耐药基因的遗传背景却相同;3株菌均缺失了相对分子质量约为38 000的外膜蛋白而出现36 000的外膜蛋白。结论 3株菌来自2种克隆株,均携带KPC-2基因。该基因由3个不同的质粒携带,同一可移动序列可能介导了KPC-2基因在3株细菌的不同质粒上转移。产KPC-2型碳青霉烯酶及外膜蛋白缺失可能共同导致了所分离的摩根摩根菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药。     

产碳青霉烯酶菌株实验室检测研究进展

碳青霉烯类抗菌药物是抗菌谱最广、抗菌活性最强的非典型β-内酰胺类药物,因其具有对β-内酰胺酶稳定以及毒性低等特点,已成为治疗严重细菌感染最主要的抗菌药物之一.随着此类药物的大量使用,耐药菌株不断出现且检出率逐年提高,给临床治疗和院内感染控制带来新的挑战.既往临床上常见的耐药菌株以铜绿假单胞菌和不动杆菌属细菌为代表,但随着此类抗菌药物使用频率增加,对其耐药的肠杆菌科细菌在世界各地均有报道.对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性可以是由产生过量AmpC酶同时伴外膜孔道蛋白大量缺失和(或)外排泵过量表达,或产生碳青霉烯酶引起.而产碳青霉烯酶是碳青霉烯类药物耐药的主要原因,包括KPC酶、金属酶以及部分OXA酶,编码此类酶的基因大多位于可移动基因元件上,通过质粒或转座子在不同菌种间传播,从而导致耐药基因的迅速播散[1].碳青霉烯类药物是临床治疗重症感染的最后选择,如果患者对其耐药,几乎无药可医.因此,对碳青霉烯酶的快速检测已迫在眉睫.然而,单独的药敏试验并不能筛查所有的产碳青霉烯酶菌株,因此预防和控制产酶菌株的播散就必须依赖实验室的诊断.     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学研究进展

肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要包括产碳青霉烯酶、外膜蛋白缺失或突变、外排泵过度表达以及青霉素结合蛋白变异等,其中最主要的是产碳青霉烯酶。虽然各种肠杆菌科细菌的耐药机制大体相同,但是各种耐药基因在不同种属细菌中的分布和流行情况并不相同。肺炎克雷伯菌是临床上最常见的条件致病菌之一,也是检出率最高的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌。由于临床上治疗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌感染的药物非常有限,此类患者的病死率较高［1］。自1997年在美国北卡罗莱纳州发现第1株耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌以来［2］,对碳青霉烯类耐药或敏感性降低的肺炎克雷伯菌检出率呈持续上升趋势,在肺炎克雷伯菌中发现的耐药基因突变类型也越来越多,这些基因大多存在细菌质粒上,往往通过细菌间的传播导致医院感染的流行。     

肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物耐药现状

碳青霉烯类药物对超广谱β-内酰胺酶表现出的稳定性使其一直作为产酶株临床治疗的首选药物,但随着碳青霉烯类药物的大量使用,对碳青霉烯类药物耐药的肠杆菌科细菌不断出现,成为一个棘手的临床问题.耐药性的产生往往是多机制共同作用的结果,从而导致实验室检测可能存在假阳性.替加环素、多黏菌素、磷霉素等可以用于治疗碳青霉烯类耐药的菌株.应该合理、正确的使用抗菌药物减缓耐药性出现,加强医院院内感染的控制,减低耐药性传播的几率.     

可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的耐药基因研究

目的 分析临床分离的可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌所携带的耐药基因.方法 采用全自动细菌鉴定仪进行药敏试验,用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶筛选,用纸片扩散试验进行ESBLs表型检查,用头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,用聚合酶链反应检测β内酰胺酶基因、外膜蛋白（OmpK35和OmpK36）编码基因、转座子tpuA和tpuU基因,并进行产物测序.结果 ①62株可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌对厄他培南和氨苄西林100％耐药,对氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、氨曲南的耐药率达87％以上,对亚胺培南、美洛培南、丁胺卡那霉素耐药率为35％以下;②β内酰胺酶的总检出率为75.81％,主要由同时产ESBLs和AmpC引起,检出率为33.87％,其次为单产ESBLs引起,检出率为30.65％;③检出KPC,DHA,CIT,TEM,CTX M,SHV和NDM1β内酰胺酶基因的阳性率分别为8.06％,14.51％,24.19％,25.81％,27.42％,40.32％和6.45％; Ompk35,Ompk36基因缺失率为38.70％和62.90％;tnpA和tnpU检出率分别为11.29％和32.25％.结论 产碳青霉烯酶并非菌株耐碳青霉烯类药物的主要原因,可能由产ESBLs或AmpC酶引起,合并外膜蛋白缺失,尚存在其它降低碳青霉烯类敏感性的耐药机制.     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学和耐药基因分析

目的：探究徐州医学院附属医院临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征及耐药基因。方法收集并鉴定该院2013年2～12月临床分离非重复碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌株55株。肠杆菌基因间重复性共有序列（ERIC）‐聚合酶链反应（PCR）分析菌株的分子流行病学特征。药敏试验采用琼脂稀释法,改良 Hodge 方法检测碳青霉烯酶,亚胺培南＋乙二胺四乙酸双纸片协同法检测金属β‐内酰胺酶,PCR 方法检测细菌携带的耐药基因。结果 ERIC‐PCR 将55株肺炎克雷伯菌分为4型,以Ⅰ型为主,共41株。55株肺炎克雷伯菌对除多黏菌素和替加环素外的其他抗菌药物显示了较高的耐药性。改良 Hodge 试验阳性43株,金属酶检测试验结果均为阴性。 PCR 结果显示,K PC‐2型44株,CTX‐M‐9型27株,S HV 型22株, TEM 型23株,其中有25株同时携带3种或3种以上的耐药基因。结论该院分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对临床大多数常用抗菌药物显示较高水平的耐药性;其耐药机制主要是 K PC‐2碳青霉烯酶,CTX‐M‐9、S HV 和 TEM 型β‐内酰胺酶同时参与其多重耐药机制。     

铜绿假单胞菌外排泵及整合子与碳青霉烯类耐药中的关系

目的明确金属酶、整合子和外排泵在铜绿假单胞菌碳青霉烯类耐药中的作用。方法对42株泛耐药铜绿假单胞菌采用K-B法检测MIC值,双纸片扩散法测金属β-内酰胺酶(MBL),PCR扩增整合子并测序基因盒,real-time PCR检测oprM基因表达,western blot检测外膜蛋白。结果亚胺培南耐药率高达45.23%,美罗培南耐药率71.42%;检出有22株产MBL;Ⅰ类整合子检出率52.30%,携带dhfrⅫ-orfF-aadA2和aacA4-blaVIM-4两种类型的基因盒组合形式;oprM基因高表达细菌是低表达细菌的3.56倍;25株高表达MexAB-OprM外膜蛋白。结论金属酶、整合子均不是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药的主要原因,MexAB-OprM高表达致美罗培南耐药。各种耐药机制相互影响,并相互协同。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素膜蛋白机制研究

目的研究膜蛋白在鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素中的作用。方法采用琼脂纸片扩散法(K-B法)及琼脂稀释法从84株广泛耐药鲍曼不动杆菌中筛选出8株仅对多黏菌素敏感、1株全敏感临床株。采用PAβN外排泵抑制试验检测其外排泵表型。超声破碎法提取鲍曼不动杆菌外膜蛋白,双向电泳技术比较鲍曼不动杆菌耐药株及敏感株膜蛋白表达谱,差异蛋白进行胶内酶切,肽混合物进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上蛋白质数据库进行检索和质谱鉴定分析。结果 PAβN抑制试验显示受试8株菌中4株亚胺培南MIC值下降≤原值的1/4,而美罗培南MIC值下降至1/4及以下。耐药菌株和敏感菌株差异膜蛋白组学鉴定出(CarO、OmpA和推测分子量为41 ku外排泵膜蛋白。结论本次试验中膜孔蛋白CarO表达缺失可能参与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药,外排泵过度表达可能参与细菌对美罗培南的耐药。     

产酸克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素耐药机制的研究

目的分析产酸克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素的分子机制。方法收集福建医科大学附属协和医院2011年8月~2012年8月临床分离非重复耐碳青霉烯类抗生素的产酸克雷伯菌菌株5株,检测厄他培南(ETP)、亚胺培南(IPM)及美罗培南(MEM)的最低抑菌浓度(MIC)筛查菌株;采用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型鉴定、琼脂稀释法测其药敏;聚合酶链反应(PCR)扩增超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、碳青霉烯酶耐药基因;对检出碳青霉烯类基因的产酸克雷伯菌进行接合试验。结果 5株产酸克雷伯菌对17种抗菌药物中耐药率≥80%的有9种,分别为头孢西丁、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、厄他培南、亚胺培南、庆大霉素、头孢哌酮/舒巴坦、氨曲南。对替加环素、美罗培南、多黏菌素B和哌拉西林/他唑巴坦的耐药性较低。改良Hodge试验检出4例产碳青霉烯酶。2株携带碳青霉烯类耐药基因(1株仅IMP-4阳性,1株KPC-2和IMP-8同时阳性),3株检出β-内酰胺酶基因。结论福建医科大学附属协和医院产酸克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素耐药机制可能为携带IMP及KPC基因,并且发现了产酸克雷伯菌同时携带两种碳青霉烯类耐药基因的现象。     

耐碳青霉烯类药物大肠杆菌耐药机制的研究进展

近年来,碳青霉烯类抗生素的广泛应用导致耐碳青霉烯类抗生素大肠杆菌的出现且不断传播,其耐药性的产生导致疾病的治疗难度加大,甚至造成患者死亡。其耐药机制可能有以下几种:碳青霉烯酶的产生、外膜孔蛋白的缺失以及外排泵活动的增强。本文通过对耐碳青霉烯类药物大肠杆菌的感染现状及上述耐药机制的研究现状进行综述,以帮助医护人员对耐碳青霉烯类药物大肠杆菌有更加深入的了解。     

铜绿假单胞菌碳青霉烯耐药的机制研究

目的分析159株临床分离的非重复碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性,探究体外联合药敏试验对碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌表现不同作用的机制。方法收集来自不同患者的铜绿假单胞菌159株,亚胺培南及美罗培南耐药。采用三维水解试验检测β-内酰胺酶、聚合酶链式反应(PCR)等方法检测多重耐药菌可能存在的耐药机制。结果 159株临床分离的非重复碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌,通过三维实验检测,其中15株产MBL、13株产AmpC酶。体外联合药物敏感试验,加入MC-207,110后约38%的菌株对碳青霉烯类抗生素的MIC下降4个梯度。检测试验菌株,21株携带IMP基因,18株携带ampC基因;检测OprD2通道蛋白,159株中约有48%的菌株OprD2丢失。结论北京友谊医院碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因不是IMP、AmpC水解酶;碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要原因可能是外排泵及外膜孔道蛋白。     

耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌血流感染的基因分析

目的探讨血流感染中临床分离的耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌相关耐药基因及临床药物敏感性,为血流感染临床治疗和医院内感染控制提供依据。方法收集2016年1-12月南京医科大学第一附属医院血流感染分离的16株耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,采用改良碳青霉烯酶检测试验(改良Hodge试验)检测碳青霉烯酶表型,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因,采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)。结果 16株临床分离菌株中,12株为肺炎克雷伯菌,4株为大肠埃希菌。改良Hodge试验阳性率为87.50%(14/16)。全部菌株均携带肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC-2)基因。全部菌株对亚胺培南、美罗培南、氨曲南耐药率为100.00%,对多黏菌素,替加环素灵敏度为100.00%。结论本次分离的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的基因型均为KPC-2,对于耐碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌感染治疗可以应用替加环素和(或)多黏菌素联合其他药物联合治疗。临床医护人员应该加强耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的感染控制监测,控制其在院内传播。     

肠杆菌科细菌中质粒介导的KPC-2型碳青霉烯酶的检测

目的 研究重症监护病房(ICU)出现的碳青霉烯耐药的黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌等肠杆菌科细菌的分子流行病学及耐药机制.方法 2006年4月-2007年2月,从我院2个ICU病房分离到对碳青霉烯耐药或敏感性降低的21株黏质沙雷菌、10株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌.用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和肠杆菌基因间重复性一致序列-PCR(ERIC-PCR)分析这些菌株的分子流行病学.用接合试验、质粒消除试验、质粒图谱分析、等电聚焦电泳(IEF)、特异性PCR扩增和序列分析以及外膜蛋白分析等技术研究细菌对碳青霉烯耐药的分子机制.结果 21株黏质沙雷菌为同一克隆株;10株肺炎克雷伯菌亲缘关系相近.亚胺培南和美罗培南对黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的MIC为2～8μg/ml,肺炎克雷伯菌K10为128和256μg/ml.所有菌株接合试验均获得成功,亚胺培南和美罗培南对接合子的MIC由原来的≤0.125μg/ml上升到1～2μg/ml.IEF、PCR扩增和序列分析证实黏质沙雷菌产KPC-2型碳青霉烯酶[等电点(p1)为6.7]和pI为6.5的β内酰胺酶;肺炎克雷伯菌产TEM-1(pI5.4)、KPC-2、CTX-M-14(p17.9)和pI为7.3的β内酰胺酶;大肠埃希菌产KPC-2、CTX-M-15(pI 9.0)和pI为7.3的B内酰胺酶;所有接合子均只产KPc-2一种β内酰胺酶.所有接合子质粒DNA的EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ和Bcu Ⅰ限制性酶切图谱完全相同.外膜蛋白的十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺电泳和基因序列分析发现肺炎克雷伯菌KIO由于OmpK36基因中存在插入序列ISEcp1而导致OmpK36膜孔蛋白的缺失.结论我院ICU病房出现大量碳青霉烯耐药的黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌;KPC-2是引起这些细菌对碳青霉烯耐药或敏感性降低的主要原因;KPC-2合并膜孔蛋白缺失可导致肺炎克雷伯菌对碳青霉烯高水平耐药;同一种编码blaKPC-2的质粒在3种不同属的细菌之间传播.     

肺炎克雷伯菌介导碳青霉烯类耐药的基因型检测

目的对临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌进行耐药基因型分析。方法采用琼脂稀释法检测菌株最低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)、DNA测序、脉冲场琼脂糖凝胶电泳(PFGE)、等电点聚焦电泳(IEF)和质粒分子杂交等技术对实验菌株进行基因组DNA同源性、介导耐药的基因型、耐药酶pI和耐药基因携带状态等研究。结果12株肺炎克雷伯菌的亚胺培南和美罗培南M IC值分别为16~64μg/m l和8~256μg/m l;对其他被测的β-内酰胺类和喹诺酮类药物广泛耐药,氨基糖苷类耐药型不定。12株菌均扩增出编码碳青霉烯类抗生素耐药的blaKPC-2和编码β-内酰胺酶的blaSHV基因;部分菌株扩增出blaTEM或/和blaCTX-M基因。IEF和分子杂交揭示KPC-2的等电点为6.8,编码基因被携带在一个约56 kb大小的质粒上;PFGE结果显示12株细菌可分为2个克隆型。结论产KPC-2型碳青霉烯酶是本院肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的主要原因,垂直传播以及通过质粒传递耐药基因可能是其在本医院流行的主要方式。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶检测和基因分型

摘要：目的：探讨碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶情况和β-内酰胺酶基因分型研究。 方法：用Vitek-Ⅱ全自动微生物分析仪对本院临床标本中分离的对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌进行菌种鉴定和药物敏感试验;用冻融法提取β-内酰胺酶,三维试验检测β-内酰胺酶［AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、金属酶;改良Hodge试验检测KPC酶;用PCR扩增TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、DHA、MIR/ACT、KPC、IMP、VIM、SPM、GIM和NDM-1基因,并对阳性基因进行测序分析确定其基因型;REP-PCR检测分析其同源性。 结果: 4株对碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌均表现为多重耐药,其中2株菌对所有测试的抗菌药物均耐药;1株菌产金属酶,由IMP-4型金属酶基因编码;4株菌均产生DHA型AmpC酶,2株菌产CTX-M-14型ESBLs;1株菌产TEM-71型ESBLs,均经测序证实;未检测出SHV、PER、VEB、MIR/ACT、KPC、VIM、SPM、GIM和NDM-1基因型。REP-PCR显示4株菌属于3个不同的克隆型。 结论：本院出现碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌,属于不同克隆型,产多种β-内酰胺酶（AmpC酶、ESBLs、金属酶）,基因型为DHA、IMP-4、CTX-M-14、TEM-71。     

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌临床分离株的流行病学与耐药机制研究

目的了解耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌流行病学情况以及耐药机制,帮助临床合理使用抗菌药物,为控制医院感染提供依据。方法收集耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌110株及敏感株6株,进行来源病区和标本种类的统计分析;应用重复序列聚合酶链反应(REP-PCR)进行基因型分型;使用PCR检测β-内酰胺酶基因(OXA、IMP、VIM等)及外排泵编码基因(ade A、ade B、ade C、ade J、ade G)的携带情况;采用实时荧光定量PCR对比耐药菌株与敏感菌株的外排泵基因表达量的差异。结果 110株菌株主要来自痰标本,重症监护病房(ICU)分离率最高;所有菌株REP-PCR电泳图谱分为A~G 7型,110株耐药菌株均为A型,且均被检测到含有OXA-23、OXA-51基因,均未检测到含有OXA-24、OXA-58、IMP-1、IMP-2、VIM-1、VIM-2基因;外排泵编码基因ade A、ade B、ade C、ade J及ade G的阳性率均为100%;耐药菌株外排泵编码基因ade A、ade B、ade C表达量明显高于敏感菌株。结论耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的流行型别基本相同,均为A型,应引起临床医护人员的高度重视;β-内酰胺酶基因(OXA-23、OXA-51)的表达以及外排泵基因(ade A、ade B、ade C)的过度表达与其对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性有关。