聚合酶链反应单链构象多态性和银染技术筛查胰岛素受体基因突变

目的建立聚合酶链反应单链构象多态性（ＲＣＲＳＳＣＰ）和银染技术筛查胰岛素受体基因突变方法。方法选择８９例非胰岛素依赖型糖尿病患者,ＰＣＲ扩增编码胰岛素受体酪氨酸激酶域的外显子（外显子１７～２１）,进行ＳＳＣＰ电泳,银染色后,对突变样品进行序列分析。结果发现１１例外显子１７和１例外显子２０的异常电泳条带,外显子１７的突变经顺序分析,为ＣＡＣ１０５８→ＣＡＴ１０５８的杂合和纯合多态性突变。结论ＰＣＲＳＳＣＰ结合银染技术是一种操作简便、经济、灵敏度高、适合于临床大样本基因突变筛查的方法。     

银染单链构象多态性技术检测原发性肝癌p53基因的突变

目的建立银染单链构象多态性技术检测原发性肝癌ｐ５３基因突变。方法用银染及单链构象多态性（ＳＳ－ＳＳＣＰ）技术检测１６９例原发性肝癌的癌变及癌旁正常组织ｐ５３基因第７，８外显子（Ｅ７，Ｅ８）的突变，并进行ＤＮＡ测序，鉴定突变位点。结果４例患者ｐ５３基因Ｅ７中第２４９号密码子第３号碱基发生了Ｇ：Ｃ→Ｔ：Ａ的颠换（ＡＧＧ→ＡＧＴ），２例患者Ｅ８中第２７３号密码子第１号碱基发生了Ｃ：Ｇ→Ｔ：Ａ的转换（ＣＧＴ→ＴＧＴ），总的突变率达３８％（６／１６）；６例ｐ５３基因突变的癌变组织中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的整合率为５／６，８例未发生ｐ５３基因突变的癌变组织中ＨＢＶ的整合率仅为１／８，两者相比差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论ｐ５３基因突变是原发性肝癌发生发展过程中的常发事件，且与ＨＢＶ的慢性感染密切相关。进一步研究有利于探讨原发性肝癌的发病机制，并为基因治疗提供依据。     

１０ ３１３ 例新生儿听力与耳聋易感基因联合筛查结果分析

摘要：目的 对扬州地区 １０ ３１３ 例新生儿进行听力与耳聋易感基因联合筛查，探讨该地区常见耳聋基因突变位点分布及联合 筛查的意义。方法 对２０１８ 年３ 月至２０２０ 年１２ 月在扬州市妇幼保健院出生的１０ ３１３ 例新生儿进行听力与耳聋易感基因联 合筛查。听力筛查包括耳声发射和自动听性脑干反应；耳聋易感基因检测采用 ＰＣＲ 导流杂交法，检测 ４ 个常见耳聋易感基因 的 １３ 个位点，包括 ＧＪＢ２ 基因（ｃ． ３５ｄｅｌＧ，ｃ． １７６ｄｅｌ１６，ｃ． ２３５ｄｅｌＣ，ｃ． ２９９ｄｅｌＡＴ，ｃ． １５５ｄｅｌＴＣＴＧ），ＳＬＣ２６Ａ４ 基因（ｃ． ２１６８Ａ ＞ Ｇ， ｃ．９１９ ２Ａ＞Ｇ，ｃ．１２２９Ｃ＞Ｔ），ＧＪＢ３ 基因（ｃ．５３８Ｃ＞Ｔ），线粒体 １２ＳｒＲＮＡ（ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ，ｍ．１４９４Ｃ＞Ｔ）和线粒体 ｔＲＮＡ （ｍ．７４４５Ａ＞Ｇ， ｍ．１２２０１Ｔ＞Ｃ）。应用 Ｓａｎｇｅｒ 测序对单个位点基因筛查阳性的听力损失患儿进行验证。结果 １０ ３１３ 例新生儿中听力初筛通 过率为８７．２６％，复筛为 ８１．６１％，检出听力损失者 ３８ 例。共检出耳聋基因突变 ５７７ 例，携带率为 ５．５９％，ＧＪＢ２、ＳＬＣ２６Ａ４、ＧＪＢ３ 和 １２ＳｒＲＮＡ 基因的检出率分别为 ３． ０３％、１． ８９％、０． ２４％ 和 ０． ３２％。联合筛查发现耳聋易感基因突变组听力损失发生率 （２．７７％）明显高于阴性组（０．２３％）。结论 突变位点 ＧＪＢ２ ｃ．２３５ｄｅｌＣ 和 ＳＬＣ２６Ａ４ ｃ．９１９ ２Ａ＞Ｇ 是扬州地区新生儿耳聋易感基 因的主要突变类型。大规模开展听力与耳聋易感基因联合筛查提高了新生儿聋病或高危聋儿的检出率，有利于聋病的防治 和干预。     

对142例β地中海贫血基因携带者进行缺失型α地中海贫血1基因分析

目的了解广东地区常见的β地中海贫血（地贫）与α地贫１复合存在的发生率。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１４２例经筛查确定为轻型β地贫的成人血样ＤＮＡ进行α地贫１基因检测,阳性者又应用突变引物ＰＣＲ特异扩增或用等位基因特异寡核苷酸探针反向点杂交（ＡＳＯ／ＲＤＢ）技术,确定其β地贫基因突变类型。结果１４２例中有１３例轻型β地贫样本同时合并有α地贫１基因,占总数的９１５％,其β地贫基因的突变类型分别是：ＣＤ４１４２（－ＴＣＴＴ）突变５例,ＩＶＳ２６５４（Ｃ→Ｔ）突变３例,ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）突变２例,ＣＤ７１７２（＋Ａ）、ＣＤ４３（Ｇ→Ｔ）和－２８（Ａ→Ｇ）突变各１例。结论β地贫复合α地贫１的双重杂合子在轻型β地贫个体中的发生率较高,是该地区在地贫的遗传咨询和产前诊断工作中值得重视的一个问题。     

突变型p53在胃癌中的表达及临床意义

目的 研究突变型ｐ５３基因在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法 分别应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及原位分子杂交技术,检测４１例胃癌组织和２６例癌旁非病变粘膜ｐ５３基因点突变及ｍＲＮＡ过表达情况。结果 人胃癌组织存在ｐ５３基因突变和ｍＲＮＡ过表达率明显高于癌旁非病变粘膜（Ｐ〈０．０５）。肿瘤组织分化越差,ｐ５３突变率越高,ｍＲＮＡ过表达的分布越广泛（Ｐ〈０．０５）。发生ｐ５３基因突变的胃癌病人较未发生者更易发生淋巴结转移（Ｐ〈０．０５）。结论 胃癌的发生、发展与ｐ５３基因突变有关,检测胃癌组织中ｐ５３突变情况可为胃癌的诊断、分期及预后评估提供可靠依据。     

原发性甲状腺机能减退症与心包积液的关系

本文通过对５１例原发性甲状腺机能减退症中１６例并发心包积液病例与３５例无心包积液病例的比较，发现并发心包积液组Ｔ３、Ｔ４明显低于无心包积液组（ｐ＜０．００５），ＴＳＨ、ＴＣ及ＴＧ明显低于无心包积液组（ｐ＜０．０５），经替代治疗后甲状腺功能恢复正常的时间无心包积液组明显短于心包积液组（ｐ＜０．００１）。     

老年慢性肾功能衰竭血清甲状腺激素检测的临床意义

目的：研究老年人慢性肾功能衰竭时甲状腺激素的变化及其临床意义。方法：应用放射免疫法（ＲＩＡ）检测４７例老年人ＣＲＦ患者,２１例肾功能正常的肾脏疾病患者和２４例正常老年人Ｔ３,Ｔ４,ＦＴ３,ＦＴ４,ＴＳＨ。结果;老年人ＣＲＦ患者血清Ｔ３,Ｔ４,ＦＴ４明显降低,并与Ｓｃｒ呈显著负相关。结论：老年ＣＲＦ病例存在继发性甲状腺功能减退症,甲状腺激素可作为判断肾功能受损程度的参考指标。     

两种常见葡萄糖－6－磷酸脱氢酶基因突变检测及临床分析

通过扩增葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因第１０，１１，１２，１３外显子６３９ｂｐＤＮＡ片段结合寡核苷酸探针斑点杂交技术，在４０例广西籍Ｃ６ＰＤ缺陷者中检测中国人常见Ｇ６ＰＤ突变ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）和ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）。结果检出ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）男性半合子１２例，ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）男性半合子１０例，ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）女性纯合子１例，ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）和ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）女性双重杂合子１例。ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）突变的频率为３１．０％，ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）突变的频率为３１．０％。ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）和ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）两种突变均可导致新生儿高胆红素血症、急性溶血、遗传性非球形细胞性溶血性贫血、无症状基因突变携带者等临床表现。     

结直肠癌p53基因点突变和蛋白表达的研究

目的了解中国人结直肠癌ｐ５３基因的突变谱，探讨聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术用于研究结直肠癌中ｐ５３基因突变的可行性。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测４１例结直肠癌ｐ５３基因突变，以ＡＢＣ免疫组织化学染色检测结直肠癌Ｐ５３蛋白的表达。结果３４％（１４／４１）的病例显示有ｐ５３基因突变，其中外显子５，６，７和８各有４，１，５和４例突变。２０例有Ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为４９％。结论导致Ｐ５３蛋白异常堆积的ｐ５３基因突变是结直肠癌的一种常见的分子结构改变，可能在结直肠癌的发生和发展中起着重要的作用。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法     

一种新的NADH-细胞色素b5还原酶基因点突变

目的　为了查明中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ） 患者的ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５ 还原酶（ｂ５Ｒ） 基因突变类型,探讨ＲＣＭ 发生的分子机制。方法　从已报道的１ 例ＲＣＭⅠ型患者的外周血白细胞中提取ＲＮＡ,应用逆转录聚合酶链反应法（ＲＴＰＣＲ） 扩增了ｂ５ＲｃＤＮＡ（９２１ ｂｐ）,测定其ｂ５ＲｃＤＮＡ的全部编码序列。结果　ｂ５ＲｃＤＮＡ基因的第２０３ 位密码子存在（ＴＧＣ→ＴＡＣ）Ｃｙｓ→Ｔｙｒ 的错义突变。经基因组ＰＣＲ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ） 分析证实该突变并非ＰＣＲ过程中的错配。结论　Ｃｙｓ２０３ →Ｔｙｒ 是ＲＣＭ 的一种新的基因突变类型     

一例凝血因子Ⅷ B区错义突变导致重型血友病A

目的：检测一例重型血友病Ａ患者（ＳＨ９）的基因突变。方法：用ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和ＤＮＡ测序检测因子Ⅷ基因突变。先用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ排除内含子２２倒位，然后应用ＰＣＲ对凝血因子Ⅷ基因进行扩增。扩增范围包括所有外显子及其侧翼内含子序列。结果：片段１４２在ＤＧＧＥ中泳动异常。ＤＮＡ测序证实Ｃ２５３５Ａ导致Ｂ区错义突变８２６Ａｓｐ（ＧＡＣ）→Ｇｌｕ（ＧＡＡ）。结论：该突变可能是导致重型血友病Ａ的原因，但有待进一步研究证实。     

１ 例非肌性肌球蛋白重链 ９ 基因相关疾病家系并文献 复习

目的 鉴定 １ 例非肌性肌球蛋白重链 ９（ＭＹＨ９）基因相关疾病家系的致病突变。 方法 调查收集先证者和家系成员病 史资料，观察其临床特征和实验室检查指标。 采用芯片捕获高通量测序方法检测先证者 ＭＹＨ９ 基因，确定突变位点后，对先证 者和家系成员进行 Ｓａｎｇｅｒ 验证。 结果 该家系三代 ４ 名患者均有鼻衄、瘀斑紫癜、外伤血肿或月经量增多病史，长期存在镜 下血尿和蛋白尿。 血涂片镜检均有血小板减少、巨大血小板和粒细胞异常包涵体“三联征”。 所有患者 ＭＹＨ９ 基因第 ４０ 内含 子供体剪接位点存在错义突变 ｃ．５７６５＋２Ｔ＞Ａ（ｐ．Ｒ１９２２Ｒｆｓ? ４３），且该基因突变与疾病表型共分离。 结论 该家系存在 ＭＹＨ９ 基因 ｃ．５７６５＋２Ｔ＞Ａ（ｐ．Ｒ１９２２Ｒｆｓ? ４３）剪接突变，是 ＭＹＨ９ 基因相关疾病的致病突变，为国内首次报道。     

广西瑶族与汉族葡萄糖—6—磷酸脱氢酶基因三种常见突变型？…

目的 研究广西瑶族葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因突变特点，并与汉族作比较。方法 用突变特异性扩增系统（ＡＲＭＳ）法对广西瑶族３４例和汉族３７例Ｇ６ＰＤ缺乏进行中国常见的三种Ｇ６ＰＤ基因突变型筛查。结果 广西３４例瑶族Ｇ６ＰＤ缺乏的基因型分别为Ｇ１３７６Ｔ １４例（４１．２％），Ｇ１３８８Ａ９例（２６．５％），Ａ９５Ｇ５例（１４．７％），Ｃ１３１１Ｔ１例（２．９％）。     

MOTSA 和MTC MRA 对脑动静脉畸形的诊断价值

目的 分析脑ＡＶＭ的３Ｄ－ＴＯＦ ＭＲＡ结合ＭＯＴＳＡ（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｔｈｉｎ ｓｌａｂ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ）和ＭＴＣ（ｍａｇｎｅｔｉｚａｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｃｏｎｔｒａｓｔ）的表现。探讨其诊断价值。方法 使用ＧＥｓｉｇｎａ ｅｃｈｏ ｓｐｅｅｄ １．５Ｔ超导ＭＲ机对１２０例ＡＶＭ患者分别行ＳＥ序列ＭＲＩ,３Ｄ－ＴＯＦＭＲＡ结合ＭＯＴＳＡ和ＭＴＣ检查。结果     

以急性髓性白血病为终结的严重型先天性中性粒细胞减少症：疾病发展与粒细？

严重型先天性中性粒细胞减少（ＳＣＮ）是一种异质性疾病，家族史不一，有向骨髓增生异常综合症（ＭＤＳ）和急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）发展的倾向，在部分病人发现了Ｇ－ＣＳＦ－Ｒ基因突变点，这些无意突变导致了Ｇ－ＣＳＦ诱导成熟关键部位Ｃ末端胞浆部分的中断，Ｇ－ＣＳＦ－Ｒ基因突变的ＳＣＮ病更容易转变成ＡＭＬ，在此，简述Ｇ－ＣＳＦ－Ｒ缺陷是怎样导致中性粒细胞减少和白血病的。     

β地中海贫血[-28(A→G)·CD17(A→T)/N]双重突变杂合子的基因鉴定及家系分析

目的：报道β地中海贫血（β地贫）［－２８（Ａ→Ｇ）·ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）／Ｎ］双重突变杂合子的基因鉴定及家系分析结果。方法：采用聚合酶链反应结合等位基因特异的寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ／ＡＳＯ）技术。结果：对４例先证者及其家系成员计３５人进行基因鉴定，共检出２２人同时携带有β地贫－２８（Ａ→Ｇ）和ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）的突变基因，结合临床体征、血液及生化指标、家系调查资料综合分析，确定他们是β地贫［－２８（Ａ→Ｇ）·ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）／Ｎ］双重突变杂合子，为同一条染色体上基因的双重点突变。结论：［－２８（Ａ→Ｇ）·ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）／Ｎ］双重突变杂合子是一种新的β地贫类型，这种β地贫的发现，为认识我国地贫的高度异质性积累了资料。     

用多种特异性基因标志跟踪检测儿童微量残留白血病的研究

用多聚酶链反应技术，以Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ、ＴＣＲδ、ＩｇＨ基因的Ｖ－（Ｄ）－Ｊ结合部Ｎ顺序三种克隆特异基因标志；ＳＩＬ－ＴＡＬ－１、ＨＲＸ基因相关的融合基因和ｂｃｒ／ａｂ１融合基因作为肿瘤特异标志，对２３例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患儿完全缓解后的微量残留病（ＭＲＤ）作系统的跟踪检测。结果表明，所有小儿ＡＬＬ缓解后均存在ＭＲＤ。６个月内复查的１２例ＡＬＬ中６例（５０％）在缓解６个月内ＭＲＤ测定阴性，１８例（７８．３％）在１２个月内、１９例（８２．６％）在２４个月内ＭＲＤ测定阴性。若持续ＭＲＤ检测阳性或由阴性转阳性则提示将发生骨髓复发。检测的灵敏度是１０－２～１０－６。提示白血病ＭＲＤ的跟踪检测有重要的临床意义。     

应用多重等位基因特异性PCR技术对β地中海贫血进行产前诊断

为研究β地中海贫血（β地贫）产前诊断的新途径，应用多重等位基因特异性多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０例有重型β地贫风险的胎儿进行了产前诊断。将相应于－２８Ａ→Ｇ，ＣＤ１７→０，ＣＤ４１－４２（－４ｂｐ），ＣＤ７１－７２（＋Ａ）和ＩＶＳ－Ⅱ－６５４Ｃ→Ｔ等中国人最常见的五种β地贫突变类型的五组扩增引物组合成一个ＰＣＲ体系，以羊水细胞以及父母的ＤＮＡ为模板进行多重等位基因特异性扩增，结果显示：４例胎儿为２种不同突变类型复合杂合子，２例胎儿为一种突变类型的纯合子，３例胎儿为一种突变类型的杂合子，还有１例为正常胎儿。所有产前诊断的结果均与ＰＣＲ／等位基因特异性寡核苷酸探针点杂交或ＤＮＡ测序结果一致。该方法为β地贫的产前诊断提供了一种简便、快速和可靠的新途径。     

经食管多普勒定量估测冠状动脉血管阻力及血管储备

应用经食管多普勒超声心动图（ＴＥＥ）对３０例冠状动脉造影患者测量注射潘生丁前后左前降支平均舒张期血流率（Ｖｃｏｒ）、冠脉血管阻力（Ｒｃｏｒ）和冠脉血管储备（ＣＶＲ）。静息状态正常组与狭窄各组平均动脉压（ＭＡＰ）、Ｖｃｏｒ和Ｒｃｏｒ无显著差异。注射潘生丁后狭窄各组较对照组的Ｒｃｏｒ显著增加、Ｖｃｏｒ和ＣＶＲ显著降低而ＭＡＰ基本不变；ＰＤＳ＜７５％与≥７５％组的注药后Ｒｃｏｒ和ＣＶＲ无显著差异，血管狭窄积分（ＡＳＩ）＜１．５ｃｍ与≥１．５ｃｍ组两指标差异显著。注药后的Ｒｃｏｒ与ＡＳＩ成正相关（ｒ＝０．６３，Ｐ＜０．０１），与ＰＤＳ不相关；ＣＶＲ与ＡＳＩ和ＰＤＳ成较好的负相关（ｒ＝－０．８２，－０．５２）。本研究为冠状动脉病变功能严重度的定量估价提供了参考依据。     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。