小儿慢性迁延性腹泻与食物不耐受的相关性分析

目的通过检测并对比慢性迁延性腹泻病患儿与健康体检儿童血清中食物特异性IgG抗体的水平,分析小儿慢性迁延性腹泻病的发生与食物不耐受是否具有相关性。方法随机抽取深圳市儿童医院2015年1-12月临床诊断为慢性迁延性腹泻病的患儿105例,并选取健康体检儿童94例作为对照组,采用酶联免疫法检测受检者血清中14种食物过敏原特异性IgG抗体的浓度水平。结果慢性迁延性腹泻病多见于0~1岁的小婴儿,105例慢性迁延性腹泻病患儿的14种食物特异性IgG抗体阳性率水平从高到低依次排列为:牛奶、鸡蛋、西红柿、大米、小麦、鳕鱼、玉米、牛肉、大豆、鸡肉、猪肉、蘑菇、虾和蟹;94例健康体检儿童的14种食物特异性IgG抗体阳性率水平从高到低依次排列为:牛奶、鸡蛋、西红柿、大米、小麦、大豆、鳕鱼、玉米、牛肉、蟹、鸡肉、蘑菇、虾和猪肉;其中牛奶、牛肉和大豆的食物特异性IgG在两组间的比较中具有统计学意义(P0.05)。结论食物不耐受有可能是婴幼儿发生慢性迁延性腹泻病的重要病因之一,可以通过合理调整小儿饮食治疗小儿慢性迁延性腹泻病。     

儿童急性单核细胞白血病骨髓自然缓解1 例报告并文献复习

目的探讨急性髓系白血病自然缓解的诱因和可能的发生机制。方法回顾分析1例急性单核细胞白血病发生自然缓解患儿的临床资料,并结合相关文献探讨自然缓解的可能机制。结果 1岁4月龄男性患儿,确诊为急性髓系单核细胞白血病,未经化疗后发生骨髓自然缓解,约1年后出现髓系肉瘤复发,予行HLA半相合造血干细胞移植术,目前预后良好。回顾既往文献发生自然缓解患者大部分缓解之前有发热史,通常由感染导致,也可由药物撤除或输血导致。结论髓系白血病发生自然缓解很少见,未来或许可以通过免疫疗法达到治疗白血病的目的。     

多色流式细胞术检测人外周血BCG特异性效应型记忆γδT细胞的表型特征

目的检测卡介苗(BCG)刺激后,PPD+正常人外周血中分泌IFN-γ的TCRγδ亚群及其表型特征。方法分离PPD+正常人外周血单个核细胞(PBMCs),用多色流式细胞术检测TCRγδ亚群;BCG刺激PBMCs后检测γδT细胞IFN-γ分泌水平,并分析BCG特异性γδT细胞表型特征。结果依据PBMCs中TCRγδ和δ2的表达,可将γδT细胞分为3个亚群,即δ2high、δ2low和TCRγδ中非δ2T细胞(non-δ2-γδT)细胞。其中,δ2high和δ2lowT细胞几乎全部(>98%)为CD45RO+,而non-δ2-γδT细胞中只有少部分表达CD45RO,其余大部分不表达CD45RO。δ2high和δ2lowT细胞表型类似,主要为CD45RO+CD62L-CD27-,而non-δ2CD45RO+细胞主要为CD62L-CD27+,non-δ2CD45RO-细胞几乎全部为CD62L-CD27-。BCG刺激PBMCs后,可诱导γδT细胞分泌IFN-γ,且主要为δ2high和δ2low细胞,而non-δ2-γδT几乎不产生IFN-γ。进一步分析BCG特异性γδT细胞的表型特征,结果表明,δ2high-CD45RO+IFN-γ+和δ2lowCD45RO+IFN-γ+细胞主要为CD62L-CD27-和CD62L-CD27+,为效应型记忆细胞。结论 BCG刺激PPD+正常人外周血PBMCs后,主要诱导δ2T细胞分泌IFN-γ,且该细胞表现出CD45RO+CD62L-效应型记忆细胞特征,可能在预防结核早期感染中发挥重要作用。     

TLR7/8配体(R848)对人NK细胞杀伤功能的作用及其机制的探讨

目的研究R848对人自然杀伤细胞(NK)杀伤功能的作用及其机制。方法分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)、纯化NK细胞,加或不加R848进行培养。分别在0、2、6、24、48h收集培养细胞,流式细胞术检测R848对NK细胞表面活化分子CD25和CD69表达的影响;检测R848活化的NK细胞杀伤靶细胞K562的作用、通过检测颗粒酶A、B、穿孔素、TRAIL和NK细胞与靶细胞共孵育后CD107a/b的表达,探讨R848促进NK细胞的杀伤功能机制。结果 R848活化的NK细胞在培养24h时CD69和CD25分子的表达百分率和平均荧光密度达到峰值,随后活化分子的表达有所下降;R848活化的NK细胞对靶细胞的杀伤功能明显增强,TRAIL在不同NK细胞亚群的表达显著增加(P0.05)。当NK细胞与K562共孵育后,R848活化的NK细胞表面CD107a/b的表达较未刺激条件明显增加。结论 R848可直接作用于NK细胞促进其杀伤功能,其作用机制与NK细胞活化后释放颗粒酶和穿孔素增加,并且TRAIL的表达增加有关。     

人外周血CD3~+CD56~+NKT与Vα24~+iNKT、Vβ11~+iNKT细胞的关系及NKT亚群和细胞因子分泌的研究

目的探讨正常人外周血中CD3+CD56+NKT细胞的频率与CD3+Vα24+iNKT、CD3+Vβ11+iNKT细胞之间的关系、表型特征及细胞因子的表达。方法应用流式细胞术,检测CD3+CD56+NKT细胞频率与CD3+Vα24+iNKT和CD3+Vβ11+iNKT细胞之间的关系、CD4及CD8表面分子及细胞因子的表达。结果正常人外周血CD3+CD56+NKT细胞的频率为6.39%±2.34%;只有1.5%CD3+CD56+NKT细胞表达TCRVα24和1.2%CD3+CD56+NKT细胞表达TCRVβ11,0.7%CD3+CD56+NKT细胞同时表达TCRVα24和TCRVβ11;根据CD4和CD8表面分子的表达,可将CD3+CD56+NKT细胞分为66.9%CD4+、20.4%CD8+和11.6%CD4-CD8-3个亚群;当细胞刺激后,50.2%CD3+CD56+NKT细胞分泌IFN-γ,3.3%分泌IL-4,1.5%同时分泌IFN-γ和IL-4。此外,CD4+NKT、CD8+NKT和CD4-CD8-NKT 3群细胞分泌IFN-γ的频率分别为45.1%、70.3%和55.4%,分泌IL-4的频率为6.5%、7.0%和6.9%,同时分泌IFN-γ和IL-4的频率为2.4%、4.7%和3.1%。结论大多数CD3+CD56+NKT细胞与CD3+TCRVα24+iNKT和CD3+TCRVβ11+iNKT细胞是不同的NKT细胞亚群,CD3+CD56+NKT细胞频率小,能分泌大量的细胞因子,参与机体的免疫反应。     

人肠道正常粘膜组织与外周血中记忆性IL-22~+T淋巴细胞频率及表型的比较

目的比较人肠道正常粘膜组织与外周血中IL-22+T淋巴细胞的频率及其表型特征。方法分离人肠道正常粘膜与外周血中单个核细胞,anti-CD3+anti-CD28刺激后,采用流式细胞术(FACS)检测IL-22的产生及其与IFN-γ、IL-17的关系,分析IL-22+T淋巴细胞CD45RO,CD62L,CCR7,CCR6,CCR10,CCR4等表面分子的表达。结果与anti-CD3+anti-CD28刺激外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞产生少量的IL-22(0.6%;0.57%)相比,肠道粘膜CD4+T细胞产生大约3.15%的IL-22,CD8+T淋巴细胞产生4%左右的IL-22。此外,肠道粘膜CD4+和CD8+T细胞中存在一群产生IL-22并独立于Th1、Th17,Tc1、Tc17的细胞亚群。肠道粘膜IL-22+T细胞表达较高比例的CD45RO,其中部分细胞表达CCR7,而较少表达CD62L。进一步研究表明,肠道粘膜CD4+IL-22+和CD8+IL-22+T细胞表达较高水平的CCR10(55.3%;73.9%),部分细胞表达CCR6或CCR4。结论人肠道正常粘膜组织中IL-22主要由效应型或中央型记忆T细胞产生,部分IL-22+T细胞独立于Th1、Th17,Tc1、Tc17细胞亚群。     

腺病毒与呼吸道合胞病毒肺炎患儿外周血淋巴细胞亚群差异分析

目的比较腺病毒(adeno virus,ADV)与呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)肺炎患儿及健康儿童外周血淋巴细胞亚群的百分比例并探讨其临床意义。方法收集2014年1月~2015年12月期间在深圳市儿童医院住院的腺病毒肺炎患儿(ADV组)30例,呼吸道合胞病毒肺炎患儿(RSV组)30例(入选依据:60例病毒感染患儿肺部听诊均可闻及中小湿啰音,肺部X线片有点状或片状阴影,临床诊断为肺炎,直接免疫荧光法检测相关病毒抗原结果为阳性且无其他病原感染的临床及实验室证据)以及健康体检儿童(健康组)35例,应用流式细胞术检测上述研究对象外周血中CD3~+T细胞,CD3~+CD4~+T细胞,CD3~+CD8~+T细胞,CD3~-CD56~+NK细胞及CD3~-CD19~+B细胞的百分比并比较各组间的差异。结果与健康组相比较,ADV组[(55.04±8.45)%vs(69.07±9.30)%,t=3.32,P=0.002]与RSV组[(60.90±11.12)%vs(69.07±9.30)%,t=2.43,P=0.004]的CD3~+T细胞比例均下降,差异具有统计学意义(P0.01),特别是ADV组[(21.26±6.16)%vs(26.97±7.63)%,t=1.87,P=0.04]与RSV组[(21.56±7.06)%vs(26.97±7.63)%,t=1.68,P=0.04]的CD3~+CD8~+T细胞比例明显下降,差异具有统计学意义(P0.05);与此同时,与健康组相比,ADV组[(28.22±5.16)%vs(17.06±6.42)%,t=3.25,P=0.001]和RSV组[(29.14±10.96)%vs(17.06±6.42)%,t=2.79,P=0.009]的CD3~-CD9~+B细胞比例升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与健康组[(13.54±5.95)%,t=2.01,P=0.03]及ADV组[(16.26±8.34)%,t=2.89,P=0.005]相比,RSV组的CD3~-CD56~+NK细胞亚群比例[(9.59±5.54)%]下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论腺病毒肺炎和呼吸道合胞病毒肺炎患儿外周血淋巴细胞亚群比例存在统计学差异,病毒性肺炎患儿体内可能存在免疫应答紊乱。     

八色流式细胞术检测人外周血BCG特异性效应型记忆CD4+T细胞的表型特征

目的:检测BCG刺激后,PPD+正常人外周血中细胞因子产生及其亚群.方法:分离PPD+正常人外周血单个核细胞(PBMC),BCG刺激后检测CD4+和CD8+T细胞细胞因子分泌,并用八色流式细胞术分析BCG特异性T细胞亚群.结果:BCG刺激PBMC后,主要是CD4+T细胞分泌Th1细胞因子(IFN-γ、IL-2和TNF-α),而CD8+T细胞几乎不产生细胞因子.进一步分析分泌细胞因子的细胞亚群,主要是CD4+CD45RO+ CD62L(-)CD27(-)和CD4+ CD45RO+ CD62L(-)CD27+分泌细胞因子.结论:BCG刺激PPD+正常人外周血PBMC后,主要诱导CD4+T细胞分泌细胞因子,且该细胞表现出CD4+CD45RO+ CD62L(-)效应型记忆细胞特征,可能在预防结核感染中发挥重要作用.     

IL-12依赖于TRAIL途径增强NK细胞对Jurkat细胞的杀伤功能

目的:探讨IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的相关机制。方法:纯化正常人NK细胞,分为加或不加IL-12两个刺激组,通过基因芯片筛选差异基因,并通过流式细胞术在单个细胞水平检测相关杀伤分子的表达。结果:基因芯片系统结果显示IL-12刺激组和未刺激组相比,17种基因具有显著性差异(fold change≥10),其中5种基因上调,12种基因下调。在IL-12的刺激作用下,TRAIL的表达在CD56+CD16+和CD56-CD16+NK细胞上显著增加。同时,Jurkat细胞亦高表达TRAIL受体TRAIL-R2(DR5)。TRAIL中和抗体RIK-2可以阻断IL-12诱导的NK细胞对Jurkat细胞的杀伤功能。结论:TRAIL是IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的主要途径之一。