卵巢癌细胞促进外周血CD4+T细胞糖酵解代谢

目的探讨卵巢癌细胞对外周血CD4~+ T细胞糖酵解代谢及功能的影响。方法建立健康人CD4~+ T细胞与卵巢癌细胞SKOV3共培养体系,用实时荧光定量PCR检测共培养后CD4~+ T细胞糖酵解相关8个基因(mTORC1,HIF1α,GLUT1,GPI,ENO1,PKM2,LDHα,PDK1)的mRNA表达水平,比色法检测葡萄糖摄取和葡萄糖酵解水平,流式细胞术检测CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T细胞的表达比例,渗入法检测CD4~+ T细胞的增殖水平。实时荧光定量PCR检测10例卵巢癌患者、10例卵巢良性肿瘤患者及10例健康人对照者外周血CD4~+ T细胞糖酵解相关8个基因的表达水平。结果与CD4~+ T细胞单独培养组相比,SKOV3共培养组CD4~+ T细胞中糖酵解相关8个基因的表达水平均升高(P均0.01),葡萄糖摄取及葡萄糖酵解水平增高(P0.05),CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T细胞的表达比例上升(P0.05),CD4~+ T细胞增殖水平下降(P0.05)。此外,卵巢癌患者外周血CD4~+ T细胞中糖酵解相关的8个基因的mRNA表达水平显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康人对照者(P均0.05)。结论卵巢癌细胞促进外周血CD4~+ T细胞糖酵解代谢水平增高,CD4~+ T细胞糖酵解代谢的改变可能与其分化和功能相关。     

小鼠调节性T细胞的CD4+ CD25+ CD127low/-标记分析

新的特异性细胞表面标记的发现是提高调节性T细胞(Treg)测量和分选技术的重要环节,Foxp3是公认的天然Treg的标记,却不能作为分选细胞的标记,CD127是新发现低表达于Treg细胞表面的标记。本实验测定CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25+Foxp3+标记的小鼠外周血及脾脏Treg细胞的数量,并测定CD4+CD25+CD127low/-细胞内Foxp3转录因子的表达水平,分析CD4+CD25+CD127low/-标记在小鼠Treg细胞测定及分选的价值。收集BALB/c小鼠外周血及制备脾细胞悬液,分别三重荧光染色CD4、CD25、CD127及CD4、CD25、Foxp3后应用流式细胞仪检测,得出CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+这两种标记的小鼠外周血和脾脏Treg细胞的比例;再在CD4、CD25、Foxp3基础上加CD127染色(四重荧光染色),检测CD4+CD25+CD127low/-细胞Foxp3转录因子的表达情况。结果显示:①BALB/c小鼠外周血CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+TCD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为39.02%、5.35%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为7.13%、3.97%;②BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+T、CD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为23.49%、3.86%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为12.8%、8.23%;③BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞比例高于CD4+CD25+Foxp3+细胞,以脾脏更为明显(P<0.01);④小鼠外周血及脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞高表达Foxp3转录因子,CD4+CD25+Foxp3+细胞低表达CD127。结论:BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-较CD4+CD25+Foxp3+能定量更多的Treg细胞;CD127low/-作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,在细胞分选时受其他细胞的干扰最小,是定量和纯化小鼠Treg细胞的更好标记选择。     

胃癌患者外周血中调节性T细胞和CTLA-4的表达及临床意义

目的 研究胃癌患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)和共刺激分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4,CD152)的表达水平,并探讨细胞频数的变化与肿瘤临床分期的相关性,从而探讨在胃癌肿瘤免疫过程中Treg细胞对免疫效应细胞的调节作用,共刺激通路是否异常及其在胃癌的发病机制中的作用.方法 用流式细胞仪检测49例胃癌患者外周血淋巴细胞表面的CD152及CD4+ CD25+调节性T细胞的表达,并与健康对照组及胃良性肿瘤组作比较.结果 胃癌患者外周血中CD4+ CD25+和CD3+CD152+水平显著增高,高于健康对照组及良性肿瘤组;胃癌临床分期越晚CD4+CD25+和CD3+ CD152+水平越高,在临床Ⅰ、Ⅱ期患者与临床Ⅲ、Ⅳ期患者之间存在显著差异,统计学有显著差异.结论 胃癌患者外周血淋巴细胞高表达CTLA-4分子,Treg细胞的数量较正常人明显增高,影响了T细胞彻底清除肿瘤细胞,从而使肿瘤逃避机体的免疫监视、与胃癌的发病有关.     

脓毒症患儿CD4+CD25+调节性T细胞的变化

目的 观察不同免疫状态下脓毒症婴幼儿外周血CD4+CD25+Foxp3high调节性T细胞(Treg细胞)及相关分子的变化,探讨婴幼儿脓毒症免疫功能紊乱的可能机制.方法 分别收集2007年5月至2007年11月深圳市儿童医院重症监护室收治的婴幼儿脓毒症36例血液标本,另选16例健康同龄儿童作为正常对照进行前瞻性研究;排除既往患有自身免疫性疾病、免疫缺陷病、遗传代谢病及肿瘤的患儿,排除近6个月曾使用影响免疫功能的药物.本研究获得深圳市儿童医院伦理委员会的同意.以外周血CD14+单核细胞HLA-DR表达>30%或<30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组),用流式细胞术检测CD14+单核细胞HLA-DR表达率,CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞比例;实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测CD4+T细胞Foxp3、CTLA-4、GITR、IL-10mRNA表达.统计方法采用单因素方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 急性期DR-L组CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞比例明显高于对照组及DR-H组(P<0.05).DR-L组Foxp3、CTLA-4、IL-10等相关分子基因表达高于对照组及DR-H组(P<0.05),DR-L组GITR基因表达高于DR-H组.结论 CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞数量异常增加可能与婴幼儿脓毒症免疫抑制状态有关.     

调节性T细胞在胃癌周围组织及癌组织中的表达意义

目的探讨调节性T细胞在胃癌周围组织及癌组织中的表达意义。方法选取30例胃癌患者及30例健康体检者(对照组)为研究对象,胃癌患者均经手术病理及胃镜检查确诊。采用流式细胞仪检测两组外周血组织中的CD4+CD25+Foxp3+的表达。同时留取胃癌患者癌组织和癌旁组织,对Foxp3细胞的表达情况进行免疫组化检查,并将其与胃癌的临床分期、分化程度、肿瘤部位等相关性进行分析。结果胃癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+的百分比高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中的Foxp3+T细胞表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中的Foxp3+T细胞表达水平与临床分期、淋巴结转移、分化程度因素相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+及胃癌组织中的Foxp3+显著增加,在胃癌的预测和诊断中有一定的临床检测意义。     

CD127用于特异性识别调节性T淋巴细胞的方法建立及临床应用评价

目的 建立用膜表面标志CD4+ CD25high CD-/low127界定调节性T淋巴细胞的方法,并评价其临床应用意义.方法 五色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD127-PE/CD4-PerCP/CD25-APC/CD3-PC7抗体组合鉴定调节性T淋巴细胞,分选CD4+CD25highCD-/low127细胞鉴定Foxp3 mRNA和蛋白水平的表达情况,比较CD-/low127与Foxp3+界定调节性T淋巴细胞的相关性.用该膜表面标志分析20名健康对照者外周血及35例胃癌患者不同部位CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)细胞的分布特点及意义.结果 用CD4+CD25highCD-/low127界定调节性T淋巴细胞的Foxp3蛋白表达率为87.1%,Foxp3 mRNA高表达.用膜表面抗原CD4+CD25highCD-/low127界定调节性T淋巴细胞与CD4+CD25highFoxp3+具有相关性(r=0.985,P＜0.01).胃癌患者外周血CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为(8.67 ±3.52)%,高于健康对照组[(5.12±2.46)%,t=2.542,P＜0.05].胃癌患者腹腔积液、肿瘤浸润性淋巴细胞、癌旁淋巴结中CD4+CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血(分别为t=2.357,P＜0.05;t=6.174,P＜0.01;t=5.481,P＜0.01).胃癌Ⅰ期+Ⅱ期患者外周血CD25high CD-/low127Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为(6.04±2.31)%,Ⅲ期+Ⅳ期患者为(10.16±2.29)%,其分期差异具有显著统计学意义(t=2.473,P＜0.05).结论 CD4+CD25highCD-/low127抗体组合可用于鉴定调节性T淋巴细胞.胃癌患者CD4+CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞的比例升高,且增高程度与肿瘤临床分期相关.     

CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞异常表达与多发性骨髓瘤的关联性分析

目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者和良性单克隆丙种球蛋白血症(MGUS)患者外周血及骨髓组织中CD4+CD25+CD127low/-调节性T(Treg)细胞表达水平,初探MM中调节性T细胞免疫功能状态以及与疾病发生、发展的关联性.方法 采用流式细胞术分别检测33例MM患者、44例MGUS患者和30例健康者外周血以及6例MM患者骨髓CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞水平.分别采用溴甲酚绿法、免疫散射比浊法检测MM患者血清清蛋白(Alb)、β2-微球蛋白(β2-MG)水平.结果 MM组外周血中CD4+CD25+CD127low/-细胞表达高于MGUS组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);MM中稳定期患者组外周血细胞水平较初诊患者组和复发、难治患者组升高,差异有统计学意义(P<0.05);但不同ISS分期的MM患者外周血细胞表达差异无统计学意义(P>0.05);而进展期MM患者中,CD4+CD25+CD127low/-T细胞表达在Ⅲ期高于Ⅰ期+Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05);进一步研究发现,同一初诊MM患者骨髓CD4+CD25+CD127low/-T细胞水平低于其外周血T细胞水平,差异有统计学意义(P<0.05).结论 外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞表达异常可辅助鉴别良、恶性单克隆丙种球蛋白血症;监测MM的进展以及疾病的活跃程度,并为进展期MM患者及时进行临床干预提供实验依据.     

慢性淋巴细胞白血病患者外周血Th17和Treg细胞比率的平衡关系研究

本研究通过检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中Th17和CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的比率及其平衡关系,探讨其在CLL发病机制中的作用及临床意义。CLL患者根据外周血淋巴细胞计数及治疗情况,分为初发组30例和治疗后缓解组15例,另设健康对照20例。用流式细胞术(FCM)检测CLL患者和健康对照者外周血中T细胞亚群及Th17和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的比率。结果显示,初发组CLL患者外周血CD3+CD4+T细胞和Th17细胞的比率均明显高于健康对照组(P<0.05),CD3+CD8+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率明显低于健康对照组(P<0.05),Th17/Treg细胞比值明显高于健康对照组(P<0.05);缓解组CLL患者Th17细胞比率与健康对照组相当,而CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率明显低于健康对照组(P<0.05),Th17/Treg细胞比值明显高于健康对照组(P<0.05);缓解组CLL患者Th17细胞比率显著低于初发组(P<0.05)。结论:CLL患者外周血T细胞紊乱以CD4+T细胞的增加为主,Th17细胞比率增加和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率降低导致Th17/Treg细胞比率失衡,该免疫失衡在CLL的发生发展中可能起重要作用。     

溃疡性结肠炎患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达

目的:探讨溃疡性结肠炎(ulcerative coitis,UC)患者外周血CD4+CD25+ Foxp3+T细胞的表达及意义.方法:采用流式细胞术检测UC患者22例及健康对照组20例外周血CD4+ CD25+ Foxp3+在T淋巴细胞的单独或联合表达比例.结果:UC患者外周血T淋巴细胞表达CD4+的比例为(34.76±5.40)%,与健康对照组的(33.23±11.38)%比较无差异(P>0.05);CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例为(8.27±1.46)%,显著低于健康对照组的(11.4±2.17)%(P<0.05);CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例为(0.87±0.25)%,显著低于健康对照组的(1.55±0.55)%(P<0.05).结论:UC患者CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+T细胞明显减少,可能打破了自身免疫耐受,发生了针对肠道抗原的自身免疫反应,参与了UC的发病.     

中西医结合治疗对免疫低下肺炎小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的建立免疫功能低下小鼠肺炎克雷伯菌肺炎的模型,观察中西医结合治疗对于此种肺炎的CD4+CD25+调节性T细胞表达的影响。方法采用腹腔注射环磷酰胺的方法建立免疫功能低下的小鼠模型,通过鼻腔滴种肺炎克雷伯菌液制作肺炎模型,用流氏细胞学技术检测各组小鼠给药前、给药后12 h,给药后24 h,给药后36 h小鼠外周血CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率和CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度。结果各组各时间点的小鼠外周血CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度较正常小鼠显著升高(P<0.05),CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率较正常小鼠明显降低(P<0.05)。给药后12 h,中西医治疗组小鼠外周血的CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度较模型组显著下降(P<0.05),CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率较对照组、单纯西药组及单纯中药组显著升高(P<0.05)。结论①应用环磷酰胺后,小鼠外周血CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度显著升高,CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率明显降低。②中西医结合治疗在免疫功能抑制小鼠肺炎感染模型中可能具有"双向调节免疫"功能的作用,即一方面维持CD4+T细胞Foxp3阳性表达率,提高机体抗感染能力,同时维持了机体免疫耐受的状态。③中西药结合治疗有改善免疫功能低下感染生存率的趋势。