食管癌血清蛋白质谱揩纹图分析及人工神经网络诊断模型研究

目的利用高通量和高灵敏的表面激光解析电离飞行时间质涪技术（SELDI—TOF—MS）寻找食管癌患者血清中微量的标志性差异蛋白质组,为探索食管癌发生与基因转录的蛋白调控机制,基因治疗以及早期诊断提供参考数据,方法用SELDI—TOF—MS检测食管癌及其相关人群的血清蛋白质谱指纹图,用Biomarkex Wizaid Software软件筛选出差异蛋白,选择具有标志性的差异蛋白质组建立人工神经网络诊断模型,使用SPSS分析其诊断效能。结果在食管癌患者血清中发现89个差异蛋白（P〈0．05）。其中有显著差异（P〈0.001）的蛋白质如下：在食管癌患者血清中表达增高的蛋白（5017．6Da,7458、5Da,7908,1Da,8111.9Da,8577,8Da）和表达降低的蛋白（4215.8Da,5890.9Da,7749.3Da）。利用筛选出8个有明显表达差并的蛋白质组建立食管癌人工神经网络筛查模型和诊断模型,其灵敏度达到93．2％和96.3％,特异度分别为95．6％和97．2％,经大样本盲法验证的灵敏度为75.4％和75.8％,特异度分别为84．8%和86．7％,经蛋白组数据库检索发现两种蛋白分别为血清淀粉样蛋白A和子宫球蛋白。结论血清蛋白质谱指纹图结合人工神经网络技术进行蛋白组学数据挖掘对食管癌的筛查和诊断以及探索其基因和蛋白调控机制具有重要的临床意义。     

蛋白芯片技术筛选肝癌血清标志蛋白的初步研究

目的应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI—TOF—MS)从肝癌患者血清中筛选标志蛋白，找出最佳的标志蛋白组合模式作为临床诊断指标。方法采用WCX2芯片及SELDI—TOF—MS技术对34例肝癌患者及34例健康对照组血清进行蛋白质指纹图谱检测分析，所得到的结果采用Biomarker Wizard和Biomarker Pattems System软件分析。结果发现肝癌患者和健康对照组血清蛋白质指纹图谱之间有17个稳定的标志蛋白，其中有6个标志蛋白在肝癌患者血清中高表达，11个标志蛋白在肝癌患者血清中低表达。分析系统筛选出13752Da及11472Da标志蛋白建立起一个肝癌的诊断模型，对肝癌的诊断特异性为97．06％，敏感度为91．18％，及阳性预测率为96．88％。结论SELDI-TOF—MS技术的特异性及敏感度远远高于目前所采用的某一单独的标志物的血清学诊断，其结果对进一步研究肝癌的蛋白质组学改变及其临床应用可能具有重要意义。     

检测子宫内膜异位症患者血清中差异表达蛋白的研究

目的：检测子宫内膜异位症（内异症）患者血清中差异表达的蛋白。方法：采用表面增强激光解吸／离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术，选用WCX2蛋白质芯片对50例内异症及48例对照组血清标本进行检测以筛选内异症血清中差异表达的蛋白。结果：在Mr 0～50000范围内，检测出106个蛋白峰。内异症患者血清中差异表达的蛋白峰有4个。将发现的差异蛋白峰在Swiss蛋白数据库中搜索，发现Mr 9280蛋白峰与玻璃粘连蛋白Vitronectin相符。Vitronectin属于整合素家族，在内异症的粘附、侵袭、血管形成过程中起重要作用。其他的蛋白峰没有发现与之相匹配的蛋白，提示可能为新的蛋白质。结论：内异症患者血清中存在差异表达的蛋白，其对内异症的早期诊断具有一定的临床意义。SELDI蛋白芯片技术是一种快速、简单易行、样本用量少、高通量、重复性好的分析方法，具有广阔的临床应用前景。     

利用血清中蛋白质组构型鉴定Dukes A期结直肠癌

目的目前对DukesA期结直肠诊断尚无灵敏度和特异性均较高的血清学诊断指标，本研究旨在通过对血清中蛋白质组的质谱分析来发现可用于DukesA期结直肠癌鉴定的蛋白质组构型。方法各随机取10例DukesA期结直肠癌患者的血清，68例DukesB、C、D期结直肠癌患者的血清做为预备组和检测组。预备组血清与金属亲和表面（Immobilzed Metal Affinity Capture，IMAC3）芯片结合后，用蛋白芯片仪读取数据，用CipherGen公司提供的BioMarker Wizard及BioMarker Pattern软件分析可得到用于区分DukesA期结直肠癌患者、DukesB、C、D期结直肠良性疾病患者的树状分类规则，并用双盲法测试检测组以证实其准确性。结果软件分析结果显示预备组中二类血清蛋白质在质荷比为8320Da，8604Da，8867Da，15872Da4处含量有显著差异，得到树状分类规则，其分类准确率为97．44％（76／78），灵敏度为100％（10／10），特异性为97．06％（66／68）：对检测组进行双盲检测，结果显示准确度为94．87％（74／78），灵敏度和特异性分别为100％（10／10）、94．12％（64／68）。结论用SELDI—TOF—MS技术DukesA期和DukesB、C、D期结直肠癌患者进行比较蛋白质组学研究，发现在结直肠癌病理发展中有一组蛋白质有显著的差异。     

SELDI在筛选从慢性活动性肝炎到早期肝硬化两阶段血清标记物中的应用

目的比较慢性活动性肝炎患者和早期肝硬化患者血清蛋白标记物并建立相关筛选模型。方法用表面加强激光解析／电离飞行时间质谱技术（SELDI．TOF—MS）及CM10蛋白芯片对28例慢性活动性肝炎患者、26例早期肝硬化患者血清样本进行分析，将获得的血清蛋白质指纹图谱，用计算机软件进行比较分析，建立慢性活动性肝炎与早期肝硬化患者的比较筛选模型。结果慢性活动性肝炎组与早期肝硬化组共有26个差异有统计学意义的蛋白峰；建立诊断模型的灵敏度92％（24／26），特异度86％（24／28），准确率为89％（48／54）。结论建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分慢性活动性肝炎患者与早期肝硬化患者，SELDI技术在诊断及特异性蛋白生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用前景。     

血清中胶质瘤疾病相关蛋白质的筛选

目的方法利用液体芯片一飞行质谱技术进行血清中胶质瘤疾病相关蛋白质的筛选。结果将78例胶质瘤患者和68例正常对照者血清样本各随机分为模型建立组和模型验证组；应用液体芯片．飞行质谱技术测定模型建立组样本，进行了差异蛋白的筛选和诊断模型的建立；然后用模型验证组样本进行了差异蛋白和模型的验证；并对其中的蛋白质进行鉴定。经模型建立组胶质瘤患者与正常对照者的血清蛋白质图谱比较，得到差异蛋白17个并建立了诊断模型，建模蛋白质为l460（m／z）、l612（m／z）、l776（m／z）、l862（m／z）、l941（m／z）、3952（m／z）、4052（m／z）。模型敏感性为85％，特异性为9r7．06％。其中差异蛋白质l460（m／z）、1612（m／z）、2551（m／z）为肿瘤高表达，差异蛋白l941（m／z）为肿瘤低表达，经鉴定蛋白质l941（m／z）为高分子量激肽原。结论利用液体芯片一飞行质谱技术进行血清中胶质瘤疾病相关蛋白质的研究，得到了差异蛋白和诊断模型，为临床胶质瘤的诊断提供了新的思路；差异蛋白质的鉴定结果可能为胶质瘤的治疗提供有价值的途径。     

血清蛋白指纹技术在冠心病不稳定型心绞痛诊断中的应用

目的采用蛋白质组学新技术筛选冠心病不稳定型心绞痛（unstable angina，UA）患者血清蛋白标志分子，建立诊断不稳定心绞痛的蛋白分类模型。方法冠心病不稳定型心绞痛患者48例，男28例，女20例；正常健康人60例，患者出现症状24h内采血，分离血清。样本分为两组：第一组为训练组，包括UA患者和正常健康人各30例，性别年龄相当；第二组为盲法分析组，包括剩余18例UA患者和26例正常健康人。利用（surface enhanced laser desorption／ionization time of flight mass spectrometry，SELDI—TOF—MS）技术对血清样本进行蛋白质谱分析。采用蛋白飞行质谱仪（PBSⅡ—C型）对结合在WCX2芯片上的血清蛋白进行读取分析。采用Ciphergen Proteinchip 3．1软件分析分组数据及相关性，Biomarker Wizard软件对不同组相同质荷比的蛋白含量进行t检验，P〈0．01时具有统计学意义，用Biomarker Patterns System建立分类树模型。结果UA患者与正常人血清蛋白组比较后发现了25个表达差异蛋白，其中13个蛋白在UA患者血清中高表达，12个低表达。软件分析系统利用上述蛋白建立了一个分类模式，在训练组中敏感性和特异性均为96．6％。盲法分析显示其对UA患者的诊断敏感性为94．4％，特异性为100％，阳性预测值为100％，阴性预测值96．3％。结论SELDI技术能够有效快速地从血清中筛选出UA患者相关的标志蛋白分子，利用蛋白模式分类方法对冠心病患者进行风险评估和冠心病的筛查是一个比较好的方法。     

卵巢癌患者术前、术后、复发及化疗过程中血清蛋白质差异表达研究

目的探讨卵巢癌患者术前、术后复发及化疗过程中血清蛋白质的变化。方法采用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)联合CM10蛋白质芯片技术,对就诊于我院并进行手术治疗及术后化疗的9例卵巢癌患者进行跟踪随访收集到的37份血清标本进行检测。结果共获得显著差异表达的蛋白峰7个。1.在卵巢癌术前、术后自身对照研究中,卵巢癌术前组蛋白峰平均强度/卵巢癌术后组蛋白峰平均强度≥2的蛋白峰有1个(1452.58Da),说明该蛋白峰在卵巢癌术前组中高表达。卵巢癌术前组蛋白峰平均强度/卵巢癌术后组蛋白峰平均强度≤0.5的蛋白峰有4个(8785.20,1659.79Da,4253.91Da,5603.31Da),其中m/z为8785.20的蛋白峰与Apo C-Ⅲ的质核比相符。说明该蛋白峰在卵巢癌术前组中低表达。2.在卵巢癌术前、术后及复发组对照研究中,差异表达明显的蛋白峰有2个,其中m/z7991.89Da的蛋白峰术前、术后及复发时的蛋白质平均强度分别为14.67、5.75、12.28(P值=0.002);m/z 8093.54Da的蛋白峰术前、术后及复发时的蛋白质平均强度分别为3.12、0.71、2.81(P值=0.002)。结论 7个差异表达峰与卵巢癌发生、发展相关,有望成为有价值的卵巢癌的诊断尤其卵巢癌术后及复发的监测的标志物。     

表面增强激光解析电离飞行时间质谱血清蛋白指纹图谱在肿瘤诊断中的应用

蛋白质组学是当今生命科学研究中最活跃的前沿领域，蛋白指纹图谱技术是研究蛋白质组的技术手段之一，由蛋白芯片及表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）两部分组成，可通过蛋白表达图谱模式快速筛选肿瘤标志物，进行肿瘤的诊断。现就该技术的一般原理及在肿瘤诊断中的应用作一综述。     

卵巢癌患者血清蛋白指纹图谱检测及其临床意义

目的 运用SELDI-TOF-MS技术（表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术）检测卵巢癌患者、良性卵巢囊肿和正常健康妇女的血清蛋白质指纹图谱，初步探讨筛选出的肿瘤标志物建立的诊断模型在卵巢癌诊断中的临床意义。方法 用SELDI-TOF-MS技术及WCX2芯片检测55例卵巢癌患者和60例对照纽的血清蛋白指纹图谱，并运用SPSS10.0软件判别分析处理数据和筛选标志物，以建立诊断模型。结果 6个蛋白质峰（11500、11650、11800、15800、16000、16250m／z）组合构建的诊断模型1鉴别卵巢癌和对照组的敏感性为94、5％（52／55），特异性为93．3％（56160）。6个蛋白质峰（11590、11700、12000、14800、15500、15900m／z）组合构建的诊断模型Ⅱ鉴别Ⅰ期卵巢癌和对照组的敏感性为82．45％（14／17），特异性为90．0％（54／60）。5个蛋白质峰（11600、11750、16100、16150、16200m／z）组合构建的诊断模型Ⅲ鉴别Ⅰ期卵巢癌患者和Ⅱ～Ⅳ期卵巢癌患者的敏感性为92．1％（35／38），特异性为94．1％（16／17）。结论 SELDI-TOF-MS技术是一种快速、准确、高通量、高灵敏度的蛋白质分析方法，能够直接检测出卵巢癌患者血清中相对特异的肿瘤标志物，其对于卵巢癌的早期诊断具有一定的临床意义。