老化小鼠模型与年青小鼠肺脏蛋白表达谱的差异分析

目的:寻找在肺脏衰老过程中起作用的关键蛋白。 方法:利用双向电泳(2DE)和质谱技术对老化小鼠肺脏蛋白进行了蛋白质组学的研究。 结果:老化小鼠肺脏的蛋白表达谱与年青小鼠的肺脏相比较在11个点上有明显变化。进而对这11个差异蛋白进行肽质量指纹分析并检索相应蛋白,得到3个有意义的蛋白质,分别是kit ligand precursor,Carbonic anhydrase Ⅱ(CA Ⅱ)和Heat shock cognate 7l kDa protein(HSC 71)。 这3个在衰老与年青小鼠肺脏中的表达差异的蛋白可能有利于衰老过程中肺功能衰退的研究,同时也可能成为防治老年呼吸功能衰竭的关注点。     

针刺对快速老化小鼠生长因子及受体基因表达的影响

目的：探讨快速老化小鼠(senescence accelerated mouse，SAM)脑衰老的机制，揭示“益气调血、扶本培元”针法改善SAMP10脑衰老症状的部分机制。方法：选取7月龄雄性清洁级SAMP10小鼠20只，单纯随机分为2组，即SAMP10对照组、SAMP10“益气调血、扶本培元”针刺法组(简称针刺组)；选取7月龄雄性SAMR1 10只，为SAMR1对照组。应用cDNA Array技术，观察快速老化小鼠SAMP10与正常老化小鼠SAMR1前脑588个基因表达的差异，同时观察“益气调血、扶本培元”针法对上述基因表达的影响。结果：SAMP10与SAMR1相比，胰岛素样生长因子ⅠA、胰岛素样生长因子Ⅱ前体、生长激素受体、雌激素受体伴快速老化，其表达分别下调了16，1．6，20．2和7．6倍，胰岛素样生长因子Ⅰ受体α亚单位的表达则上调了1．6倍。针刺后其表达水平趋向于正常老化的R1品系，其表达分别上调11．5，4．1，17．1和3．8倍，上调1．8倍。结论：SAMP10脑衰老可能与胰岛素样生长因子系统、生长激素等的异常表达有关，针刺可改善上述生长因子的表达，进而起到延缓脑衰老作用。     

烟酰胺对帕金森病小鼠黑质细胞凋亡的影响

目的：探讨黑质细胞凋亡在帕金森病发病机制中的作用及烟酰胺对帕金森病小鼠黑质细胞凋亡和Bax蛋白表达的影响。方法：给C57BL小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病小鼠模型。利用原位缺口末端标记法(TUNEL)及Bax免疫组化方法观察黑质细胞凋亡情况及烟酰胺干预的影响。结果：帕金森病小鼠黑质致密带可见大量凋亡细胞[(19.43&;#177;3．33)个／视野]Bax蛋白表达(Bax阳性细胞平均灰度值80.59&;#177;3.73)。预先应用烟酰胺能使凋亡细胞减少[(6.33&;#177;2．35)个／视野]，烟酰胺+MPTP甲组与MPTP组间比较差异有显著性意义(q=9．23，P&;lt;0.05)。预先应用烟酰胺也能使Bax蛋白表达降低(Bax阳性细胞平均灰度值107．59&;#177;2.50)，烟酰胺+MPTP组与MPTP组间比较差异有显著性意义(q=7.44，P&;lt;0．05)结论：烟酰胺可降低MPTP诱导的C57BL小鼠黑质细胞Bax蛋白表达，减少黑质细胞凋亡。     

救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元β-淀粉样肽及其相关蛋白表达的影响

背景：D-半乳糖老化小鼠脑内存在的β-淀粉样肽(β-amyloid，Aβ)产生过多，是否与脑老化过程有关?目的：观察中药救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元A8及其相关蛋白表达的影响。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：实验地点：首都医科大学宣武医院神经生化室。昆明小鼠60只，无特定病原体动物环境(SPF)级，雄性，体质量26—28g，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。方法：采用免疫组织化学染色和免疫印记方法，检测D-半乳糖老化小鼠模型海马神经元Aβ、β-分泌酶、内质网Aβ结合蛋白(endoplasmic reticulum amyloid β-peptide binding protein，ERAB)和早老蛋白-1的表达水平，并观察中药救脑益智胶囊的保护作用。主要观察指标：Aβ、β-分泌酶、ERAB和早老蛋白-1免疫组织化学染色结果和凝胶转移电泳分析。结果：对照组小鼠海马CA1区神经元有少量的Aβ及其相关蛋白表达，而D-半乳糖老化小鼠海马CA1区神经元Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加，与对照组比较差异有高度显著性意义(P<0．01)，中药组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近。结论：D-半乳糖老化小鼠海马神经元存在着Aβ及其相关蛋白表达的上调，中药救脑益智胶囊可使之恢复正常水平，对神经元具有一定的营养和保护作用。     

补肾活血方药对老年小鼠睾丸的影响

目的：补肾活血中药左归饮加减其作用针对肾虚这一衰老的基本病机，研究其对老年小鼠睾丸的影响，有助于揭示其抗衰老机制。方法：昆明种雄性小鼠36只，其中老年小鼠(18～22个月)24只。随机分为老年实验组和老年对照组，12只4～5个月小鼠为青年对照组。以中药方剂左归饮加减的水煎液供实验组小鼠自由饮用。75d后，取各组小鼠睾丸进行组织学和细胞化学研究。结果：老年实验组小鼠曲精小管增粗(152．08&;#177;9．25)μm与老年对照组(139．4&;#177;14．42)μm比较，差异有非常显著性意义(t=3．102，P&;lt;0．01)；平均支持细胞数(12．03&;#177;3．72)与老年对照组(9．11&;#177;2．18)比较，差异有显著性意义(t=1．809，P&;lt;0．05)；核仁增大；间质细胞核质比例(0．44&;#177;0．40)与老年对照组(9．11&;#177;2．18)比较差异有显著性意义(t=1．801，P&;lt;0．05)；3β-羟基甾脱氧酶反应增强；增殖型精原细胞平均数(40．08&;#177;15．63)与老年对照组的(29．25&;#177;11．39)比较，差异有显著性意义(t=1．804，P&;lt;0．05)。结论：以左归饮为主的补肾活血方药有调整下丘脑-垂体-性腺轴的分泌机能，促进睾丸的生精活动从而起到抗衰老的作用。     

自然衰老与半乳糖催老小鼠重要脏器的形态学差异

目的：观察自然衰老与半乳糖催老小鼠的病理形态学差异。方法：NIH 2月龄小鼠27只，按体质量随机分为致衰老模型组，自然衰老组和对照组，每组9只。致衰老模型组每日皮下注射D-半乳糖100mg／kg，正常对照组每日皮下注射等量生理盐水，各持续42d。自然衰老组为常规饲养15月的小鼠。分别将上述各组小鼠断头处死后解剖，取心脏，肝脏，肾脏，肺脏，脑等脏器，常规病理取材，固定，脱水，包埋，苏木精伊红染色，制片，光镜下观察各主要脏器的病理形态学改变。结果：与正常对照组相比，自然衰老组和半乳糖催老组的各主要脏器的组织结构均有不同程度的老化改变；半乳糖催老组小鼠的肺组织中，肺泡腔面积未见明显减少，肺泡壁内部分毛细血管内皮细胞增生；自然衰老组小鼠的肺组织中，肺泡腔面积明显减少，部分实性变，肺间质纤维结缔组织增生，肺泡上皮细胞，毛细血管内皮细胞增生。半乳糖催老组小鼠肾脏的改变以肾小球数量减少，球系膜细胞增生为主；自然衰老组小鼠的肾脏以肾间质结缔组织增生和肾小管上皮细胞萎缩变性为主。心脏，肝脏，脑的病理组织学改变在自然衰老组和半乳糖催老组之间无明显差异。结论：肺脏和肾脏老化的病理组织学改变在自然衰老组和半乳糖催老组小鼠之间存在差异。     

1200009K10基因在小鼠视网膜中的表达

背景：1200009K10基因来源于成年小鼠肺cDNA基因库，于2002-01公布，其功能暂时还未明确。预测其蛋白含有5个区域：Kelch基序，Kelch区．BTB／POZ区，BTB区以及13推进区，以上所有结构均参与蛋白之间的相互作用和一些酶的活性表达。 目的：观察1200009K10基因在小鼠视网膜中的表达方式。 设计：观察对比实验。 单位：中山大学眼科中心研究所。 材料：实验用rd小鼠和rds小鼠以及正常对照的C3B小鼠传代小鼠模型购自Jackson实验室（巴港，缅因州04609，美国），所有动物均在中山大学实验动物中心二等动物单元饲养。 方法：从小鼠中提取分离视网膜RNA，通过急速冷凝cDNA扩增法扩大1200009K10基因，采用基因特性定量聚合酶链反应对rd小鼠和rds小鼠以及正常对照的C3B小鼠视网膜中该基因的表达进行分析。 主要观察指标：3种小鼠视网膜1200009K10基因的表达含量和表达方式。 结果：从小鼠视网膜中提取分离的视网膜RNA经过急速cDNA冷凝扩增后，获得了1种与小鼠1200009K10基因序列基本相同的克隆物。小鼠视网膜12000109KIO基因的表达分为6个阶段：出生后7，12，25，37，50d（接近性成熟）及出生后150d。rds，rd和C3B小鼠视网膜中1200009K10基因表达于小鼠出生后7d较低，7～12d较高，12-50d稳定，最后略有增加。C3B小鼠视网膜中1200009K10基因表达趋势和水平与rds，rd小鼠基本相同，出生12d后1200009K10基因的表达水平高于rds，rd小鼠。rds，rd和C3B小鼠视网膜1200009K10基因表达水平有所不同，其表达方式在3者之间无明显差异。 结论：1200009K10基因可能不参与视网膜变性的发展过程。     

年龄相关听力损失小鼠耳蜗组织中甲基化CpG结合蛋白2的变化

[目的]探讨年龄相关听力损失小鼠耳蜗组织中甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)的表达差异及临床意义.[方法]在对不同月龄BALB/c小鼠听功能和耳蜗形态学研究以及耳蜗MeCP2蛋白表达免疫组化研究的基础上,应用半定量反转录多聚酶链反应方法,检测3、6、12、18个月月龄鼠耳蜗组织中Me、CP2基因mRNA的表达.[结果]MeCP2在4组不同月龄小鼠耳蜗组织中均有表达,MeCP2 mRNA表达水平随着月龄增加逐渐下降,各组间差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]MeCP2在年龄相关听力损失小鼠耳蜗组织中的表达水平随着小鼠月龄的增加而降低,这可能与耳蜗的老化及老年性耳聋的发生有关.     

海藻多糖对衰老小鼠的免疫调节作用?

目的：探讨海藻多糖(PSS)对 D-半乳糖(D-gal)所致衰老小鼠的免疫调节作用。方法腹腔注射 D-gal 制备衰老小鼠模型,同时对衰老小鼠行 PSS 灌胃,收集腹腔巨噬细胞,检测巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的水平和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA 表达水平;计算脾脏指数,观察 PSS 对小鼠脾脏显微结构的影响;流式细胞术检测衰老模型小鼠脾细胞周期的变化。结果PSS 能促进衰老小鼠巨噬细胞合成 NO、NOS 和上调 iNOS mRNA 表达水平,并使衰老小鼠脾脏指数明显增加,脾脏被膜层明显增生。PSS 能增加衰老小鼠脾 S 期和 G2/M 期细胞。结论PSS 能提高 D-gal 所致衰老小鼠的的免疫功能,值得进一步研究和开发。     

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马神经元凋亡的影响

目的 研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响，为进一步探讨APP17肽对脑老化的临床治疗意义提供理论依据。方法 雄性昆明小鼠66只，按随机数字表法分为3组：正常对照组(C组)、D-半乳糖对照组(D组)、APP17肽治疗组(P组)，每组动物22只。用D-半乳糖制备脑老化模型，并皮下注射APE，17肽对D-半乳糖脑老化小鼠进行治疗，3个月后取脑组织做Bcl-2，Bax，CREB，Akt，AIF免疫组织化学染色。结果 D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax，AIF阳性反应神经元细胞数目多，细胞计数与C组及P组有显著性差异；胞质与突起深染，而正常小鼠及APt，17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少，染色淡；D-半乳糖小鼠海马内Bct-2，CREB(cAMP反应结合蛋白)，AKt阳性细胞数目少，染色淡，细胞计数与C组及P组有显著性差异；而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元细胞数目多，胞质与突起深染。结论 促进凋亡的Bax，AIF(凋亡诱导因子)在D-半乳糖小鼠海马表达增加；与凋亡呈负相关的Bct-2，CREB，Akt在D-半乳糖小鼠海马表达降低APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2，Bax．CREB，Akt，AIF的表达，使之接近正常。