miRNA-21-5P在食管鳞癌患者中的鉴别诊断价值

目的检测食管癌患者血清miRNA-21-5P的表达水平,探讨miRNA-21-5P对食管癌患者的鉴别诊断价值。方法选取2019年12月至2020年3月于朝阳市中心医院就诊的食管鳞癌患者50名(疾病组)及食管炎患者20名(相关疾病对照组),采集食管炎患者血清样本及组织样本,以及食管鳞癌患者治疗前血清样本、术中食管鳞癌组织及癌旁组织。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测2组血清及组织样本中miRNA-21-5P的表达水平,分析miRNA-21-5P表达水平与食管鳞癌患者临床病理参数的关系,采用ROC曲线评估其对食管鳞癌的鉴别诊断价值。结果食管鳞癌患者血清miRNA-21-5P的表达水平(3.60±0.09)显著高于食管炎患者(1.01±0.05),差异有统计学意义(t=24.43,P0.05);食管鳞癌患者癌组织中miRNA-21-5P的表达水平(4.36±0.29)显著高于癌旁组织(1.31±0.16),差异亦具有统计学意义(t=20.10,P0.05);而食管癌患者组织中miRNA-21-5P的表达水平显著高于食管炎患者组织(t=20.100,P0.05)。ROC曲线分析结果显示,组织中miRNA-21-5P筛查食管鳞癌的ROC曲线下面积(AUC~(ROC))为0.767(95%CI:0.650,0.859),当cut-off值为0.39时,其敏感性88%,特异性为75%。血清miRNA-21-5P筛查食管鳞癌的AUC~(ROC)为0.671(95%CI:0.549,0.779),当cut-off值为0.63时,其敏感性为80%,特异性为66%。结论 miRNA-21-5P在食管鳞癌血清中的诊断价值与组织相当,或可用于对食管鳞癌的鉴别诊断。     

miR-30-5p和SOCS1在食管癌组织中的表达及临床意义

目的探讨miR-30-5p和细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)在食管癌组织中的表达及临床意义。方法选取2016年2月—2017年1月收治的食管癌85例,比较食管癌组织和癌旁组织中miR-30-5p及SOCS1 mRNA和蛋白表达,分析食管癌组织miR-30-5p和SOCS1 mRNA表达与食管癌患者临床病理特征关系,探讨食管癌组织中miR-30-5p和SOCS1 mRNA表达的相关性,预测食管癌组织中miR-30-5p和SOCS1 mRNA的结合位点,分析食管癌组织中miR-30-5p和SOCS1 mRNA不同表达与食管癌患者预后关系。结果食管癌组织中miR-30-5p相对表达量高于癌旁组织,SOCS1 mRNA相对表达量低于癌旁组织,SOCS1蛋白表达阳性率低于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.01)。食管癌患者不同病理分级、肿瘤分期和有无淋巴结转移食管癌组织miR-30-5p和SOCS1 mRNA表达差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。食管癌组织中miR-30-5p和SOCS1 mRNA表达呈明显负相关(P0.01)。SOCS1 mRNA序列3'非翻译区的285～292碱基位置处含有与miR-30-5p互补结合位点。3年总体生存率食管癌组织中miR-30-5p高表达患者低于低表达患者,SOCS1 mRNA高表达患者高于低表达患者,差异有统计学意义(P0.01)。结论食管癌组织中miR-30-5p表达升高,而SOCS1 mRNA和蛋白表达降低,其与食管癌患者病理分级、肿瘤分期、有无淋巴结转移及预后有关,共同促进食管癌恶性进展。     

microRNAs在肾透明细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨microRNA(miRNA)在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR技术检测20例肾透明细胞癌患者癌组织与癌旁组织中miRNA-20b、-21、-34a、-210、-141、-200c、200b、-514、-532-5p的表达变化。结果与癌旁组织相比,肾透明细胞癌患者癌组织中miRNA-21、-34a、-210呈高表达(P<0.05),miRNA-141、-200c呈低表达(P<0.05),miRNA-20b、-200b、-514、-532-5p则无差异。miRNA-34a随着肾癌病理分级的增高而增高。结论miRNA-21、-34a、-210、mir-141、-200c在肾透明细胞癌患者癌组织中表达存在差异,可能在肾透明细胞癌中起重要作用。     

miRNA-21在结直肠癌中的表达研究

目的 检测MicroRNA-21（miRNA-21）在正常人和结直肠癌患者血清,以及结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,探讨其与结直肠癌临床病理参数的关系.方法 采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测正常人和结直肠癌患者血清,以及结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,分析miRNA-21的表达与结直肠癌临床病理参数的关系.结果 miRNA-21在结直肠癌患者血清中表达水平显著高于正常人血清（P＜0.05）;结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于癌旁组织;中晚期（Ⅲ期和Ⅳ期）结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于早期（Ⅰ期和Ⅱ期）结直肠癌（P＜0.05）;低分化肿瘤组织中miRNA-21表达水平明显高于中高分化者;有淋巴结转移的结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于无淋巴结转移者.结论 miRNA-21在结直肠癌患者血清及肿瘤组织中呈高表达,可能与结直肠癌的发生发展有关.     

miR-218-5p在胃癌细胞和胃癌组织中表达的临床意义及生物信息学分析

目的分析miR-218-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达,采用生物信息学方法,预测其靶基因并对其信号通路进行富集分析,并利用OncomiR数据库对miR-218-5p在胃癌中的表达与预后关系进行生存分析。方法通过实时荧光定量PCR检测miR-218-5p在不同分化程度的胃癌细胞和正常细胞、胃癌组织和癌旁组织中的表达,分析其临床意义。在miRecords网站数据库选择3个以上软件在线预测其靶基因,取其交集,运用DAVID6.7数据库,对其靶基因参与的信号通路进行富集分析。采用OncomiR数据库分析miR-218-5p在胃癌组织相对于癌旁组织中的表达,并利用OncomiR和cBioportal数据库分别进行miR-218-5p在胃癌组织中的表达与预后生存期的分析。结果miR-218-5p在不同分化程度的胃癌细胞中表达下调。相对于癌旁组织,miR-218-5p在胃癌组织中也明显下调,miR-218-5p的下调与胃癌淋巴结转移(P<0.001)及TNM分期(P<0.001)具有相关性。生物信息学分析显示,miR-218-5p的靶基因富集在与肿瘤相关的多个信号通路中,且其在胃癌中的表达与胃癌患者预后具有一定相关性(P=0.01632)。结论miR-218-5p在胃癌中表达下调,起到潜在的抑癌作用,可能成为新的治疗靶点和预后标志物。     

实时荧光定量PCR测定食管癌VEGF-C和VEGFR-3基因表达

目的 建立测定血管内皮生长因子-C(VEGF-C) mRNA和血管内皮生长因子受体-3 (VEGFR-3) mRNA的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),探讨其在食管癌组织及其癌旁组织中的表达水平.方法 分别以自行构建和克隆的pMD18-VEGF-C和pMD18-VEGFR-3质粒作为定量模板,用循环阈值(Ct)定量起始的模板,在荧光TaqMan方法的基础上建立了测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR,并分别测定了40例食管癌组织及其癌旁组织中VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平.结果 VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA测定的线性范围均为103~108拷贝/μg总RNA;VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA高、低值的批内、批间变异系数(CV)在7.07%～12.49%之间.VEGF-C mRNA主要表达在癌组织中,而VEGFR-3 mRNA在癌组织与癌旁组织中表达无差异;VEGF-C mRNA与VEGFR-3 mRNA在癌组织与癌旁组织中表达存在相关性;24例淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA水平与16例无淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织存在显著差异,提示有淋巴结转移的食管癌组织及其癌旁组织VEGF-C和VEGFR-3基因表达水平上调.VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平与食管癌临床病理分期有密切关系.结论 我们建立的测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR灵敏、稳定、重现性好,可供VEGF-C、VEGFR-3基因表达的临床检测和研究.VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA基因表达水平可作为食管癌淋巴结转移的预测指标,亦可作为分子水平上判定食管癌临床分期的辅助指标之一.     

miR-4645-5p通过靶向MUC16调控食管癌细胞的恶性生物学行为

目的 探讨微小RNA(miR)-4645-5p靶向黏蛋白16(MUC16)对食管癌细胞增殖、侵袭、上皮间充质转化的影响及其分子机制。方法 通过TCGA数据库在线分析miR-4645-5p在食管癌组织中的表达。利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)分析食管癌细胞系中miR-4645-5p的表达水平。通过脂质体转染技术将miR-4645-5p模拟物和阴性对照模拟物转染KYSE-30细胞，作为miR-4645-5p组和对照模拟物组。分别采用CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分析转染KYSE-30细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力。通过生物信息学网站预测miR-4645-5p的靶基因，双荧光素酶报告基因实验检测miR-4645-5p对靶基因的结合。采用qPCR检测MUC16 mRNA的表达水平，Western blotting检测MUC16、转录因子-1(ZEB-1)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达水平。结果 食管癌组织中miR-4645-5p表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。与HET-1...     

miRNA-30a通过介导Th17细胞分化影响免疫性血小板减少性紫癜发病的初步探讨

目的:探讨miRNA-30a是否通过影响Th17细胞分化参与ITP发病;通过对miRNA-30a预测靶基因SOCS3的验证,进一步探讨miRNA-30a参与ITP发病的可能机制。方法:建立慢性ITP小鼠模型,检测其脾脏单个核细胞中miRNA-30a、RoRγt的表达并分析两者相关性;构建含靶基因mRNA 3′UTR的荧光素酶表达载体及含有miRNA的绿色荧光载体,通过Luciferase荧光检测、实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blot验证SOCS3是否为miRNA-30a的靶基因。结果:实验组小鼠血小板计数在注射抗小鼠血小板血清(APS)48 h后下降至正常的20%,且至少可维持14 d。实验组小鼠脾脏单个核细胞中miRNA-30a及RoRγt表达较对照组升高(P<0.05),且两者存在正性相关(r=0.54)。pMDH-GFP-miRNA-30a与pMIR-report-UTR实验组的荧光素酶的活性明显低于pMDH-GFP空质粒与pMIR-report-UTR的对照组(P<0.05)。转染miRNA-30a质粒的EL4细胞中SOCS3在mRNA及蛋白水平与对照组均无差异。结论:miRNA-30a在ITP小鼠脾脏单个核细胞中表达升高,且与RORγt表达呈正相关性,它可能通过影响Th17细胞分化参与ITP发病;SOCS3能与miRNA-30a靶位点结合,却不是其功能靶基因。     

糖尿病肾病患者血清miRNA-93的表达变化及意义

目的探讨miRNA-93在糖尿病肾病患者血清的表达情况及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR技术分别检测20例糖尿病肾病患者血清和健康对照组血清中miRNA-93的表达变化。分析其与临床病理参数的关系;运用TargetScan等靶基因预测分析软件预测miRNA-93靶基因。结果与健康对照组相比,糖尿病肾病患者血清中miRNA-93低表达(P<0.05);尿毒症组患者血清中miRNA-93较非尿毒症组低表达(P<0.05);生物信息学分析显示为糖尿病肾病中miRNA-93的靶基因为VEGFA、MTHFR、ADRA2B、SDC2、APOB、PPARG。结论 miRNA-93在糖尿病肾病患者血清中低表达,可能通过调控其下游靶基因在糖尿病肾病发生过程中起重要作用。     

肺腺癌miR-195的表达及靶基因筛选

目的研究miR-195在肺腺癌中的表达差异,筛选miR-195靶基因,分析靶基因作用网络及其对患者生存预后的影响。方法利用TCGA数据库,比较miR-195在肺腺癌癌组织与癌旁正常组织间的表达差异;采用实时荧光定量PCR检测miR-195在临床标本中的相对表达水平。设计miR-195的Hybrid PCR引物,扩增出靶基因的mRNA 3′-非翻译区(3′UTR),菌落PCR筛选靶基因的3′UTR片段进行测序。美国国家生物信息中心网站比对测序结果,得到靶基因的基因注释和全长序列,构建靶基因作用网络并进行生存分析。结果miR-195在肺腺癌癌组织中的相对表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.01)。Hybrid PCR筛选miR-195候选靶基因显示多个条带。miR-195与靶基因的结合位点在基因3′UTR上有19个。靶基因GCLC、NOB1的低表达与肺腺癌患者的良好预后相关。结论肺腺癌癌组织中miR-195呈低表达。miR-195可能通过直接抑制靶基因GCLC、NOB1的功能,进而影响肺腺癌的发生、发展。     

实时荧光定量PCR测定食管癌VEGF-C和VEGFR-3基因表达

目的建立测定血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)mRNA的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),探讨其在食管癌组织及其癌旁组织中的表达水平。方法分别以自行构建和克隆的pMD18-VEGF-C和pMD18-VEGFR-3质粒作为定量模板,用循环阈值(Ct)定量起始的模板,在荧光TaqMan方法的基础上建立了测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR,并分别测定了40例食管癌组织及其癌旁组织中VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平。结果VEGF-CmRNA和VEGFR-3 mRNA测定的线性范围均为103~108拷贝/μg总RNA;VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA高、低值的批内、批间变异系数(CV)在7.07%~12.49%之间。VEGF-C mRNA主要表达在癌组织中,而VEGFR-3mRNA在癌组织与癌旁组织中表达无差异;VEGF-C mRNA与VEGFR-3 mRNA在癌组织与癌旁组织中表达存在相关性;24例淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织VEGF-C mRNA和V...     

宫颈癌癌组织中miR-365、miR-135a-5p及STAT3的表达水平及意义

目的探讨宫颈癌癌组织中miR-365、miR-135a-5p及STAT3的表达水平及意义。方法选取2016年6月-2018年7月在医院行宫颈癌手术切除的存档蜡块和癌旁正常组织(距病变部位5cm处,且证实为无癌浸润)石蜡标本各90例作为研究对象。采用免疫组化法检测宫颈癌组织中STAT3的表达,实时定量荧光聚合酶链反应(qPCR)检测mi R-365、miR-135a-5p表达水平,分析miR-365、miR-135a-5p及STAT3与宫颈癌患者临床病理参数及预后的关系。结果 miR-365在宫颈癌组织中的相对表达量低于癌旁组织,miR-135a-5p的相对表达量、STAT3的阳性表达率均高于癌旁组织(P0.05)。FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、合并淋巴结转移、高分化、直径≥5cm的宫颈癌组织中miR-365相对表达量分别高于FIGO分期I～II期、未合并淋巴结转移、低分化、直径5cm的宫颈癌组织(P0.05);FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、合并淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-135a-5p相对表达量分别高于FIGO分期I～II期、未合并淋巴结转移的癌组织(P0.05)。宫颈癌组织中miR-135a-5p的表达与STAT3呈显著正相关(r=0.388,P0.05)。90例宫颈癌患者2年总生存率为66.67%(60/90),ROC曲线分析显示miR-365、miR-135a-5p及STAT3的曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.735、0.549。结论 miR-365、miR-135a-5p的表达水平均与临床分期、淋巴结转移相关,miR-365还与肿瘤大小、分化程度有关,miR-135a-5p的表达与STAT3具有显著相关性;其中miR-365、miR-135a-5p对患者预后的预测价值较高。     

miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和组织中的表达及调控靶基因信号通路富集分析

目的观察miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达,并用生物信息学方法分析其靶基因和富集的信号通路,探讨其生物学行为和功能。方法采用实时荧光定量PCR法检测miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞和正常胃黏膜细胞以及其在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析其临床意义,采用mir WALK网站数据库的预测软件预测其靶基因,选择该网站10个软件中具备3个以上软件支持的靶基因,用DAVID 6.7在线富集其靶基因参与的信号通路。结果 miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞中表达上调(P均0.05),胃癌组织相对于癌旁组织亦明显上调表达(P0.05),miR-20b-5p表达上调与胃癌淋巴结侵袭转移以及浸润深度关系密切(P均0.05);生物信息学分析提示,miR-20a-5p/miR-20b-5p的靶基因富集存在于肿瘤相关的多个信号通路中。结论 miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞系及组织中呈高表达,并于与淋巴结侵袭转移以及浸润深度有关,可作为胃癌潜在的生物学标志物。     

survivin mRNA和NF-κB mRNA在原发性肝癌中的表达及其意义——附30例检测结果

目的:探讨存活素信使核糖核酸(survivin mRNA)和核因子-κB信使核糖核酸(nuclear factor-κB mRNA,NF-κB mRNA)在原发性肝细胞癌(肝癌)癌组织和相应癌旁组织中的表达及其意义.方法:收集肝癌病人的肝癌组织标本及癌旁组织标本各30份,肝血管瘤病人的瘤旁正常肝组织标本(对照组)10份,采用实时荧光定量逆转录PCR技术检测标本中的survivin mRNA和NF-κB mRNA的表达水平,以及研究两者在肝癌组织中的相关性.结果:肝癌癌组织中survivin mRNA的表达水平均高于癌旁组织和正常组织,差异均有统计学意义(P＜0.05～P＜0.01),而在癌旁组织的表达水平与正常组织的表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).癌组织中NF-κB mRNA的表达均高于癌旁组织和正常组织,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),在正常肝组织、癌旁组织及癌组织中,该因子的表达呈逐渐升高的趋势.survivin mRNA和NF-κB mRNA在肝癌癌组织中的表达呈正相关(r=0.36,P＜0.05).结论:survivin mRNA和NF-κB mRNA在肝癌癌组织中呈高表达,且两者在癌组织中的表达呈正相关,提示两者可能与肝癌的发生、发展有关.     

食管癌组织早期生长反应基因-1mRNA表达与患者生存期关系的研究

目的 通过对食管癌组织及癌旁组织中早期生长反应基因1(Egr-1)表达的研究,探讨Egr-1mRNA与食管癌患者预后的关系.方法 应用RT-PCR技术检测68例食管癌患者Egr-1mRNA表达情况,并对68例患者进行生存期随访,分析其与患者预后的关系.结果 Egr-1mRNA在正常食管组织表达最高为1.201±0.347,在癌旁组织表达次之,为0.945±0.336,在癌灶中心组织表达最低,为0.567±0.404(F=12.709,P＜0.01,P＜0.05);68例癌组织和癌旁组织标本中Egr-1mRNA均阳性表达的21例,单一表达阳性的21例,均阴性表达的26例.随访68例术后患者,术后1年生存组60例、术后3年生存组35例;2组Egr-1mRNA均阳性表达率分别为30.00%和65.71%(P＜0.01);2组阳性表达者生存率分别是94.44%和86.96%(P＞0.05).结论 从癌旁组织到癌组织Egr-1mRNA表达减弱可能与食管癌的癌变有一定关系;食管癌组织Egr-1mRNA表达水平与患者生存期有关系,对食管癌预后判断有重要参考价值.     

逆转录实时荧光定量PCR检测p73 mRNA在结肠癌的表达

目的:建立一种实时定量PCR方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于其在癌旁组织的表达(P<0.01);表达水平与肿瘤的恶性程度、分化及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:p73的高表达可能与结肠癌的发生、发展及预后有联系。     

miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p在急性缺血性脑卒中中的表达及诊断价值研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p在急性缺血性脑卒中(AIS)中的表达及临床诊断价值。方法分别收集该院50例非脑卒中患者和50例AIS患者的血清标本作为对照组和病例组。采用实时荧光定量PCR法检测血清中miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p的表达水平,同时将血清中miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p的水平与研究对象的临床诊断价值进行对比分析。结果病例组血清miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p表达水平均显著高于对照组(P<0.001)。AIS患者血清miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p与美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分呈显著正相关(r=0.605、0.667、0.710,均P<0.05)。miRNA-17-5p、miRNA-103-3p、miRNA-144-3p及三者联合区分AIS患者与非AIS的受试者工作特征曲线下面积分别为0.846(95%CI:0.757~0.935,P<0.001)、0.866(95%CI:0.788~0.945,P<0.001)、0.935(95%CI:0.888~0.982,P<0.001)和0.976(95%CI:0.953~0.999,P=0.000);灵敏度和特异度分别为84%和92%、84%和88%、92%和86%、92%和94%。结论miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p是AIS诊断的潜在标志物。     

miRNA-193a在肺腺癌患者体内的表达水平及意义

目的研究miRNA-193a在肺腺癌患者体内的表达水平,并将其用于肺癌诊断的效能与癌胚抗原(CEA)进行比较,探讨其价值。方法将40例确诊的肺腺癌患者作为肺癌组,同时将40例健康体检者作为对照组。肺腺癌患者中手术12例,术后收集切除的肺段,取正常组织、癌旁组织及癌组织,通过实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测组织中miRNA-193a的表达水平;检测40例肺癌患者及健康者血清中miRNA-193a和CEA的水平,使用Spearman相关性分析软件分析两者的关系;应用ROC曲线及AUC(95%CI)评估miRNA-193a、CEA作为诊断指标的效能并将两者进行比较。结果肺腺癌患者癌组织miRNA-193a表达量较正常组织明显下降(P0.05);肺癌组血清miRNA-193a水平较对照组明显下降(P0.05);而且与CEA之间无相关性(r=0.079,P=0.618),其血清miRNA-193a的AUC为0.829,95%CI为0.741~0.917。结论肺腺癌患者癌组织及血清中miRNA-193a含量均低于正常对照。血清miRNA-193a可能是诊断肺腺癌的一个重要指标。     

敲减microRNA-205靶向PTEN抑制食管癌细胞TE1的增殖并促进细胞凋亡

目的:探讨miRNA-205对食管癌细胞株TE1增殖和凋亡能力的影响及其作用机制。方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western印迹检测正常食管黏膜细胞Het-1A和不同食管癌细胞株(KYSE70,TE12,TE1)中miRNA-205的mRNA及蛋白表达水平。转染miRNA-205抑制剂下调TE1细胞中miRNA-205的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞增殖和细胞凋亡相关CDK2,cyclin D1,P21,Bcl-2,cleavedcaspase-3,caspase-3,p-Rb,Rb,p-Akt和Akt的蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因。结果:MiRNA-205在各型食管癌细胞中高表达。沉默miRNA-205后,TE1细胞的增殖能力降低并表现为细胞周期阻滞,而细胞凋亡率显著升高(P0.05)。同时细胞中cyclinD1,CDK2,bcl-2,p-Rb及p-Akt的蛋白表达水平均显著降低,p21及cleaved-caspase-3的蛋白表达水平显著升高。双荧光素酶报告基因分析显示PTEN是miRNA-205的可能作用靶点,TE1中共转染miRNA-205抑制剂和PTENsiRNA可部分逆转miRNA-205介导细胞增殖抑制及凋亡诱导作用。结论:沉默miRNA-205可靶向PTEN抑制食管癌细胞株TE1的增殖,并促进其凋亡,提示miRNA-205可作为食管癌诊疗的一个潜在作用靶点。     

五聚素3基因甲基化在食管鳞癌中的作用

目的研究食管鳞癌组织中五聚素3(PTX3)基因的表达,以及基因启动子区甲基化状态对其表达的影响。方法应用半定量逆转录PCR(RT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)、免疫组织化学的方法对癌旁食管黏膜组织和食管鳞癌组织进行检测,分析PTX3基因mRNA的表达、基因启动子区甲基化状态和PTX3蛋白阳性表达与食管癌临床病理特征的关系。结果 25%(5/20)食管鳞癌组织和90%(18/20)正常食管黏膜组织存在PTX3基因表达,PTX3mRNA在食管癌与癌旁组织之间的表达差异有统计学意义(χ2=17.289,P<0.001)。80%(16/20)食管鳞癌组织和25%(5/20)正常食管黏膜组织存在PTX3基因CpG岛超甲基化,提示PTX3基因超甲基化与食管癌发生之间有关联(χ2=12.13,P<0.001)。PTX3蛋白在食管癌组织中表达的阳性率为30.38%(24/79),癌旁食管组织PTX3蛋白阳性表达率为84.81%(67/79)(P<0.001)。随着食管癌临床分期增加,PTX3蛋白阳性表达率逐渐降低。结论 PTX3基因启动子高甲基化是PTX3表达失活的主要原因,在食管鳞癌的发生发展中起重要作用,PTX3基因启动子甲基化可作为食管鳞癌预后评估的潜在肿瘤标志物。