^125I标记碳纳米材料石墨烯及其稳定性研究

目的研究放射性核素^125I标记聚乙二醇修饰的碳纳米石墨烯材料（Graphene-PEG 18kDa）的可行性及其标记产物的稳定性。方法采用氯氨一T法标记石墨烯材料（GP-18）．Millipore超滤离心管对产品进行分离纯化,并测定^125I-GP-18的标记率;纸层析法测定放射化学纯度;将^125I-GP-J8,按1：20的比例分别加入到生理盐水、血清中,置于37℃、4℃、室温条件下,测定放置2h、4h、24h、48h后标记物的放化纯度以评价其体外稳定性。结果^125I标记GP．18的标记率为（56．93±2．85）％,^125I-GP-18的放射化学纯度（97．93±0．70）％．放射性比活度为52．81MBq／mg。4aC生理盐水中放置48h的放射化学纯度仍可达（93．48±1．20）％,但在37屯血清中放置2h放化纯降为（71．94士5．47）％（P〈0．01）。结论可用^125I标记碳纳米材料石墨烯,所得产物放射化学纯度及放射性比活度高,但在37℃血清中稳定性欠佳,其结构有待进一步改进。     

^99Tc-BDI-1标记和人膀胱癌荷瘤裸鼠显像的研究

目的 探讨^99Tc-BDI-1的标记和人膀胱癌荷瘤裸鼠显像方法，为临床应用做好准备。方法 用亲和层析柱纯化的抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1。用2-巯基乙醇直接还原法标记^99Tc-BDI-1。用薄层层析测定^99Tc-BDI-1的放化纯度。用EJ细胞测定^99Tc-BDI-1标记抗体的免疫活性分数及亲和常数。用人膀胱癌荷瘤裸鼠进行^99Tc-BDI-1显像。结果 ^99Tc-BDI-1抗体标记率为70.1％，放射化学纯度92.1％，免疫活性分数80.5％。荷瘤裸鼠影像清晰、对比度良好，^99Tc-BDI-1在瘤体部位的浓集明确，瘤体清晰可辨。结论 ^99Tc-BDI-1能够穿过肿瘤组织中的血管壁进入肿瘤组织，并保留了抗体的亲合力和特异结合力。     

125I-3,3'-二碘甲腺原氨酸标记物的制备和鉴定

目的建立3，3＇-二碘甲腺原氨酸（3，3＇T2）的^125 I标记方法，并对标记产物进行鉴定。方法用氯胺T法以^125I标记3，3’T2；用Sephadex LH-20柱层析和下行纸层析纯化分离；以3，3’-T2纯品作为标准，通过下行纸层析、放射自显影、茚三酮显色等方法对标记产物进行鉴定。结果3，3＇-T2的^125 I标记率为26．57％，放化纯度为95．24％，比放射性为116μCi/μg，经Sephadex LH-20柱分离出现2个峰；标记产物下行纸层析分离后经放射自显影鉴定可见^125 I-rT3、^125I-3，3＇-T2、游离^125I，计算其Rf值分别为0．33、0．46、0．74；经下行纸层析、放射自显影、茚三酮显色的联合应用及标准品的对照证明Rf值0．46位置的物质就是^125I-3，3’T2。结论成功建立了3，3＇T2^125。I标记方法。     

131I标记的抗甲状腺髓样癌人源单链抗体在荷瘤裸鼠的体内分布和放射免疫显像

目的 测定¹³¹I标记的抗甲状腺髓样癌(MTC)人源单链抗体(scFv)的放射化学纯度,并研究荷MTC细胞(TT cells)裸鼠¹³¹I-scFv体内分布和体外放射免疫(RII)显像特点。方法 氯胺T法对scFv进行¹³¹I标记,Sephadex G200纯化标记抗体,三氯醋酸沉淀法测定标记率,纸层析法测定标记抗体在1、6、12、24 h的放射化学纯度、室温稳定性和血清稳定性。构建荷TT细胞裸鼠模型,尾静脉注射¹³¹I-scFv,分析¹³¹I-scFv在裸鼠重要组织器官的分布情况,并于注射药物12、24、48、72 h行SPECT正位静态显像,观察肿瘤内放射性浓集情况,肿瘤组织显像清晰时行SPECT/CT融合图像。结果 标记抗体经纯化后,测得标记率为(78.60±0.08)%,放射化学纯度为(87.10±0.78)%,各个时间点的放射化学纯度均在90%以上。荷瘤裸鼠体内研究结果显示,¹³¹I-scFv的放射性瘤/血、瘤/肌肉比值随时间的增长逐渐增高,48 h达最高。RII显示,¹³¹I-scFv可选择性聚集于肿瘤组织,48 h时肿瘤显像与全身组织对比最清晰,此时融合图像可清晰显示肿瘤部位的放射性浓聚情况,体内分布和体外显像结果一致。结论 成功标记了抗MTC人源scFv,生物活性较高,荷瘤裸鼠肿瘤的RII较好。     

125I标记三螺旋形成寡核苷酸及其对肝癌细胞杀伤力研究

目的 探讨三链形成寡核苷酸（TFP）的^125I标记方法及其对肝癌细胞的抑制作用。方法 合成一段能与HBV前S基因特异结合的TFO，并用^125I标记；以HepG2．2．15细胞为靶细胞，分^125I—TFO、等量TFO、相同活度^125I、空白对照四组分别转染细胞，以MTT比色试验检测各组细胞存活率。结果 ①^125I-TFO的标记率为93％，放化纯为99％，比活度129．6kBq／ug，体外稳定。②^125I-TFO组的细胞杀伤率高于其它组（P〈0．05），最高抑制率为35.2％。结论 Iodogen法标记连接酪胺的寡核苷酸的方法简便、标记率和放化纯高，标记产物生物活性损失小，体外稳定性好；标记化合物有效抑制了肝癌细胞生长。     

胞外HMGB1调控SDF-1/CXCR-4轴介导脐血CD34＋细胞的迁移作用研究

本研究探究高迁移率族蛋白B1 （high mobility group boxl,HMGBl）和/或基质细胞衍化因子（SDF-1）对脐血CD34＋细胞的迁移作用,并进一步探讨HMGB1是否通过调控SDF-1/CXCR-4轴介导脐血CD34＋细胞的迁移.分离脐血单个核细胞,应用免疫磁珠分选CD34＋细胞,流式细胞仪检测脐血CD34＋细胞的纯度.利用趋化迁移实验（Transwell）测定HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34＋细胞的迁移作用.1.0×105细胞/孔脐血CD34＋细胞加入上孔中,应用不同浓度梯度的HMGB1和/或SDF-1（0、10、25、50、100、200 ng/ml）检测HMGB1和/或SDF-1促进脐血CD34＋细胞迁移的最适作用浓度.新鲜分离的脐血CD34＋细胞表达SDF-1受体CXCR4和HMGB1受体TLR2TLR4和RAGE.为进一步探讨何种受体在HMGB1和SDF-1介导的细胞迁移中起作用,应用抗SDF-1抗体,抗CX-CR-4抗体,抗RAGE抗体,抗TLR2抗体和抗TLR4抗体阻断研究HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34＋细胞的迁移作用.结果表明,磁珠分选脐血CD34＋细胞纯度为97.40±1.26％.25 ng/ml的SDF-1不能介导脐血CD34＋细胞的迁移,最佳作用浓度为100 ng/ml.HMGB1的最低作用浓度为100 ng/ml.通过剂量研究实验发现,细胞迁移最佳联合作用浓度为HMGB1 100 ng/ml＋ SDF-1 50 ng/ml.抗体阻断实验结果表明,抗SDF-1（4μg/ml）和抗CXCR-4（5 μg/ml）抗体均可以阻断HMGB1单独或联合SDF-1介导的细胞迁移运动,而抗RAGE抗体,抗TLR2抗体及抗TLR4抗体并不能阻断HMGB1和/或SDF-1对脐血CD34＋细胞的迁移作用.结论：HMGB1和SDF-1均可以促进脐血CD34＋细胞的迁移,HMGB1可能通过CXCR-4而非RAGE和TLR受体加强SDF-1诱导的细胞迁移作用.具体的作用机制还需进一步探讨.     

核素标记混合抗体瘤内注射治疗大肠癌的实验研究

目的：为监床应用混合抗体进行放射免疫治疗提供实验依据。方法：在裸鼠荷人大肠瘤Lovo移植瘤生长至1cm时,瘤内分别或同时注射^131I标记的抗CL3单克隆抗体（^132I-CL3)和^132I标记抗FERR单克隆抗体T9（^132I－T9）治疗后行SPECT显像标记抗体在肿瘤内的浓,并进行疗效观察。结果：两种抗体混合治疗组疗效明显好于单独治疗组,在肿瘤内的浓聚也大于单独应用。结论：多种抗体混合应用瘤内注射放射免疫治疗可增加标记抗体在肿瘤内的浓聚,并能提高放射免疫治疗的疗效。     

蛋白质和多肽的放射性标记方法研究进展

蛋白质和多肽的放射性标记广泛用于药代动力学研究,医学影像检查[1], 抗体标记,二维电泳[2]等方面,在医学和药学领域是一种重要的技术.蛋白质和多肽的标记常用125I或131I标记[3-4]酪氨酸.标记方法一般是用氯氨T法进行碘放射性标记,用柱层析法和离心超滤法对标记物分离纯化,同时用三氯乙酸沉淀法和SDS-PAGE电泳法鉴定纯化后的标记化合物放射化学纯度,用MTT比色法测定标记物的生物学活性.例如徐贤坤等[5]改进的双相氯氨T法标记了聚乙二醇化重组人白细胞介素6标记率可达74.5%, 高于常规氯氨T 法的62.3%, 放射性比活度分别为5.151 3×109和4.161×109 BqPμg.     

99mTc直接法标记Octreotide及其在甲状腺突眼患者的临床初步应用研究

目的：采用放射性核素99mTc直接标记Octreotide；评价甲状腺突眼患者临床受体影像。方法：标记是通过对半胱氨酸桥还原后提供的巯基与99mTc螯合后完成的。新华I号纸层析测定标记率，通过Sep pak C18柱层析、半胱氨酸置换实验、血清蛋白结合实验及体外稳定性实验对99mTc-OCT的放射化学性质进行评价，对甲状腺突眼患者进行SPECT与同机CT融合显像。结果：99mTc-OCT标记率为（95.8±0.55）%，标记物具有良好的放射化学性质，活动期甲状腺突眼患者融合图像清晰，病灶放射性浓聚明显。结论：99mTc直接法标记OCT方法简便，标记率高（>95％），体内外稳定性好；99mTc-Octreotide是一种极具前景的生长抑素受体显像剂。     

NMO-IgG/anti-AQP4抗体的检测及其特异性的研究

目的 NMO-IgG/anti-AQP4抗体已被多数研究证实为是视神经脊髓炎（NMO）或其疾病谱的一种特异性抗体。然而,该抗体的特异性尚未在中枢神经系统（CNS）感染性疾病中做过特异性的测试。本研究的目的是检测结核性脑膜炎（TBM）患者血清中是否有NMO-IgG/anti-AQP4抗体的表达,并和NMO疾病谱进行比较。方法建立常规NMO-IgG检测的间接免疫荧光法（IIF）和检测AQP4-Ab的细胞分析法（CBA）。IIF法以鼠脑为底物检测NMO-IgG,并测定其滴度,同时应用免疫双标法验证NMO-IgG与AQP4-Ab分布的一致性。应用CBA法检测患者血清中AQP4-Ab的表达情况。盲法检测血清172例,其中NMO24例,纵形扩展性脊髓炎（LETM）22例,多发性硬化（MS）30例,TBM46例,肺结核患者30例,健康对照20例;对其检测的阳性率进行分析。结果研究发现NMO-IgG/anti-AQP4抗体不仅存在于NMO疾病谱中,在TBM患者血清中也可以普遍检测到该抗体。NMO-IgG的血清阳性率分别为：TBM76.1%（35/46）,NMO62.5%（15/24）,LETM59.1%（13/22）;TBM组抗体滴度明显高于NMO组和LETM组。CBA法检测的血清阳性率分别为：TBM91.3%（42/46）,NMO91.7%（22/24）,LETM86.4%（19/22）。肺结核、MS和健康对照血清阳性率很低。结论本研究结果显示,CNS结核感染可导致NMO-IgG/anti-AQP4抗体的产生。该发现使传统的NMO-IgG/AQP4-Ab为疾病特异性抗体的观念受到挑战,提示该抗体可能是反映CNS破坏性脱髓鞘的生物学标记。     

188-Re直接法标记CD45单抗及其体内生物分布研究

目的：利用188Re直接法标记CD45单抗,探讨其在正常小鼠体内的生物学分布特性。方法应用2-巯基乙醇（2-ME）还原CD45单抗分子中的二硫键形成巯基;以氯化亚锡作为188Re的还原剂,葡庚糖酸钠为中间弱配体,188Re直接标记CD45单抗;PD-10层析柱分离纯化,纸层析法测定标记率与放化纯;鉴定188Re-CD45单抗的体外稳定性;研究188Re-CD45单抗在正常小鼠体内的生物分布特性。结果188Re-CD45单抗的标记率平均为（85.25±2.63）%,PD-10柱纯化后的放化纯为（92.54±3.56）%,比活度平均为（2.06±0.07）TBq/mmol;室温下放置24 h,188Re-CD45单抗放化纯为（64.33±1.53）%;在鼠血清和生理盐水中37℃下孵育24 h后,其放化纯仍有（64.2±3.77）%和（56.7±4.16）%。小鼠体内生物分布显示,188Re-CD45单抗主要分布于肾脏和肝脏,其次是肺脏、骨骼和血液。结论188Re直接法标记CD45单抗的方法简单易行,标记率较高,具有良好的体外稳定性;188Re-CD45单抗静脉注射后,体内放射性主要经肾脏排泄,并在肝脏有较高的浓聚,符合标记抗体的体内分布规律。     

18F-FDG与人卵巢癌细胞株SKOV3结合实验方法学研究

目的：建立18F-FDG与人卵巢癌细胞株SKOV3结合实验的方法学。方法：在不同条件下测定18F-FDG与人卵巢癌细胞株SKOV3结合率。①细胞数分别为5×104个/瓶、1×105个/瓶、5×105个/瓶、1×106个/瓶、5×106个/瓶;②反应时间分别为20min、40min、60min、80min、100min和120min;③18F-FDG放射性活度分别为1.85KBq、3.7KBq、7.4KBq、14.8KBq和29.6KBq;④葡萄糖的浓度分别为0mmol/L、2.78mmol/L、5.55mmol/L和11.1mmol/L。用γ测量仪测量细胞的CPM（B）及上清液CPM（F）。计算18F-FDG的细胞结合率=[B/（B+F）]×100%。结果：①18F-FDG与人卵巢癌细胞株SKOV3结合率（y）与细胞数（x1）、反应时间（x2）、葡萄糖的浓度（x3）存在线性回归关系,回归方程：y=（7.395+5.18E-0.06x1+0.094x2-2.040x3）×100%,F=106.9,P<0.05。偏回归系数P均<0.05。校正决定系数R2c=0.728,P<0.05。细胞结合率与细胞数、反应时间、葡萄糖的浓度Pearson相关系数分别为0.581、0.179、-0.599,P均<0.05。②18F-FDG与人卵巢癌细胞株SKOV3结合实验基本条件：细胞数量为1×106个/瓶,18F-FDG放射性活度3.7KBq,反应时间100min,葡萄糖浓度0mmol/L,细胞结合率为（25.45±1.66）%。结论：建立了18F-FDG与人卵巢癌细胞株SKOV3结合实验的方法学,为18F-FDG结合实验早期评价放疗和化疗对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用奠定了基础。     

七氟醚对脂多糖刺激的人单核巨噬细胞系细胞IL-1β 水平的影响

目的 探讨七氟醚对脂多糖刺激的人单核巨噬细胞系(THP-1)细胞白介素1β(IL-1β)水平的影响.方法 脂多糖刺激THP-1 细胞后,分别以1%、2%、4%的七氟醚处理,收集上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测.结果 与对照组比较,七氟醚组1%、2%、4%浓度处理脂多糖刺激的细胞后,相应上清液IL-1β 的水平均未见明显变化,差异均无统计学意义(t 分别=0.19、-1.55、-0.90、-1.87、0.06;0.34、-1.80、-0.13、0.94、1.08;0.95、-0.33、-1.02、1.49、-0.76,P 均＞0.05).结论 七氟醚不能降低脂多糖刺激的THP-1 细胞的IL-1β 水平.     

超顺磁性氧化铁纳米粒子标记人骨髓和脐带间充质干细胞：

背景：优化人源细胞安全、有效的标记参数及细胞移植后的定位是评价其治疗效果至关重要的环节。目的：比较核磁影像对比剂超顺磁性氧化铁纳米粒子体外标记入骨髓和脐带间充质干细胞的细胞活率、标记效率及核磁共振T2＊WI成像的效果,优化标记细胞处理细节。方法：培养第3代人骨髓和脐带间充质干细胞,以5-30mg／L菲立磁（FeridexIV）结合硫酸鱼精蛋白标记细胞。结果与结论：人骨髓和脐带间充质干细胞标记前后细胞的存活率接近（P〉0．05）。以530mg／L菲立磁标记骨髓间充质干细胞的阳性标记率差异无显著性意义（P〉0．05）：而5mg／L菲立磁标记脐带间充质干细胞的阳性标记率与20和30mg／L菲立磁标记的差异有显著性意义（P〈0．05）：10mg／L菲立磁标记脐带间充质干细胞的阳性标记率低于骨髓间充质干细胞（P〈O．05）。当≥20mg／L菲立磁标记细胞时,2种来源的细胞悬液中均出现不易洗脱和过滤去除的氧化铁颗粒。标记后细胞在3.0T MR GRE T2＊WI扫描均见随菲立磁的浓度升高,信号强度减弱。提示这2种组织来源的间充质干细胞,以10mg／L的菲立磁硫酸鱼精蛋白复合物标记是安全有效的,可用临床T2＊WI的MR成像观察。     

运用免疫荧光法检测温热对于硼化合物细胞微分布影响

目的硼中子俘获疗法(BNCT)的有效性主要取决于硼-10元素在肿瘤细胞内的聚集。目前的硼检测手段仅限于分析肿瘤组织中硼的平均浓度,不能准确地评价硼化合物(BPA)在组织中的详细分布。先前研究证实温热处理可以提高放疗疗效,本研究通过免疫荧光法检测温热是否对BPA细胞内的微分布有影响。方法通过免疫荧光法分析硼化合物在肿瘤细胞中的分布以及温热对BPA分布的影响。在体外对人肺癌细胞株A549和人头颈部鳞状细胞癌细胞株SAS进行培养,并且加入BPA共培养1h。另外,A549细胞经温热处理1h后,利用抗BPA抗体通过免疫荧光法进行检测。免疫荧光强度通过图像分析软件进行分析。结果检测发现BPA主要聚集于细胞核周围,BPA免疫荧光的强度随着培养基中BPA浓度的增加而增强。尽管在26μg/ml浓度和13μg/ml浓度时,细胞免疫荧光的平均强度相近,但直方图分析发现26μg/ml时细胞主要向高荧光强度区域移动。经温热处理后,BPA在细胞中的分布没有明显增加。结论本研究利用免疫荧光法对BPA在细胞内的分布进行了分析,以上结果暗示温热对肿瘤细胞硼摄取的影响可能主要需要通过改善肿瘤循环、增加肿瘤内BPA的输送来实现。     

THP与ADM对乳腺癌的体外生长抑制及诱导凋亡研究

目的比较吡柔比星(THP)和阿霉素(ADM)对乳腺癌细胞的体外抑制及凋亡诱导作用。方法采用ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP-TCA)及AnnexinV凋亡检测技术比较吡柔比星和阿霉素对人乳腺癌细胞株MCF-7的体外生长抑制及细胞凋亡诱导作用。结果吡柔比星对MCF-7细胞株生长抑制作用明显高于阿霉素,其IC50仅相当于阿霉素的1/3-1/6,差异具有显著意义(P0.01);吡柔比星和阿霉素对MCF-7细胞抑制作用均有剂量依赖性,并均能在低浓度下诱导MCF-7细胞凋亡,吡柔比星处理组的细胞凋亡比例高于阿霉素组(P0.01)。结论吡柔比星较阿霉素对乳腺癌细胞MCF-7具有更好的体外生长抑制和诱导细胞凋亡作用。     

喜泊芬对人食管癌Eca-109细胞的光动力效应

目的：探讨不同孵育浓度和不同光照剂量密度喜泊芬介导的光动力治疗（photodynamic therapy,PDT）对人食管癌细胞Eca-109体外效应的影响。方法：以不同浓度喜泊芬孵育食管癌Eca-109细胞,并分别在不同光照剂量密度（0、12、24、30J/cm2）下行PDT,24h后通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞生存率。结果：不同孵育浓度喜泊芬在4种不同光照剂量密度下食管癌Eca-109细胞生存率间均有显著差异（P〈0.01）。在同一光照剂量密度下,不同喜泊芬浓度的食管癌Eca-109细胞的生存率有显著差异（P〈0.01）,而同一喜泊芬孵育浓度下,不同光照剂量密度的食管癌Eca-109细胞的生存率有显著差异（P〈0.01）。结论：喜泊芬的不同孵育浓度和不同光照剂量密度对人食管癌Eca-109细胞体外PDT效应有显著影响。     

老年糖尿病患者血清GAD-Ab、ICA、IAA和IA-2-Ab联合检测的临床应用价值

[目的]探讨谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）、胰岛细胞抗体（ICA）、胰岛自身抗体（IAA）和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2-Ab）联合检测对老年糖尿病患者的应用价值.[方法]采用免疫印迹法检测330例老年糖尿病患者和40例正常人血清中GAD-Ab、ICA、IAA和IA-2-Ab,并对四项自身抗体全阴患者与有一项以上阳性患者的空腹血糖（FBG）、餐后两小时血糖（2hPBG）和糖化血红蛋白（HbA1c）等血液生化指标进行比较.[结果]430例老年糖尿病患者GAD-Ab、ICA、IAA和IA-2-Ab的阳性率分别为39.7%、28.5%、17.0%和16.4%,四项自身抗体全阴患者124例,占37.6%,与有一项以上阳性患者比较,其FPG、2hPBG和HbA1c水平无显著差异（P〉0.05）.[结论]四项联合检测对老年糖尿病患者的诊断及治疗方案的制定有重要意义     

原代脐静脉内皮细胞与脐静脉内皮细胞株的培养方法及生物特性的比较

目的建立一套成功率高,细胞污染率少,获得较多的细胞数的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外分离方法,并且将原代脐静脉内皮细胞与EA.HY926人脐静脉内皮细胞株生物特性进行对比研究,为细胞培养及相关的医学基础研究提供依据。方法在新鲜(健康剖宫产产妇分娩后立即取新生胎儿脐带,长度15～20 cm,取标本时间≤4h)脐静脉内注0.1%的Ⅱ型胶原酶消化获得内皮细胞,用M199生长液(含25%的内皮细胞生长因子)进行培养,EA.HY926细胞株用M199生长液。比较两组细胞的形态、超微结构、细胞纯度检测CD31抗体表达。结果①形态:原代HUVEC体外生长3～4 d可铺满单层,细胞呈梭形、饱满,漩涡状排列生长,传代后可见管腔样结构;EA.HY926细胞株胞质多颗粒,2～3可铺满单层,可长成复层。②超微结构:透射电镜下,原代HUVEC里可发现较多的横切与纵切的韦伯潘力小体,在EA.HY926细胞株里较少。③细胞纯度检测:CD31抗体的表达率原代HUVEC细胞大于EA.HY926细胞株,两种细胞CD31表达差异有统计学意义(P﹤0.001)。结论脐静脉注Ⅱ型胶原酶消化法配合M199生长液可迅速获取大量内皮细胞,其生物学特性明显优于HUVEC株,而细胞株则以细胞数量多,培养方法简单,成活率高为特点,两者均是组织工程及相关医学基础研究较好的细胞来源。