联用乳酸杆菌和丁酸梭菌治疗小鼠急性溃疡性结肠炎的实验研究

摘要 目的：观察联用乳酸杆菌和丁酸梭菌对小鼠急性溃疡性结肠炎的疗效并探讨其治疗机制。方法：建立DSS诱导的小鼠急性UC模型,观察给予乳酸杆菌和丁酸梭菌治疗后,小鼠结肠粘膜的病理改变和TNF-α和P-SEL表达的变化。结果：乳酸杆菌和丁酸梭菌可明显减轻小鼠结肠粘膜的损伤;可明显抑制TNF-α和P-SEL的表达,尤以两菌合用组抑制作用最强。结论：乳酸杆菌和丁酸梭菌对DSS诱导的UC有治疗作用,对TNF-α和P-SEL表达的协同抑制作用可能是其发挥协调治疗作用的分子机制。     

益生菌CMS-H002和CMS-H003联用对小鼠急性溃疡性结肠炎的影响

目的：研究肠道益生菌CMS-H002和CMS-H003对小鼠溃疡性结肠炎（UC）的治疗作用。方法：建立硫酸葡聚糖胺（DSS）诱导的小鼠急性UC模型。观察益生菌CMS-H002和CMS-H003治疗后，疾病活动指数（DAI）、肠道菌群及丙二醛（MDA）的变化。结果：肠道益生菌CMS-H002和CMS-H003均可明显降低DAJ的水平及结肠组织的MDA水平。疗效均优于或等于巴柳氮阳性治疗药物。治疗后，各益生菌治疗组粪便乳酸杆菌、双歧杆菌菌数均有不同程度增加；而大肠杆菌及金黄色葡萄球菌菌数均有不同程度减少；其中用CMS-H003和合用组治疗后，丁酸梭菌菌数也有增加。以合用组小鼠粪便菌群更趋近于正常小鼠粪便菌群构成。而巴柳氮阳性治疗组对小鼠粪便的菌群菌数无明显影响。结论：口服肠道益生菌CMS-H002和CMS-H003可明显改善5％DSS诱导的Balb／c小鼠急性UC的一般表现及组织学损伤。两茼舍用效果尤为明显。减少自由基的产生及逆转病态菌群是它们发挥治疗UC作用的部分机制。     

Smad3磷酸化促进溃疡性结肠炎的黏膜修复

目的：研究小鼠溃疡性结肠炎黏膜损伤与修复过程及转化生长因子-β（TGF-β）信号转导过程中关键分子Smad3对黏膜修复的作用。方法给予小鼠3％葡聚糖硫酸钠（DSS）饮用5天诱导急性溃疡性结肠炎,再停用DSS 改为正常饮水修复。实验小鼠分为6组,分别为正常对照组,3％DSS 5天损伤期组,饮水修复1、2、3、4周组,其中正常对照组小鼠仅饮用蒸馏水。观察小鼠结肠炎修复情况及行结肠组织学检查,检测结肠黏膜凋亡与增殖相关指标及TGF-β信号通路中Smad3及相关蛋白的表达,观察其在损伤与修复中的变化。结果小鼠疾病活动指数在饮用DSS 后上升,修复2周后恢复正常。结肠组织学评分于饮用DSS 5天损伤期时明显升高,修复2周后下降。结肠黏膜凋亡指数于损伤期升至最高,至修复3周后降至正常水平。增殖指数于损伤期降至最低,至修复3周时升至峰值。结肠黏膜TGF-β表达量在各实验组均升高,而p-Smad3表达量于损伤期降低,修复1周后开始上升。结论TGF-β转导过程中关键分子Smad3的磷酸化促进小鼠结肠炎黏膜的修复。     

乳酸杆菌和双歧杆菌粗制代谢产物对小鼠溃疡性结肠炎的影响

【目的】了解乳酸杆菌和双歧杆菌粗制代谢产物对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的防治作用。【方法】采用右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠UC模型,分别予乳酸杆菌粗制代谢产物和双歧杆菌粗制代谢产物灌肠,生理盐水(NS)和柳氮磺胺吡啶(SASP)灌肠对照,并设立空白对照组和DSS模型组对照,计算小鼠死亡率、疾病活动指数(DAI)、组织学损伤评分和组织学病理改变以及结肠黏膜IL-10免疫组化情况。【结果】①乳杆组和双歧组小鼠结肠黏膜组织病理学改变轻微,其死亡率、DAI评分、组织学损伤评分均低,与DSS模型组和NS组对照差异均有统计学意义(P<0.05)。②乳杆组和双歧组IL-10免疫组化表达均较高,与空白对照组、DSS模型组和NS组对照差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】①乳酸杆菌和双歧杆菌粗制代谢产物均对小鼠溃疡性结肠炎起主要的防治作用。②乳酸杆菌和双歧杆菌粗制代谢产物的某些成分通过促进IL-10表达而发挥防治作用的。     

速激肽受体2对小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的: 利用速激肽受体2（tachykinin receptor 2,Tacr2）基因敲除小鼠及诱导溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠模型,探讨Tacr2在小鼠UC发生、发展中的作用。方法: 小鼠按照基因型分成野生型组和基因敲除（纯合子）组,再按照给药与否进一步分成野生型造模组、纯合子造模组、野生型空白组、纯合子空白组。给造模组小鼠口服右旋葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate, DSS）构建UC小鼠模型,观察其UC活动指数及结肠组织中病理学改变、炎症因子及上游转录因子核因子NF-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）的变化。结果: Tacr2基因敲除的纯合子小鼠经DSS诱导的UC症状比野生型造模组小鼠明显加重。进一步分析基础状态下结肠的免疫活性,发现在基础状态下,纯合子小鼠与野生型小鼠相比,结肠免疫活性明显降低,表现为结肠黏膜中 IL-1β、TNF-α、IL-6和NF-κB水平降低。结论: Tacr2对UC的发生、发展有抑制作用。     

Th17类细胞因子在溃疡性结肠炎患者中的表达

目的：以Th17细胞分泌的细胞因子白介素-17（IL-17）为研究对象,检测IL-17在溃疡性结肠炎（UC）患者中的表达及其与疾病活动指数的相关性,探讨Th17细胞在UC发病机制中的作用。方法：免疫组化方法对比溃疡性结肠炎患者病变部位结肠黏膜和对照组结肠黏膜IL-17表达,并将其与疾病活动指数进行相关性分析。酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测溃疡性结肠炎患者与对照组血清IL-17蛋白表达。结果：溃疡性结肠炎患者与对照组血清IL-17表达无差异（P〉0.05）;溃疡性结肠炎患者与对照组结肠黏膜IL-17表达有显著差异（P〈0.05）;轻度与中度UC患者相比IL-17表达有显著差异（P〈0.05）;中度与重度UC患者相比IL-17表达有显著差异（P〈0.05）。结论：IL-17在溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中高表达,并与疾病活动指数呈正相关,局部阻断Th17细胞的分泌可能成为治疗UC的一种方法。     

垂体肿瘤转化基因1通过调控肠上皮细胞焦亡在结肠炎症中的作用

目的 明确垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)通过调控肠上皮细胞的焦亡水平在结肠炎症中的作用机制。方法 PTTG1野生型（WT）小鼠和PTTG1基因敲除（KO）小鼠各10只,随机分为4组,每组5只,分别为PTTG1 WT对照组（control组）和实验组（3%DSS组）,PTTG1 KO对照组和实验组。实验组小鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠（DSS）6 d诱导急性实验性结肠炎,对照组给予无菌双蒸水。观察并记录各组小鼠的疾病活动指数（DAI）。收集小鼠结肠组织,用免疫组织化学和蛋白免疫印迹法检测焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、GSDMD的表达水平。在人源结肠上皮细胞系（HcoEpic）中,通过shRNA沉默PTTG1的表达,TNF-α刺激细胞以诱导细胞炎症模型,检测GSDMD的表达水平。结果 DSS诱导的结肠炎小鼠结肠黏膜组织中PTTG1表达减少（P <0.01）,PTTG1敲除加重小鼠结肠炎症,PTTG1 KO实验组小鼠的结肠黏膜上皮焦亡相关蛋白表达水平上调（P <0.05）。在HcoEpic中沉默PTTG1的表达,TNF-α刺激后,细胞的GSDMD蛋白表达水平上调（P <0...     

海南萝芙木提取物对葡聚糖硫酸钠小鼠结肠炎作用研究

目的探讨海南萝芙木提取物对葡聚糖硫酸钠(DSS)小鼠结肠炎的作用及机制。方法 80只BALB/c小鼠随机分为:(1)正常对照组;(2)模型组;(3)模型+柳氮磺胺嘧啶治疗组;(4)模型+海南萝芙木提取物治疗组。实验结束后剖取各组小鼠结肠炎症组织,HE染色,组织学评分;免疫组化方法检测各组小鼠肠黏膜组织中NF-κB抑制蛋白(IκB-α)阳性细胞表达率,ELISA方法检测定小鼠结肠组织白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)表达。结果柳氮磺胺嘧啶治疗组和海南萝芙木提取物治疗组小鼠一般情况好于DSS模型组,DAI积分低于DSS模型组;结肠组织显微镜检查,动物结肠炎症程度低于DSS模型组;动物结肠黏膜细胞中IκB-α阳性细胞表达率显著高于DSS模型组;小鼠结肠组织中IL-4、IL-13水平均显著高于DSS模型组。结论海南萝芙木提取物果胶多糖可能通过于预IκB-α蛋白表达,进而抑制溃疡性结肠炎症细胞中NF-κB活性,抑制IL-4、IL-13等炎症因子,产生抗炎效果。     

基于16S rRNA高通量测序技术分析小鼠实验性结肠炎肠道菌群结构特征

目的:明确溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)与肠道菌群间的相互关系,为寻找简单、安全的UC治疗方法提供实验基础。方法:通过3%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导建立小鼠溃疡性结肠炎模型,观察检测体重变化、肠道病理改变,采用16S rRNA高通量测序技术,检测小鼠粪便中的肠道菌群,并分析比较结肠炎小鼠与正常小鼠间肠道菌群的多样性及丰度。同时,利用已有数据库,预估肠道菌群内的功能基因构成,分析2组间的菌群基因功能差异。结果:溃疡性结肠炎小鼠体重明显减轻,且肠道上皮完整性被破坏,同时肠道菌群多样性明显降低,溃疡性肠炎组小鼠肠道内双歧杆菌属降至0.2%明显低于正常组小鼠(P0.05),而乳酸杆菌属平均丰度也显著降低至2.9%(P0.05),提示可能是通过影响机体代谢从而造成溃疡性结肠炎的发生、发展。结论:溃疡性结肠炎小鼠的肠道菌群多样性降低,菌群分布均发生显著改变。     

抑制性ODN对实验小鼠溃疡性结肠炎的抑制作用研究

目的研究抑制性ODN对小鼠溃疡性结肠炎的抑制作用。方法首先利用我们已发表的研究[1]中的方法建立小鼠溃疡性结肠炎模型。建模成功后将结肠炎小鼠随机分为三组,分别给予腹腔内注射PBS、A151及A151对照,记作PBS＋UC组、A151＋UC组和A151对照＋UC组,同时设一组健康小鼠对照并给予腹腔注射PBS,记作PBS＋健康对照组。每组分别连续注射7天,末次注射后每天观察各组小鼠的状态、大便性状及便隐血情况,并作DAI评分;于末次注射后第7天处死小鼠,分离结肠组织进行组织学评分。结果经A151免疫的溃疡性结肠炎小鼠体重明显增加,而且状态逐渐好转,DAI及结肠组织学评分明显降低,且在末次免疫后7天降低到正常水平。结论说明A151对小鼠溃疡性结肠炎具有抑制作用,展现出治疗溃疡性结肠炎的潜力。     

柳氮磺胺吡啶联合酪酸梭菌活菌片治疗溃疡性结肠炎的疗效观察

目的观察联合应用柳氮磺胺吡啶和酪酸梭菌活菌片（米雅片）治疗轻、中度溃疡性结肠炎的临床疗效。方法选择41例轻、中度溃疡性结肠炎患者,随机分为治疗组22例和对照组19例。治疗组口服柳氮磺胺吡啶联合酪酸梭菌活菌片,对照组单纯口服柳氮磺胺吡啶。结果治疗组总有效率（90.91%）明显高于对照组（63.16%）（P〈0.05）。结论联合应用柳氮磺胺吡啶和酪酸梭菌活菌片比单独应用柳氮磺胺吡啶治疗轻、中度溃疡性结炎具有更好的临床疗效,能更好地改善患者的临床症状。     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠溃疡性结肠炎

背景:近年已有干细胞移植修复慢性肠炎受损组织的报道,但其治疗机制尚不明确。目的:观察移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布及分化情况,及对大鼠结肠黏膜的修复作用。方法:取经鉴定的第3代大鼠骨髓间充质干细胞1×106个,应用Hoechst 33342进行荧光标记,并将其经尾静脉移植入溃疡性结肠炎大鼠体内,分别于移植后3,7,14d取材。结果与结论:骨髓间充质干细胞移植后3d,大鼠结肠即可见荧光标记的细胞,移植后14d,大鼠结肠荧光标记细胞仍较多,此时可见部分标记细胞表达细胞角蛋白。同时骨髓间充质干细胞移植后14d,溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜白细胞介素10表达增高,肿瘤坏死因子α表达降低,结肠黏膜的病理损伤明显好转。说明移植的骨髓间充质干细胞可迁移至结肠溃疡部位并分化为上皮细胞,同时可通过调节炎性因子的表达促进溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜损伤的修复。     

酪酸梭菌对非酒精性脂肪性肝病的疗效及对肠屏障的影响

目的探讨酪酸梭菌对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者肠屏障的作用及其对NAFLD的疗效和作用机制。方法选择在该院消化科就诊的NAFLD患者100例纳入NAFLD组,另选取50例健康体检者纳入对照组,比较两组的肠屏障功能指标[血清内毒素、二胺氧化酶(DAO)和D-乳酸]。将NAFLD组患者按照随机数字表法又分为A组、B组,两组均予以常规低脂饮食+有氧运动+双环醇1粒tid po,A组在此基础上,予以酪酸梭菌2粒tid po。将NAFLD组根据丙氨酸氨基转移酶(ALT)值分为ALT升高组和ALT正常组,比较两组肠屏障功能障碍发生率及炎性反应指标[白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。分别于给药1个月后复查患者肠屏障功能、血脂[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)]、肝功能、炎性反应指标等,并对A组与B组患者以上指标进行比较。结果NAFLD组的血清内毒素、DAO、D-乳酸水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ALT升高组的TNF-α、IL-6水平明显高于ALT正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。用药后A组与B组内毒素、D-乳酸、DAO水平均较用药前下降,A组下降比B组更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。用药后A组与B组IL-6、TNF-α、TG水平均较用药前下降,A组下降比B组更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。A组的总有效率(86.0%)高于B组(70.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论NAFLD患者存在肠屏障损伤,可能与炎性反应激活有关。联合酪酸梭菌治疗有助于改善NAFLD患者的肠屏障功能,降低血脂水平,提高疗效。     

Effect of low molecular weight heparin rectal suppository on experimental ulcerative colitis in mice

The objective of this study was to investigate the effect and possible mechanism of rectally administered low molecular weight heparin (LMWH) on experimental ulcerative colitis. LMWH rectal suppository was prepared and its efficacy was studied by macroscopical and histological scoring systems as well as myeloperoxidase activity. Serum levels, including tumor necrosis factor-α (TNFα), interleukin-6 (IL-6) and a link factor of blood coagulation and inflammation factor Xa (FXa) were assayed by enzyme-linked immunosorbent assay. The expression of Musashi-1 (as an intestinal stem cell marker) in the colons was assessed by immunohistochemical analysis. The results showed that LMWH rectal suppository significantly decreased serum levels of TNF-α, IL-6 as well as FXa, while increased the expression of Musashi-1 in colon compared with acetic acid induced ulcerative colitis model group. All these preliminary results indicate LMWH rectal suppository is promising for treatment of ulcerative colitis.     

Efficacy of oral colon-specific delivery capsule of low-molecular-weight heparin on ulcerative colitis

Low-molecular-weight heparin has the potential for the treatment of ulcerative colitis, and targeted drug delivery to the colon is important for topical treatment of this disease, so low-molecular-weight heparin oral colon-specific delivery capsule was prepared, and the in vitro and in vivo drug release behavior was investigated. The macroscopical and histological scoring systems, wet colon mass index and myeloperoxidase activity were assessed to evaluate the efficacy of the capsule after administered orally to experimental colitis mice. Serum levels, including tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6) and a link factor of blood coagulation and inflammation factor Xa (FXa) were assayed by enzyme-linked immunosorbent assay. The expression of Musashi-1 (as an intestinal stem cell marker) in the colons was assessed by immunohistochemical analysis. The in vitro and in vivo drug release studies clearly indicated that the specific coated capsules were capable of protecting low-molecular-weight heparin from releasing in stomach and small intestine, while specifically delivering at colon. The oral colon-specific delivery capsule of low-molecular-weight heparin could attenuate macroscopic and histological features of colitis. The results showed that low-molecular-weight heparin oral colon-specific delivery capsule significantly decreased the serum levels of TNF-α, IL-6 as well as FXa, while increased the expression of Musashi-1 in colon compared with acetic acid-induced ulcerative colitis model group. The results showed that low-molecular-weight heparin oral colon-specific delivery capsule had the potential for treatment of inflammatory bowel disease.     

Anti-inflammatory effect of taurocholate on TNBS-induced ulcerative colitis in mice

Taurocholate is a natural conjugated bile acid. The aim of this study was to evaluate the anti-inflammatory effect of taurocholate in TNBS-induced ulcerative colitis in mice. The colitis were induced by rectal administration of TNBS. After 24 h, the experimental animals were treated with sulfasalazine (SASP, 500 mg/kg/day) and taurocholate (20, 40 and 60 mg/kg) for 7 consecutive days. The anti-inflammatory effects of taurocholate for colitis were assessed by body weight, colonic weight and length, macroscopic scores, and histopathological examinations. In addition, the colonic tissue levels of myeloperoxidase (MPO) activity, interleukin (IL)-1β, interferon (IFN-γ) and tumour necrosis factor-α (TNF-α) were also determined to assess the effect of taurocholate. Compared with the model group, treatment with taurocholate (20, 40 and 60 mg/kg) significantly inhibited the body weight loss, improved colonic weight and length, and decreased macroscopic and histopathological scores. Furthermore, the activity accumulation of MPO and the colonic tissue levels of IL-1β, IFN-γ and TNF-α were also decreased by administration of taurocholate. All the findings of this study suggested that taurocholate has the anti-inflammatory effect in ulcerative colitis in mice and indicated it as a good candidate to treat inflammatory bowel disease.