大孔树脂吸附提取五味子的有效成分乌索酸

采用D301大孔树脂吸附法成功的提取出五味子中的有效成分乌索酸,同时用红外线(IR)、核磁共振(NMR)对提取的样品的进行了表征,确定其为乌索酸。并对大孔树脂吸附法提取乌索酸的实验条件进行了考察,分析在pH为5时,以及用90%的乙醇洗脱乌索酸,用D301树脂交换吸附提取液母液的效果最好。     

大孔吸附树脂法在中药提纯中的应用

大孔吸附树脂是一类不含交换基团结具有大孔结构的高分子吸附剂。它具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物。它是20世纪60年代发展起来的新型吸附剂。从问世以来，已在环保、食品、医药等领域得到了广泛的应用。大孔吸附树脂在中药成分精制纯化中的应用也逐年增加，呈现出良好的发展势态。由于大孔吸附树脂纯化技术的应用时间相对较短、相关基础研究较薄弱等原因，实际应用中还存在一些问题，本文综述了其在中药研究中的应用进展。     

大孔树脂对大蓟总黄酮吸附的研究

大蓟为为菊科管状花亚科菜蓟族蓟属植物的干燥地上部分或根[1], 我国各地均产.临床常用于治疗衄血、吐血、尿血、便血、崩漏下血、外伤出血、痈肿疮毒等症[2].已有研究报道其止血的有效成份为黄酮类化合物[3], 且治疗效果确切[4].大孔树脂是20余年发展起来的一种新型非离子型有机高分子聚合物吸附剂,具有较好的吸附性能,吸附作用同表面吸附、表面电性或形成氢键等有关[5].在中草药有效成分的提取、分离、纯化方面显示出其独特的作用,对黄酮类物质的分离与纯化也有大量成功的应用[6-7].大蓟总黄酮的提取方法通常采用有机溶剂萃取、加热提取等方法[8], 所得粗提取黄酮的量低.为提高大蓟蓟中酮类化合物的质量分数,本研究选择5种大孔树脂对大蓟黄酮类化合物进行纯化,为大孔树脂分离纯化大蓟总黄酮类化合物提供实验依据.     

大孔树脂吸附提取五味子的有效成分乌索酸

采用D301大孔树脂吸附法成功的提取出五味子中的有效成分乌索酸，同时用红外线（IR）、核磁共振（NMR）对提取的样品的进行了表征，确定其为乌索酸。并对大孔树脂吸附法提取乌索酸的实验条件进行了考察，分析在pH为5时，以及用90％的乙醇洗脱乌索酸，用D301树脂交换吸附提取液母液的效果最好。     

血液灌流吸附剂对百草枯吸附作用的实验研究

目的探讨血液灌流吸附剂对百草枯的吸附作用。方法采用0．5％百草枯溶液200ml、100ml、50ml及0．01％百草枯溶液200ml进行体外循环吸附2h，观察百草枯浓度的变化，以计算活性炭及大孔吸附树脂对百草枯的吸附率。结果百草枯的浓度为0．5％，循环容积为200ml，百草枯含量为1000mg时，活性炭和树脂的吸附率为46％、35％；百草枯的浓度为0．5％，循环容积为100ml，百草枯含量为500mg时，活性炭和树脂的吸附率为65％、47％；百草枯的浓度为0．5％，循环容积为50ml，百草枯含量为250mg时活性炭和树脂的吸附率为88％、57％；百草枯的浓度为0．01％，循环容积为200ml，百草枯含量为20mg时，活性炭和树脂的吸附率为95％、87％。结论在百草枯浓度较低0．01％、较低含量20mg时，活性炭及大孔吸咐树脂对百草枯的吸附率无明显差异；在百草枯浓度较高0．5％、较高含量时，活性炭清除百草枯的作用优于大孔吸附树脂；临床上清除百草枯可以根据患者情况选用炭肾或树脂吸附柱进行血液灌流治疗。     

化妆品原料鬼针草提取物的制备工艺研究

目的 从分布广泛、存量区大的鬼针草Bidens pilosa L.植物中提取总黄酮作为化妆品原料。方法 以提取物的色泽、黄酮含量、转移率、水复溶性为指标,优选提取物的提取、纯化、精制工艺;测定提取物在不同常用化妆品溶剂中的溶解度。结果 提取物工艺为：以70%乙醇为溶剂,回流提取1h,3次,浓缩至1g/mL,通过已处理好的AB-8大孔树脂(柱长/直径约为12.5:1,流速为4mL/min.kg树脂),先用水洗,再用70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱液,浓缩至2g/mL,用同体积乙酸乙酯萃取4次,合并萃取液,回收溶剂,浓缩,减压干燥,粉碎,过筛。提取物能溶解在多种化妆品溶剂中,色泽宜人,特别的在碱性溶剂中的溶解度大。结论：提取物色泽美观、几乎无味,水复溶性好、与多种化妆品溶剂相容性好,可以作为化妆品原料。     

羧基磁珠吸附乙型肝炎病毒表面抗原的性能研究

目的研究羧基磁殊吸附乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的性能，为磁珠在蛋白质分离纯化中的应用打下基础。方法检测羧基磁珠吸附HBsAg前后的蛋白量，判断磁珠用量、HBsAg浓度、吸附温度、吸附时间对磁珠吸附HBsAg的影响。使用10mmol／LNaOH洗脱HBsAg，测定洗脱后HBsAg的洗脱率和生物活性保留率。结果羧基磁珠吸附HBsAg的性能与磁珠用量、HBsAg浓度、吸附温度和吸附时间有密切关系。磁珠吸附浓度为524．24ug／mL的血源性HBsAg纯品后，10mmol／I。NaOH溶液洗脱HBsAg的洗脱率是71．02％，活性保留率为88．15％。结论带有羧基的磁珠可以吸附HBsAg，有望用于HBsAg的分离回收，为磁珠在蛋白质分离纯化中的应用打下基础。     

功能基化天然生物多糖吸附剂制备及对血浆胆红素的清除

背景:目前临床上应用的血液/血浆灌流吸附剂主要为活性炭和化学合成高分子大孔树脂.活性炭微末会造成栓塞,树脂致孔剂多为甲苯类溶剂不易洗脱干净引起不良反应.用天然高分子材料修饰交联制备吸附剂意义重大. 目的:用天然生物多糖-壳聚糖作为胆红素吸附剂的骨架基质,经胺化修饰交联,以蔗糖为致孔剂制备功能基化交联壳聚糖吸附剂,比较该吸附剂与市售BL-300型血浆灌流吸附剂对血浆胆红素吸附性能.方法:用功能基化交联壳聚糖吸附剂和市售BL-300型血浆灌流吸附剂,分别对高胆红素血浆进行灌流吸附试验,全自动生化分析仪测定不同吸附剂对血浆胆红素的吸附率.结果与结论:功能基化交联壳聚糖吸附剂和市售BL-300吸附剂对不同浓度的胆红素血浆均具有良好的吸附效果,功能基化交联壳聚糖吸附剂对胆红素的吸附率可达50.2%,BL-300吸附剂对胆红素的吸附率可达56.8%,与文献报道基本一致.结果证实,功能基化交联壳聚糖吸附剂血浆灌流清除胆红素效果明显且安全可靠,有望作为生物医用血浆灌流材料.     

人凝血因子Ⅷ新型离子交换树脂的筛选及吸附性能的研究

目的筛选对人凝血因子Ⅷ吸附效果较好的新型离子交换树脂,研究其吸附性能。方法将初始浓度为(20±1)IU/ml的冷沉淀提取液,恒温摇床振荡吸附2 h,测定吸附后上清液中蛋白浓度及FⅧ活性,通过蛋白吸附量及FⅧ活性吸附率,获得人FⅧ吸附效果较好的树脂;P-15与A-15树脂相同条件下吸附FⅧ,计算FⅧ的活性吸附率以及蛋白吸附量,考察树脂骨架对吸附的影响,同种方法考察树脂孔径大小对吸附的影响;测定吸附过程中吸附液中蛋白浓度的变化,得到吸附动力学曲线,从而确定吸附速率。分别改变A-15树脂用量、吸附温度、冷沉淀粗提液的pH值以及NaCl浓度,计算FⅧ的活性吸附率以及蛋白吸附量,考察树脂用量、温度、pH值、NaCl浓度对吸附的影响。结果 A-15树脂对FⅧ的活性吸附率为(78.76±4.2)%,蛋白吸附量(77.32±3.8)mg/g;A-15树脂未接基团时对FⅧ的活性吸附率为(12.34±5.6)%,蛋白吸附量为(18.68±5.3)mg/g;随着孔径的增大,树脂对FⅧ的活性吸附率和蛋白吸附量均为先增大后减小;树脂为1.25 g时,即可满足对FⅧ的吸附要求;吸附速率常速为0.003 56 g/mg.min;摇床温度为25～30℃、pH值为6.5～7.0、NaCl浓度为(0.1～0.2)mol/L时为较佳吸附条件。结论 A-15树脂对人凝血因子Ⅷ的吸附效果较好,在较佳吸附条件下,树脂对FⅧ的活性吸附率为78±4%,蛋白吸附量为(77±4)mg/g。     

新型树脂扩张床吸附分离PCC的工艺及其放大研究

目的优化新型离子交换树脂CG-6从人血浆吸附分离凝血酶原复合物的工艺并作放大研究。方法采用两因素两水平正交试验,优化筛选大孔阴离子交换树脂CG-6从人血浆中吸附分离PCC的保护剂;比较2种规模扩张床流体力学性能,研究吸附柱放大规律;考察该工艺生产PCC的回收率并分析成分。结果优化保护剂0.12 mol/L甘露醇+100 IU/L肝素条件下,FⅨ一次性洗脱回收率为(90.7±7.8)%,回收率提高41%。扩张床吸附柱放大效应小。ф25 mm柱洗脱液中杂蛋白少,FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ回收率分别为(72.6±4.9)%、(72.9±10.6)%、(70.4±6.16)%、(77.8±11.8)%。结论工艺优化后制备的PCC比活及均衡度均优于传统工艺制得的产品。     

尿液尿胆原定量法

尿液尿胆原测定技术Buttery等介绍用离子交换树脂在硷性条件下吸附尿胆原,去掉上液后,用醋酸液洗脱,以Ehrlich试剂显色,认为敏感性与特异性都有很大提高。我们用此方法作尿胆原定     

新生大鼠原代肝细胞四氯化碳损伤模型与叶下珠保肝活性成分的提取与初步分离

目的：采用大鼠原代肝细胞四氯化碳化学性损伤模型，结合四甲基偶氮噻唑蓝比色法的体外药理模型，对传统中草药叶下珠的活性成分进行提取和初步分离，追踪叶下珠保肝护肝的活性单体成分。方法：实验于2006—05／12在浙江大学药学院中药开发及评价重点研究实验室完成。①制备新生大鼠原代肝细胞四氯化碳损伤的药理模型。②叶下珠提取物的制备：采用水、体积分数为0.95的乙醇对叶下珠活性成分进行回流提取。③活性成分的初步分离：依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取；应用AB-8大孔吸附树脂分步洗脱法，即体积分数为0.1～0.9的乙醇洗脱。④采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法，通过保护率及增生指数，观察回流提取物、各萃取物及AB-8大孔树脂各洗脱部位对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞的保护作用。结果：①正丁醇萃取物对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞的保护率及其增生指数高于阳性对照槲皮素及其他各萃取物（P〈0．05-0．01）。②正丁醇萃取物中，体积分数为0.1，0.3，0.5的乙醇洗脱部分对大鼠四氯化碳损伤原代肝细胞具有保护作用，但体积分数为0.1的乙醇洗脱部分保护作用最强，显著高于阳性对照槲皮素及其他各处理组（P〈0．01），体积分数为0.1乙醇洗脱部分在剂量为200g／L时，保护率为64．43％，增生指数达到2．952。结论：叶下珠保肝护肝的有效部位为正丁醇萃取物中AB-8大孔吸附树脂体积分数为0.1的乙醇洗脱部分。但叶下珠中保肝的有效单体成分还没有确定，有待进一步实验证明。     

丹参水煎液纯化工艺的比较研究

目的对丹参水煎液的三种纯化工艺进行比较研究，优选最佳工艺。方法分别用超滤法、纳滤法、澄清剂法对丹参水煎液进行纯化，以提取液中有效成分转移率和干膏（固体物）得率两个考察指标作为评价标准。结果相比于纳滤法、澄清剂法两种纯化工艺，超滤法可明显提高目标物质转移率，同时有效降低出膏率。结论超滤法是丹参水煎液理想的纯化工艺。     

骨髓间充质干细胞成纤维样集落的培养方法及多向分化潜能

目的:建立原代小鼠骨髓间充质干细胞成纤维样集落的培养方法,了解间充质干细胞的培养特性及其多向分化潜能。方法:实验于2004-10/2005-10在郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所完成。①间充质干细胞的分离:选取SPF级2月龄昆明种小鼠30只,无菌条件下抽取双侧股骨、胫骨骨髓,制成骨髓单细胞悬液,计数有核细胞的密度。②血清浓度对成纤维样集落的影响:调整有核细胞密度为5×108L-1,分别接种于体积分数为0.02,0.05,0.1,0.15,0.2,0.25的胎牛血清-DMEM培养基中,每种血清浓度各4孔,1mL/孔,24h后换液。随后每72h换液,连续观察2周。③有核细胞密度对成纤维样集落的影响:分别调整有核细胞至106L-1,107L-1,2.5×108L-1,5×108L-1,109L-1,分别接种于12孔板中,每种密度4孔,24h后换液。随后每72h换液,连续观察2周,瑞氏吉姆萨染色后计数成纤维样集落的个数。④成骨与成脂肪诱导:调整有核细胞密度在5×108L-1,接种于预包被鼠尾胶的12孔板中培养。24h换液,去除未贴壁的细胞,以后每48h换液1次,换液后加入成骨诱导液、成脂肪诱导液。观察各血清浓度下细胞生长情况,消化培养板中的成纤维样集落流式细胞仪检测CD34,CD133,CD90,CD105。VonKossa和油红O法染色鉴定间充质干细胞成骨与成脂肪诱导情况。结果:①不同血清浓度对成纤维样集落形成的影响:胎牛血清-DMEM培养液体积分数为0.02,0.05时,细胞可保持成纤维样,但增殖较慢;体积分数为0.15,0.2,0.25时,细胞增殖较快,但细胞易分化;体积分数为0.1时,细胞可基本保持成纤维样,且增殖速度适中。②有核细胞不同接种密度对成纤维样集落形成的影响:有核细胞接种密度为106L-1,107L-1时,每孔成纤维样集落数为0～1个。接种密度高于109L-1时,每孔成纤维样集落之间出现交叉或融合。接种密度分别为2.5×108L-1,5×108L-1,109L-1时,10d左右可见典型的成纤维样集落。成纤维样集落个数与所接种有核细胞密度呈正相关。③成纤维样集落中的间充质干细胞表面标记流式检测结果:成纤维样集落中的间充质干细胞呈CD34-,CD133-,CD90 ,CD105 ,分别各占2.5%,3.1%,67%和78%。④间充质干细胞成骨与成脂肪诱导情况:成脂肪诱导2周后成纤维样集落中(80±7)%的间充质干细胞出现脂滴,成骨诱导2周后成纤维样集落出现矿物结节。分别以油红O和VonKossa’s矿化结节特异性染色后,成脂肪诱导中成纤维样集落(85±6)%的细胞胞浆呈红色,成骨诱导中大多数的成纤维样集落中心位置出现钙结节。结论:全骨髓接种合适密度的有核细胞可形成典型的成纤维样集落,且成纤维样集落具有成骨、成脂肪等多向分化潜能。     

人成釉蛋白C端肽的大量表达及纯化

目的:获得高纯度的重组人成釉蛋白C端肽。方法:实验于2001-01/2004-06在解放军第四军医大学口腔内科实验室解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学实验室完成。①转化pRSET-A/成釉蛋白原核表达质粒入BL21(DE3)细菌进行大量培养,加入诱导剂IPTG至终浓度为0.1mmol/L,32℃继续振荡诱导培养5h,收集细菌,诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱Ni-NTA结合蛋白,收集洗脱蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定。②离子交换层析缓冲液(pH 7.4,50 mmol/L Tris·Cl)平衡Q SapharoseHP层析柱,将初步纯化的蛋白样品加在Q Sapharose HP凝胶介质上,梯度洗脱结合的蛋白,收集洗脱峰,制样,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定洗脱蛋白。结果:①表达重组人成釉蛋白C端肽的金属螯合亲和层析结果:诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱下Ni-NTA结合蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳法电泳证实获得初步纯化的重组人成釉蛋白C端肽,其中仍含一些杂蛋白。②重组人成釉蛋白C端肽的离子交换层析结果:获得多个蛋白洗脱峰,聚丙烯酰胺凝胶电泳法证实获得纯化的重组人成釉蛋白C端肽。结论:获得了纯化的人成釉蛋白重组蛋白。     

中药红芪药材的鉴定及有效成分多糖的提取工艺

目的:探讨中药红芪药材的鉴定方法及红芪有效成分多糖的提炼工艺。方法:通过红芪的外形、切片及粉末显微等三种方式鉴定红芪的特征,比较水提醇沉法与碱浸提法提取多糖含量与得率。结果:(1)红芪外表呈红褐色,皮质坚韧,纹理清晰,味微甜,咀嚼无豆腥气味;(2)水提醇沉法最佳提取工艺条件为:温度80℃,固液比例1︰12,反复沉淀提取两次,1 h/次;(3)水提醇沉法提取的红芪多糖含量与得率明显高于0.3 mol/L、0.5 mol/L碱浸提法(P<0.05)。结论:通过外形、切片及粉末显微观察可掌握红芪特点,红芪水提醇沉法提取红芪多糖有效性高于碱浸提法,在今后的提取工艺中,可注重对综合性多指标提取工艺的深入研究。     

纯硅纳米孔材料AMS-8对溶菌酶的吸附和释放

背景:纳米介孔材料具有较高的比表面积、均一可调的孔径分布、规则的孔道结构和较强的吸附性能,是良好的酶固定化载体.目前对AMS材料的研究主要集中于合成和开发新材料方面,而对于生物分子的吸附、释放行为的研究还不多见.目的:筛选介孔材料AMS-8吸附释放溶菌酶的最佳条件,观察不同条件对酶吸附量及释放量的影响.方法:以阴离子表面活性剂为模板剂,3-氨丙基三甲氧基硅烷为助结构导向剂,水热法合成纯硅纳米孔材料AMS-8,结合小角度X射线粉末衍射和氮气吸附,脱附技术对合成的材料进行表征.改变酶溶液初始的浓度条件,测定吸附量的变化,在不同pH值的PBS洗脱液条件下测定释放量的变化.结果与结论:结果显示,AMS-8具有高度有序的立方孔道径结构,比表面积达到867 m2/g,孔道直径为3.4 nm.以溶菌酶为模型分子,首先观察了AMS-8在中性(pH=7)条件下,对不同质量浓度溶菌酶的吸附行为.研究发现,当溶菌酶质量浓度为0.5 g/L时,AMS-8的最大吸附量为136 mg/g.其次,观察了溶菌酶/AMS-8体系在不同pH条件下对溶菌酶蛋白的释放行为.结果表明对于溶菌酶蛋白纳米孔材料AMS-8表现出了良好的缓释效果,其中pH值对缓释行为具有良好的调控作用.     

HA中性大孔树脂血浆吸附治疗肝性脑病的疗效观察

目的　观察HA中性大孔树脂血浆吸附治疗重型肝炎肝性脑病的治疗效果 ,探讨肝性脑病新的治疗方法。方法　治疗组 4 3例肝性脑病患者 ,经HA血浆吸附治疗 91次 ,平均 2 1次 ,比较治疗前后肝性脑病严重程度、血常规、血氨、凝血功能等指标 ;以 32例同类病人作为对照组。结果　HA中性大孔树脂血浆吸附治疗Ⅱ°肝性脑病较对照组有差异 ,治疗Ⅲ°2 4h内肝性脑病较对照组也有显著性差异 ,对清除血氨有较好的治疗效果。治疗安全性方面 ,观察到血小板减少 ,但对血细胞、部分凝血功能指标、患者的血压等无明显影响。结论　中性大孔树脂血浆吸附治疗肝性脑病具有较好的应用价值 ,且具有安全性高的特点。     

响应面法优化人凝血因子Ⅸ肝素亲和层析条件研究

目的利用响应面法对肝素亲和层析在人凝血因子Ⅸ纯化中的纯化条件进行优化,确立最佳层析工艺参数。方法通过单因素试验分析上样温度对纯化效果的影响,三因素三水平响应面法优化层析洗脱条件,福林酚法和一期凝固法分别测定总蛋白含量和人凝血因子Ⅸ效价,以比活性指标以及工艺回收率评价层析纯化效果。结果优化的最佳层析条件为5℃上样,洗涤4 CV,洗脱液配方枸橼酸钠20 mmol/L、盐酸精氨酸18.7 mmol/L、NaCl 611.6 mmol/L、pH7.5;在此最佳层析参数条件下工艺回收率为(46.6±2.9)%,人凝血因子Ⅸ效价达到(68.4±4.7) IU/mL,比活性(62.8±3.3) IU/mg。结论经本研究优化的肝素亲和层析工艺参数可对人凝血因子Ⅸ的纯化起到很好的指引作用。     

亲和层析法纯化小鼠腹水来源的单克隆抗体的实验研究

目的建立从小鼠腹水中纯化抗CD28单克隆抗体(mAb)2F5的一步亲和层析方法。方法小鼠mAb腹水样品经离心过滤后,进行亲和层析柱纯化。分别对样品稀释倍数、上样流速、梯度洗脱体积对m A b纯度的影响进行检测。结果样品在稀释4倍以上、上样流速为1.0mL/min以及Gly-HCl(pH 2.7)一步洗脱条件下,可获得纯度大于90%的mAb 2F5,回收率为80%。结论该研究建立的一步亲和层析纯化方法操作简便,所得mAb的纯度和回收率较高。