蛋白质飞行质谱技术在严重急性呼吸综合征(SARS)早期诊断中的应用价值(英文)

目的探索蛋白质飞行质谱技术在严重急性呼吸综合征(SARS)早期诊断中的应用价值。方法用表面加强激光解吸电离质谱技术检测急性SARS组和对照组的血清,首先建立诊断模型,然后单盲进行模型验证。结果通过检测急性SARS组(74例)和对照组(147例)的血清,发现了早期SARS患者血清中质谱峰(M/Z)为3939.08、4137.71、8136.64、11514.20的4种特异蛋白指纹标志物,并建立诊断模型,此模型敏感性98.6%(73/74),特异性94.6%(139/147)。结论早期SARS患者有特异的蛋白指纹图谱,利用表面加强激光解吸电离质谱技术检测SARS患者或疑似SARS患者血清,可更好地协助临床进行SARS的早期诊治。     

肾癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型的建立

目的:筛选肾癌特异相关蛋白质,建立用于肾癌诊断的分类树模型,为进一步临床应用奠定基础。方法:采集肾癌患者48例与正常人83例血清,用表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱分别检测其蛋白表达谱,用BioMarker Wizard软件筛选出差异蛋白,再用BioMarker Patterns软件建立肾癌诊断最优分类树模型。结果:在48例肾癌患者、83例正常人血清中共检测出44个差异蛋白质峰,在质荷比从2 800到16 100的差异蛋白中有21个蛋白质相对含量差异有统计学意义(P<0.05),从中选出12个差异蛋白建立分类树模型,用于鉴别肾癌患者与正常人,该模型在学习模式下的诊断准确率、灵敏度和特异性分别为98.47%(129/131),97.91%(47/48),98.79%(82/83),在测试模式下这3项指标分别为87.02%(114/131),85.42%(41/48),87.95%(73/83)。结论:肾癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型具有一定优越性,为肾癌早期诊断提供了新途径。     

MALDI-TOF质谱在乳腺癌诊断及分型中的应用研究

目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术建立乳腺癌诊断预测模型，寻找乳腺癌血清中的差异蛋白质/多肽，鉴别区分三阴性乳腺癌（TNBC）与非三阴性乳腺癌（NTNBC）。方法 研究纳入61例乳腺癌患者、60例乳腺纤维腺瘤患者及44例健康体检者。按照 3∶1的比例随机分为训练组(乳腺癌患者 45 例，健康体检者对照 33 例)和验证组(乳腺癌患者 16 例，健康人对照 11 例)。弱阳离子交换磁珠（WCX-MB）提取血清蛋白质/肽后，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术检测并筛选出差异峰，构建诊断预测模型并初步验证。观察分析乳腺癌患者血清蛋白质谱分子变化。结果 ClinProTools软件提供了乳腺癌组与健康组的诊断预测模型。遗传算法（GA）模型的特异度为90.9%，敏感度为93.8%，准确度为92.6%。对纤维腺瘤组和对照组、乳腺癌组和纤维腺瘤组以及TNBC组和NTNBC组分别进行聚类分析，发现有显著差异峰可将其准确区分：差异峰m/z 4220.9、5920.36在纤维腺瘤组中的峰强度明显高于对照组，但其在乳腺癌组中的峰强度明显低于纤维腺瘤组；差异峰m/z 4220.9、5920.36在TNBC组中的峰强度明显高于NTNBC组。结论 应用MALDI-TOF-MS技术建立的乳腺癌诊断预测模型具有高敏感性、高特异性的特点，此技术可将乳腺癌患者从健康体检者和良性疾病人群中区分出来，还可用于区分乳腺癌的基因分型。     

血清蛋白质指纹图谱用于胃癌早期诊断的研究

目的:探讨血清蛋白质指纹图谱用于胃癌早期诊断的可行性。方法:用弱阳离子交换芯片蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术检测血清蛋白质指纹图谱。以30例胃癌(10例早期、14例进展期、6例伴远隔脏器转移)与30例正常对照为训练组建立早期胃癌决策树分类器模型,并用盲筛方法对未参加建模的27例胃癌患者及7例良性病、19例健康者进行验证。结果:初步建立了3个对早期胃癌诊断预警分类效果较好的模型,参加盲筛的9例早期胃癌患者均被准确鉴别,模型的总体敏感性96.3%,特异性73.1%～84.6%;阴性预测值94.7%～95.7%;阳性预测值78.9%～86.7%。结论:虽然本实验建立的用于胃癌患者早期诊断预警模型在与胃良性病鉴别上效果不理想,但可有效用于人群中的早期胃癌初步筛查,有进一步研究的价值。     

肺癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型的建立

目的建立肺癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型,探讨其对肺癌的诊断价值。方法收集127例肺癌患者、108例正常人血清标本,随机分成训练组(肺癌89例、正常人68例)与测试组(肺癌38例、正常人40例),应用表面增强激光解吸/电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)检测其蛋白质指纹图谱。用BioMarker Pattern软件分析训练组中肺癌与正常人血清中的差异蛋白后,建立肺癌诊断的最优分类树模型,然后用测试组血清标本盲法验证该模型的诊断效率。结果分类树诊断模型由质荷比分别为5 808、5 971和7 780的3种蛋白质组成。盲法验证显示,该模型诊断肺癌的准确率为92.3%,敏感性与特异性分别为92.1%(35/38)和92.5%(37/40)。结论肺癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型较以往的传统方法具有更高的敏感性与特异性,值得进一步研究。     

血清蛋白质谱模型对肝癌诊断的应用

目的应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)从肝癌患者血清中筛选标志蛋白,找出最佳的标志蛋白组合模式作为临床诊断指标。方法蛋白组学图谱通过表面增强激光解吸电离飞行时间质谱产生。对20例肝癌患者和60例健康志愿者、20例肝硬化的血清蛋白质谱进行反复分析寻找合理运算规则以确定能区分肝癌和健康志愿者与肝硬化患者的蛋白组学图谱。结果发现肝癌患者和肝硬化患者、健康对照组血清蛋白质指纹图谱之间有5个标志蛋白在肝癌患者血清中高表达,1个标志蛋白在肝癌患者血清中低表达。分析系统筛选出4477Da、8943Da、13761Da、4097Da标志蛋白建立起一个肝癌的诊断模型。结论SELDI-TOF-MS技术的特异性及敏感度远远高于目前所采用的某一单独的标志物的血清学诊断,其结果对进一步研究肝癌的蛋白质组学改变及其临床应用可能具有重要意义。     

应用金芯片技术预测肾功能损害的临床应用研究

目的探讨利用金(Au)芯片检测尿蛋白质指纹图谱在预测肾功能损害中的应用价值。方法利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及Au芯片检测186例肾病患者和188例对照者尿蛋白质指纹图,分析肾病患者与对照组尿蛋白质表达差异并筛选标志蛋白质,结合人工神经网络(ANN)技术建立智能预测模型,评价其诊断肾病的应用价值。对部分差异蛋白质通过电喷雾四级杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)进行鉴定。用免疫散射比浊法检测尿微球蛋白并与蛋白质指纹图谱结果比较,评价SELDI-TOF-MS检测性能。结果肾病患者与对照者尿中共检测到214个蛋白质峰,有69个蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05),筛选其中质荷比(m/z)11 735、23 770、51 720、58 720、67 650、80 045、91 240蛋白质建立的ANN模型预测肾功能损害的灵敏度为98.8%(85/86),特异度为96.6%(85/88)。蛋白鉴定结果表明m/z 11 735、23 770、67 650、80 045蛋白质分别为β2-微球蛋白、α1-微球蛋白、白蛋白、转铁蛋白。SELDI-TOF-MS检测微球蛋白较免疫散射比...     

慢性肾小球肾炎唾液蛋白质组无创伤分子诊断模型的研究

目的探讨液态芯片结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术筛选慢性肾小球肾炎(CGN)患者的唾液蛋白质标记物并建立诊断模型,为CGN临床诊断提供依据。方法采集43例CGN患者和45例健康体检者的唾液标本,采用液态芯片(WCX磁珠)制备唾液样品,并结合MALDI-TOF-MS质谱仪对唾液标本进行蛋白质检测,筛选出2组间特异性表达差异蛋白,并结合生物信息学方法建立诊断模型。结果比较2组唾液蛋白质指纹图谱数据,共获得116个差异有统计学意义的蛋白峰(P0.05),选择质荷比(m/z)为2 499.11、2 159.09、3 622.30Da的3个蛋白质峰用于构建最佳决策树模型,该诊断模型测试组总准确率为85.23%(75/88),灵敏度为83.72%(36/43),特异度为86.67%(39/45)。结论初步建立了CGN唾液蛋白质组诊断模型,为CGN的早期诊断提供了新的方法和途径。     

应用金芯片技术预测肾功能损害的临床应用研究

目的探讨利用金（Au）芯片检测尿蛋白质指纹图谱在预测肾功能损害中的应用价值。方法利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术及Au芯片检测186例肾病患者和188例对照者尿蛋白质指纹图,分析肾病患者与对照组尿蛋白质表达差异并筛选标志蛋白质,结合人工神经网络（ANN）技术建立智能预测模型,评价其诊断肾病的应用价值。对部分差异蛋白质通过电喷雾四级杆飞行时间质谱（ESI-Q-TOF）进行鉴定。用免疫散射比浊法检测尿微球蛋白并与蛋白质指纹图谱结果比较,评价SELDI-TOF-MS检测性能。结果肾病患者与对照者尿中共检测到214个蛋白质峰,有69个蛋白质峰差异有统计学意义（P〈0.05）,筛选其中质荷比（m/z）11 735、23 770、51 720、58 720、67 650、80 045、91 240蛋白质建立的ANN模型预测肾功能损害的灵敏度为98.8%（85/86）,特异度为96.6%（85/88）。蛋白鉴定结果表明m/z 11 735、23 770、67 650、80 045蛋白质分别为β2-微球蛋白、α1-微球蛋白、白蛋白、转铁蛋白。SELDI-TOF-MS检测微球蛋白较免疫散射比浊法更灵敏。结论基于Au蛋白芯片技术的尿蛋白质指纹图谱检测,可快速、灵敏、高通量的显示尿蛋白质表达情况,对诊断肾损伤、判断蛋白尿类型及治疗评价具有重要的应用价值。     

SELDI技术在乳腺癌淋巴结转移诊断中的应用研究

目的应用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术和蛋白芯片从乳腺癌患者血清中筛选出乳腺癌淋巴结转移的特异性蛋白标志物,为预测淋巴结转移提供更早且简单易行的方法。方法用SELDI-TOF-MS技术及IMAC-30蛋白芯片检测了39例发生淋巴结转移和45例未发生转移的乳腺癌患者的血清蛋白指纹图谱,采用Ciphergen Biomaker Wizard软件筛选差异表达蛋白,用SPSS17.0软件对数据进行统计分析。结果乳腺癌发生淋巴结转移组与未转移组相比共有31个差异蛋白峰(P<0.05),判别分析选出质荷比为4781、5329、5895、6012和8918的5个差异蛋白并评价其诊断效能,其中质荷比为4781的蛋白的诊断效能最高,灵敏度为84.62%,特异度为88.89%。结论 SELDI蛋白质谱技术在预测乳腺癌患者的淋巴结转移诊断方面具有一定的价值。     

Altered biochemical parameters in the saliva of patients with breast cancer

Saliva plays an important role in the protection of oral cavity and alterations in either salivary flow rate or protein composition may have dramatic effects on oral health. Prevention and management of oral complications of cancer and cancer therapy will improve oral function and quality of life, and reduce morbidity and the cost of care. The aim of this study was to investigate the saliva of patients with breast cancer biochemically and cytologically and compare with healthy controls. Accordingly, lipid peroxidation (LPO), total protein, salivary flow rate, and pH levels were measured in the saliva samples obtained from 20 breast cancer patients and 11 healthy individuals. Tissue factor (TF) is a major regulator of normal hemostasis and thrombosis, and TF activity of saliva samples was evaluated. Under the conditions used, patients with breast cancer present a significant reduction in total protein, pH and LPO levels. Salivary TF activity was higher in breast cancer patients than that in control subjects, but the degree of increase was not statistically significant. In addition, the analysis of saliva samples by SDS polyacrylamide gel electrophoresis showed the retarded mobility of the 66-kDa proteins and the increased proteins of about 36 kDa in the patient group. Some patients with breast cancer had increased number of leucocytes. Importantly, dysplastic cells and yeast cells were detected only in saliva samples of cancer patients. Decreased salivary LPO may be considered as a risk factor for breast cancer.     

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱联合磁珠技术寻找肺癌血清蛋白标志物

  目的  建立肺癌蛋白质指纹图谱诊断模型, 探讨用于肺癌早期诊断及手术疗效评估的血清蛋白标志物。  方法  收集38例肺癌患者、12例肺部良性肿瘤患者及32名正常对照者的血清标本, 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)联合磁珠技术, 获得蛋白质指纹图谱, 采用BPS分析软件对数据分组及相关性进行分析, 初步建立肺癌的血清蛋白质指纹图谱诊断模型, 并验证其诊断效率; 同时对比肺癌患者手术前后的差异蛋白质谱, 结合肺癌的诊断模型, 选取合适的蛋白作为肺癌手术疗效的观察指标。  结果  在质荷比为1000~50 000范围内, 肺癌患者、肺部良性肿瘤患者和正常对照者之间共检测到215个蛋白质峰。其中, 质荷比为1115.37、1929.70、3217.57、3246.34、3318.57、11 508.90的6个蛋白质峰表达差异具有统计学意义(P < 0.05)。决策树模型对肺癌的原始判别敏感性为92.11%(35/38), 特异性为90.91%(40/44);交叉验证敏感性为86.67%(13/15), 特异性为86.67%(13/15)。其中质荷比为1115.37、1929.70、3246.34和11 508.90的蛋白质峰在肺癌患者中明显升高(P < 0.05), 当肺癌患者手术治疗后表达量较术前明显降低(P < 0.01), 表明这4个蛋白质峰对肺癌的诊断及疗效判定具有潜在应用价值。  结论  应用SELDI-TOF-MS技术建立的肺癌血清蛋白质指纹图谱诊断模型具有较高的敏感性和特异性, 为发现肺癌早期生物标志物并判断疗效奠定基础。     

乳腺癌细胞膜蛋白的SELDI-TOF-MS分析

目的比较乳腺癌细胞株和正常乳腺上皮细胞膜蛋白指纹图谱,为乳腺癌亚细胞蛋白组学的研究奠定基础。方法试剂盒提取两株乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MCF-7及一株乳腺正常上皮细胞HBL-100的膜蛋白,SEL-DI-TOF-MS分析蛋白指纹图谱,寻找差异蛋白。结果在分子量2kD-100kD范围内3株细胞均可检测到近100个蛋白点,MDA-MB-231和MCF-7与HBL-100相比,膜蛋白差异点分别为32个和34个(P<0.05),其中7.8kD,8.3kD和8.8kD的蛋白在两株癌细胞中表达均降低,9.6kD的蛋白在两株癌细胞中表达均增高。结论 SELDI-TOF-MS可以快速灵敏地检测到乳腺癌亚细胞蛋白水平的差异,为乳腺癌早期诊断提供依据。     

食管鳞癌血清WCX2蛋白芯片诊断模型的研究

目的　分析食管鳞癌血清蛋白表达谱的改变 ,筛选并建立食管鳞癌血清标志物诊断模型。方法　采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱 (SELDI TOF MS)技术分析 199例食管鳞癌患者和 10 6名性别、年龄匹配的健康人血清 ,获得WCX2蛋白芯片表达图谱。用BiomarkerPattern软件分析食管癌差异蛋白并初步建立诊断模型。扩大样本量 ,通过盲法分析进一步验证诊断模型。结果　在分子量 0～ 5 0 0 0 0范围内 ,共检测到 92个差异蛋白峰 ,其中 34个差异有显著意义 (P <0 0 5 )。建立了由 12个差异蛋白组成的食管鳞癌诊断模型 ,其敏感性为 91 5 % (5 4 / 5 9) ,特异性为86 9% (5 3/ 6 1)。扩大样本盲法验证结果其敏感性为 85 % (119/ 14 0 )、特异性为 84 4 % (38/ 4 5 )。结论　由 12个差异表达蛋白及其特定组合构成的诊断模型可以区分食管鳞癌与健康人     

3种乳腺癌相关基因联合检测在乳腺癌诊断中的应用

目的建立荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测细胞角蛋白19（CK19）、C-erbB2和核内原癌基因（c—myc）表达水平，探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法，并以β2-微球蛋白（β2-MG）为内对照，测定15例健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和81例乳腺癌患者外周血中CKl9、C—erbB2和c—myc的表达量。结果CK19、CerbB2和e-myc表达水平在健康对照组与良性乳腺疾病组间差异无统计学意义（P〉0．05），乳腺癌组均高于前两组（P〈0．05），β2-MG在三组间差异无统计学意义（P〉0．05）。CK19、C-erbB2和c—myc联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论FQ-PCR技术是高度灵敏、特异的快速定量检测CK19、C—erbB2和c-myc的方法，三者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的灵敏度。     

血清TK1、TPS、CA15-3联合检测在乳腺癌诊断中的临床价值

目的 探讨血清胸苷激酶1(TK1)、特异性组织多肽抗原(TPS)、糖类抗原15-3(CA15-3)联合检测在乳腺癌诊断中的临床价值.方法 采用免疫印迹-增强化学发光法对乳腺癌组(69例)、乳腺良性疾病组(52例)、健康对照组(48例)血清TK1进行检测,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对血清TPS进行检测,采用化学发光法对血清CA15-3进行检测,并对检验结果进行统计学分析.结果 乳腺癌患者血清TK1、TPS、CA15-3水平均显著高于乳腺良性疾病组与健康对照组(P＜0.01),3项指标联合检测的敏感性显著高于单项检测或2项联合检测(P＜0.05).结论检测血清TK1、TPS、CA15-3水平,对乳腺癌的诊断具有重要的价值,3种标志物联合检测能明显提高乳腺癌诊断的敏感性.     

荧光定量PCR检测血清微小RNA-21方法的建立及对乳腺癌诊断的初步应用

目的 建立一种SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,并初步探讨其对乳腺癌诊断的应用价值.方法 用Trizol试剂提取血清总RNA.用茎环引物将miR-16(作为miR-21内参基因)与miR-21分别逆转录成相应cDNA.再用SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR对cDNA进行扩增、检测.然后,通过信噪比(signal to noise ratio,SNR)分析试验的准确性;通过熔解曲线评价试验的特异性;通过标准曲线的R2评估试验的精确性;通过批内和批间差异计算试验的稳定性.另外,用自建方法检测33例乳腺癌患者、18例乳腺良性疾病和49名健康人群血清miR-21和miR-16水平,并根据乳腺癌组与健康对照组中miR-21相对表达量确定临界值,以评价其对乳腺癌诊断的敏感度、特异度.结果 通过PCR退火与延伸在温度和时间上的优化,本试验所建立方法SNR≥99.36％;熔解曲线为单峰;标准曲线R3=0.994 8;批内CV＜ 1.5％,批间CV＜ 4％.以miR-16为内参,用自建SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测乳腺癌组、良性疾病组与健康对照组血清miR-21的相对表达量分别为20.83±18.18、20.86±10.11和9.33±4.44,经Kruskal Wallis检验,3组间表达量差异有统计学意义(x2=16.92,P＜0.001),且健康对照组与乳腺癌组、健康对照组与良性疾病组间的差异均有统计学意义(Z值分别为-2.58、-4.42,P均≤0.01),而乳腺癌组与良性疾病组血清miR-21表达量差异无统计学意义(Z=-0.51,P=0.608).以miR-21相对表达量18.32为临界值,其对乳腺癌诊断的敏感度为51.5％(17/33),特异度为93.9％(46/49).结论 建立了一种较敏感、特异、稳定的SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR检测血清miR-21方法,该方法对乳腺癌的诊断可能有一定价值.     

血清survivin定量检测在乳腺癌诊断中的临床价值

目的探讨血清生存素(survivin)测定在乳腺癌诊断中的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测健康对照组(22例健康体检者)、乳腺癌患者无转移组(24例)和乳腺癌患者有远处转移组(32例)血清survivin蛋白的表达水平。结果健康对照组血清survivin表达水平为0.31±0.06 ng/ml;无转移的乳腺癌患者sur-vivin表达水平为0.49±0.05 ng/ml;有转移的乳腺癌患者survivin表达水平为1.02±0.18 ng/ml。统计软件分析显示与健康对照组相比,survivin在乳腺癌患者(包括无转移组和转移组)的表达升高(P<0.01);而乳腺癌转移组中survivin的表达明显高于无转移组(P<0.01)。结论血清survivin的蛋白质表达的定量检测可作为乳腺癌发生和转移的预警指标之一。