多发性骨髓瘤免疫表型特征及其意义

本研究探讨多发性骨髓瘤细胞的免疫表型特征及其意义。采用流式细胞仪多参数直接免疫荧光技术、CD45/SSC设门,对31例多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞标记CD138、CD38、CD56、CD117、HLA-DR、CD3、CD7、CD13、CD33、CD19、CD20、CD22、CD34进行检测,并辅以瘤细胞的形态学检查。结果表明:形态学检查观察到瘤细胞比例为10%-68%,CD45/SSC设门证实可疑瘤细胞比例为9.72%-67.77%;抗原阳性表达比例分别为CD13861.29%,CD38 100%,CD56 46.15%,CD13 70.00%,CD33 29.03%,HLA-DR74.19%,CD117 33.33%,其余抗原均为阴性表达。结论:CD45/SSC设门技术可以较准确地设定需要分析的多发性骨髓瘤细胞群,与形态学分类瘤细胞的比例相接近;瘤细胞以表达CD138、CD38、CD56抗原为主,部分患者可伴有髓系抗原CD13、CD33、CD117表达,有关这些抗原表达的生物学意义尚待进一步研究。     

多发性骨髓瘤患者免疫表型特征分析

目的:探讨初诊多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者免疫表型特征在诊断中及预后的应用价值。方法:采用流式细胞仪多参数直接免疫荧光技术,CD45/SSC设门,对34例初诊多发性骨髓瘤患者的浆细胞表面CD38、CD138、CD19、CD20、CD28、CD56、CD117及胞内抗原c Kappa、c Lambda进行检测。同时对10例对照组浆细胞反应性增多患者的浆细胞进行免疫表型检测。比较异常浆细胞和正常浆细胞免疫表型情况。根据临床检测β2-微球蛋白(β2-MG)及血清白蛋白(Alb)进行分期,经预后分期,比较Ⅱ期、Ⅲ期MM患者的抗原免疫表型情况。分析浆细胞表面CD56表达与反映MM疾病进展指标β2-微球蛋白(β2-MG)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清白蛋白(Alb)、肌酐(Cr)、血钙(Ca2+)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)的相关性。结果:异常浆细胞高表达CD38(100%)、CD138(94.1%),而CD56+(67.6%)、CD117+(29.4%)、CD19+(5.8%)、CD20+(14.7%)、CD28+(17.6%)、CD45+(14.7%)及单克隆轻链表达(97%)相对常见。MM组与对照组CD56阳性率(67.6%vs10%)、CD19阳性率(5.8%vs 100%)及CD45阳性率(14.7%vs 100%)间差异有统计学意义(P均0.01)。MM浆细胞典型免疫表型为CD38++CD138+CD56+CD19-CD45-/dim,而正常浆细胞为CD38++CD138+CD56-CD19+CD45+。经预后分期,Ⅱ期、Ⅲ期患者抗原CD45、CD38、CD138、CD56、CD19、CD117、CD20、CD28表达间差异均无统计学意义(P均0.05)。MM患者CD56阳性率与LDH水平呈负相关(P0.01);与血小板计数(PLT)水平呈正相关(P0.01)。结论:MM具有独特的免疫表型特征,通过流式细胞术进行免疫表型分析对MM的诊断及预后判断有重要价值。     

3种设门方法在多发性骨髓瘤免疫表型分析中的应用比较

目的探讨CD45/SSC、CD38/SSC及CD45/CD38 3种设门方法在多发性骨髓瘤(MM)免疫表型分析中的应用价值,并分析不同免疫表型与反映MM疾病进展的实验室指标的相关性。方法采用CD45/SSC、CD38/SSC、CD45/CD38 3种设门方法的多色流式细胞术,对20例初诊MM患者浆细胞表面CD138、CD56、CD117、CD13、CD19等的表达情况进行检测,比较不同检测方法间的差异。另仅使用CD38/SSC设门术,对44例初诊MM患者及12例对照组患者浆细胞进行免疫表型检测,分析浆细胞表面各CD抗原表达与反映MM疾病进展指标血红蛋白(Hb)、清蛋白(Alb)、肌酐(Cr)、β2-微球蛋白(β2-MG)、C-反应蛋白(CRP)及乳酸脱氢酶(LDH)的相关性。结果 CD38/SSC、CD38/CD45设门组CD56、CD138表达率均明显高于CD45/SSC组(P0.05),CD38/SSC与CD38/CD45设门间各CD抗原表达率差异无统计学意义(P0.05)。CD138阳性率在CD45/SSC设门组明显低于CD38/SSC及CD45/CD38组(P0.05),余各组间CD抗原阳性率差异无统计学意义(P0.05)。使用CD38/SSC设门术时,MM组与对照组CD56阳性率(70.5%和8.3%)及CD19阳性率(13.6%和100%)间差异有统计学意义(P均0.01)。MM浆细胞典型免疫表型为CD38++CD138+CD56+CD19-,而正常浆细胞为CD38++CD138+CD56-CD19+。CD56+MM患者清蛋白降低的发生率明显高于CD56-MM患者(71.0%vs 38.5%,P0.05),CD13+MM患者比CD13-患者更易出现LDH异常增高(50.0%vs 13.9%,P0.05)。Spearman相关性分析显示,MM患者CD56表达率与Cr水平呈负相关(r=-0.353,P0.05),CD13表达率与LDH水平呈正相关(r=0.359,P0.05),其他CD抗原表达与Hb、Alb、Cr、β2-MG、CRP及LDH水平无明显相关性(P0.05)。结论流式细胞术中采用不同设门方法圈定浆细胞的有效性不同,CD38/SSC及CD45/CD38设门明显优于CD45/SSC设门,常规临床检测可使用CD38/SSC设门技术。MM具有独特的免疫表型特征,选用恰当方法进行免疫表型分析对MM的辅助诊断及预后判断有重要价值。     

CD138/Syndecan-1在多发性骨髓瘤免疫表型中的意义

为了建立多发性骨髓瘤（MM）免疫分型的测定方法,分析各种抗原的表达特点,并分选高纯度原代骨髓瘤细胞,应用CD45/侧向角（SSC）设门的三色免疫荧光流式细胞术（FCM）测定18例MM患者、20例急性白血病（AL）患者和7例正常人骨髓免疫分型特点;应用抗CD138和免疫磁珠从MM患者的骨髓中分选骨髓瘤细胞.结果表明：骨髓瘤细胞CD45阴性或弱阳性,SSC介于有核红细胞和中性粒细胞之间,CD138和CD38均阳性,T、B细胞及髓系抗原多为阴性,CD56阳性率为83.3%,HLA-DR阳性率为44.4%.与MM患者相比,AL患者CD138均阴性,而CD38为100%阳性,CD56阳性率为25%.正常人CD138和CD56均为阴性.磁珠分选获得的原代骨髓瘤细胞纯度在73%-95%之间,平均为86%.结论：CD45/SSC设门的三色免疫荧光FCM是测定MM免疫分型的稳定可靠方法,CD138是骨髓瘤细胞表面较为特异的抗原标志,应用抗CD138和免疫磁珠可以获得高度富集的原代骨髓瘤细胞.     

多发性骨髓瘤免疫表型及胞浆轻链检测的临床意义

目的研究多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞的免疫表型特点及胞浆内轻链的表达。方法采用四色流式细胞仪,用CD45-APC/SSC及CD38/CD56联合设门,对45例MM患者的骨髓标本进行CD38、CD56、CD19、CD138、CD45、轻链（κ链、λ链）及胞浆内轻链（cκ链、cλ链）的检测。结果 45例骨髓瘤患者中分泌型为37例（其中IgG型为27例,IgA型为10例）,轻链型为5例（λ链型4例,κ链型1例）,不分泌型3例,其免疫表型出现的频率为：其中表型为CD38＋CD56＋CD19-CD45-：分泌型为37/37（100%）,轻链型2/5（40%）,不分泌型0/3（0%）,表型为CD38＋CD56-CD19-CD45-：轻链型3/5（60%）,不分泌型3/3（100%）,CD138＋：45/45（100%）,膜表面轻链（κ链、λ链）：0/45（0%）,胞浆轻链（cκ链、cλ链）：45/45（100%）,其中分泌型：cκ链10/37（27%）;cλ链：27/37（73%）;轻链型：cκ链1/5（20%）;cλ链：4/5（80%）;不分泌型：cκ链1/3（33%）;cλ链：2/3（67%）。结论用流式细胞术分析多发性骨髓瘤的细胞免疫表型及胞浆轻链的表达对骨髓瘤的临床诊断有很大的帮助,特别是对不分泌型的骨髓瘤诊断的临床价值更大。     

多发性骨髓瘤的免疫表型特征的研究进展

采用流式细胞术研究多发性骨髓瘤（MM）的免疫表型特征,浆细胞特异标志物有CD38、CD138和CD56,其中CD138对MM患者骨髓浆细胞浸润的评估有临床价值,CD56有望可作为多发性骨髓瘤早期预测病程进展及预后的指标。髓系抗原CD117和CD33的表达可能与MM的预后相关。CD28的表达与MM疾病进展存在相关趋势。采用多参数流式细胞术监测微小残留病灶可考虑作为MM独立的预后因素。     

多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤及其微小残留疾病的免疫表型分析

目的探讨多参数流式细胞术(MFC)在多发性骨髓瘤患者初诊和微小残留疾病的检测意义。方法采用多参数流式细胞技术,通过CD138或CD38抗原标记识别74例多发性骨髓瘤患者的浆细胞,联合CD45、CD56、CD19、CD20、CD117表面抗原标记及胞浆Kappa和Lambda轻链鉴别异常骨髓瘤细胞。结果 44例初诊病例中,CD138在可检测的病例中均呈阳性表达,同时CD19阴性,42例病例(95%)CD45阴性或弱阳性,其他表面抗原标记CD38、CD56、CD20、CD117的检测率分别为98%、93%、45%、41%,胞浆Kappa和Lambda轻链均呈限制性克隆型表达。14例病例用于评估初诊及治疗过程中免疫表型的变化,其中11例病例(79%)出现至少1个及以上异常表型的变化,4例(29%)病例化疗后抗原标记荧光强度显著增加,7例(50%)病例荧光强度显著降低。CD45、CD19、胞浆免疫球蛋白轻链为最稳定的标记,未见显著抗原标记的变化,2例CD38(14%)、7例CD56(50%)、4例CD20(29%)及2例CD117(14%)病例呈现显著的抗原密度的变化。30例已治疗病例用于评估MRD的免疫表型,其中25例检测出异常的瘤细胞,5例病例未见显著的限制性轻链克隆型表达,Kappa与Lambda比值在0.5~2,认定MRD阴性。结论流式细胞术用于多发性骨髓瘤的诊断疗效及预后的判断具有重要意义,采用胞浆免疫球蛋轻链的检测可提升微小残留检测的正确性。     

52例多发性骨髓瘤患者细胞免疫表型分析

目的探讨52例多发性骨髓瘤患者细胞免疫表型的特点。方法采用流式细胞仪,以CD45/SSC配合CD38+/CD138+联合设门,对52例多发性骨髓瘤患者的骨髓细胞进行CD38、CD138、CD19、CD56、CD117、CD200标记检测,并进行骨髓细胞形态学检查。结果流式细胞术检测多发性骨髓瘤患者骨髓细胞中骨髓瘤细胞比例为0.2%～52.9%,而在细胞形态学检查中,发现骨髓瘤细胞比例为2.0%～85.5%,但两种方法检测结果之间具有良好的相关性(R2=0.686 4,P0.05)。多发性骨髓瘤细胞各免疫表型阳性率如下:CD38为100.00%(52/52),CD138为100.00%(52/52),CD19为9.62%(5/52),CD56为80.77%(42/52),CD117为40.38%(21/52),CD200为26.92%(14/52)。其中CD56在两种轻链型和不同类型免疫球蛋白中的表达差异均有统计学意义(P0.05)。结论κ链型患者CD56的阳性率比λ链型低,CD56的阳性率在IgM型中最低。在筛选细胞方面,流式细胞术比细胞形态学更灵敏,但细胞形态学检查的骨髓瘤细胞结果比流式细胞术结果更准确。     

多参数流式细胞术测定多发性骨髓瘤细胞免疫标记的研究

本研究探讨多发性骨髓瘤(MM)的免疫表型特征及其意义。采用多参数流式细胞术直接免疫荧光技术,CD38/SSC设门,对33例MM患者及12例浆细胞反应性增多症患者的骨髓标本进行免疫分型检测,并辅以瘤细胞的形态学检查。结果表明:形态学检查观察到瘤细胞比例为6.0%-76.0%;流式细胞术CD38/SSC设门后可见到一群CD38强阳性细胞,比例为0.99%-57.54%;多数MM细胞表型为CD38st+CD138+CD19-CD56+(78.8%),部分患者伴有CD20(12.1%)、CD33(15.2%)、CD117(30.3%)、HLA-DR(9.1%)抗原表达,其余抗原表达均为阴性;27例(81.8%)MM患者检测到cκ或cλ的单克隆限制性,其余cκ及cλ均为阴性。结论:利用CD38/SSC设门方法的流式细胞术对MM进行免疫分型,根据细胞表面抗原的异质性,可鉴别良性或恶性浆细胞,为判断预后及靶向治疗提供依据。     

116例多发性骨髓瘤免疫特征表型分析

目的了解多发性骨髓瘤(MM)的免疫表型特征,以及CD45、CD19与临床特征的相关性。方法采用三色流式细胞术对116例初诊MM病例进行免疫表型分析,并收集患者的实验室和临床指标。结果 116例MM均表达CD38,其他抗原CD19、CD138、CD56、CD20、CD33、CD117、CD45的阳性率分别为10.3%、96.6%、60.7%、3.4%、70.0%、25.6%、17.2%,无1例表达CD7、CD34。在116例MM中,胞浆κ轻链阳性率为34.5%,λ轻链阳性率为48.3%。CD45阳性患者分期较好,其表达缺失患者易出现骨破坏,微球蛋白、C反应蛋白水平较高;CD19表达与高分期有关,易出现贫血,微球蛋白、C反应蛋白水平较高。结论了解MM的免疫表型特点对此类疾病的诊断具有重要意义,其中CD45、CD19与分期等临床生物学特征有关,有助于判断预后。     

流式细胞术在多发性骨髓瘤诊断中的应用

目的探讨流式细胞术免疫分型在多发性骨髓瘤（MM）诊断中的价值。方法应用多参数流式细胞仪检测35例MM和10例继发性单克隆免疫球蛋白血症骨髓细胞免疫表型。结果 35例MM患者表达CD38、CD138强阳性,平均荧光强度（MFI）分别为695.2±120.69、56.23±436.2。CD45阴性或弱阳性。33例MM患者CD19阴性。32例MM患者表达CD56强阳性,MFI为779.9±241.0。10例继发性单克隆免疫球蛋白血症患者表达CD38、CD138强阳性,MFI分别为621.3±82.8、549.6±132.7。CD45表达均阳性。8例患者CD19阳性。CD56均阴性,MFI为24.61±13.1。MM患者CD44表达荧光强度明显高于继发性单克隆免疫球蛋白血症（P〈0.01）。结论应用多参数流式细胞仪检测细胞表面CD38、CD138、CD19、CD56、CD45、CD44抗原表达情况,可方便区分骨髓瘤和良性浆细胞,是MM的重要诊断依据。     

CD56在急性髓系白血病细胞上的表达及微小残留病分析

目的探讨CD56在非M3急性髓系白血病（AML）中的表达及在微小残留病（MRD）检测的意义。方法应用流式细胞术分析145例非AML-M3 AML患者免疫表型,以CD56、CD19、CD117、CD34、CD33为标志,CD45设门MRD分析。结果 145例AML患者中CD56阳性37例,占25.52%,CD19阳性17例,占11.72%,分布在M1、M2、M4、M5。CD56或/和CD19阳性的AML患者共49例,其中CD56和CD19同时阳性5例,均为M2亚型。P170蛋白阳性36例,占24.83%,其表达率与CD56呈显著正相关（P〈0.01）。48例AML患者在诱导治疗结束和维持治疗第14、32、56周作MRD检测。单纯CD56＋组MRD阳性率93.55%,复发率77.41%,与单纯CD19＋组（MRD阳性率25.00%,复发率0）比较,差异有统计学意义（P均〈0.01）。CD56＋CD19＋组MRD阳性率100.00%,复发率80.00%,与单纯CD56＋组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,与单纯CD19＋组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 CD56、CD19在非M3 AML有较高的表达率。用CD45设门以CD56、CD19、CD34、CD117、CD33为组合的MRD方案能有效检测MRD。     

CD7阳性急性髓系白血病骨髓干／祖细胞5个基因表达的研究

本研究探讨abca5、mdr-1、kdr、dapk和irf-1 5个基因在CD7^＋急性髓细胞性白血病干／祖细胞的表达。利用实时定量RT—PCR（RQ—PCR）方法检测了15例正常骨髓（NBM）和16例AML患者骨髓单个核细胞（MNC）中5个基因的表达。采用流式细胞仪（FCM）分选8例NBM和21例AML患者骨髓CD34^＋CD38^＋祖细胞和CD34^＋CD38-干细胞,利用微量细胞RQ—PCR方法检测分选细胞中5个基因的表达。结果表明：NBMMNC均表达这5个基因,其中irf-1与dapk表达水平最高,相对表达量分别为4．08和3．86;abca5和mdr-1表达水平较低,为0．49和0．84;kdr表达最低为0．02。在经分选的CD34^＋CD38^＋祖细胞中,dapk和irf-1表达明显减低（P〈0．05）,kdr表达明显增加（P〈0．05）,其余2个基因无明显变化。在CD34^＋CD38^＋Lin-干细胞中,5个基因的表达均高于CD34^＋CD38^＋祖细胞,普遍增加至近2倍,而kdr增加了3倍,其中kdr和irf-l表达的增加具有统计学差异（P〈0．05）。与NBM相比,AMLMNC中5个基因的表达水平均有不同程度减低,以abca5、mdr-1、kdr和dapk最为显著（P〈0．05）。与AMLMNC相比,AMLCD34^＋CD38^＋细胞中,irf-1和dapk表达明显减低（P〈0．05）,其余3个基因表达增加,以kdr表达增加有统计学意义（P〈0．05）。AMLCD34^＋CD38^＋与CD34^＋CD38^-细胞比较,发现5个基因在CD34^＋CD38^＋细胞中的表达均增加,尤以kdr和irf-1的表达增加有意义（P〈0．05）。AMLCD34^＋CD38^＋CD7^＋细胞与CD34^＋CD38^-CD7-细胞中5个基因的表达均比CD34^＋CD38^＋细胞中的高,其中只有CD34^＋CD38^- CD7^＋细胞中KDR和CD34^＋CD38^-CD7^-细胞中KDR和irf-1的表达增加并具有统计学差异（P〈0．05）。结论：NBM中kdr主要表达在干／祖细胞中,而dapk和irf-1主要表达在较分化的细胞中。5个基因在干细胞阶段的表达均高于祖细胞阶段。AMLCD34^＋CD38^-CD7^＋细胞与CD34^＋CD38^＋CD7^-都具有干／祖细胞的基因表达特点。     

成人Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病免疫表型特征分析

本研究旨在了解成人Ph染色体阳性（Ph^＋）的急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型特征,并初步探讨其在预测疾病预后和指导临床治疗中的价值。应用多参数流式细胞仪（MFC）技术对35例Ph^＋ALL和59例Ph—ALL患者的标本（骨髓或外周血）进行细胞免疫表型检测,并分析其异常表达。结果显示：所有Ph^＋ALL均为B淋系表达;Ph^＋B—ALL患者CD34和CD13表达较Ph—B—ALL显著增高（P〈0．05）,而CD38表达较Ph—B—ALL明显减低（p〈0．05）;两组患者伴髓系表达比例分别为85．7％和61．O％,Ph^＋B—ALL组显著增高（P〈0．05）,表达的髓系抗原主要为CD13和／或CD33。结论：Ph^＋ALL存在较为特征性的免疫表型,在成人B—ALL中CD34、CD13和CD38的免疫表型分析有助于提示存在Ph染色体的可能,对于存在上述特征性免疫表型的成人ALL患者应进行bcr／abl融合基因检测。以上特征性免疫表型将有助于临床上对这组疾病进展迅速、预后差的亚型患者进行预测,并指导一临床个体化治疗。     

流式细胞术联合检测骨髓细胞CD271、CD133、CD34的表达与分析

本研究检测骨髓细胞的CD271、CD133和CD34的表达,分析细胞表达CD271与CD133及CD133与CD34的相关性。根据不同设计组合用CIN5-PerCP、CD271-PITC、CD133-PE和CD34-FITC标记骨髓细胞,获得细胞后以FSC、SSC和CD45反复对细胞群进行定位和筛选,然后用流式细胞术检测骨髓细胞和骨髓单个核细胞（MNC）的上述表达。结果表明,骨髓细胞CD271^＋、CD133^＋和CD34^＋表达率分别为0．16％、0．20％和0．43％,骨髓单个核细胞分离后CD271^＋、CD133^＋和CD34^＋表达率分别0．49％、0．47％和1．07％;骨髓细胞的CD271^＋CD133^共表达率为0．02％,单个核细胞分离后的CD271^＋CD133^＋的共表达率为0．03％。90％CD133^＋细胞表达CD34,40％CD34^＋细胞表达CD133。结论：建立的三色荧光联合检测方法可作为检测骨髓中CD271^＋,CD133^＋和CD34^＋细胞的方法。CD271阳性细胞与CD133和／或CD34阳性细胞是不同的细胞群,CD271可能在评价和指导骨髓间充质干细胞的临床治疗中有重要意义。