线状溶酶体及其细胞生物学特性

线状溶酶体是近年来发现的一种细长形状的溶酶体，人们先后运用生化方法，电镜观察技术，电镜酶细胞化学、免疫电镜、免疫荧光、细胞培养技术分别在哺乳类动物的外分泌腺腺泡细胞，巨噬细胞，肝细胞，肌细胞，中枢神经元等２０多种细胞中，报导了线状溶酶体的存在及分布特点。本文回顾了线状溶酶体的发现过程，综述了线状溶酶体的形态结构和功能特点及诱导线状溶酶体形成的因素、线状溶酶体的形成和细胞内外环境的关系，保证线状溶酶体结构完整的因素，指出线状溶酶体和圆形溶酶体之间形成溶酶体三维网络系统，细胞骨架系统在调节线状溶酶体的分布和运动方面的重要作用。本文也综述了内吞体和线状溶酶体是参与膜循环途径的２个阶段。但线状溶酶体的细胞生物学特性尚在深入探讨中。     

大鼠胃肌间神经丛神经元NLY的电镜观察

目的：研究大鼠胃肌间神经丛神经元中线状溶酶体及其生物学特性。材料与方法：用电镜酶细胞化学方法对大鼠胃肌间神经丛神经元进行超微结构观察。结果：显示大鼠胃肌间神经丛神经元中存在线状溶酶体其酶活性与圆形溶酶体类似。结论：本次研究结果为研究人的消化管肌间神经丛神经元中线状溶体的存在及其生物学特性提供了依据。     

大鼠空肠肌间神经丛NADPH—黄递酶的光镜及电镜观察

用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学染色及电镜技术对正常成年大鼠空肠肌间神经丝的ＮＤＰ分布进行观察。结果显示，ＮＤＰ阳性产物为蓝色，分布于神经元胞浆中，核不着色，电镜下，ＮＤＰ阳性产物为中等电子密度，呈斑块或点状均匀分布或散在于神经元胞浆中，常靠近核膜和粗面内质网，但未发现与特定的细胞器或突触小泡有特殊的定位关系。     

牛脊髓前角匀浆皮下注射损伤豚鼠脊髓运动神经元

目的探讨牛脊髓前角匀浆对豚鼠脊髓、前根及坐骨神经的影响。方法采用新鲜牛脊髓前角匀浆免疫豚鼠。观察脊髓、前根、坐骨神经光镜及超微结构的变化。结果豚鼠体重在第4次免疫后明显下降。脊髓前角运动神经元变性和丢失,有卫星、噬节及墓穴现象形成。电镜下最主要的表现是线粒体异常;其次神经元核周质内异常神经丝聚集,形成包涵体;轴突内异常神经丝聚集形成轴索球。前根及坐骨神经的变化,表现为轴索变性及继发的髓鞘改变。结论牛脊髓前角匀浆可以作为抗原引起豚鼠脊髓、前根及坐骨神经免疫所介导的损伤,为进一步研究运动神经元病的发病机制提供了可靠的方法。     

中枢神经细胞瘤的临床病理特征和预后

目的：探讨中枢神经细胞瘤（CNC）的临床病理特征及其与预后的关系。方法：应用光镜、电镜检查观察了22例CNC的组织病理、超微结构特点,应用免疫组织化学染色观察了突触素、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、Leu-7、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、髓磷脂碱性蛋白（MBP）及增殖细胞核抗原（PCNA)董关CNC的表达情况。结果：本组病例年龄4－14岁,平均27．9岁。肿瘤均发生于脑室。随访18例,14例生存8个月至14年11个月;4例死亡,平均生存时间70．7个月。CNC组织学特点,瘤细胞有明显的核周空晕,呈蜂窝状结构,特征性改变为无核纤维岛。细胞异型、核分裂象及灶性坏死罕见。免疫组织化学染色突触素、NSE、Leu-7阳性表达,GFAP7有MBP阴性反应,PCNA极少数细胞阳性。超微结构特点为圆形瘤细胞可见多量细胞突起,突起内含微管、神经分泌颗粒、透明囊泡及溶酶体样结构。结论：常规光镜检查难以鉴别CNC和少突胶质细胞瘤,免疫组织化学和电镜对确诊CNC很重要。CNC一般预后良好。间变性组织学特点与生物学行为之间的关系仍不清楚。     

人心房肌细胞胞嘧啶单核苷酸酶细胞化学与心钠素免疫电镜研究

本研究应用电镜酶细胞化学法和免疫电镜胶体金技术,对人心房肌细胞中的胞嘧啶单核苷酸酶(CMP酶)和心钠素进行了定位和定量研究。心钠素定位于心房特殊颗粒,数量较多,大小均一,直径0.20±0.05μm,分布于整个胞浆中,多聚集成群,尤以肌膜下和核极区较多见。而CMP酶存在于初级溶酶体中,溶酶体大小不一,直径0.30±0.19μm,显著大于心房特殊颗粒(P<0.001),一般在核极区成群分布,也单个散在于肌原纤维之间和肌膜下。常见心房特殊颗粒与初级溶酶体邻近,偶见二者相接触,少数心房特殊颗粒的单位膜上出现CMP酶反应产物。提示初级溶酶体可能参与前心房肽的转化和心钠素释放的调节。     

去窦弓神经后大鼠臂旁核亚核内Fos和NADPH-d的分布

目的探讨大鼠臂旁核神经型一氧化氮合酶是否参与减压反射的调节。方法用Fos蛋白免疫组织化学结合还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学双重染色的方法,观察去窦弓神经后Fos和NADPH-d在臂旁核各亚核内的分布情况。结果与假手术组和正常对照组相比,臂旁外侧核外亚核、内侧核外亚核和K-F核内Fos免疫阳性反应明显增强。在这些Fos阳性神经元的表面通常可见NADPH-d阳性纤维终末分布,但偶见Fos和NADPH-d双标神经元。结论臂旁外侧核外亚核、内侧核外亚核和K-F核内部分神经元可被去窦弓神经术特异性激活;一氧化氮可能主要通过突触前机制参与此刺激的传递过程。     

周围神经变性过程的免疫组织化学观察

目的 :用免疫组织化学方法观察周围神经损伤后的结构改变及时相。方法 :切断SD大鼠的双侧坐骨神经 ,用免疫组织化学ABC法 ,SMI 3 1轴索染色及S 10 0雪旺细胞染色观察 6h到 4周神经远端的结构变化。结果 :与以往组织学观察所见不同的是 ,神经损伤平面近端 10mm范围内 ,1周内存在酶组织化学损伤性反应 ,6h起出现轴索的形态学改变。神经损伤平面远端全长 1～ 3周形成密集排列的细胞条索 ,但S 10 0染色阴性。结论 :采用免疫组织化学的方法能够更早的观察到神经变性的发生 ,神经损伤近端观察到更广泛的变化 ,S -10 0蛋白可能是标示雪旺氏细胞活化或正常雪旺氏细胞的重要观察指标     

雌三醇对胚胎小鼠脑发育的影响

用免疫吸附及免疫组织化学方法研究了在妊娠期给予雌三醇对小鼠胚胎脑发育的影响。免疫定量结果表明：在小鼠生后１４ ｄ,雌三醇可增加神经元特异性标记物 神经元特异性烯醇化酶及神经丝的表达,而神经胶质细胞特异性标记物 神经胶质纤维酸性蛋白不受影响。免疫组织化学反应结果表明：雌三醇增加了位于视束前区,下丘脑视交叉上核、腹内侧核以及杏仁核等结构神经元的神经元特异性烯醇化酶的阳性反应强度,也增加了位于视束前外侧核神经元的神经丝反应强度。雌三醇除了明显减少了海马神经胶质细胞的神经胶质纤维酸性蛋白的表达外,在脑的其它区域对该抗原的反应性未见影响。本研究结果表明：妊娠期给予雌三醇可影响胚胎脑“性中枢”（ＰＯＡ ＡＭ ＢＨ ＡＭ 功能复合体）的发育。     

人胚胎视网膜发育过程中突触囊泡蛋白的表达

用光、电镜免疫组织化学方法研究了６～３８周人胚胎视网膜突触囊泡蛋白的表达及超微定位。结果显示：１．人胎１４周突触囊泡蛋白才出现在早期视细胞的胞质中，随后，内网层及节细胞的胞体也相继出现，且由视网膜的中央区向周边区发展；２．随着胎龄增长，神经细胞发育长大，突触囊泡蛋白的含量也逐渐增加，并从核周质中转移至突触前末梢，３２周时基本与成人相似；３．突触囊泡蛋白主要定位于突触前终末的突触小泡，核周质及轴突中     

豚鼠脊髓腹角神经元线状溶酶体酶细胞化学研究及其电子探针X射线能谱分析

为探讨豚鼠脊髓腹角神经元是否存在线状溶酶体及其酶细胞化学活性分布特点，用偏磷酸酶（Ｍｅｔａｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＭＰａｓｅ）和酸性磷酸酶（Ａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＣＰａｓｅ）电镜细胞化学方法和电子探针Ｘ射线能谱分析技术，证实豚鼠脊髓腹角神经元存在线状溶酶体（Ｎｅｍａｔｏｌｙｓｏｓｏｍｅ，ＮＬＹ），同时于原位测定ＮＬＹ内的铅含量以反映酶活性强弱。ＭＰａｓｅ和ＡＣＰａｓｅ反应产物分布于圆形溶酶体和ＮＬＹ，同时在高尔基复合体的部分扁囊也有酶活性，表明该酶是在高尔基复合体上加工后输送至溶酶体。在神经元胞体、突起及突触前成分中均有呈ＭＰａｓｅ阳性和ＡＣＰａｓｅ阳性的ＮＬＹ的分布，并和线粒体紧密相贴，提示酶是由线粒体提供能量的ＮＬＹ从胞体输送到神经终末，可能参与神经递质的降解及神经元代谢物质的处理。电子探针Ｘ射线能谱分析测定结果，ＭＰａｓｅ活性强于ＡＣＰａｓｅ活性，提示ＭＰａｓｅ是比ＡＣ－Ｐａｓｅ更为敏感的溶酶体标志酶     

胎鼠脊髓原代培养神经元蛋白激酶C与突起生长关系的研究

本研究的目的在于通过观察大鼠脊髓原代培养神经元生长过程中 α、β 、β 、ε四种蛋白激酶 C亚型在胞体和突起中的表达与分布以及其总活性的动态变化 ,了解蛋白激酶 C与神经突起生长间的关系。结果表明 ,随着神经突起的生长 ,蛋白激酶C四种亚型的表达及总活性均发生规律性的变化。本研究提示 ,神经突起的生长以及其形态和功能的维持均离不开蛋白激酶 C的活性     

不同诱导剂对大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用

目的 观察体外不同诱导方法对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的作用.方法 体外培养、扩增骨髓MSCs,分别采用化学诱导剂(2-巯基乙醇 二甲基亚砜)和生物诱导剂,诱导骨髓MSCs分化为神经细胞.用神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学方法对诱导后的细胞进行鉴定和诱导率分析.应用组织学方法显示尼氏体.结果 倒置显微镜下可见,MSCs经两种方法诱导48h后,细胞均向神经细胞分化,胞体呈锥形、多角形,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支.免疫组织化学鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达NSE、NF,不表达GFAP.化学诱导剂组NSE阳性细胞率为86.9%,NF阳性细胞率为85.6%;生物诱导剂组NSE阳性细胞率为88.2%,NF阳性细胞率为86.8%,两组间无显著差异(P＞0.05).硫堇-伊红染色显示胞体内有大量的尼氏体.结论 体外两种诱导方法均可诱导大鼠骨髓MSCs分化为神经细胞.     

人胚胎视网膜内神经丝蛋白的出现和分布

用免疫组织化学ＡＢＣ法研究了２５０例４－３８周人胚胎视网膜中神经丝蛋白（ＮＦ）的出现和分布。发现第３２周胎儿视网膜神经纤维层出现ＮＦ阳性纤维。至出生时，神经纤维层卫性纤维增多、增粗，但仍未达成人的水平。人胎视网膜ＮＦ主要分布于节细胞轴突，成人除节细胞胞体和轴突外，内网层也有少数ＮＦ阳性纤维。     

大鼠坐骨神经损伤后背根节感觉神经元神经丝蛋白基因表达的变化

目的 探讨神经损伤再生过程中细胞骨架蛋白基因表达的调控机制。方法 用原位杂交组织化学技术观察了大刀坐骨神经夹伤后神经再生过程中,L4－6背根节感觉神经元内轻分子量（light,L）、中分子量（medium,M）和重分子量（heavy,H）神经丝蛋白亚基mRNA的表达变化。结果 光镜下,轴突损伤后背根节神经元内各神经丝亚基mRNA的杂交信号明显减弱,神经丝－L和神经丝－M mRNA的杂交信号位于神经元胞浆内,而在神经元胞浆和胞核内均可见神经丝－H mRNA的表达信号。结论 神经丝3个亚基基因表达的调控机制不同,神经丝基因表达的下调可能是神经元对轴突损伤的基本应答,而且在有效神经再生过程中发挥重要作用。     

Differential distribution of 68 Kd and 200 Kd neurofilament proteins in the gerbil hippocampus and their early distributional changes following transient forebrain ischemia

Summary The distribution of neurofilament (NF) proteins was studied immunohistochemically in the gerbil hippocampus with antibodies against NF68 (68 Kd molecular weight) and NF200 proteins, and changes in the distribution of NF proteins after transient ischemia were observed in order to investigate the temporal correlation between NF and delayed neuronal death. In the normal hippocampus, NF68-like immunoreactivity (NF68-LI) was densely distributed in nerve processes in CA2, CA3 and the hilus of the dentate gyrus but was less intense in CA1. In contrast, processes with NF200-LI appeared to be evenly distributed in CA1, CA2, CA3 and the dentate gyrus. Mongolian gerbils were subjected to transient ischemia for 5 min by bilateral carotid occlusion and subjected to immunohistochemistry 1, 2, 3 and 4 days after ischemia. Following transient ischemia, prior to neuronal cell death, the intensity of both NF68-LI and NF200-LI decreased in the whole hippocampal formation. This decrease was more obvious in the case of NF68-LI than NF200-LI. Four days after ischemia, when neuronal death of CA1 pyramidal cells had occurred, processes in CA1, particularly 68 Kd components, showed marked decreases in number and staining intensity, although processes in most layers of CA2, CA3 and the dentate gyrus appeared to be stained similarly to normal brain. Since NF68 protein is considered to be the major component of NF proteins and NF200 is an associated accessory protein, the current observations suggest that the poor distribution of NF68 in CA1 and the early loss of NF proteins may be closely related to selective vulnerability of CA1 pyramidal cells and delayed neuronal death.     

中药神经再生素作用于背根神经节细胞过程中基因的表达变化

目的 探讨中药神经再生素(NRF)作用的分子生物学机制。方法 采用半定量PCR方法，观察和比较NRF组、NGF组和空白对照组中生长相关蛋白43(GAP-43)、低分子量神经丝蛋白(NF-L)、翻译延伸因子2A3-2(EF-Ts，RRAJ5161)和锌指样蛋白DDP2(F196315)基因水平的表达变化。结果 在NRF作用于离体培养的DRG细胞过程中，GAP-43、NF-L、2A3-2和DDP2基因表达在不同时间呈不同程度的上调。结论 NRF促神经生长的作用与NGF相似，可作用于蛋白翻译水平，促进神经细胞的生长；作用于细胞骨架蛋白水平，维持神经细胞的形态和神经细胞正常生理活动；作用于神经细胞特异的蛋白水平，具有维持细胞生存及促进神经细胞突起生长的作用；还可以作用于反式因子调控水平，影响相关基因的表达，促进神经元存活和神经突起延伸。     

Disector法测量突触的数密度

Disector法作为新兴的体视学技术已广泛应用于生物组织中粒子数目的计数，它是利用已知距离的相邻平行切片计数三维空间中任意粒子数目的方法。Disector法作为一种三维探针技术无需基于对待测粒子形状、尺寸和空间分布的任何假设，因此，应用Disector法计数神经组织中突触的数目，尤其是空间结构复杂的突触的数目，具有高效、无偏差等明显的优点。