5-HT代谢通路相关基因在PMS肝气郁证大鼠海马及下丘脑的表达

<正>目的:通过研究5-羟色胺(5-HT)代谢通路相关基因5-HT1AR、SERT、MAOA、MAOB在PMS肝气郁证模型大鼠海马和下丘脑的表达,探讨该病证的发病机制及调肝方药经前舒颗粒的相关作用靶点。     

调肝方药对束缚应激大鼠神经内分泌免疫功能的调节作用

目的:探讨调肝方药对束缚应激大鼠神经内分泌免疫功能的调查作用。方法:以束缚制动作为应激原复制应激反应大鼠模型,采用放射免疫法检测模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴功能,同时检测模型大鼠有关免疫功能的变化,并观察调肝方药的调节作用。结果:束缚应激大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPAA)兴奋亢进(P＜0.01或P＜0.05);脾淋巴细胞增殖反应降低(P＜0.01),腹腔巨噬细胞(MΦ)释放H₂O₂功能下降(P＜0.01)。而调肝方药能抑制HPAA的兴奋性,提高大鼠的免疫机能。结论:调肝方药对束缚应激所引起的神经内分泌免疫功能的紊乱具有一定的调节作用。     

肝欣舒口服液解痉镇痛作用研究

目的：观察肝欣舒口服液的解痉镇痛作用。方法：采用大鼠离体子宫平滑肌实验观察解痉作用;采用小鼠热板法、扭体反应实验检测镇痛作用。结果：肝欣舒口服液能拮抗缩宫素所致的子宫平滑肌痉挛,提高小鼠痛阈值,减少醋酸所致小鼠扭体反应的次数。结论：肝欣舒口服液具有明显的解痉镇痛作用。     

调脂保肝胶囊防治大鼠脂肪肝的实验研究

目的:研究调脂保肝胶囊对大鼠脂肪肝的防治作用及其机制。方法:采用复合方式建立大鼠脂肪肝模型,通过肉眼、病理学检查、血液生化等检测,观察调脂保肝胶囊对脂肪肝大鼠的一般情况、肝脏指数(肝体比)、肝脏病理改变(肉眼大体外观观察、H-E染色病理学检查分析)、12项生化指标等的影响。结果:调脂保肝胶囊能降低脂肪肝模型大鼠的肝脏指数(P<0.01);明显改善肝脏病理情况,降低肝细胞内的脂肪含量,减轻肝脏的脂肪变性,有一定的保肝作用;降低血清和肝组织中MDA含量(P<0.05);增加血清和肝组织中SOD活力(P<0.05);降低血清中TC和LDL含量(P<0.05…     

一氧化氮和内皮素对肝硬化大鼠离体内脏血管条舒缩的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)和内皮素(ET)血管活性作用的动静脉差异在门脉高压形成机制中的意义。方法:以四氯化碳皮下注射复制大鼠肝硬化门脉高压模型,取动物门静脉(PV)和肠系膜动脉(MA)制成螺旋血管条,观察NO和ET的最大舒缩反应(Rmax,Cmax),并计算得到EC50值。结果:模型组(n=8)大鼠PV和MA对NO的Rmax显著高于对照组(n=7),EC50显著低于对照组(P<0.05,P<0.01);而对ET的Cmax则显著低于对照组,EC50显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。两组大鼠对NO和ET的最大舒缩反应和EC50,在PV和MA之间均存在显著差异,但模型组相差的幅度显著大于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:NO和ET在肝硬化大鼠内脏血管的舒缩作用存在动静脉差异,这可能是它们参与门脉高压形成的重要因素。     

羊Ⅲ型前胶原放免法在大鼠肝纤维化模型中的应用

目的 :探讨羊Ⅲ型前胶原 (gPCⅢ )放免法在大鼠肝纤维化模型中的应用价值。 方法 :用四氯化碳吸入法和猪血清免疫法建立大鼠肝纤维化模型。每周采血用放免法测血清PCⅢ含量。取肝脏标本经组织学观察确定肝纤维化级别。用双盲法比较肝病理纤维化分级与放免法血清PCⅢ结果的相关性。结果 :大鼠肝病理纤维化分期与血清PCⅢ水平相关趋势明显。结论 :gPCⅢ放免法可用于动态监测大鼠血清PCⅢ变化 ,适用大鼠模型肝纤维化基础研究     

PTEN在肝纤维化大鼠肝组织中的动态表达

目的： 探讨大鼠肝纤维化过程中肝组织PTEN的动态表达。方法: 采用胆总管结扎法建立大鼠肝纤维化模型,HE及Masson三色染色检测肝脏组织学变化,免疫组织化学染色、Western blotting及实时荧光定量PCR技术检测大鼠肝组织的PTEN蛋白及mRNA表达。结果: 大鼠肝纤维化模型成功建立,随着造模时间延长,肝纤维化程度逐渐加重,造模不同时间均可见不同程度的肝细胞变性坏死而导致正常肝细胞逐渐减少;免疫组织化学染色显示正常大鼠肝组织中PTEN广泛表达,主要表达于细胞浆,随着肝纤维化的进展,PTEN阳性表达细胞逐渐减少（P<0.01）;Western blotting及实时荧光定量PCR显示造模1周、2周、3周及4周不同时间大鼠纤维化肝组织中PTEN蛋白及mRNA表达均显著低于假手术组（P<0.01）,并随着肝纤维化的进展逐渐降低（P<0.01）。结论: 大鼠纤维化肝组织中PTEN蛋白及mRNA表达均随着肝纤维化的进展逐渐降低,其下降程度与肝纤维化程度一致。     

肝毒清颗粒对大鼠实验性肝纤维化的防治作用

目的 :观察肝毒清颗粒的抗纤维化作用。方法 :将Wistar雄性大鼠随机分成 6组 ,即正常对照组、模型组、肝毒清大、中、小剂量组和乙肝宁阳性组 ,采用四氯化碳诱导肝纤维化模型。于造模第 2个月始给予治疗药物。实验持续 3月后将大鼠处死取血作肝功检查及取肝组织做病理检查。结果 :肝毒清能降低AST ,升高TP、ALB ,与模型组比较 (P <0 .0 5 ) ;减轻肝脂肪变性、减少纤维组织增生、促进肝细胞再生。结论 :肝毒清对大鼠肝纤维化有明显防治作用     

大鼠海马结构在空间辨别性学习记忆时突触素表达的变化

目的:探讨空间辨别性学习记忆活动与突触可塑性的关系。方法:用免疫组织化学方法对具有空间辨别性学习记忆功能的模型大鼠与对照组大鼠海马结构内突触素I的表达进行对比研究。结果:(1)对照组大鼠海马结构内未见明显的突触素颗粒产物;在模型组,经水迷宫训练1周的大鼠海马切片上见到齿状回、CA4和CA3区出现深染的颗粒分布,CA2和CA1区颗粒较少;训练2周的大鼠海马结构内的染色显示颗粒与训练1周的比较无明显差异,但染色加深;(2)模型组大鼠的突触素反应产物的光密度值明显大于对照组(P＜0.05);模型组大鼠海马结构内突触素光密度值在训练的1~2周内随训练时间增加而增加,训练2~3周则增加不明显;模型组大鼠海马结构CA3、CA4区和齿状回突触素反应产物的光密度值较CA1和CA2区的大,差异有显著(P＜0.05)。结论:(1)大鼠经水迷宫训练获得空间辨别性学习记忆功能时在海马结构内有新突触形成;(2)海马结构的CA3、CA4区和齿状回与空间辨别性学习记忆的关系密切。     

肝毒清颗粒对细胞因子的调节的实验研究

目的 :观察肝毒清颗粒对急性肝损伤的保护作用。方法 :选用雄性Wistar大鼠 60只 ,随机分为 6组 ,即空白对照组、模型组、肝毒清颗粒大、中、小剂量组 ,乙肝宁阳性对照组。用硫代乙酰胺复制急性肝损伤模型。检测血清TNF α、IL 6水平。结果 :硫代乙酰胺急性肝损伤时 ,肝毒清颗粒能使血清TNF α、IL 6水平明显降低 ,与模型组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :肝毒清颗粒能减少致炎细胞因子的生成 ,减轻致炎细胞因子的肝损害 ,对肝脏起到保护作用     

夏至草醇提物对急性微循环障碍大鼠器官血流量的影响

目的:观察夏至草醇提物对高分子右旋糖苷(Dextran500)致急性微循环障碍(AMD)大鼠小肠、胃、肝等器官血流量的影响。方法:Wistar雄性大鼠20只,随机分为夏至草组、模型组(均n=10)。静注10%Dextran500(10ml/kg)复制AMD模型。6min后,夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物(1g/ml,6g/kg),模型组以等量生理盐水代替。应用激光多普勒技术,分别于实验前、AMD期、治疗后观察大鼠小肠、胃、肝等器官微区血流量变化。结果:AMD期,两组大鼠小肠、胃、肝区血流的浓度、流速、流量均显著低于实验前;经输注生理盐水或夏至草醇提物实施治疗后,小肠、胃、肝区血流浓度、流速、流量均显著高于AMD期,但仍低于实验前水平;且输注夏至草醇提物对各器官血流的改善作用显著优于输注生理盐水。结论:夏至草醇提物能明显提高AMD大鼠的器官血流量。     

大鼠胰岛细胞经门静脉肝内移植模型的建立

背景:由于肝脏既是胰岛素的作用部位,又是相对的免疫特惠区,排斥反应小,肝窦及其小静脉结构还有利于胰岛的居留和生长,可供移植容积大,有利于胰岛的生存,因此肝脏是一个较为理想的移植部位。目的:建立一种经门静脉胰岛细胞肝内移植治疗SD大鼠1型糖尿病的动物模型。方法:采用文献方法制备SD大鼠胰岛细胞。以腹腔注射链尿佐菌素诱导建立SD大鼠1型糖尿病模型,随机数字表法分为2组:实验组经门静脉主干穿刺输注SD大鼠胰岛1000胰岛当量1.5mL;对照组经门静脉主干穿刺输注无血清1640液1.5mL。术后未给予免疫抑制剂,观察两组大鼠出血量、血糖、胰岛素水平及肝脏组织形态学变化。结果与结论:所有大鼠均移植成活,门静脉穿刺一次成功率90%,出血量0.5mL。胰岛移植大鼠血糖降为正常的时间1～6(3.7±1.7)d,移植胰岛存活时间为2～15(8.4±4.1)d。术后2周内实验组大鼠空腹血清胰岛素水平明显高于对照组(P0.05,P0.01)。病理结果证实,移植大鼠肝细胞形态、肝小叶结构均正常,肝实质未见坏死灶,血管内无血栓形成;门静脉主干未见狭窄,亦未发生感染,说明胰岛细胞在肝窦内存活并能发挥功能。证实大鼠胰岛经门静脉主干穿刺输注肝内移植是胰岛移植基础研究的理想模型。     

调肝方药对慢性束缚应激大鼠神经内分泌免疫功能的影响

七情致病理论及其防治是中医病因病机学中的一个重要内容,但目前相关研究较少,现代医学中的心理应激理论与中医七情学说在认识上存在着许多共同点,从应激角度出发,结合中医"怒伤肝"的理论,以束缚制动作为应激原,复制慢性激怒应激反应大鼠模型,并探讨调肝方药(TGFY)对应激大鼠神经内分泌免疫功能的影响。1 材料与方法1.1 主要试剂 细胞培养液RPMI-1640(Gibco产品),刀豆素A(ConA,Sigma产品),3H-TdR(中国科学院原子能研究所产品),莨菪葶(9．61μg,Sigma产品),辣根过氧化物酶(HRP,10μg,Sigma产品),十四酰佛波乙酸酯(PMA,100ng,Sigma产品)。125I-CRH、125I-ACTH、125I-CORT放免检测药盒(美国DPC产品)。1.2 大鼠应激模型制作及分组处理 雄性Wistar大鼠,体重250～300 g,分为正常对照组10只(正常饮食,不给任何刺激);慢性束缚应激组1O只(给予束缚刺激,正常饮食,不给中药治疗);调肝方药组10只(给予束缚刺激的同时灌胃调肝方药)。慢性束缚应激反应大鼠模型的制作取雄性Wistar大鼠20只,体重250～300 g,每2只一笼,每日给予黑暗和光照各12 h,20～22℃,同时给予每日1次成对双后肢的立式束缚,以引起明显的激怒应激反应(粗叫、站立对峙、扭打嘶咬),首次30min,以后隔日增加10min,共2 w。普通饲料,自由饮水。于实验第13天和第14天在动物清醒、安静状态下断头处死取材。1.3 药物组成剂量及给药方法 所用中药均由本校第一附属医院药房提供的纯正药材。调肝方药组成及剂量：柴胡15g、白芍15 g,香附10 g,山萸肉15 g,郁金10 g,枳壳10g。将上述药物制成100％水煎剂,每毫升含生药1 g,给予大鼠1 ml／100 g体重灌胃,每日2次,共2 w。对照组及应激组灌服等量生理盐水。     

舒马普坦对电刺激上矢状窦后大鼠硬脑膜血流量的影响

目的:观察电刺激上矢状窦区后大鼠硬脑膜血流量的变化以及舒马普坦对其的影响。方法:18只SD大鼠随机分为对照组、电刺激组和舒马普坦组,暴露大鼠上矢状窦区硬脑膜,电刺激组和舒马普坦组以30Hz、6V和0.25ms的刺激参数建立偏头痛模型,激光多普勒血流量图像仪测定硬脑膜血流量,比较各组大鼠相对血流量的变化。结果:对照组、电刺激组以及舒马普坦组的相对血流量分别为2.61±4.43%、15.49±5.65%和-0.35±5.08%,组间差异有非常显著性统计学意义(P<0.01);电刺激组分别与对照组及舒马普坦组行两两比较,差异有非常显著性统计学意义(均P<0.01);对照组与舒马普坦组比较,差异无统计学意义。结论:高频电刺激上矢状窦区能增加大鼠硬脑膜血流量,舒马普坦对其有抑制作用。     

大黄素对肝纤维化大鼠肺损伤的保护作用

 目的:探讨不同剂量大黄素对肝纤维化大鼠肺损伤的保护作用。方法:采用复合致病因素法（CCl 4、乙醇、高脂、高胆固醇和低胆碱）建立肝纤维化大鼠模型并以不同剂量（20 mg/kg和40 mg/kg）大黄素进行治疗。4周后,测定肝指数,检测血清内毒素、同型半胱氨酸、反映肝功能的指标白蛋白、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、总胆固醇、甘油三酯和肝纤维化指标透明质酸、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、Ⅲ型前胶原蛋白的含量,观察肝组织病理学改变; 测定肺指数,光镜下行肺组织病理学观察,检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)含量。结果:大鼠肝纤维化模型复制成功,模型组大鼠肺指数明显增加,肺脏发生水肿、炎症反应,肺匀浆TNF-α、MDA、NO和ONOO-含量明显增加;大黄素治疗组肺指数较模型组下降,肺组织病理性损伤明显减轻,肺组织TNF-α、MDA、NO和ONOO-含量明显降低。结论:大黄素对肝纤维化大鼠的肺损伤具有一定的保护作用。     

芝麻素对代谢综合征性脂肪肝大鼠肝组织iNOS和NT表达的影响

目的: 观察芝麻素对代谢综合征性脂肪肝大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及硝基酪氨酸(NT)表达的影响。方法: 采用两肾一夹术伴高脂高糖饮食12周制备代谢综合征性脂肪肝大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、芝麻素高、中、低剂量治疗组(120、60、30 mg·kg-1·d-1),另设假手术对照组;灌胃给药8周后,检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);应用Western blotting法检测大鼠肝组织中iNOS和NT的蛋白表达;HE染色观察肝组织病理变化。结果: 与模型组相比,高、中剂量治疗组芝麻素可降低大鼠血清TC、TG、FFA及MDA(P<0.05),提高SOD活性(P<0.05);抑制大鼠肝组织中iNOS和NT的蛋白表达(P<0.05),减轻肝组织脂肪变性。结论: 芝麻素对大鼠代谢综合征性脂肪肝病具有防治作用,其机制除了调脂作用外,可能还与下调iNOS、NT表达,减轻氧化应激损伤有关。     

重组腺病毒介导的BCL-Xl基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的 明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL-Xl过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组.正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒.预处理7 d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖+脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-Xl蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率.结果 BCL-Xl基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6 h,处理组的血清ALT、AsT水平低于模型组(P<0.05).处理组的肝细胞凋亡率低于模型组(P<0.05).处理组的大鼠死亡率低于模型组(P<0.05).结论 在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-Xl在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率.     

重组腺病毒介导的BCL-Xl基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的 明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL-Xl过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组.正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒.预处理7 d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖+脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-Xl蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率.结果 BCL-Xl基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6 h,处理组的血清ALT、AsT水平低于模型组(P<0.05).处理组的肝细胞凋亡率低于模型组(P<0.05).处理组的大鼠死亡率低于模型组(P<0.05).结论 在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-Xl在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率.     

重组腺病毒介导的BCL-Xl基因过表达治疗急性肝衰竭大鼠的研究

目的 明确肝细胞凋亡与急性大鼠肝衰竭模型肝组织损伤程度的关系;明确BCL-Xl过表达对急性肝衰竭大鼠肝脏的治疗保护作用.方法 将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、处理组三组.正常对照组及模型组给予门静脉注射生理盐水,处理组予门静脉注射重组BCL-Xl腺病毒.预处理7 d后模型组及处理组予D-氨基半乳糖+脂多糖建立肝衰竭模型,观察各组大鼠的BCL-Xl蛋白的表达、ALT、AST水平、肝细胞凋亡率及死亡率.结果 BCL-Xl基因在处理组的表达高于在模型组中的表达;建立大鼠肝衰竭后6 h,处理组的血清ALT、AsT水平低于模型组(P<0.05).处理组的肝细胞凋亡率低于模型组(P<0.05).处理组的大鼠死亡率低于模型组(P<0.05).结论 在急性肝衰竭大鼠中,肝细胞的凋亡率与大鼠的死亡率呈正相关;BCL-Xl在肝组织中的过表达能减少急性肝衰竭模型大鼠的肝细胞凋亡率,降低急性肝衰竭大鼠的死亡率.     

改良法构建大鼠减体积肝移植模型

背景:目前有关活体肝移植后肝脏再生的研究较少。在大鼠肝移植实验中不断改进手术方法和技术,提高肝移植成功率是进行大鼠肝移植研究和获得可靠实验数据的基础。目的:验证以改良方法构建减体积肝移植大鼠模型的有效性。方法:选用健康SD大鼠,70对制备减体积肝移植改良前模型,100对制备减体积肝移植改良后模型。供体为雌性,受体为雄性,供体体质量比受体轻10g左右。改良前方案采用取下全肝后在修肝盆中进行减体积肝移植。改良后方案如下:供体采用单人裸眼操作,在取肝的过程中即进行减体积操作;修肝时将套管柄置于门静脉和肝下下腔静脉的正前方,将幽门静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的左侧,即肝脏的左侧;将右肾静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的右侧,即肝脏的右侧;供肝套管完成后用灌注液对门静脉和肝下下腔静脉进行冲洗;然后以左膈静脉为标识点进行7/0无损伤血管缝线吊线;受体采用双人裸眼配合操作,肝上下腔静脉吻合时,左右固定位点采用"8"字形外翻缝合,后壁和前壁分别采用连续吻合,门静脉和肝下下腔静脉采用改良的双袖套法,胆管支撑管法建立大鼠减体积的稳定模型。结果与结论:改良后供体手术时间为(32±2)min,修肝时间为(6±2)min,受体手术时间为(40±3)min,无肝期时间为(14±3)min。移植成功率为92%,移植后3d生存率为85%,移植后2周生存率83%。与改良前比较,移植后并发症发生率降低(P0.05),供肝的冷保存时间缩短(P0.05)。提示改良后的大鼠减体积肝移植模型比较稳定、可靠,移植成功率较高,移植后并发症发生率较低,为研究减体积肝移植后肝脏再生提供了有效的改良手段。