抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。     

从随机肽库中筛选抗入ANG抗体的模拟小肽

目的从随机噬菌体十二肽库中寻找抗重组人 ANG抗体的模拟肽。方法以重组人 ANG为目标分子 ,对随机十二肽库进行亲合筛选 ,用噬菌体 EL ISA及竞争抑制实验鉴定阳性克隆的结合性和特异性。结果经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率从 2 .0× 10 - 4 %增加到 9.3× 10 - 2 % ,阳性克隆得到富集 ;EL ISA和竞争抑制实验证明 :有 9个噬菌体克隆与靶分子有较强的结合活性 ,其中 6个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制抗人重组 ANG单抗与 ANG的结合。结论该小肽可能是抗人ANG抗体的模拟小肽 ,可作为 ANG的拮抗剂     

抗人载脂蛋白E单克隆抗体制备及免疫学特性的研究

应用人血清纯化的ApoE免疫BALB/C小鼠,其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗人ApoE单克隆抗体的杂交瘤细胞株(E6C3,E4C2和E3C3),对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为8×10~(-5)～2×10~(-6),与其它载脂蛋白没有交叉反应,制备免疫亲和层析柱纯化了ApoE,单抗相加试验和双抗体夹心试验证明,两株MeAb识别ApoE的两个不同抗原决定簇,抗体亚型均为IgG_1型。应用ELISA双抗体夹心法测定了人血清ApoE含量。     

小鼠抗人C5aR短肽（9—30）单克隆抗体制备及鉴定

目的获得有生物功能的小鼠抗人 C5 a R短肽单克隆抗体。方法对 C5 a受体 (CD88)二级结构和 B细胞表位进行分析研究 ,采用 Fmoc方案固相合成 C5 a R N-端第 9～ 30位氨基酸残基的 2 2 -肽 ,以此为抗原免疫 Balb/ c小鼠。结果建立了 1株小鼠抗人 C5 a R短肽杂交瘤细胞系 E3,其平均染色体数目为 10 2条 ,所分泌抗体为 Ig G1,κ型 ,腹水抗体效价为 1×10 - 4 ～ 1× 10 - 6 ,可识别 U 937、人脐静脉内皮细胞 (VEC)和 PMN等表达 C5 a R细胞。 E3单抗的亲和常数 Ka=2 .5× 10 5 ,其结合表位为 C5 a R第 15～ 2 1位氨基酸基序 D1 5 DKDTL2 0 D。结论 B细胞表位多肽具有免疫原性 ,可制作单克隆抗体 ,为 C5 a-C5 a R相互作用的研究以及 AL I、ARDS等 C5 a相关疾病的研究提供实验材料。     

抗恶性疟单抗独特型决定簇的第二单克隆抗体的制备和鉴定

本文以分泌抗恶性疟疾红内期抗体的小鼠杂交瘤细胞系94D1诱生的腹水,通过Protein A-Sepharose cL-4B亲和层析法,纯化IgG,并以此作为免疫原皮下多点免疫Wistar大鼠。加强免疫后3天取脾与小鼠Sp2/0瘤细胞进行异种间的细胞融合,经间接ELISA法检测筛选和5次克隆化,最终得到一株生长稳定,连续分泌特异抗体的异种杂交瘤细胞系41RF5。经过多次冷冻和复苏以及体外连续传代培养6个月,其稳定性与小鼠×小鼠杂交瘤细胞相近。选择8株单抗和Sp2/0 IgG作为包被抗原,即6株抗恶性疟单抗:21E3、92D4(IgG2b)、93A3(IgG_1)、94B5(IgG_1)、94C_3(IgG_1)和94D1(IgG2b),1株抗猪尾猴疟原虫(Plas mc-dium inui)红内期单抗32A12(IgG_1)和1株抗登革热Ⅲ型病毒单抗215D3(Ig-G2b),用间接ELISA法对41RF5特异性进行鉴定,结果显示,41RF5单抗只与94D1呈阳性反应,与其余各种包被抗原均呈阴性反应,表明41RF5具有良好的抗94D1单抗独特型决定簇的特异性,41RF5培养上清中特异的抗体效价为1:1,28O。     

抗hCG-β单克隆抗体的产生及初步鉴定

本文报道用hCG免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,获得6株分泌抗hCG单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中,2B5和2D8二株细胞的分泌抗体,对hCG-β亚基呈强阳性反应。其培养液抗体的ELISA效价为10~(-2)～10~(-4);注入同系小鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-5)～10~(-7)。2B5抗体为IgA,2D8抗体属IgG_1。它们对hCG-β的亲和常数(K_a)分别为0.8×10~9升/克分子和1.8×10~9升/克分子.在以~(125)I-hCG-β作为标记物的检测系统中,2B5抗体在50％抑制时同hLH的交叉反应为5.7％,而2D8抗体为3.1％.     

两株双价痢疾工程菌苗不同粘膜免疫途径的免疫原性

目的探讨免疫途径、接种剂量及侵袭蛋白表达对两株双价痢疾工程菌苗免疫效果的影响。方法小鼠分为滴鼻、灌胃和对照组 ,分别以不同剂量免疫 3次 ,间隔 2周 ,3次免疫后 7d收集血清、小肠、鼻咽、肺、阴道冲洗液 ,EL ISA法检测其中特异性福氏、宋内氏 L PS- Ig A和 Ig G。结果 4× 10 7CFU菌苗经鼻途径免疫即可诱导多个粘膜部位以及血清双价特异性抗体显著增高 ;菌苗剂量增加 2 0、2 0 0倍时经灌胃免疫诱发较为局限的粘膜特异性抗体增高。结论鼻粘膜免疫不仅诱导多个粘膜部位 (特别是生殖道 )以及系统免疫的抗体反应 ,是一个安全有效的免疫途径。     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

重组BCG—Sj26GST疫苗诱导小鼠sIL—2R和IFN—γ的变化

目的研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞 s IL- 2 R和 IFN- γ的影响。方法第 1次实验采用 1× 10 6 和 1× 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/ C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组。第 2次实验用 1× 10 6 CFU疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,分离脾脏 ,用 Sj2 6或 Con A刺激脾细胞 ,用 EL ISA法检测脾细胞上清液中 s IL 2 - R和 IFN -γ含量。结果疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 ,s IL- 2 R和 IFN- γ水平显著升高 ;动态观察发现 s IL- 2 R和 IFN- γ分别于免疫后 8～ 10周和 4～ 8周达最高水平。结论日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗可加强宿主 Th1反应 ,促进 Th1细胞分泌 IL- 2和 IFN- γ,它们与免疫细胞相互作用 ,提高宿主抗血吸虫感染的保护力     

不同剂量白细胞介素2作为乙型肝炎病毒核酸疫苗佐剂的效应

目的构建表达乙型肝炎病毒 (HBV) S蛋白的重组质粒 p CR3.1- S作为核酸疫苗 ,观察重组人白细胞介素 2(rh IL - 2 )作为佐剂对其诱导 BAL B/ c小鼠产生免疫应答的影响。方法分别以 EL ISA法、3H- Td R掺入法、Cr5 1 4h释放法等测定免疫小鼠的血清抗 HBs、淋巴细胞增殖活性、淋巴细胞杀伤效应 ,初步研究不同免疫组体液和细胞免疫应答的差异。结果血清抗 HBs EL ISA效价 ,rh IL - 2组与对照组相比较差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;淋巴细胞增殖指数、淋巴细胞杀伤率 ,10 0 0 U (只·次 ) rh IL - 2 /组和 2 0 0 0 U (只·次 ) rh IL - 2 /组与对照组相比较差异显著 (P<0 .0 5 ) ,而 5 0 0 U (只·次 ) rh IL - 2 /组与对照组相比较无显著差异 (P>0 .0 5 )。结论一定剂量的 rh IL - 2作为佐剂可增强 HBV核酸疫苗的免疫效应