rhIL-2与阿霉素长循环热敏脂质体靶向治疗肿瘤的协同作用

目的:观察重组人白细胞介素-2(rhIL-2)与阿霉素长循环热敏脂质体(ALTSL)联合靶向治疗荷H22瘤小鼠的协同作用,并探讨其抑瘤作用的机制。方法:以荷H22瘤小鼠的瘤重为指标,评价药物的抑瘤活性。以荷H22瘤小鼠的存活天数计算生命延长率。以乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞的杀伤活性。以MTT比色法检测淋巴细胞的转化率。以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53、Fas、FasL和caspase-3的表达。用RT PCR法测定IL-2mRNA及IL-12mRNA的表达。镜下观察荷H22瘤小鼠肿瘤、心、肝及肾脏组织的病理变化。结果:rhIL2 ALTSL的抑瘤率显著高于单用ALTSL,分别为73.5%和67.0%;ALTSL和rhIL2 ALTSL均可显著延长荷瘤小鼠的存活时间(P<0.05～P<0.01)与对照组和游离阿霉素(FADM)组相比较,ALTSL组NK细胞的杀伤活性显著增加,rhIL2 ALTSL组NK细胞的杀伤活性更高。与FADM组比较,rhIL-2 ALTSL组淋巴细胞的转化率明显提高(P<0.01)。应用ALTSL组和rhIL-2 ALTSL组均可增强脾细胞中IL-2mRNA和IL-12mRNA的表达,但后者的增强作用高于前者。病理切片检查显示,热敏脂质体配合肿瘤局部加热,使肿瘤细胞凝固坏死,联合应用rhIL-2肿瘤组织溶解,细胞破碎,可见大量的淋巴细胞浸润。结论:ALTSL能提高ADM的抑瘤效果,降低ADM心肺的毒性。rhIL-2 ALTSL可诱导肿瘤     

附子多糖与阿霉素长循环热敏脂质体的抗肿瘤作用及其机制探讨

目的:观察附子多糖(MPS)与阿霉素(ADM)长循环热敏脂质体(ALTSL)联合靶向治疗荷肝癌H22小鼠的作用,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法:以荷瘤小鼠的瘤重为指标,观察药物的抗肿瘤活性。以荷瘤小鼠的存活天数计算生命延长率。以乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞的杀伤活性。以MTT比色法检测淋巴细胞的转化率。以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53、Fas、FasL和caspase-3的表达。用RT-PCR法测定IL-2mRNA及IL-12mRNA的表达。制作病理切片观察肿瘤、心、肝、肾脏的组织学变化,探讨抗肿瘤机制。结果:MPS ALTSL联合治疗对肿瘤的抑制作用比单一ALTSL靶向治疗更为显著,抑瘤率达80.4%,并可显著延长荷瘤小鼠的存活时间(P<0.01)。与对照组和ADM组比较,ALTSL可使NK细胞的杀伤活性显著增加,而MPS ALTSL则可使NK细胞的杀伤活性和淋巴细胞转化率进一步提高(P<0.01)。应用ALTSL可使脾细胞中IL-2mRNA和IL-12mRNA的表达明显增高;而MPS ALTSL则可使他们的表达进一步增强。病理切片的结果显示,热敏脂质体配合肿瘤局部加热,可使肿瘤细胞凝固坏死。联合应用MPS,可见肿瘤组织中出现大量的淋巴细胞浸润。结论:ALTSL能提高化疗药物ADM的抗肿瘤效果,并降低其心肺毒性,保护机体的免疫功能。MPS ALTSL能进一步诱导肿瘤细胞凋亡,激活并促进T细胞转化和NK细胞的杀伤活性,增强机体的免疫功能,发挥抗肿瘤的协同作用。     

树突状细胞激活的肿瘤浸润淋巴细胞对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

目的:探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性;并将H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(H22-DC-TIL)过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性及血清TNF活性,并与对照组相比较。结果:(1)H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性(杀伤率为71.31%±3.11%),明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性(杀伤率分别为50.11%±3.03%和30.31%±2.89%);也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞和未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性(杀伤率分别为49.80%±3.21%、48.76%±3.60%和19.23%±2.71%)和对Hepal-6细胞杀伤活性(杀伤率分别为39.40%±3.21%、38.62%±2.87%和18.73%±2.40%)以及对B16细胞杀伤活性(杀伤率分别为26.38%±2.51%、25.82%±2.70%和18.34%±3.01%),同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性(活性分别为30.43%±1.35%、31.40%±1.80%和35.30%±1.20%),并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/m l],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞组、未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论:(1)H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠特异性抗肿瘤免疫反应。     

IL-21基因治疗小鼠H22细胞皮下移植肝癌模型的效果评价

用已构建的mIL-21/pcDNA3.1重组质粒对H22细胞建立的小鼠肝癌模型进行基因治疗,观察IL-21对小鼠体内抗肿瘤免疫应答的影响及对小鼠生存的影响。采用BALB/c小鼠左腋皮下注射腹水型肝癌细胞株H22细胞建立小鼠移植肝癌模型,给荷瘤小鼠瘤体内注射mIL-21/pcDNA3.1进行基因治疗,MTT比色法检测IL-21对荷瘤小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性的影响,观察治疗后荷瘤小鼠生存情况及肿瘤生长情况的改变。病理检测结果显示,成功建立了小鼠移植型肝癌模型,MTT比色法显示基因治疗后小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性显著升高,荷瘤小鼠肿瘤生长速度减慢,生存期显著延长。IL-21基因治疗肝癌荷瘤小鼠可显著提高荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫应答水平,抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠生存期。     

双氢青蒿素通过调控PI3K/AKT通路增强肝癌H22细胞荷瘤小鼠放疗效果

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对肝细胞癌H22细胞荷瘤小鼠放疗增效的影响。方法:构建肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型,实验分为模型组、单放疗组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组和低、中、高剂量DHA组,每组8只,按照分组进行给药和放疗治疗。隔天测量各组荷瘤小鼠体重和瘤体积,给药结束后鼠尾取血后立刻脱颈处死小鼠。观察DHA对放疗的增效作用和对肿瘤生长的抑制作用,测定淋巴细胞转化程度和自然杀伤(NK)细胞活性,ELISA法检测小鼠血清白细胞介素2(IL-2)和IL-4水平,Western blot法测定小鼠肿瘤组织中PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:成功构建肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型。与模型组相比,单放疗组肿瘤3倍倍增时间(TGT3)显著升高(P0.05),瘤重、淋巴细胞转化程度、NK细胞活性、IL-2和IL-4水平、PI3K表达水平和AKT磷酸化水平均显著降低(P0.05);与单放疗组相比,随着DHA剂量升高,TGT3、增敏系数、抑瘤率、淋巴细胞转化程度、NK细胞活性及IL-2和IL-4水平随之升高(P0.05),PI3K表达水平和AKT磷酸化水平随之降低(P0.05)。结论:DHA可能通过抑制PI3K/AKT信号通路活性,提高荷瘤小鼠免疫能力,从而增强放疗效果。     

艾灸对荷瘤小鼠免疫功能的增强作用

作者通过观察艾灸大椎穴对荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化,NK细胞,LAK细胞活性,IL-2产生水平,探讨艾灸抑瘤效应的免疫学机理。结果显示:艾灸对荷瘤小鼠免疫功能低下或受抑状态,可起到正向免疫调节作用;艾灸治疗组小鼠T淋巴细胞转化,NK、LAK细胞活性;IL-2产生水平较荷瘤对照组明显增高。本研究结果也显示艾灸的治疗作用有选择性的相对的腧穴特异性,艾灸大椎穴组T细胞转化率、NK细胞活性明显高于艾灸非经穴对照组。艾灸抑瘤效应,可能是通过改善荷瘤机体非特异性免疫功能状态,抑制移植性肿瘤在新宿主的早期生长、发展的结果。     

龙牙楤木多糖抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:探讨龙牙楤木多糖(AEPS)抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:以S180肉瘤为肿瘤模型,检测龙牙楤木多糖对肿瘤生长的抑制活性;MTT法检测龙牙楤木多糖对S180肉瘤细胞、A549肺癌细胞、SMMC-7721肝癌细胞的体外抑制活性;以其对荷瘤小鼠免疫器官、血液淋巴细胞数量及淋巴细胞增殖影响、巨噬细胞活性和NK细胞杀伤活性来评价AEPS对荷瘤小鼠免疫功能的作用。结果:AEPS对S180肉瘤生长有显著的抑制作用,其中75 mg/(kg.d)剂量组抑瘤率最高达57.68%;AEPS对S180肉瘤细胞、A549肺癌细胞、SMMC-7721肝癌细胞生长的最高抑制率均达60%以上;AEPS显著提高荷瘤小鼠脾脏和胸腺质量以及血液淋巴细胞数量,促进淋巴细胞增殖反应,增加NK细胞杀伤活性和巨噬细胞活性。结论:AEPS有显著的抗肿瘤活性,并能直接作用于肿瘤细胞,抑制肿瘤生长,其抑瘤作用与机体免疫功能的增强有关。     

IL-2与眼镜蛇毒协同抗肿瘤作用的实验研究

本文研究了白细胞介素2(IL-2)和眼镜蛇毒对小鼠移植鼠肝癌的抑制作用以及对荷移植窟小鼠NK细胞杀伤活性的影响。结果表明:IL-2或眼镜蛇毒单独使用时,前者能明显增强荷瘤鼠的NK细胞活性,可是抑瘤作用不很明显;后者虽然严重地减弱荷瘤鼠的NK活性,但抑瘤作用反而较前者为强。当两者联合使用时,其抑瘤作用及NK活性则都显著提高(P<0.005)。提示IL-2与眼镜蛇毒具有良好的协同抗小鼠移植鼠肝癌的作用。     

应用rmIL-18 诱导肿瘤特异性CTL 治疗肝癌的实验研究

目的:研究rmIL-18 在体外培养系统(Coculture system in vitro,CCs)诱导肿瘤特异性细胞毒性T 淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)及在小鼠体内发挥的抗肝癌效果。方法:采用Stem SepTM 免疫磁性细胞分离方法分离培养小鼠脾脏NK 细胞、T 细胞及DCs,建立体外培养系统;采用不同途径,不同剂量CTL 免疫肝细胞癌荷瘤小鼠,研究CTL 对荷瘤小鼠肿瘤生长速度和生存时间的影响。结果:rmIL-18 能够在体外培养系统中诱导并促进CTL 介导的肿瘤特异性杀伤效应;CTL能够明显抑制荷肝癌小鼠的肿瘤生长速度(P<0.01)及明显延长荷瘤小鼠生存时间(P<0.01),并且这种作用随rmIL-18 浓度的增加而增强(P<0.01),且肿瘤内注射均优于腹腔内注射(P<0.01)。结论:rmIL-18 可以在体外诱导肿瘤特异性CTL 并在小鼠体内发挥抗肝癌作用。     

表达CRT-E2融合蛋白肿瘤疫苗诱导特异性抗肿瘤免疫应答

目的:探讨表达钙网蛋白(Calreticulin,CRT)和HPV E2融合蛋白的肿瘤疫苗在小鼠体内诱导的抗肿瘤免疫应答.方法:转染重组质粒得到高表达CRT、E2和CRT-E2融合蛋白的肿瘤细胞,作为肿瘤疫苗隔周两次腹腔注射免疫小鼠,17天后观察成瘤率,检测NK细胞杀伤活性、特异性T细胞增殖能力、CIL活性以及睥淋巴细胞分泌IFN-γ水平,并观察荷瘤小鼠生存期.结果:高表达CRT-E2融合蛋白肿瘤疫苗免疫小鼠后,其成瘤率明显低于其他实验组,NK细胞杀伤活性、特异性T细胞增殖能力、CTL活性和脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平均显著高于其它实验组(P＜0.01),生存期也明显延长(P＜0.01).结论:小鼠体内实验显示,表达CRT-E2融合蛋白肿瘤疫苗能够诱导特异性CD8+T细胞免疫应答和NK细胞活性,显著抑制了肿瘤生长.     

参杞合剂对小鼠腹水型肝癌细胞株H22细胞周期及凋亡的影响

目的：观察参杞合剂(SQ)在体内、外对小鼠腹水型肝癌细胞株(HcaF16A3)细胞周期及凋亡的影响。方法：用SQ对荷瘤小鼠连续胃饲治疗10d，观察其NK细胞／Mφ的杀伤活性及细胞周期的改变。用流式细胞仪检测SQ对HcaF16A3细胞增殖的抑制作用与诱导凋亡的作用。结果：SQ的抑瘤率为65．68％。流式细胞仪检测发现，SQ可使肿瘤细胞的细胞周期阻滞到S期，并在体外诱导其凋亡。结论：SQ在体内、外均有抑瘤作用，其机制与细胞周期阻滞继而诱发凋亡有关。     

氯化甲基汞对小细胞肺癌NCI-H446细胞的增殖抑制作用

目的:探讨氯化甲基汞(MMC)对人小细胞肺癌NCI-H446细胞的增殖抑制作用,为MMC治疗小细胞肺癌提供实验依据.方法:采用MTT比色法,分别测定不同浓度的MMC、顺铂(DDP)、As_2O_3作用于NCI-H446细胞后的吸光度A570值,计算增殖抑制率;并应用皮下注射法建立裸鼠NCI-H446移植瘤模型,灌胃法给予模型鼠MMC或生理盐水,停药后测量肿物长短径,HE染色观察瘤体细胞形态学改变.结果:MMC各浓度组A570值均低于对照组,自2.5 μmol/L起各浓度组之间A570值均存在显著性差异(P＜0.05),且同一浓度各时间之间均存在显著性差异(P＜0.05);DDP、As_2O_3各浓度组A570值亦均低于对照组,其中DDP与MMC两者之间比较无统计学差异,在作用24、48、72小时的每一个浓度组,MMC和DDP的增殖抑制率均大于As_2O_3.给予MMC灌胃的荷瘤鼠肿瘤体积小于对照组,差异有显著性(P＜0.05),HE染色见坏死细胞增多.结论:MMC对人小细胞肺癌NCI-H446细胞有增殖抑制作用,并存在着时间和剂量效应关系,其增殖抑制作用与顺铂相当,强于As_2O_3.     

重组可溶性MHC Ⅰ类相关蛋白A对NK细胞生物学活性的影响

目的:研究体外重组可溶性MHC Ⅰ类相关蛋白A(sMICA)对NK细胞杀伤靶细胞活性、分泌IFN-γ、增殖和凋亡的影响.方法:将重组sMICA蛋白与人外周血NK细胞相互作用过夜后,流式细胞仪检测NK细胞杀伤K562靶细胞的能力;ELISA检测培养上清IFN-γ浓度;MTS/PMS法检测sMICA对NK细胞增殖的影响;给NK细胞标记Annexin V和碘化丙啶检测凋亡情况.结果:可溶性MICA抑制NK细胞杀伤K562细胞的活性,下调IFN-γ的分泌,却对NK细胞的增殖和凋亡没有影响.结论:肿瘤细胞表面脱落的sMICA抗原可通过抑制NK细胞活性而逃逸机体的免疫监视功能.     

mIL-21基因转染的Sp2/0瘤苗细胞的抗肿瘤机制探讨

目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用RT-PCR检测肿瘤组织中CXC家族趋化因子I-TAC的表达。结果:与对照组相比,瘤苗细胞膜表面MHC-Ⅰ类分子的表达明显上调。瘤苗接种组小鼠NK细胞、CTL的细胞毒活性明显增强。病理分析发现,肿瘤组织中有较多的淋巴细胞浸润并检测到干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)的表达上调。结论:肿瘤细胞瘤苗Sp2/0-mIL21可增强小鼠的细胞免疫作用,其抗肿瘤机制可能与T细胞的增殖、活化,促进NK细胞的分化成熟,淋巴细胞向肿瘤组织浸润,以及增强NK细胞和CTL的细胞毒活性有关。     

Activated monocytes augment TRAIL‐mediated cytotoxicity by human NK cells through release of IFN‐γ

Natural killer (NK) cells are innate lymphocytes that are able to directly kill tumor cells through different mechanisms including ligation of TNF‐related apoptosis‐inducing ligand (TRAIL) receptors. Zoledronic acid (ZA) is a bisphosphonate known to upregulate the expression of TRAIL on human γδ T cells. Here, we investigated whether exposure to ZA would upregulate TRAIL expression on human NK cells and augment their cytotoxicity against tumor cells. When cocultured with monocytes, treatment with ZA and IL‐2 resulted in a significant upregulation of TRAIL expression on human NK cells (p = 0.002). Consequently, ZA‐primed NK cells were significantly more cytotoxic against TRAIL sensitive tumor cells (p < 0.0001). In the presence of ZA and IL‐2, monocytes produced high levels of IFN‐γ; when cultured in the presence of neutralizing antibodies to IFN‐γ, TRAIL expression and TRAIL‐mediated cytotoxicity of NK cells were significantly reduced. Furthermore, in tumor‐bearing SCID/Beige mice, a significant delayed tumor progression and prolonged survival was observed after infusion of ZA‐primed NK cells compared with that observed in mice infused with unprimed NK cells. These findings represent a novel approach to potentiate TRAIL‐mediated apoptosis by adoptively infused NK cells that could improve the outcome in patients with cancer.     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的在体外实验中,探讨三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法采用TUNEL染色法,定性、定量地研究As2O3与卵巢癌细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果As2O3在体外能诱导卵巢癌细胞发生凋亡,下调bcl-2的表达,增强bax的表达。结论诱导卵巢癌细胞发生凋亡是As2O3抗卵巢癌作用的机制之一,As2O3可能通过下调bcl-2的表达及增强bax的表达诱导卵巢癌细胞发生凋亡。     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2对去血清培养诱导的293T细胞凋亡的作用

目的：探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP－2对去血清培养诱导人胚肾293T细胞凋亡的作用。方法:将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2(WT)野生型及pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体法转染293T细胞，MTT测定去血清培养对293T细胞增殖的抑制情况，去血清培养293T细胞3 d后，电镜观察超微结构、流式细胞仪检测细胞凋亡率、免疫组织化学方法测定caspase-3表达。结果:去血清培养293T细胞3 d，转染pIRES-GFP-SHP-2(WT)野生型组的293T细胞凋亡率明显低于对照组和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组；而2转染组超微结构均发生早期凋亡，但并无明显差异；caspase-3免疫组化结果显示SHP-2(WT)野生型组的caspase-3表达率明显低于SHP-2C459S突变体组。结论:SHP-2可能参与到去血清培养诱导细胞凋亡的信号转导通路中并通过caspase-3依赖途径，对细胞的生存起到正向调节作用。     

rhIL-2与阿霉素白蛋白磁微球靶向治疗肿瘤的协同作用

目的：观察重组人白细胞介素-2(rhIL-2)瘤内注射和阿霉素白蛋白磁微球(ADM-MAM)联合外磁场联合治疗H22荷瘤小鼠的协同作用，并探讨其抗肿瘤作用机制。方法：以荷瘤小鼠的瘤重为指标，观察药物的抗肿瘤活性。以乳酸脱氢酶释放法测NK细胞的杀伤活性。以MTT比色法测淋巴细胞的转化率。以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53、Fas和FasL的表达。用RT—PCR法测定IL—2及IL—12的表达。探讨抗肿瘤机制。结果：ADM—MAM靶向治疗与rhIL—2联用，可显著减小荷瘤小鼠的瘤重；提高NK细胞的杀伤活性和脾脏淋巴细胞的转化率；减小肿瘤细胞的增殖指数，上调肿瘤细胞p53、Fas和FasL的表达，以及增加脾脏淋巴细胞上IL—2及IL—12的表达。结论：ADM—MAM联合外磁场，具有显著增强抑瘤的作用。rhIL—2能增强ADM—MAM靶向治疗的抗肿瘤作用，其抗肿瘤协同作用主要是通过促进T细胞增殖，刺激NK细胞增长等提高机体的免疫功能而实现的。