北京地区心血管疾病患者SLCO1B1&ApoE基因多态性分析

目的 了解北京地区心血管疾病患者药物代谢基因SLCO1B1和ApoE的基因多态性分布，为他汀类药物的临床应用提供数据支持。方法 采用聚合酶链式反应-荧光探针方法对2017年7月至2022年12月就诊于北京市石景山医院的826例心血管疾病患者进行SLCO1B1和ApoE基因多态性检测。分析该研究群体总体以及不同性别的基因多态性分布，比较北京地区与已报道的其他地区的基因多态性分布。结果 经过Hardy-weinberg遗传平衡检验，本研究样本具有群体代表性。在826例心血管疾病患者中共检出6种SLCO1B1基因型，分别为*1b/*1b(38.63%)、*1a/*1b(35.23%)、*1b/*15(12.71%)、*1a/*1a(7.14%)、*1a/*15(4.96%)和*15/*15(1.33%)。共检出6种ApoE基因型，分别为E3/E3(69.12%)、E3/E4(14.65%)、E2/E3(13.08%)、E2/E4(1.45%)、E4/E4(0.97%)和E2/E2(0.73%)。不同性别患者的SLCO1B1和ApoE基因多态性分布差异无统计学意义(P>0.05)。北京地...     

右美托咪定减轻酒精诱导的小鼠急性肝损伤

目的:探讨右美托咪定(DEX)对酒精诱导的小鼠急性肝损伤的作用及机制。方法:50只昆明小鼠随机分为5组(n=10):生理盐水对照(NS)组、酒精性肝损伤模型(E)组、DEX低剂量(10μg/kg)治疗(E+L)组、DEX中剂量(50μg/kg)治疗(E+M)组和DEX高剂量(100μg/kg)治疗(E+H)组。各组动物乙醇灌胃后6 h处死,采集血和肝组织标本。测定各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及甘油三酯(TG)浓度;测定各组肝组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;ELISA测定小鼠肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的浓度;Western blot检测肝组织细胞色素P4502E1(CYP2E1)和核因子κB(NF-κB)的表达;HE染色观察肝组织病理学改变并进行肝损伤评分。结果:与NS组比较,E组血清的AST、ALT水平及TG含量升高,与E组比较,E+M组和E+H组血清AST、ALT水平及TG含量降低;与NS组比较,E组肝组织MDA含量升高,GSH含量和SOD活性降低,与E组比较,E+M组和E+H组肝组织MDA含量降低,GSH含量及SOD活性升高;与NS组比较,E组肝组织TNF-α和IL-1β含量升高,与E组比较,E+M组和E+H组肝组织TNF-α和IL-1β含量降低;与NS组比较,E组肝组织CYP2E1和NF-κB表达升高,与E组比较,E+M组和E+H组肝组织CYP2E1和NF-κB表达降低;肝组织病理学检查可见,DEX中、高剂量可明显减轻肝细胞变性和坏死及炎性细胞浸润程度。结论:右美托咪定通过抗炎及抗氧化作用对急性酒精性损伤的肝脏具有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制CYP2E1和NF-κB的表达有关。     

eIF4E的研究进展

1978年发现了一种Mr为 24 000的细胞质蛋白能够与帽同系物特异地交叉结合, 并将此蛋白命名为 24K帽结合蛋白, 后来重新命名为eIF4E(eukaryotictranslationinitiationfac tor4E)。目前在哺乳动物中已经明确了 3种不同的eIF4E家族成员: eIF4E1、eIF4E2(4EHP、4E LP)和eIF4E3[1]。eIF4E1存在于所有的真核生物中; eIF4E2和eIF4E3分别存在于后生动物和脊索动物。在体外, 三者都具有与mRNA帽结构结合的特点, 但是eIF4E2、eIF4E3仅具有eIF4E1的部分活性。由于eIF4E1的功能完整性, 在此仅对eIF4E1(以下称eIF4E)的研究进展…     

E2F1促进内源性XRCC1启动子的表达

目的 探讨E2F1对XRCC1的调节作用及其意义.方法 将受四环素调节的启动子控制的E2F1表达载体(tet-E2F1)和突变的E2F1(tet-132E)表达载体分别转染至Saos2细胞,构建XRCC1启动子荧光报告载体,同时转染特异的XRCC1启动子荧光报告载体和不同数量的E2F1表达载体以及E2F2、E2F4、E2F4表达载体进入Saos2细胞,收集细胞,进行荧光素酶分析,570 nm波长读取吸光度值.结果 转染E2F1表达载体和XRCC1启动子荧光报告载体,提高E2F1载体的数量可以增加荧光素酶的活性,相反.突变的E2F1(132E)不能激活XRCC1启动子荧光报告基因.结论 E2F1能够激活XRCC1启动子,并且能够使XRCC1启动子表达增强.     

前列腺素E1对急性缺血损伤大鼠肾组织血栓调节蛋白表达的影响

探讨前列腺素E1(prostaglandin E1,PGE1)对肾缺血再灌注损伤(ischemiareperfusion injury,IRI)大鼠血中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMNs)细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecu...     

过表达E2F1保护神经元依赖其转录活性

目的探讨E2F1对小脑颗粒神经元死活的影响及机制。方法构建表达质粒pcDNA-E2F1(pE2F1)及突变体pcDNA-E2F1-m132(pm132),转染293细胞验证表达,转染小脑颗粒神经元用6×E2F-luciferase报道基因检测转录活性。转染神经元24 h或48 h后Hoechst 33258核染色,统计转染pE2FI及pm132神经元(GFP阳性细胞)的核固缩率(即凋亡率);或者转染48 h后进行25K、5K处理12hr,统计凋亡率。结果构建质粒表达E2F1及突变体E2F1-m132成功,E2F1具有转录活性而E2F1-m132没有;表达E2F1及E2F1-m132均未诱导神经元凋亡(P>0.05);表达E2F1抑制5K诱导的神经元凋亡(P<0.05),而E2F1-m132没有抑制效应。结论E2F1抑制神经元凋亡依赖其转录活性。     

子宫内膜癌中p16蛋白及E-Cad的表达及意义

目的　探讨p1 6蛋白及E -钙粘附蛋白 (E -cad)在子宫内膜癌中的表达及意义。方法　采用免疫组化SP法对 3 8例子宫内膜癌及 1 9例正常子宫内膜组织进行了P1 6蛋白及E -钙粘附蛋白的免疫组化检测。结果　 ( 1 )在子宫内膜癌与正常子宫内膜组织中 ,p1 6蛋白的表达差异极显著 (P <0 0 1 ) ,并且随着子宫内膜癌临床期别的增高p1 6蛋白的表达率显著下降 ;( 2 )在子宫内膜癌组织中 ,E -cad的阳性表达率明显低于正常对照组 ( P <0 0 1 ) ,并且随着子宫内膜癌临床期别的增高E -cad的阳性表达显著降低 ;结论　p1 6蛋白及E -钙粘附蛋白在子宫内膜癌的发生及进展过程中起重要作用。     

TRAF4通过泛素化E2F1调控乳腺癌细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)是否通过E2F1转录因子(E2F1)调控乳腺癌细胞凋亡.方法 流式细胞分析检测TRAF4对乳腺癌细胞凋亡的调控情况以及E2Fl在其中的作用;Western blot检测TRAF4、精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)和E2F1之间的调控关系;免疫荧光及免疫共沉淀检测TRAF4与E2F1的定位及相互作用.结果 TRAF4能够抑制乳腺癌细胞凋亡.TRAF4通过下调E2F1抑制乳腺癌细胞凋亡.TRAF4下调E2F1的作用不依赖PRMT5.TRAF4通过泛素化作用降解E2F1.结论 在乳腺癌细胞中,TRAF4可以通过泛素化作用降解E2F1,并下调其表达水平,从而发挥其抑制凋亡的活性.     

雌二醇抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎与其下调细胞间粘附分子1和干扰素γ的表达有关

目的:探讨雌二醇(estradiol,E2)对去卵巢后实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠的免疫抑制作用及其机制.方法:制备去卵巢后10天的EAE动物模型,随机分为EAE组、E2治疗组和佐剂组.E2治疗组从免疫后(Post-inoculation,p.i.)0～5天每日肌注E2(250 μg/kg)一次.观察各组在不同时间点的血清E2浓度、血清和脑脊液中白蛋白含量比值(CSF to serum albumin quotient,QA),通过QA评定血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)的损害.在p.i.6、8、10、12、14、16天处死动物,取脑和脊髓用免疫组化技术检测不同部位细胞间粘附分子1(Intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)和干扰素γ(Interferon-γ,IFN-γ)的表达,并对EAE组ICAM-1和IFN-γ进行相关分析.结果:在p.i.6～12天E2治疗组血清E2浓度较EAE组升高(F=1 666.49,P＜0.05).EAE组QA在p.i.8天达峰值(0.31±0.07),E2治疗组QA在p.i.14天达峰值(0.20±0.04),E2治疗组QA值幅度低且峰值出现时间较EAE组延迟(F=26.20,P＜0.05).E2治疗组临床症状评分(0.53±0.92)较EAE组(2.07±1.67)降低(t=2.93,P＜0.05);E2治疗组体重减轻(6.73±3.53)较EAE组(15.40±4.03)减少(t=6 26,P＜0.05);E2治疗组发病率(27%)较EAE组(73%)降低(χ2=6.53,P＜0.05).在p.i.10～16天,E2治疗组ICAM-1的表达较EAE组降低(F=21.01,P＜0.05),E2治疗组IFN-γ的表达较EAE组降低(F=26.19,P＜0.05).EAE组ICAM-1与IFN-γ表达呈显著正相关性(r=0.87,P＜0.01).结论:E2能够有效抑制EAE,其抑制机制与E2下调ICAM-1、IFN-γ的表达,进而保护BBB的功能和促使Th细胞发生转分化有关.     

女性激素替代治疗的临床应用

女性激素替代治疗 (horm eme replacem ent therapy,HRT)是一种医疗措施 ,当机体缺乏性激素 ,并由此发生或将会发生健康问题时 ,需要外源地给予具有性激素活性的药物 ,以纠正其不足。目前 ,该方法已广泛地用于围绝经期和子宫切除后妇女及某些性激素相关疾病的防治 ,以提高老年妇女的生活质量和生殖健康水平。现就 HRT有关知识综述如下。1　 HRT的临床应用1.1　药物种类　 (1)雌激素 (E)类 :1天然 E:E1 、E2 、E3 及其衍生物 ;2酯化 E制剂 :戊酸雌二醇 ,硫酸雌酮 ,硫酸哌嗪雌酮 ;3结合 E:倍美力 ,补佳乐。 (2 )孕激素 (P)类 :117羟酮…     

苦荞过敏原TBa表位区段的表达及免疫活性分析

目的:确定苦荞过敏原(TBa)的主要表位区段。方法:以TBacDNA为模板,利用PCR方法,构建TBa的4个表位区段(E12、E3、E6、E36)的重组原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。经Ni2+-NTA亲和纯化后,SDS-PAGE分析。采用间接和竞争ELISA以及点杂交技术进行免疫活性测定。结果:获得了纯度较高的TBa重组表位蛋白(E12、E3、E6、E36),与先前获得表位E1、E2的免疫活性比较表明,重组表位蛋白与荞麦过敏症患者血清均有IgE结合活性,其中E1的活性最强。结论:E1可能是苦荞过敏蛋白TBa中最重要的抗原结合区域之一。     

丙型肝炎病毒河北株E2蛋白胞外核心区的真核表达及应用

目的真核细胞表达丙型肝炎病毒(HCV)河北株E2蛋白胞外核心区(E2c)并利用E2c蛋白检测HCV患者血清中特异性抗E2蛋白抗体水平。方法以HCV1b型(河北株)基因序列为基础,设计HCV1b E2c基因序列并通过基因拼接的方法合成;将含有组织型纤溶酶原激活物(t PA)信号肽的E2c扩增产物克隆入p CI-neo真核表达载体,获得p CI-tpa-1b E2c载体;将p CI-tpa-1b E2c真核表达载体转染HEK293T细胞,收集细胞上清后进行浓缩及纯化,Western blot法鉴定蛋白特异性;以获得E2c蛋白为抗原,建立基于雪花莲凝集素(GNA)的改良ELISA检测HCV患者血清特异性抗E2c抗体水平。结果成功利用真核表达系统表达获得E2c蛋白,建立了GNA改良ELISA检测HCV患者血清中抗E2蛋白抗体的方法。结论成功在HEK293T细胞表达HCV-1b E2c蛋白并进行了临床应用。     

ATP结合盒转运子A1对巨噬细胞载脂蛋白E分泌的调节作用

目的: 研究ABC转运子(ABC)A1对巨噬细胞载脂蛋白E(apo E)的分泌是否具有调节作用。方法: 利用佛波酯刺激人单核细胞系THP-1细胞分化;分别将ABCA1表达的激动剂8-Br-cAMP、抑制剂格列苯脲和针对ABCA1 mRNA的特异性反义寡核苷酸与分化后的THP-1巨噬细胞或巨噬细胞泡沫细胞一起孵育,通过酶联免疫吸附试验和Northern blot检测其对细胞apo E的产生、分泌以及apo E基因表达的影响。结果: 在孵育8 h时,8-Br-cAMP可使THP-1巨噬细胞apo E分泌增加(P＜0.05),而格列苯脲和针对ABCA1 mRNA的反义寡核苷酸则明显减少THP-1巨噬细胞和巨噬细胞泡沫细胞的apo E分泌(P＜0.01)。同时这些调节剂均不改变THP1巨噬细胞内apo E含量和apo E mRNA表达水平。结论: ABCA1促进巨噬细胞和巨噬细胞泡沫细胞apo E的分泌,该作用发生在翻译后水平上。     

Caveolin-1在17β-雌二醇对抗脂多糖诱导的血管平滑肌细胞MCP-1表达中的作用

目的:旨在观察小窝蛋白-1(caveolin-1)在17β-雌二醇(E2)抑制脂多糖(LPS)诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)分泌单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)中的作用。方法:原代培养VSMCs,以不同浓度E2(10-9-10-6mol/L)干预LPS诱导的MCP-1的分泌,ELISA法检测MCP-1生成的变化。分别使用caveo-lin-1的阻断剂β-甲基环糊精(β-MCD)以及特异性caveolin-1 siRNA抑制caveolin-1表达,W estern b lotting法检测caveolin-1蛋白表达的变化。结果:LPS浓度和时间依赖地诱导MCP-1的表达,不同浓度E2(10-9-10-6mol/L)抑制LPS诱导的MCP-1的表达;分别使用β-MCD以及caveolin-1 siRNA抑制caveolin-1的表达,能抑制LPS诱导的MCP-1的表达,而E2(10-6-10-9mol/L)又可以抑制caveolin-1的表达。结论:E2抑制LPS诱导的血管平滑肌细胞MCP-1的表达,caveolin-1是这一抑制作用的中间环节。     

广西壮族人群ICAM-1基因多态性及血清水平与脑梗死关系的研究

探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因K469E多态性各等位基因及基因型在广西壮族脑梗死患者中的分布频率,初步分析其基因及血清水平与脑梗死的关系。采用聚合酶连反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和DNA序列测定法检测19例脑梗死及210例对照者ICAM-1基因第6外显子K469E多态性,同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑梗死和对照者血清ICAM-1水平。脑梗死组ICAM-1血清水平显著高于对照组(P<0.01),ICAM-1基因K469E基因频率和等位基因频率在脑梗死组和对照组比较差异有显著性(P<0.05),等位基因频率的相对风险分析发现,E等位基因携带者患脑梗死的风险是K等位基因的1.454倍(OR=1.454,95%CI1.090～1.940),携带E等位基因的脑梗死患者ICAM-1血清水平显著高于不携带者(503.31±141.32)ng/ml和(489.80±122.43)ng/ml,(P<0.01)。ICAM-1基因K469E多态性与脑梗死的发病具有相关性,E等位基因可能是广西地区壮族人脑梗死发病的遗传易感基因,携带E等位基因的个体可能通过促进ICAM-1的高度表达进而增加脑梗死的发病风险。     

雌激素对去卵巢大鼠血清NO、NOS及ET-1水平的影响

观察雌二醇 (E2 )替代疗法对去卵巢大鼠血清一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)及内皮素 - 1(ET - 1)水平的影响。选择 2 1只SD雌性大鼠 ,体重 (2 0 0± 10 ) g ,随机分为假手术组 ,去卵巢组 ,去卵巢 +E2 治疗组。一个月后将大鼠处死 ,测血清NO、NOS及ET - 1的含量。结果表明同假手术组相比 ,去卵巢大鼠血清NO与NOS显著降低 ,ET - 1水平显著升高 ;去卵巢 +E2 治疗组大鼠血清NO与NOS显著升高 ,而ET - 1显著下降(P <0 .0 5 )。结果显示 :E2 能对血管内皮NO、NOS及ET - 1起调控作用 ,这可能是E2 对抗动脉粥样硬化的作用机制。     

子宫颈鳞状细胞癌中PDHA1的表达及临床意义

目的 探讨丙酮酸脱氢酶E1亚单位α(pyruvate dehydrogenase E1 component subunit alpha,PDHE1α)(又称PDHA1)在子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化EnVision法...     

B细胞淋巴瘤中E2F1、BIRC5、PLK1蛋白表达及其临床意义

目的探讨E2F1、BIRC5、PLK1蛋白在B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义。方法收集80例B细胞淋巴瘤及30例反应性增生淋巴组织,用免疫组化SP法检测两组中E2F1、BIRC5、PLK1的表达差异。结果 B细胞淋巴瘤中E2F1、BIRC5、PLK1蛋白表达均明显高于反应性增生组(P<0.05),与临床分期密切相关(P<0.01),与年龄、发生部位无关(P>0.05)。E2F1、PLK1蛋白表达与组织学亚型及恶性程度相关(P<0.05),BIRC5表达与此二者无关(P>0.05)。E2F1在男性患者中的表达高于女性患者(P<0.01),BIRC5、PLK1蛋白在不同性别组中的表达差异无显著性(P>0.05)。经Spearman等级相关分析发现E2F1、BIRC5、PLK1蛋白在B细胞淋巴瘤中的表达均呈正相关(P<0.01)。结论联合检测E2F1、BIRC5、PLK1对B细胞淋巴瘤的诊断、治疗及预后判断具有一定的现实意义。     

丙型肝炎病毒包膜基因变异与急性丙型肝炎疾病转归的动态研究

目的探讨HCV包膜基因变异与急性丙型肝炎疾病转归的关系。方法前瞻性收集到5例HCV急性感染者的系列血清标本,其中2例一过性感染,3例持续性感染。采用高精确度DNA聚合酶,较长PCR扩增HCV基因组结构区(包括C区C端、E1和E2区N端)1 kb产物并进行克隆,每份标本挑选33个克隆,以异源双链和单链构象多态分析筛查的代表性克隆型DNA进行测序,并对HCV的E1、HVR1及HVR1除外的E2区核酸序列的非同义碱基替换率、同义碱基替换率以及氨基酸序列的理化特征进行分析。结果HCV持续性感染者急性期与慢性期的标本比较,HVR1基因差异性明显大于E1 (0.0322±0.0068 vs-0.0020±0.0014,P<0.05)和HVR1以外的E2区(0.0322±0.0068 vs 0.0017±0.0011, P<0.05),而一过性感染者感染初期与病毒清除前标本比较,HVR1、E1和HVR1以外E2基因差异性则无明显改变。HCV持续性感染者的E1(0.23×10-3±O.15×10-3)、HVR1(2.76×10-3±1.51×10-3)和HVR1以外E2区(0.50×10-3±0.10×10-3)的非同义碱基替换率比较,HVR1非同义碱基替换率呈明显增高趋势。相反,一过性感染者E1、HVR1和HVR1以外E2区的同义碱基替换率和非同义碱基替换率则无明显改变。E1、E2区所有半胱氨酸及潜在的糖基化天冬酰胺均高度保守,HVR1第11、25、27位置保持碱性氨基酸。结论HCV持续感染与宿主免疫反应对HVR1的阳性选择相关,HVR1区特异位置保守的碱性氨基酸可供研制HCV疫苗时参考。     

雷公藤联合前列腺素E1治疗下肢动脉硬化闭塞症36例临床分析

目的 探讨雷公藤联合前列腺素E1(PGE1)治疗下肢动脉硬化闭塞症(LEAOD)的疗效.方法 选取下肢动脉硬化闭塞症患者72例,随机分为对照组36例和治疗组36例,对照组采用单纯前列腺素E1治疗2个疗程,治疗组采用雷公藤联合前列腺素E1治疗2个疗程,比较两组疗效.结果 治疗组总有效率91.67%,对照组总有效率72.22%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 雷公藤联合前列腺素E1治疗下肢动脉硬化闭塞症较单纯前列腺素E1疗效好,而且药源丰富易取,价格低廉,值得进一步深入研究.