心肌闰盘染色改良法

应用免疫组化与HE相结合的染色方法显示心肌闰盘,敏感性高、特异性强,同时能全面展示心肌的光镜结构特点,在实验教学中便于学生观察和识别。     

急性染镉对大鼠心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43表达的影响及黄芪甲苷的拮抗作用

目的:观察急性染镉对大鼠心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨黄芪甲苷的保护机制.方法:SD大鼠随机分为正常组、镉处理组、镉加黄芪甲苷处理组,取心室肌组织,分别作光镜、透射电镜观察和免疫组织化学检测.结果:与正常组相比,镉组心肌细胞连接蛋白43的表达量明显降低,心肌纤维和闰盘超微结构破坏严重;而镉加黄芪甲苷组心肌细胞连接蛋白43的表达量较镉组显著增加,心肌纤维和闰盘超微结构的损伤也明显减轻.结论:镉能破坏心肌细胞闰盘超微结构,影响连接蛋白43的表达及分布,黄芪甲苷能在一定程度上拮抗镉对心肌细胞闰盘超微结构和连接蛋白43的毒性损伤.     

形态学检验方法在心肌组织样本中的应用

目的探讨形态学检验方法在心肌疾病中的应用,评价其优缺点。方法运用磷钨酸苏木素(PTAH)染色法、Masson 3色染色法、弹力纤维组织(ET)+Van Gieson(VG)染色法、刚果红染色法、过碘酸雪夫氏(PAS)染色法、革兰氏染色法、以及免疫组织化学法及透射电子显微镜对心肌组织进行检测。结果 HE染色对心肌组织的区分度不好;Masson 3色染色法对心肌细胞和胶原纤维有明确的区分作用;ET+VG染色法可以很好地区分弹力纤维、胶原纤维、肌纤维和淀粉样物质;刚果红染色主要用于淀粉样物质的检测;PAS反应可辅助诊断糖原累积症;免疫组织化学(IHC)技术在疾病模型的研究及对疾病的观察中具有重要辅助作用;电子显微镜对超微结构的观察是病因学诊断的重要手段。结论运用组织水平、亚细胞水平以及分子水平的形态检验方法,对心肌组织样本进行观察与评估,可以得到较好的效果。     

过锰酸钾——苏木精染心肌闰盘整块染色法

参照“实用组织学技术中,碘酸钠——苏木精块染心肌闰盘法”,我们用过锰酸钾代替碘酸钠。经过应用,取得了闰盘及横纹清楚,色泽鲜艳的满意效果。现将此法介绍如下。一、取材:取人、猴、狗、兔的心肌,尤以心尖部经纵行肌较佳。切成1～2     

心肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景：干细胞具有“环境依赖性分化”特性,以心肌组织裂解液模拟心肌微环境诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞方向分化的研究甚少。 目的：观察心肌组织裂解液对大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞方向分化的影响。 方法：选用生长良好的第2代骨髓间充质干细胞,加入诱导液连续培养5周,连续观察细胞形态学特征的变化规律,采用α-Actin进行免疫细胞化学染色观察干细胞是否向肌细胞方向分化,收集诱导后的细胞行苏木精-伊红染色观察是否存在闰盘,并通过电镜观察其超微结构。 结果与结论：加入诱导液后大部分细胞呈“竹节样”,α-Actin免疫细胞化学染色阳性,表明间充质干细胞向肌细胞方向分化;苏木精-伊红染色可见闰盘,透射电镜下见排列整齐明暗相间的肌丝,扫描电镜下可见胞浆内有纤维状结构,说明“竹节样”细胞具有心肌细胞的典型形态结构特点。连续诱导12 d多个区域出现成片的、具有自律性搏动的多核肌管结构。心肌组织裂解液可模拟心肌细胞的微环境,诱导骨髓间充质干细胞分化为具有典型形态结构特征和相应功能活动的心肌样细胞。     

不同染色方法对人脑垂体细胞显示效果的比较

目的改进人脑垂体的染色方法,更清晰地显示腺垂体内各种细胞的形态特点,提高实验课教学质量。方法应用苏木精-伊红染色法和改良染色液染色法显示脑垂体的组织结构。结果用传统的苏木精-伊红染色法不易区分各种细胞,而采用改良染色液显示脑垂体组织结构效果好,既能观察脑垂体的结构,又能区分嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞。结论改良染色液染色法能够很好地显示脑垂体组织结构,使3种细胞的形态特点清晰可辨,可为实验教学提供优质的切片标本。     

两种横纹肌染色方法的比较

<正>横纹肌包括骨骼肌和心肌,常规的H-E染色方法对正常横纹肌中横纹显示不清楚,所以为了显示与观察横纹,常常需要用到特殊的横纹肌染色方法。传统的横纹肌染色包括Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH)和Heidenhain氏铁苏木素染色法等。作为医学检验方法,以简单快速为首选,而要制作教学切片,则对染色的效果,切片存放时间等要求高。为了寻求一种稳定的,效果好的,适合制作大量教学切片的染色方法,我们将上述2种横纹肌的染色方法做了比较。     

应用活体冷冻技术研究活体小鼠心脏微循环

目的：分别用传统组织制备方法与活体冷冻技术（in vivo cryotechnique,IVCT）联合冷冻置换制备方法制备样本,对比研究小鼠心外膜下微循环内血流、红细胞及血清蛋白在心脏的免疫定位分布。方法：实验分三组,活体冷冻组（IVCT）、浸泡固定组（immersion dehydration fixation,IM-DH）及灌流固定组（perfusion dehydration fixation,PF-DH）,每组8只小鼠,分别对跳动的小鼠心脏进行活体冷冻技术联合冷冻置换,浸泡固定及灌流固定,制作的组织样本分别进行苏木素-伊红染色、免疫组织化学染色以及双重免疫荧光染色,光镜及共聚焦荧光显微镜观察,对结果进行对比分析。结果：IVCT从组织形态学水平显示微血管内流动状态的血流,即单行排列的顶端指向血流方向的成串的降落伞型红细胞,以及微血管分流和汇合处;血清白蛋白和免疫球蛋白不但通过微血管壁进入细胞间隙,白蛋白还单独分布在心肌细胞间的特殊结构闰盘和心肌细胞表面的T小管。结论：IVCT实现了从免疫组织化学水平显示活体状态小鼠心脏的微循环;心肌细胞间的闰盘及心肌细胞表面的T小管对血清蛋白具有分子大小选择性。     

陈旧蜡块组织脆硬的技术处理

在回顾性研究时 ,经常会遇到因为放置过久或保存不当 ,蜡块组织变硬、变脆或发糟 ,而难以制片的问题。配制既不损害组织结构和影响染色效果 ,又能达到新鲜蜡块标本柔软程度的软化剂 ,是我们一直探讨的目标。作者以 10年以上陈旧蜡块组织为处理对象 ,对各种试剂进行选择、比较 ,在不同温度下 ,通过调整处理时间 ,反复实验 ,配制出一种能软化处理各种陈旧蜡块组织而不影响各项染色的软化剂 ,效果满意 ,现介绍如下。1　材料与方法1 1　材料　 10年以上陈旧蜡块组织 6 0 0例 ,可调式热水浴箱 1个 ,白瓷方盘 1个 ,纱布垫 1块。1 2　 试剂配制　试…     

心房颤动患者心房纤维化与缝隙连接重构的关系

目的：探讨心房颤动患者心房肌胶原纤维与缝隙连接重构在房颤发病机制中的可能作用以及它们之间的关系。 方法： 取44例心脏病患者的右心耳标本（房颤26例,为AF组；窦性心律18例，为SR组）,（1）行天狼猩红染色，偏光显微镜下观察AF组与SR组心房肌Ⅰ型胶原并通过图像分析系统分析统计2组间Ⅰ型胶原含量分数（collagen volume fraction of collagen Ⅰ,CVF-Ⅰ）的差异；（2）超微病理切片，透射电镜下观察闰盘并统计闰盘组数及闰盘重构分数（remodeled intercalated disc fraction, RIDF）；（3）连接蛋白43（connexin 43,Cx43）免疫组化染色，普通显微镜下观察分析缝隙连接蛋白Cx43的含量分数（volume fraction of Cx43,Cx43VF），统计2组间的差异；（4）CVF-I与Cx43VF、RIDF分别进行Pearson相关分析。 结果： （1）AF组CVF-I高于SR组（1.26 vs 0.57, P＜0.01）；(2)2组间闰盘组数无显著差异(9.54 vs 10.11, P>0.05), AF组闰盘重构分数大于SR组(39.48 vs 15.61, P＜0.01)；(3)AF组Cx43VF低于SR组(3.45 vs 5.22, P＜0.01)；(4)CVF-I与闰盘重构比例正相关(r＝0.96,P＜0.01)；(5)CVF-I与Cx43VF负相关(r＝－0.98,P＜0.01)。 结论： 房颤患者Ⅰ型胶原纤维化程度增加，闰盘与连接蛋白发生重构。纤维化可能分离心肌，使闰盘重构,进而影响到缝隙连接蛋白的分布，参与房颤发生发展的过程。     

CX40和miR-155在冠状动脉粥样硬化性心脏病猝死者心肌中的表达及其法医学意义

目的鉴定在冠状动脉粥样硬化性心脏病猝死者心肌中心肌连接蛋白(connexin,CX)40、免疫及炎症相关的小分子RNA(micro155)的表达及探讨其法医病理学意义。方法在2014-2015年间法医尸体解剖工作中选出22例符合冠心病猝死的心脏标本(标本严格按照冠状动脉粥样硬化性心脏病的标准进行筛选)作为试验组,再选取10例非冠心病猝死者作为对照组;对筛选出两组中所有的蜡块进行连续切片,HE染色;利用免疫组织化学染色来检测CX40在心肌中的表达;蜡块心肌组织中提取micr RNA,利用RT-PCR法检测每组中mi R-155的表达情况;数据统计学处理采用SPSS18.0统计软件分析,P0.05为差异有统计学意义。结果 HE染色观察分析:试验组切片镜下可见心肌纤维多处断裂,细胞间质充血水肿,且伴有脂肪变性和脂质沉积;有纤维斑块形成,内部有无定型的坏死崩解物质,镜下观察呈现针形空隙,底部和边缘有肉芽组织和纤维组织,并有泡沫细胞聚集和淋巴细胞浸润;对照组心肌细胞形态正常,各动脉管腔无狭窄;CX40免疫组织化学染色结果:非冠心病猝死组显示磷酸化心肌连接蛋白40大量分布于心肌闰盘处,排列整齐并有一定的规律性;冠心病猝死组显示心肌连接蛋白40在心肌梗死部位数量减少甚至完全消失,排列散乱,分布不均匀;RT-PCR结果表明mi R-155在冠心病猝死者中的表达显著上调,且在试验组和对照组中差异有统计学意义(P0.01)。结论在冠心病猝死患者的心肌中CX40含量减少,mi R-155显著表达,为冠心病猝死法医学鉴定提供了理论依据。     

不同固定液、染色法显示结缔组织肥大细胞效果的比较

本研究用6种固定液、4种染色法,观察对显示小鼠耳廓、舌和背皮肤结缔组织肥大细胞的影响。结果表明:一种固定液固定的组织,用不同的染色法染色或不同固定液固定的组织,用一种染色法染色,显示肥大细胞的效果不同。这可能是由于固定液能影响肥大细胞颗粒对染料的亲合力。本文对不同部位的结缔组织肥大细胞对固定液的反应有差异这一现象,进行了讨论。     

脊髓块染改良法

脊髓是医学院校学生实验课必须观察的内容之一,脊髓前角神经细胞内尼氏体的形态结构可作为判断其机能状态的一种标志.在光镜下显示尼氏体的染色方法较多,但大多数为石蜡切片染色法.虽然有的方法能很清晰地显示尼氏体.但标本很快褪色,不易保存.为探索一种快速显示和能较久地保存尼氏体的方法.作者经反复试验,改用组织块固定和染色同时进行的方法.该方法非常简单,容易掌握.经染色后的组织块不但容易切片.而且能保存数年不褪色:同时,封固剂也由常规的加拿大树胶改用环氧树脂、DDSA混合剂,避免易褪色现象.     

实验动物肝组织制片和胶原纤维染色方法的改进

在组织制片中 ,实验动物免疫损伤性肝纤维模型组织切片难度较大 ,因此我们改变了组织固定、脱水、透明、浸蜡和切片与Ｈ、Ｅ染色 ,提高了制片质量。特别是根据实验病理组织形态变化的要求 ,进行二种特殊对比染色 ,所选用和改进的显示胶原纤维的Ｓｉｒｉｕｓｒｅｄ(天狼星红 ) [1] 和Ｍａｓｓｏｎ三色染色法[2 ] ,已得到了较好的染色效果。1　材料和方法1 1　肝组织采用 1 5 %　中性甲醛固定液 ,得到了较好的固定效果。解剖后的动物大鼠肝脏标本切开 3～ 5块 ,置固定液中 5小时后 ,取材 0 2～ 0 .3ｃｍ厚度 ,再固定 5～ 1 0小时可得到充分…     

大鼠骨髓间质干细胞定向分化的心肌细胞间形成闰盘样结构

目的：建立大鼠骨髓间质干细胞（BMMSCs）定向分化为心肌细胞的模型，了解细胞间藕联情况。方法： 采用贴壁筛选法分离BMMSCs，体外扩增，5-氮胞苷(5-aza)定向诱导第2代BMMSCs分化为心肌细胞，取继续培养1周、2周、3周的细胞进行免疫细胞化学染色，鉴定横纹肌肌动蛋白和闰盘样结构的存在。结果： 5-aza处理后1周、2周、3周均可见横纹肌肌动蛋白染色阳性细胞。5-aza处理后1周及2周连结蛋白43在部分细胞上表达:呈核周散在分布的棕黄色颗粒，5-aza处理后3周连结蛋白43 在细胞密度大的区域呈核周聚集成线形分布的棕黄色颗粒，个别细胞间可见此结构,类似正常心肌的闰盘结构。结论： 骨髓间质干细胞分化为心肌细胞过程中，随培养时间延长及细胞密度增加逐渐形成闰盘样结构。     

家兔心肌闰板的本质

前言虽然电镜曾显示心肌闰板为二层相邻的细胞膜组成,但它们所显示的闰板形态难于与光镜下所见到的心肌闰板形态完全吻合。本文图1及许多教课书的附图,如 Hama 及 Bailey 二书的附图,这许多图版用铁苏木素法所显示的心肌闰板都具有多种形态,本文试图讨论这些闰板形态差别的成因。     

活检组织中真菌Calcofluor White荧光染色法的改良

目的：探索对Calcofluor White荧光染色法的改良,为活检诊断真菌感染提供一种快速、经济、对比更清晰的染色方法。方法：采用Calcofluor White M2R和苏木素、伊红染液,组合成3种染色步骤,对32例病例进行染色,筛选出适用于活检组织,并且在光镜与荧光镜下能同时观察的改良染色法步骤。结果：光镜下,组织呈现HE染色固有的形态。切换至荧光显微镜下,真菌则被显示为亮蓝色,组织背景呈黄绿色,结果清晰、醒目,对比强烈。结论：改良Calcofluor White荧光染色法能使同一张切片在光镜和荧光显微镜下同时观察,相互对照和定位,是提高真菌检出的好方法,值得在真菌的病理活检工作中广泛使用。     

人心肌细胞粘着斑蛋白α-catenin表达的增龄变化

目的　探讨在人心脏发育过程中心肌细胞粘着斑蛋白α catenin表达的增龄变化规律。方法　应用S P免疫组化方法分别对新生儿和成年人的心肌细胞α catenin的表达进行检测。结果　细胞粘着斑蛋白α catenin在心房、心室、乳头肌、室间隔等处的心肌细胞中均有表达。新生儿时期大量的α catenin呈斑块状聚集在心肌的端闰盘处 ,少量分布于心肌细胞的侧面连接处和胞浆中 ;成年人心肌细胞的α catenin典型地分布于细胞末端的闰盘处。结论　在人的心肌发育过程中 ,α catenin的表达分布存在增龄变化 ;α catenin的分布方式与闰盘的发育是一致的     

石蜡切片显示大脑神经细胞方法探讨

以片显示大脑各种神经细胞一般都是用含有重铬酸钾的固定液固定,用硝酸银浸染的方法进行,所以要想制作大批教学标本只能用传统的方法。而大脑神经细胞的特殊染色,只能用火棉胶切片或冰冻切片制作标本,操作步骤复杂、时间长。为此我们对石蜡切片、镀银染色显示大脑神经细胞的方法进行了探讨。本实验选用小白鼠大脑,组织块大小为2×2cm,勿超过3cm;固定后入1%～1.5%硝酸银水溶液浸染5～7天;蒸馏水洗2分钟;用还原液作用24小时;组织块脱水、透明、浸蜡、包埋、切片,因低浓度酒精易使组织块退色,因此组织块经还原后在酒精内的脱水时间一定要精确。…     

采用紫BL与蓝B2R对组织切片染色的观察

目的寻找制备简单、效果良好、来源丰富的组织切片染色剂。方法应用27种直接服装染料对小鼠肝脏组织切片进行染色效果观察,发现其中的紫BL和蓝B2R染色能够清晰显示中央静脉和肝细胞核等结构,再用紫BL和蓝B2R对心脏、肾脏和睾丸组织切片进行染色效果观察。结果紫BL和蓝B2R用蒸馏水溶解后即可使用,配制简单,在5 min内完成。它们对心脏、肾脏和睾丸组织切片染色后,心肌横纹、肾小囊腔、生精细胞等结构清晰可辨,与HE染色结果类似。结论紫BL与蓝B2R比苏木素制备简单,同时它们的组织切片染色效果良好,来源丰富。因此,可能部分替代苏木素。