抗赭曲霉毒素A单克隆杂交瘤细胞系的建立及特性

用杂交瘤技术制备了4株稳定产生抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1A9、5F2、5G5和6G11。1A9、5G5和6G11的Ig亚类为IgG1,5F2的亚类为IgG2a。抗体腹水效价为500000～1000000。6G11检测纯毒素的线性范围为2～500ng/ml,最低检出量为1ng/ml。交叉反应的结果还表明,该单抗与共试的其他结构类似物无反应,具有较高的特异性。     

抗RAET1G2单克隆抗体的研制和初步鉴定

目的:制备鼠源抗RAET1G2单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:以原核表达的RAET1G2蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,运用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗RAET1G2单克隆抗体;用免疫双扩散方法鉴定Ig亚类;Western blot鉴定单克隆抗体的特异性。结果:获得了4株可分泌特异性抗RAET1G2抗体的杂交瘤细胞株7A11、9C6、10F9和12F8,Ig亚类均为IgG1。结论:制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌特异性的抗RAET1G2抗体,并且所分泌的单克隆抗体都能识别天然的RAET1G蛋白,为进一步研究游离性的RAETlG2分子与肿瘤进展的关系以及分析各种肿瘤细胞表面的RAET1G表达情况创造了条件。     

重组人α干扰素单克隆抗体的研制及其应用

目的　研制抗干扰素的单克隆抗体 (McAb)及其应用。方法　应用杂交瘤技术 ,获得 4 0株抗重组人α干扰素的单克隆抗体细胞株 ;用ELISA方法检测腹水滴度 ,用辛酸法纯化McAb。结果　 4 0株细胞中 2E9、4G1能稳定分泌抗重组人α1b干扰素的单克隆抗体 ,2C9为抗重组新型干扰素 ,2A7、4G10分泌抗重组人α干扰素 (α1b、α2b、α2a、)和重组集成干扰素、重组新型干扰素的单克隆抗体细胞系 ;体外连续传代 6个月 ,分泌抗体能力不变 ,特异性专一。 5株单克隆抗体均为IgG。采用辛酸方法提纯抗体纯度达到 95 %以上。粗制的重组人α干扰素经 4G10单克隆抗体亲和层析柱提纯后 ,获得的干扰素纯度 95 %以上 ,平均收率 93% ,残余鼠IgG含量 <10 0ng 剂量 (5 0 μg)。 2C9单克隆抗体亲和层析柱适用于纯化新型干扰素。结论　 4G10单克隆抗体亲和层析柱可以应用于大规模重组人α干扰素生产。     

抗鸡蛋卵类黏蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗鸡蛋主要过敏原卵类黏蛋白的单克隆抗体。方法利用鸡蛋卵类黏蛋白(ovm)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。采用半固体培养基法和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。利用双抗体夹心ELISA法检测食品中的鸡蛋过敏原。结果获得4株可稳定分泌鼠抗卵类黏蛋白的单克隆抗体,分别命名为1G8,2H5,3A7,4G4,其Ig亚型均为IgG1。且4株单抗效价均在10-8以上。ELISA和Western blotting分析表明该4株单抗均能特异性识别卵类黏蛋白,并且建立双抗体夹心ELISA的方法可以准确的检测出食品中鸡蛋过敏原的存在。结论成功制备了4株高效价的鼠抗卵类黏蛋白的单克隆抗体,为建立卵类黏蛋白检测及纯化方法奠定了基础,也可为食品中鸡蛋过敏原的检出提供依据。     

5株鼠抗人CD28单克隆抗体的研制及生物学特性的研究

目的：制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体，研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法：以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株，采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行单抗的研制；以快速定性试纸法鉴定单抗亚类；腹水诱生法和免疫亲和层析法进行单抗的制备和纯化；经间接免疫荧光法分析单抗对不同细胞膜表面CD28分子的识别；采用竞争抑制法分析单抗识别的抗原位点；利用^3H-TdR掺入法分析单抗对PBTC的刺激效应和免疫荧光法分析PBTC活化前后的表型变化。结果：成功获得5株鼠抗人CD28功能性单克隆抗体，分别命名为2D5、2F5、3136、3F8和8G8，其中2D5为IgG2a亚类，其余均为IgG1亚类；流式细胞仪分析结果显示，5株单抗均能良好识别CD28-T、U266、XGI和Jurkat细胞表面的CD28分子；竞争抑制试验表明，2D5和8G8能完全阻断标准抗人CD28单抗与U266膜CD28分子的结合，其余3株为部分阻断；^3H-TdR掺入法实验结果表明，单抗8G8联合激发型CD3单抗能明显促进PBTC的增殖，刺激指数为7．4，活化细胞CD4、CD25、ICOS、4IBB及OX40分子的表达上调。结论：5株单抗均为抗人CD28单克隆抗体，具有重要的基础研究及潜在的临床应用价值。     

抗人层黏连蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗人层黏连蛋白(laminin,LN)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:以人LN免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人的mAb;同时采用间接ELISA法柃测mAb的腹水效价及mAb的相对亲和力;采用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、进行表位分析及特异性鉴定。结果:获得4株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞2A3、2C6、3G7和4H2,其腹水mAb 的效价为3.6 × 104～2.1×106;4株mAb的Ig亚类为IgG1,轻链均属κ型;相对亲和力2C6在1012以上,2A3、3G7和4H2在106以上;其中2株与1个表位结合,另2株与另外的1个表位结合。结论:成功地制备出抗人LN的mAb,为进一步研究LN在一些疾病中的作用提供了工具。     

人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定北大核心CSCD

目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-GrnF免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,用ELISA筛选阳性克隆,并采用有限稀释法进行亚克隆;采用免疫荧光染色及Westernblot法对所获得的mAb的特异性进行鉴定,并用抗体亚类测定试剂盒检测所获得单克隆抗体亚类。结果成功获得2株可分泌特异性抗GrnF的杂交瘤细胞株(1G6及4E8),经鉴定这2株抗体重链亚类均为IgG1亚类。结论成功制备了抗人GrnF片段结构域的单克隆抗体。     

人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-GrnF免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,用ELISA筛选阳性克隆,并采用有限稀释法进行亚克隆;采用免疫荧光染色及Westernblot法对所获得的mAb的特异性进行鉴定,并用抗体亚类测定试剂盒检测所获得单克隆抗体亚类。结果成功获得2株可分泌特异性抗GrnF的杂交瘤细胞株(1G6及4E8),经鉴定这2株抗体重链亚类均为IgG1亚类。结论成功制备了抗人GrnF片段结构域的单克隆抗体。     

两株鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

目的　研制鼠抗人GL5 0分子单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究。方法　以天然高表达人GL5 0分子的Daudi细胞为免疫原 ,人GL5 0 L92 9转基因细胞为目的单克隆抗体(McAb)的筛选细胞 ,采用B淋巴细胞杂交瘤技术 ,获得分泌特异性鼠抗人GL5 0分子McAb的杂交瘤细胞株 ;免疫荧光标记和流式细胞术分析McAb识别GL5 0的表达 ;Westernblot检测抗体对特异性细胞膜蛋白的识别 ;台盼蓝 (Trypanblue)染色细胞计数法和MTT法检测McAb对Daudi细胞体外生长的抑制作用 ;3 H TdR法检测抗体对GL5 0 L转基因细胞介导的活化T细胞体外增殖的效应。结果　成功制备 2株分泌特异性抗人GL5 0抗体的杂交瘤细胞株 12B11和 11C4 ;两者皆为IgG2a亚型 ;腹水效价皆在 1∶10 0 0以上 ;12B11、11C4特异性地识别GL5 0分子。 11C4McAb可以明显抑制Daudi细胞在体外的生长 ,并可抑制GL5 0 L转基因细胞介导的活化T淋巴细胞的体外增殖效应。结论　成功获得了 2株特异性鼠抗人GL5 0抗体 ,其中 11C4McAb具有诱导表达GL5 0分子的B淋巴瘤细胞Daudi的体外生长抑制作用 ;在T淋巴细胞体外增殖反应中发挥了重要的调节作用。     

抗人IgG单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道用人IgG免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,获得 3株分泌抗人 IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为 SIBPH1、SIBPH2和 SIBPH3。现重点报道SIBPH1株。用琼脂双扩散和免疫电泳等方法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体,对IgG具有良好的专一性,注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价抗IgG的腹水(双扩散1:256～512),单克隆抗体属小鼠IgG_1亚类,该杂交瘤细胞株经组织培养传代逾半年,冻存12个月,复苏良好,分泌抗IgG性能稳定。本文还对杂交瘤细胞建株的若干问题进行了讨论。     

4种抗支原体单克隆抗体免疫学特性的研究

为了有效地控制细胞质量、我们从1987年开始、相继建立了抗口腔支原体(M.orale),精氨酸支原体(M.arginini),猪鼻支原体(M.hyorhinis).和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)的杂交瘤细胞系共20株。并用IFA法、BA法或APAAP法对单克隆抗体进行了检测和鉴定。单克隆抗体(McAb)亚类鉴定结果:8株为IgG1,2株为IgG2b,其余10株为IgM。抗体效价测定大多数在4000～8 000之间。利用支原体纯培养的菌落进行了IFA染色试验,封闭试验,生长抑制试验和免疫电镜检查,均证实了它们的特异性,并获得2株对同属支原体有抗原交叉的McAb(3D1和3A11)。利用上述McAb检测实验室常用细胞的支原体污染,较常规法和DNA荧光染色法简便,快速,特异性较高。     

鼠抗人Syndecan-1分子功能性单克隆抗体的制备及其生物学特性

制备鼠抗人Syndecan-1(CD138)分子的功能性单克隆抗体,研究其对高表达CD138分子细胞的生物学效应。以人多发性骨髓瘤(MM)细胞株8226作为免疫原,8226和B淋巴瘤细胞株Daudi作为检测细胞株,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。以快速定性试纸分析法鉴定单抗所属的IgG亚类,采用间接免疫荧光标记法及竞争抑制实验分析单抗的亲和力和特异性,以高表达Syndecan-1的人多发性骨髓瘤细胞株XG-1为靶细胞,分析单抗对其生长的影响。结果:成功地获得1株鼠抗人Syndecan-1分子的功能性单克隆抗体杂交瘤细胞株(克隆4B3),经体外长期传代培养,液氮冻存半年以上反复复苏良好,分泌特异性抗体性能稳定。4B3分泌的单克隆抗体识别位点与单抗BB4识别位点相同或相近,重链为IgG1亚类,轻链为κ型,纯化后腹水中单克隆抗体蛋白的得率为2.9 mg/ml,加入4B3单克隆抗体后的XG-1细胞体外生长受到抑制,并可用于神经胶质瘤细胞的免疫组织化学检测。由此表明,4B3为功能性抗人Syndecan-1单克隆抗体,具有一定的基础研究和临床应用前景,这对进一步研究Syndecan-1分子的生物学特性也具有重要的价值。     

An anti-human μ chain monoclonal antibody: Use for detection of IgM antibodies to toxoplasma gondii by reverse immunosorbent assay

A precipitating anti-human μ chain monoclonal antibody (designated Tibi 82 McAb) was produced by the cell fusion technique. This McAb (isotype: IgG1κ) reacted by radioimmunoassay with all 10 human IgM proteins tested. In contrast, no reactivity was observed with IgG, IgA, IgE, λ and κ chains. 19 S IgM proteins were precipitated by Tibi 82 McAb using the Ouchterlony method under standard conditions. Hence specificity of this McAb for the Cμ2 domain was characterized by inhibition of precipitin reactions using human IgM fragments. Despite its narrow specificity for the Cμ2 domain, such a McAb coulb be used for IgM capture in the detection of specific IgM to Toxoplasma gandii employing the IgM immunosorbent agglutination assay (IgM-ISAGA). Tibi 82 McAb was compared with 3 anti-human IgM polyclonal reagents in the routine analysis of 117 sera. With 2 of them, a correlation coefficient of 0.976 was obtained and Tibi 82 McAb was more sensitive than the third polyclonal reagent tested. The IgM-ISAGA technique was shown to be reproducible using Tibi 82 McAb and similar anti-human μ chain McAbs could permit the wider development of reverse immunosorbent methods for the detection of specific IgM in various infectious diseases.     

HER2/neu抗体对SKBR3乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响

目的研究抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ胞外区的特异性抗体对ＳＫＢＲ３乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响。方法Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法及抗体介导的特异性细胞增殖试验；筛选乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ的ＥＬＩＳＡ方法。结果试验发现单抗ｃ－ｎｅｕ－５对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化有明显促进作用，但对细胞增殖的影响不明显；而单抗ｃ－ｎｅｕ－２对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化及细胞增殖均有明显作用。在此基础上，收集乳腺癌病人血清１４份，分离纯化其血清ＩｇＧ，并经ＥＬＩＳＡ方法筛选出５份乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ。细胞增殖试验发现该５份标本中有３份对ＳＫＢＲ３细胞增殖有明显抑制作用。选其中１份抑制增殖的阳性血清ＩｇＧ进一步研究其对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化的影响，结果发现该病人血清ＩｇＧ对细胞酪氨酸磷酸化也有抑制作用。结论抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ的特异性抗体可能通过抑制细胞的信号传递系统而抑制肿瘤生长。     

一株识别CD40分子新位点的单克隆抗体研制及生物学特性鉴定

目的：研制识别CD40分子新位点的单克隆抗体（mAb）。方法：以转人CD40转基因细胞L929-CD40为免疫原，常规免疫6—8周龄的雌性BALB／c小鼠；采用B淋巴细胞融合技术，将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2／0融合，以L929-CD40转基因细胞为抗体筛选阳性细胞，经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养；采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析了该mAb的亚类及抗原识别位点；采用MTT法分析mAb在体外对肿瘤细胞的促增殖效应、ELISA法测定细胞因子分泌以及PI染色分析细胞周期。结果：获得1株持续、稳定分泌鼠抗人CIM0mAb的杂交瘤细胞株（命名为286），该mAb能特异性地识别人CD40分子并较好的识别肿瘤细胞株H08910表达的CD40分子并能够体外促进肿瘤细胞增殖。结论：成功地研制1株识别CD40新位点mAb，该mAb能够很好地识别肿瘤细胞表达的CD40分子并具有体外促进肿瘤细胞生长的作用。     

Establishment and biological activity of a proliferative anti-idiotype-activated T cell line

Antisera were raised in rabbits against a monoclonal antibody (McAb 103) of C3H.SW origin which is specific to the synthetic polypeptide (T,G)-A---L and was shown to express the major idiotypic determinants of conventional anti-(T,G)-A---L antibodies. Antibodies were purified and were shown in a binding assay to recognize McAb 103 as well as C3H.SW anti-(T,G)-A---L antibodies. C57BL/6 mice were immunized with the purified rabbit anti-McAb 103 (Ra 103) and their lymph nodes were studied in a proliferation assay. Proliferation was observed in the presence of both Ra 103 and (T,G)-A---L, although the latter stimulated the cells to a lesser extent, suggesting the induction in vivo of (T,G)-A---L-specific clones in low frequency. A T cell line was established from these lymph node cells. The line is kept in continuous growth in the presence of IL-2 and periodic triggering with Ra 103. A significant proliferative response was obtained with Ra 103 only. This proliferation could be almost completely inhibited by either McAb 103 or by conventional anti-(T,G)-A---L antibodies of C3H.SW origin, indicating the cross reaction between the idiotypes expressed on the T cell line and the (T,G)-A---L-specific antibodies. No proliferation could be detected in the presence of either normal rabbit IgG or rabbit anti-mouse IgG. Thus, the T cell line TId 103 allows the analysis of the role of idiotype in T cell recognition and regulation.     

一株特殊功能的抗人CD40单克隆抗体的获得及其生物学特性分析

目的：研制功能性抗人ＣＤ４０单克隆抗体,从而探讨其对Ｂ细胞、ＤＣｓ表达的ＣＤ４０分子激发所产生的生物学效应。方法：采用细胞融合、单克隆抗体筛选、荧光标记、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人ＣＤ４０ｍＡｂ,以细胞增殖、分化抗原表达观察ＣＤ４０ｍＡｂ对Ｂ细胞和ＤＣｓ的作用诳应。结果：经表型分析、Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定和竞争抑制试验,证实５Ｃ１１是识别人ＣＤ４０分子的特异性单抗;５Ｃ１１与转     

抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及鉴定

目的建立抗伏马菌素B1（FB1）的单克隆杂交瘤细胞株,制备抗FB1的单克隆抗体（McAb）。方法采用FB1-KLH偶联物小剂量长周期免疫BALB/c小鼠后,采用细胞融合方法获得分泌抗FB1的杂交瘤细胞株,采用多次亚克隆的方法建立了4株稳定分泌抗FB1抗体的杂交瘤细胞株。腹水诱生法获得大量McAb,采用抗体亚类测定试剂盒鉴定抗体的亚类,SDS-PAGE测定抗体分子量,McAb的特异性和灵敏度用间接竞争抑制ELISA。结果免疫小鼠血清检测结果显示经过5次免疫后血清的效价稳定在1×10-6,经过4次亚克隆后建立4株稳定分泌抗FB1抗体的杂交瘤细胞株,获得腹水,纯化抗体,抗体亚类属于IgG2a类,轻链为κ,轻链和重链的相对分子质量分别是55000和32000,ELISA检测抗体特异性显示可与FB1发生特异性反应,采用此抗体建立间接竞争抑制ELISA方法的线性范围在2～500ng/ml。结论制备了特异性和灵敏度较高的抗FB1单克隆抗体,为建立伏马菌素免疫学检测方法打下良好基础。