胃癌术前小剂量化疗与细胞凋亡、bcl-2和p53蛋白表达及其关系探讨

研究胃癌术前小剂量化疗中细胞凋亡、bcl-2和p53蛋白的表达及其关系.120例胃低分化腺癌患者,分为观察组62例和对照组58例,观察组术前静脉注射5-氟脲嘧啶(5-FU)500mg/天,共3天.用TUNEL方法检测细胞凋亡,用免疫组化方法(S-P法)检测bcl-2和p53蛋白的表达.观察组于24、48、72h的凋亡指数(AI)分别为0.11±0.02、0.14±0.02和0.16±0.03,三者比较差异有显著性(P《0.01);对照组相应时间的AI则为0.08±0.01、0.07±0.01和0.07±0.01,三者之间比较均无显著差异(P》0.05).观察组和对照组于24、48和72h,bcl-2蛋白阳性过度表达率分别为50.0%/53.3%、23.3%/50.0%和9.7%/48.3%;而观察组和对照组于24、48和72h,p53蛋白阳性过度表达率分别为25.0%/21.4%、33.3%/23.3%和25.8%/20.7%.观察组和对照组相比bcl-2的表达有显著性差异(P《0.05);而p53表达则无显著差异(P》0.05).5-FU与胃癌细胞的凋亡有相关性,随治疗时间的延长能使bcl-2蛋白表达逐步下调.p53蛋白高表达与胃癌的恶性程度和预后差有关.     

乳腺癌细胞凋亡、增殖与相关基因表达、突变的关系

目的:研究乳腺癌细胞凋亡、细胞增殖及相关基因表达、突变的关系,为乳腺癌细胞凋亡、细胞增殖失衡的基因调控机制提供依据。方法:分别应用TUNEL法、免疫组化S-P法和PCR-SSCP法检测54例乳腺癌标本凋亡指数(AI)和增殖指数(MI),Bcl-2、p53、c-erbB-2、PCNA、Ki67、TopoⅡ蛋白表达和p53基因突变。结果:54例乳腺癌AI平均9.40±3.78,MI平均5.96±2.36,AI与MI呈显著正相关(r=0.46,P＜0.01)。Bcl-2、PCNA、Ki67、TopoⅡ表达与AI、MI均呈显著正相关(P＜0.01)。p53表达、c-erbB-2表达、p53突变与MI呈显著正相关(P＜0.01)。p53基因突变类型与AI呈显著相关(P＜0.05)。结论:乳腺癌细胞凋亡、增殖失衡与相关基因异常表达、突变有关。     

CCAAT增强子结合蛋白α对急性粒细胞白血病HL60细胞分化和凋亡的影响

目的 探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在体内和体外对急性粒细胞白血病HL60细胞分化和凋亡的影响及其可能机制.方法 将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株为转染组;以转染pEGFP空载质粒HL60细胞为空载体组;未处理的HL60细胞为对照组.瑞氏染色观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析凋亡;RT-PCR及免疫印迹法(Western blot)检测c-myc基因的表达.20只BALB/c裸鼠按完全随机法分为3组:转染组7只、空载体组7只、对照组6只.将3组细胞分别皮下注射相应各组小鼠形成皮下瘤,20 d后处死小鼠,测量肿瘤质量及大小,TUNEL法检测皮下瘤组织细胞凋亡率.结果 筛选到C/EBPα基因稳定表达的细胞株pEGFP-C/EBPα-HL60,细胞出现明显分化.对照组、空载体组和转染组细胞的凋亡率分别为(5.4±1.4)%、(5.0±1.3)%、(21.9±4.5)%,转染组细胞的凋亡率显著高于对照组和空载体组(均P＜0.05).RT-PCR及免疫印迹显示C/EBPα明显抑制c-myc mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05).对照组、空载体组和转染组细胞接种小鼠形成皮下瘤,其质量分别为(5.35±1.12)g、(5.12±1.31)g和(3.26±0.72)g,瘤体大小分别为(25±4)mm、(18±3)mm和(11±2)mm,转染组瘤体质量及瘤体大小明显低于对照组和空载体组(均P＜0.05).与对照组和空载体组比较,转染组皮下瘤组织细胞凋亡率明显增加(均P＜0.05).结论 C/EBPα在HL60细胞中具有促进细胞凋亡和抑制细胞增殖的能力,显示C/EBPα在急性粒细胞白血病中是一种肿瘤抑制因子.     

胃癌及其癌前病变中细胞凋亡及其调控基因的表达

目的:通过观察胃癌及其癌前病变中细胞凋亡及其调控基因p53、bcl-2、c-myc的表达,探讨其在胃癌恶性转化进程中的作用。方法:利用DNA末端标记技术(TdT-mediateddUTP-biotinnickendlabeling,TUNEL法)和免疫组织化学(streptavidin/peroxidase,S-P法),原位观察了46例胃癌、20例癌前病变、24例正常粘膜中的凋亡细胞和p53、bcl-2、c-myc的表达。结果:癌前病变和胃癌中凋亡指数显著高于正常粘膜(P＜0.01),癌前病变组高于胃癌组(P＜0.01)。p53、bcl-2、c-myc蛋白在胃癌中阳性率分别为60.9%、67.4%、73.2%,均高于正常粘膜组(P＜0.01);在癌前病变中3种蛋白阳性表达率分别为40%、95%、58.8%(P＜0.01)。胃癌中p53、bcl-2蛋白阳性细胞凋亡指数分别低于阴性组(P＜0.05),c-myc蛋白阳性组细胞凋亡指数高于阴性组(P＜0.01)。结论:细胞凋亡调控异常在胃癌发生中可能起重要作用。p53、bcl-2蛋白分别抑制细胞凋亡,c-myc蛋白在胃癌中促进细胞凋亡。     

结肠癌P53、 nm23免疫组化表达特征及与临床病理的关联分析

目的 探讨结肠癌患者P53、nm23的表达及其与相关临床病理特征的关联.方法 选取2013年至2017年间于本院就诊并经病理确诊为结肠癌的患者121例,分析其P53、nm23的表达及与临床病理特征的相关性.结果 p53在肿瘤组织中的阳性率(76.03％)显著高于癌旁组织(4.96％)(P＜0.05),而nm23的表达在肿瘤组织(80.17％)和癌旁组织(86.12％)中无明显差异(P＞0.05).p53的阳性率随着肿瘤分化程度的减低逐渐增高,最高达92.50％,组间差异具有统计学意义(P＞0.05);nm23则相反,高分化组织的nm23表达阳性率最高,为86.84％.在有转移的患者的肿瘤组织中,p53的表达明显上升,nm23的表达明显下降(P＜0.05).结果 肿瘤组织中p53蛋白过量表达提示肿瘤恶性程度高,转移可能大,nm23蛋白在组织分化程度高的组中和未发生淋巴结转移组中高表达,与抑制肿瘤生长相关,两者均可以作为判断结直肠癌预后效果的重要参考指标之一.     

p57和p53蛋白在水肿性流产及葡萄胎鉴别诊断中的作用

目的探讨p57和p53蛋白在水肿性流产、完全性和部分性葡萄胎鉴别诊断中的作用。方法分别收集正常绒毛、水肿性流产、部分性葡萄胎和完全性葡萄胎石蜡标本10、12、23和20例,应用免疫组织化学EnVision法检测p57和p53蛋白在这些组织中的分布及表达水平。结果p57蛋白在正常绒毛、水肿性流产及部分性葡萄胎组织中主要分布于绒毛的细胞滋养细胞及间质细胞,阳性表达比例分别为10/10、12/12和100％( 23/23),各组间相比差异无统计学意义(P＞0.05)。在完全性葡萄胎中细胞滋养细胞及间质细胞p57表达缺失,与部分性葡萄胎相比,差异有统计学意义(P＜0.05)。p53蛋白主要表达于完全性和部分性葡萄胎的细胞滋养细胞及中间滋养细胞。在正常绒毛中p53蛋白呈阴性表达,水肿性流产中仅1例p53蛋白呈阳性表达(1/12),部分性葡萄胎和完全性葡萄胎中p53蛋白的阳性率分别为60.9％( 14/23)和85.0％ (17/20);p53蛋白的阳性率,部分性葡萄胎较水肿性流产明显增加,完全性葡萄胎较部分性葡萄胎也明显增加,差异均有统计学意义(均P ＜0.05)。结论p57蛋白免疫组织化学检测可辅助鉴别完全性和部分性葡萄胎,而p53蛋白的检测则有助于鉴别水肿性流产和部分性葡萄胎。     

The expression and clinical significance of Smad4 and p53 in non-small cell lung carcinoma

目的 观察Smad4与p53在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达情况,探讨其与NSCLC各种临床病理特征间的关系.方法 应用免疫组化SP法检测150例NSCLC组织及60例距离肿瘤10 cm以上的正常肺组织中Smad4与p53的表达情况,并将检测结果与临床病理特点进行综合分析,观察其表达差别.结果 Smad4在NSCLC组织中的阳性率明显低于正常肺组织(P＜0.05),而p53在NSCLC组织中的阳性率明显高于正常肺组织(P＜0.05).Smad4的低表达、p53的高表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、胸膜侵犯及临床分期密切相关(P＜0.05);Smad4和p53的表达与NSCLC的预后密切相关(P＜0.05).结论 Smad4在NSCLC组织中的表达下降及p53的表达升高可能与NSCLC的恶性生物学行为相关.术后常规检测Smad4及p53,对判断NSCLC患者的预后有一定的帮助.     

非小细胞肺癌中ASPP1和ASPP2基因启动子甲基化的意义

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)中ASPP1和ASPP2基因启动子CpG岛的甲基化状态和相应的蛋白表达,及癌细胞的凋亡水平和p53蛋白的表达,探讨ASPP基因在NSCLC中的作用及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)检测90例NSCLC组织、25例癌旁肺组织中ASPP1、ASPP2基因启动子的甲基化水平,并测序证实其甲基化位点;免疫组织化学EnVision法检测NSCLC组织中ASPP1、ASPP2和p53蛋白的表达;原位末端转移酶标记检测法(TUNEL)检测癌细胞凋亡,计算其凋亡指数(AI).结果 ASPP1基因启动子甲基化率在NSCLC中为42.2%(38/90),癌旁组织中为16.0%(4/25),二者比较差异有统计学意义(P=0.019);ASPP1基因启动子甲基化与患者年龄、性别、组织类型和分化程度无相关性(均P＞0.05),但与患者的TNM分期和淋巴结转移存在相关性(P=0.031,P=0.030);90例肺癌组织中ASPP1甲基化者其蛋白表达率明显低于ASPP1未甲基化者(P=0.002);ASPP1蛋白阳性组的AI值高于阴性组(P=0.022).90例NSCLC和25例癌旁组织中均未检测到ASPP2基因启动子甲基化;ASPP2蛋白表达阳性组和阴性组之间AI值差异也无统计学意义(P=0.282).ASPP1和p53表达呈负相关,(r=-0.259,P＜0.01),ASPP2和p53的表达状态无关(r=-0.119,P＞0.05).结论 NSCLC中ASPP1基因启动子甲基化可能是ASPP1蛋白表达下调的原因,高甲基化可能与NSCLC的恶性进展有关,ASPP1蛋白的表达能促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the methylation status of CpG islands in the promoter region and the protein expression of ASPP1 and ASPP2 genes in non-small-cell lung cancer (NSCLC) and their relationship with cellular apoptosis and p53 gene expression. Methods The 5'CpG island methylation patterns of ASPP1 and ASPP2 were evaluated by methylation specific polymerase chain reaction (MSP) followed by confirmation of sequencing. Immunohistochemistry was used to detect the expression of ASPP1,ASPP2 and p53 in lung carcinoma tissue samples ( n= 90) and adjacent non-neoplastic lung tissue samples (n = 25 ) . TUNEL assay was used to detect the apoptotic activity. Results The presence of ASPP1 methylation was significantly higher in NSCLC than that in the adjacent non-neoplastic lung tissue [42. 2%(38/90) vs. 16. 0% (4/25), P =0. 019]. ASPP1 promoter methylation had a close relationship with TNM stage and lymph node metastasis( P =0. 031, P =0. 030), but was not related to the age, sex, histological types and the grades of tumor differentiation (P =0. 389, P =0. 278, P =0. 570, and P =0. 103). Tumors with ASPP1 promoter methylation demonstrated a lower expression of ASPP1 as compared with those without the methylation (P =0. 002). ASPP1 expression was associated with a higher apoptotic index (AI) (P =0. 022) and a decreased p53 expression( r = -0. 259, P ＜ 0. 01 ). Methylation in the promoter region of ASPP2 gene was not detected in lung cancer (n = 90 ) or adjacent non-neoplastic lung tissue (n = 25 ).Expression of ASPP2 protein did not correlate with AI ( P = 0. 282 ) and p53 status in NSCLC. Conclusions High methylation of ASPP1 gene promoter regions is one of the important mechanisms that down-regulate its protein expression in NSCLC. ASPP1 promoter methylation may be associated with the malignant progression of the tumor, and ASPP1 expression promotes cellular apoptosis.     

Bcl-2反义核酸增强HL-60、K562细胞对柔红霉素敏感性的研究

目的:研究bcl-2反义寡核苷酸作用后,白血病细胞株HL60、K562细胞对柔红霉素(DNR)敏感性的影响。方法:MTT法测HL60、K562细胞中DNR的半数抑制率(IC50);免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平;用Hoechest33258和碘化丙锭双染色法及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:靶向bcl-2mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸(AS-ODN1)和靶向翻译起始区的反义寡核苷酸(AS-ODN2)分别与DNR联合作用于HL60细胞后DNR的IC50值分别为0.124±0.011、0.149±0.012,分别与不加寡核苷酸组DNR的IC50值(0.173±0.021)或无义寡核苷酸联用DNR的IC50值(0.180±0.023)相比有显著差异,P＜0.05。AS-ODN1和AS-ODN2分别与DNR联合作用于K562细胞后DNR的IC50值分别为0.078±0.007、0.079±0.008,分别与不加寡核苷酸组DNR的IC50值(0.106±0.011)或无义寡核苷酸联用DNR的IC50值(0.107±0.012)相比有显著差异,P＜0.05。AS-ODN1和AS-ODN2分别与DNR同时作用于HL60或K562细胞后抑制Bcl-2蛋白表达及诱导细胞凋亡率分别与单用DNR或无义寡核苷酸联用DNR相比有显著差异,P＜0.05。与AS-ODN2比较,AS-ODN1提高HL60细胞对DNR的敏感性作用要强些(P＜0.05)。结论:靶向bcl-2mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸和靶向翻译起始区的反义寡核苷酸能增强HL60和K562细胞对DNR的敏感性。     

细胞周期蛋白G1在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床病理学意义

目的 探讨喉鳞状细胞癌组织中细胞周期蛋白(cyclin)G1表达与临床病理参数及p53、癌组织微血管密度(MVD)的关系,并分析其作为预测喉鳞状细胞癌预后指标的可能性.方法 采用免疫组织化学(EnVision法)检测81例喉鳞状细胞癌组织中cyclin G1、p53的表达情况,用CD34标记新生血管内皮细胞,在显微镜下观察MVD.同时测它们在20例癌旁正常喉黏膜中的表达.结果 与正常喉黏膜组织相比,肿瘤组织中cyclin G1、p53表达及MVD均明显增加.喉鳞状细胞癌组织中cyclin G1、p53的阳性表达率分别为61.7%(50/81)和65.4%(53/81),在p53蛋白表达阳性和阴性的喉鳞状细胞癌组织标本中,cyclin G1蛋白阳性率分别为71.7%(38/53)和42.9%(12/28),cyclin G1表达与p53有相关性(Kappa值为0.281,P=0.011).cyclin G1蛋白阳性组平均MVD为(51.23±16.46),阴性者(30.74±12.29),其差异有统计学意义(P=0.005).cyclin G1高表达与肿瘤组织分化程度、颈淋巴结转移以及5年生存率均有统计学意义(P值分别为0.002、0.013和0.032).结论 cyclin G1蛋白在喉鳞状细胞癌中存在高表达,并与p53、MVD关系密切,cyclin G1异常表达可能在喉鳞状细胞癌发生、发展及转移过程中发挥重要作用,并可能作为判断患者预后的指标之一.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。     

Assessment of the efficacy of treatment of hemangiomas

Assessment of the aftereffects of cryoexposure and ultrahigh-frequency cryoexposure on hemangioma tissue of various types, cavernous and squamous, showed a higher cryogenic effect in hemangiomatous tissue preexposed to ultrahigh-frequency waves. A quantitative criterion is proposed for assessing the efficacy of the studied methods of exposure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 119, N ^o 6, pp. 669–672, June, 1995     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

侧脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元突触的影响

为观察链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)双侧侧脑室注射对大鼠海马神经元突触的影响,本研究将Wistar大鼠随机分为对照组和模型组,模型组大鼠分别于第1、3d双侧侧脑室重复注射STZ3mg/kg,对照组以人工脑脊液代替STZ。21d后,取大鼠海马,免疫组织化学染色及Western blotting方法观察突触素、活性调节细胞骨架相关蛋白(activity-regulated cytoskeletal-associatedprotein,Arc)的表达;电镜观察海马CA1区神经元突触超微结构的改变。结果显示:与对照组相比,模型组大鼠海马内突触素蛋白表达显著减少,而Arc蛋白表达显著增多;模型组海马CA1区神经毡内突触结构异常,突触小泡聚集增多。以上结果提示:脑室注射STZ可影响大鼠海马突触相关蛋白的表达,引起突触超微结构异常,干扰了神经元突触信号的传导。     

Effect of conditions of culture on quantitative assessment of viability of living tissues

The viability of tissue explants of mouse kidneys, estimated quantitatively by growth in plasma-free culture, was shown to depend on several factors connected with the conditions of culture. The effect of methods of treatment of the serum, pH of the medium, and the character of distribution of the tissue explant during culture, the size of the explants, and the firmness of attachment of the tissue fragments to the substrate on this index was demonstrated.Problem Laboratory, Arkhangel'sk Medical Institute. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR A. P. Avtsyn.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 86, No. 11, pp. 629–631, November, 1978.     

社区精神分裂症病人照料者的生活质量研究

通过对９３名精神分裂症患者的家庭照料者与１００名对照者比较研究表明，照料者的躯体功能、心理功能、社会功能与经济状况都显著差于对照者。照料者的生活质量与被照料者的病期、病情严重度、整体功能、药物副作用有关；同时，照料者身份为患者母亲者其生活质量受影响最大。     

Evaluation of fungicidal activity of extracellular filtrates of cyanobacteria--possible role of hydrolytic enzymes

A set of seventy axenised and unicyanobacterial isolates belonging to the genus Anabaena were evaluated for biocidal activity against a set of phytopathogenic fungi. Among them, 35 Anabaena strains showed zone of inhibition against one or more fungi. The extracellular filtrates from 4 and 8 weeks old cultures of these Anabaena strains were further evaluated in terms of hydrolytic enzymes, proteins and IAA employing standard methods. Significant differences were also observed among the strains in terms of their FPase, chitosanase and xylanase activity, while low and relatively similar values of CMCase, cellobiase and protease activity were recorded in the strains analyzed. IAA production was also observed in all the strains. Comparative evaluation of activity of hydrolytic enzymes and antifungal activity revealed that such enzymes may contribute to the fungicidal activity of the cyanobacterial strains, besides other bioactive compounds, including IAA, which are established promising traits for biocontrol agents. This study is a first time report on the production of hydrolytic enzymes by these oxygenic photosynthetic prokaryotes, which can be potential candidates for the development of biocontrol agent(s) against selected phytopathogenic fungi.     

膝关节骨性关节炎的关节镜治疗体会

目的我科自2001～2005年4月对59例67膝的骨性关节炎（0A），进行关节镜检查及镜下清理术。方法镜检：膝关节骨性关节炎伴不同程度滑膜炎，滑膜皱壁粘连纤维片，关节软骨不同程度破坏。镜下清除增生滑膜，松解粘连，去除剥脱软骨、修复关节面。结果随访2月～4年，平均1.5年，术后综合评估2月～1年，优良率94％；1～2年，优良率79.2％；2年以上优良率54.8％。结论关节镜对膝关节骨性关节炎诊断能提供了比较全面的资料，并对骨性关节炎早期有良好疗效，具有创伤小、恢复快、并发症少和重复治疗等优点。     

Effect of ultralow doses of thyroliberin on microviscosity of lipid components of biological membranes

Effects of the regulatory peptide thyroliberin on microviscosity of lipid components of endoplasmic reticulum biological membranes in mouse hepatocytes were studied by electron paramagnetic resonance. Thyroliberin in a concentration of 10⁻³–10⁻¹⁸ M decreased microviscosity of surface layers of membrane lipids. This decrease was the most pronounced (30%) under effects of 10⁻¹⁰ and 10⁻¹⁶ M thyroliberin. Physiological effects of thyroliberin corresponded to its influence on the membrane structure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 129, No. 1, pp. 38–40, January, 2000