沉默PARP-1对乳腺癌细胞MCF-7顺铂耐药的影响

目的:探究沉默多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)对乳腺癌细胞MCF-7顺铂耐药的影响及可能的作用机制。方法:Western blot及real-time PCR实验检测乳腺癌细胞株MCF-7及相应耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达情况。采用转染PARP-1小干扰RNA(siRNA)的方法沉默乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PARP-1、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、caspase-3、细胞色素C(Cyto-C)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白水平。结果:耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株(P0.05);并且在亲本细胞株MCF-7中加入顺铂刺激后,PARP-1的蛋白表达水平明显升高(P0.05)。沉默PARP-1可诱导乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP的凋亡,增强细胞对顺铂的敏感性,还可下调Bcl-2/Bax和p-ERK的蛋白水平,同时上调cleaved caspase-3及Cyto-C的蛋白水平。而应用ERK特异性抑制剂U0126后,PARP-1沉默组的细胞活力进一步降低。结论:沉默乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达可恢复细胞对顺铂的敏感性,促进细胞经线粒体途径的凋亡,其机制可能与其抑制ERK的磷酸化,进而阻断该信号通路有关。     

威灵仙多糖对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及Bcl-2,Fas基因表达的影响

目的探讨威灵仙多糖对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及其分子机制。方法不同浓度威灵仙多糖作用于MCF-7细胞48h后,荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果威灵仙多糖能诱导MCF-7细胞凋亡,40mg/L时凋亡率为17.63%,实验组与对照组比较有显著性差异;并且上调Fas和降低Bcl-2表达。结论威灵仙多糖能抑制MCF-7细胞增殖,促进其细胞凋亡,其机制可能与激活Fas、抑制Bcl-2的基因表达有关。     

IL-8通过上调Bcl-2的表达和下调caspase-3的表达抑制MCF-7乳腺癌细胞凋亡

目的探讨白细胞介素8(IL-8)对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及其机制。方法 Western blot法检测MCF-7细胞IL-8受体CXC趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2的表达;反转录PCR、Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞Bcl-2、caspase-3表达的影响;CCK-8法检测(0、40、80)ng/mL IL-8对MCF-7细胞增殖的影响;相差显微镜下观察80ng/mL IL-8处理MCF-7后细胞形态的变化;Western blot法检测80ng/mL IL-8联合信号通路抑制剂10μmol/L PD980590、10μmol/L LY294002或50μmol/L AG490[分别为丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)、磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路抑制剂],共同处理MCF-7细胞后,细胞内Bcl-2蛋白表达的变化;Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞磷酸化p-AKT表达的影响;流式细胞术、反转录PCR以及Western blot法分别检测80ng/mL IL-8联合10μmol/L LY294002共同处理MCF-7细胞后,细胞凋亡以及细胞内Bcl-2、caspase-3表达的变化。结果 IL-8受体CXCR1、CXCR2在MCF-7细胞中均有表达;在IL-8的作用下,MCF-7细胞Bcl-2表达升高,caspase-3表达下降,抗凋亡能力明显增强;IL-8能显著上调MCF-7细胞中p-AKT的表达;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002能显著抑制IL-8抗MCF-7细胞凋亡的作用,且减少Bcl-2并增加caspase-3的表达。结论 IL-8可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与IL-8激活PI3K/AKT信号通路而上调Bcl-2、下调caspase-3的表达有关。     

缺氧预适应抑制缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的作用及机制

目的：研究缺氧预适应（HP）对缺氧复氧（H/R）诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法： 体外培养新生大鼠心肌细胞，分3组：正常对照组、HP+ H/R组和H/R组，吖啶橙（AO）染色法观察心肌细胞凋亡形态学特征，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，比色法检测心肌细胞caspase-3的活性，免疫组织化学法结合计算机图像分析检测心肌细胞Bcl-2蛋白的表达。结果： 心肌细胞H/R损伤后，AO染色可见典型凋亡细胞，流式细胞仪检测其凋亡率为(29.7±5.4)%，HP可显著降低心肌细胞凋亡率至(7.8±1.3)%（P＜0.01）。H/R组心肌细胞caspase-3的相对活性为5.9±0.8，HP+H/R组心肌细胞caspase-3的相对活性为2.6±0.5，显著低于H/R组（P＜0.01）。Bcl-2在正常心肌细胞即有表达，其阳性染色吸光度值为119.4±7.1，H/R组为99.6±5.0，显著低于正常组（P＜0.01），HP+H/R组为126.5±6.2，显著高于H/R组（P＜0.01）。结论： HP可通过增加心肌细胞Bcl-2的表达、降低caspase-3活性而抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡，发挥心肌细胞保护作用。     

芹菜素诱导人胃癌细胞凋亡作用及机制研究

目的：研究芹菜素（apigenin, API）致人胃癌细胞凋亡作用及其机制。方法：培养人胃癌BGC823细胞株，加入不同浓度的API，孵育48 h。PI染色流式细胞术（FCM）分析测定凋亡率；罗丹明染色FCM分析测定细胞线粒体跨膜电位(Δψm)；Caspase-9分光光度法检测试剂盒测定caspase-9活性；Western印迹检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白的表达，包括bax，bcl-2，caspase-9和caspase-3。结果： API（20，40和80 μg/mL）作用48 h能呈浓度依赖性地诱导BGC823细胞凋亡。而且，API也能降低BGC823细胞的Δψm，增加caspase-9活性，促进细胞色素c（Cyt c）释放，上调bax，caspase-9和caspase-3蛋白的表达，同时下调bcl-2蛋白表达，且呈剂量依赖性。结论：API通过活化线粒体信号转导途径诱导人胃癌细胞凋亡。     

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究褐藻糖胶对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法:不同浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖；Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡的形态学及生化改变；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹分别测定细胞〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗和bax mRNA及其蛋白的表达。结果:不同实验浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.01），抑制率呈浓度依赖性增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下，〖STBX〗 bcl-2〖STBZ〗 mRNA和蛋白表达减少，而bax mRNA和蛋白表达增加，Bcl-2/Bax比值下降（P<0.05）。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。     

金雀黄素抑制人乳腺癌细胞系体外增殖作用机理的实验研究

目的 研究金雀黄素抑制人乳腺癌细胞株体外增殖作用的机理。方法 选用2种不同的人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-23l体外培养，MTT法检测细胞增殖作用，Giemsa染色观察细胞形态学改变，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率，同时进行了原位细胞凋亡的检测。结果 金雀黄素对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体外生长具有明显的抑制作用。Giemsa染色显示，金雀黄素处理的MCF-7细胞呈明显的凋亡形态改变，细胞固缩、发泡，染色质凝集呈块状，并沿核周分布。流式细胞仪检测在G1峰前可见凋亡峰，且随用药时间的延长，凋亡比率递增。而金雀黄素处理的MDA-MB-231细胞未见明显的凋亡形态改变和凋亡峰的出现，细胞周期明显地阻滞于G2～M期。结论 金雀黄素通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞于G2-M期，从而抑制乳腺癌细胞的体外增殖，为其减缓人乳腺癌细胞的体内生长提供理论依据。     

体外骨形态发生蛋白4抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移*

目的：研究骨形态发生蛋白4（BMP4）对乳腺癌细胞MCF-7 增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：将重 组慢病毒Lv-BMP4 及干扰慢病毒Lv-shBMP4 感染MCF-7 细胞，构建MCF-7/Lv-BMP4 过表达组及MCF-7/LvshBMP4 干扰实验组，同时设空白组（Blank）、慢病毒空载对照组（Lv-NC）、 过表达实验组（Lv-BMP4）、干 扰试验组（Lv-shBMP4）。RT-PCR 及ELISA 技术检测MCF-7 细胞中BMP4过表达及干扰情况； CCK-8 法检测 MCF-7 细胞的增殖能力；划痕愈合和Transwell 实验检测MCF-7 细胞的迁移能力和侵袭能力。结果：BMP4过 表达的乳腺癌细胞株MCF-7/Lv-BMP4 及BMP4低表达的干扰细胞株MCF-7/Lv-shBMP4 构建成功； BMP4过表 达组的BMP4蛋白表达水平较对照组显著升高，而Lv-shBMP4 组的BMP4蛋白表达水平较对照组显著降低，表 明BMP4过表达的乳腺癌细胞株MCF-7/Lv-BMP4 及BMP4低表达的干扰细胞株MCF-7/Lv-shBMP4 构建成功。 BMP4过表达组的细胞增殖较对照组受到明显抑制，增殖活力较对照组明显降低； 48 h 后Lv-BMP4 组划痕愈合能 力较对照组显著降低，而Lv-shBMP4 组划痕愈合能力较对照组明显升高；48 h 后Lv-BMP4 组MCF-7 细胞穿膜数 显著低于对照组，而Lv-shBMP4 组MCF-7 细胞穿膜数显著高于对照组。结论：BMP4可抑制乳腺癌MCF-7 细胞 的增殖和迁移。     

干扰素调节因子-7(IRF-7)对肿瘤细胞凋亡的影响

目的：研究干扰素调节因子－7（Interferon regulator factor-7,IRF-7)对部分人肿瘤细胞凋亡的影响，探讨IRF－7抑制肿瘤生长的机制。方法：将IRF－7的cDNA转染到人前列腺癌细胞（TSU）和乳腺癌细胞（MDA435）中，采用Western blot检测转基因细胞的caspase-3和Bax表达的变化；ELISA测定细胞裂解液中Bcl-2的含量，与转染空载体的对照组细胞进行比较。结果：TSU和MDA435细胞转染IRF－7基因后，caspase-3和Bax的表达均增高，而Bcl-2的含量下降，结论：干扰素调节因子－7（IRF－7）可能诱导肿瘤细胞出现凋亡，从而抑制肿瘤生长。     

Fas过表达逆转胃癌细胞顺铂耐药

目的:探究Fas在胃癌细胞顺铂耐药中的作用及可能的作用机制。方法:Western blot及RT-q PCR检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中Fas的表达情况。构建Fas过表达腺病毒载体,上调胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中Fas的表达,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Western blot法检测Fas、P38/p-P38、JNK/p-JNK、cleaved caspase-8/caspase-8和cleaved caspase-3/caspase-3蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中Fas的mRNA及蛋白表达水平均明显低于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中,Fas的蛋白表达水平随着顺铂的浓度增加不断降低。过表达Fas可抑制胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的细胞活力,并诱导其凋亡;同时上调p-P38、p-JNK、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:胃癌顺铂耐药细胞中过表达Fas可恢复细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡并抑制细胞生长,其机制可能与JNK和P38MAPK信号通路的激活有关。     

光敏化促进姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡

目的: 探讨光敏化促进姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及其机制。方法: 用MTT法检测光敏化姜黄素对胃癌MGC-803细胞株的增殖抑制率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位、细胞内活性氧和Ca²⁺;比色法检测caspase-3、8和9酶活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax和热休克蛋白70(HSP70)水平。结果: 单纯姜黄素(5.0μmol/L)对MGC-803细胞增殖抑制率为(29.74±2.30)%,在光学显微镜下可见部分凋亡细胞,凋亡率为(12.54±1.75)%。而光敏化姜黄素组细胞增殖抑制率则为(44.93±3.61)%,在光学显微镜下能见明显细胞核形态改变,染色质凝集,凋亡小体形成,凋亡率为(26.58±2.67)%,细胞周期主要阻滞于G₀/G₁期。光敏化姜黄素显著降低线粒体膜电位,显著增加细胞色素C、细胞内活性氧和Ca²⁺以及caspase-3、8和9酶活性,与单纯姜黄素组比较,差异显著(P<0.01)。Western blotting结果显示光敏化姜黄素同时显著抑制Bcl-2和HSP70蛋白表达水平。结论: 光敏化姜黄素通过Bcl-2和线粒体途径增强其诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。     

槲皮素诱导MCF-7细胞凋亡及其与Fas/FasL通路的相关性研究

目的:了解槲皮素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及其与Fas/Fas L通路的相关性。方法:建立槲皮素诱导的MCF-7细胞凋亡模型。采用透射电镜观察细胞核形态变化,Annexin V-FITC/PI和JC-1荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位(Δψm)及Fas L中和抗体对细胞凋亡的阻断作用。采用免疫荧光法和流式细胞术检测细胞Fas/Fas L的表达。流式细胞术观察p38 MAPK抑制剂SB203580对细胞Fas/Fas L表达的影响。Western blot检测p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白水平的变化。结果:80.0μmol/L槲皮素处理MCF-7细胞48h,透射电镜可见染色质浓缩及边缘化现象;处理24 h、48 h和72 h,Δψm分别下降17.4%、44.3%和68.9%,细胞凋亡率分别为(10.2±3.3)%、(28.9±7.5)%和(39.2±8.9)%。Fas L中和抗体预处理细胞后,24 h、48 h和72 h的细胞凋亡率则分别为(8.2±2.8)%、(19.2±5.3)%和(22.5±6.9)%,细胞凋亡阻断率分别为19.6%、33.6%和42.6%。Fas/Fas L表达率随处理时间增加而升高,SB203580可显著抑制细胞Fas/Fas L的表达率。p38 MAPK的蛋白水平变化不大,而p-p38 MAPK的蛋白水平在48 h和72 h显著增高。结论:槲皮素可上调MCF-7细胞的Fas/Fas L表达,并经膜Fas/Fas L途径诱导MCF-7细胞凋亡,p-p38 MAPK可能是上调Fas/Fas L表达的重要信号分子。     

Cytotoxicity and apoptosis induction in human breast adenocarcinoma MCF-7 cells by (+)-cyanidan-3-ol

The objective of this study was to evaluate the cytotoxicity and possible signalling pathway implicated in (+)-cyanidan-3-ol (CD-3) induced apoptosis in the human breast adenocarcinoma cell line (MCF-7). The effects of CD-3 on cell proliferation of MCF-7 cells were evaluated by 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT), sulforhodamine B (SRB) and lactate dehydrogenase (LDH) assays. Cell apoptosis was detected by Hoechst 33258 (HO) and acridine orange/ethylene dibromide (AO/EB) staining and DNA fragmentation analysis. The expressions of apoptosis-related genes were assessed by RT-PCR and ELISA. Our data revealed that CD-3 induced MCF-7 cell death in a dose-dependent manner. Marked changes in apoptotic morphology was clearly observed after CD-3 treatment. CD-3 induced cell death was considered to be apoptotic by observing the typical apoptotic morphological change under fluorescent microscopy and DNA fragmentation assays. The induction of apoptosis is correlated with the increased mRNA expressions of p53, Bax, and caspase-3, -7, -8 and -9 and decreased mRNA expressions of bcl-2. Subsequently, CD-3 decreased the mRNA expressions of mdm2, p65, c-jun, c-fos in MCF-7 cells. The protein levels of p53, Bax, and caspase-3 were increased, whereas, that of p65, c-jun and Bcl-2 were decreased in MCF-7 cells on CD-3 treatment. These results clearly demonstrated that CD-3 effectively induced growth inhibition and apoptosis in MCF-7 cells.     

重组质粒pEGFP-ING4的构建及其对MCF-7细胞凋亡的影响

目的检测ING4(inhibitor of growth 4)对MCF-7细胞凋亡的影响。方法从人胎盘总RNA中克隆人ING4基因,构建其真核表达质粒pEGFP-ING4转染MCF-7细胞表达ING4后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR检测ING4、NF-κB、caspase-3、IL-8、Bcl-2及Bax基因的表达。结果构建的重组质粒转染可见目的蛋白融合表达,与对照相比MCF-7细胞凋亡率增高;ING4、caspase-3及IL-8基因的表达上调,NF-κB与Bcl-2/Bax基因的表达下调。结论成功从人胎盘组织克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达;ING4在人MCF-7细胞中能引起凋亡相关基因的改变并促进MCF-7细胞的凋亡,这为进一步研究ING4的抗肿瘤机制奠定了基础。     

藻蓝蛋白诱导喉癌HEP-2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨藻蓝蛋白对人喉癌HEP-2细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:不同浓度藻蓝蛋白处理HEP-2细胞,分别以MTT、倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞术检测藻蓝蛋白对HEP-2细胞活力及凋亡的影响;DCFH-DA标记的流式细胞术检测细胞内的活性氧水平;分光光度法检测细胞内caspase-3、-8、-9的活性;RT-PCR、Western blot检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:MTT结果显示藻蓝蛋白能够抑制喉癌HEP-2的细胞活力,且呈时间和剂量依赖性;倒置显微镜、电镜、流式细胞术的一系列定性化和定量化实验证实藻蓝蛋白可显著诱导HEP-2细胞的凋亡;藻蓝蛋白处理后细胞内ROS水平升高,caspase-3、-8、-9被激活;RT-PCR结果表明,藻蓝蛋白作用后Bax、Fas、P53、caspase-3和caspase-9表达显著上调(P0.05),Bcl-2表达显著下调(P0.05);Western blot结果和RT-PCR结果一致。结论:藻蓝蛋白能够诱导HEP-2细胞的凋亡,其机制可能与细胞内ROS水平升高,上调Bax、Fas和P53 mRNA,下调Bcl-2 mRNA的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞凋亡有关。     

DMSO诱导MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究二甲基亚砜(DMSO)对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度DMSO处理体外培养的MCF-7细胞,应用倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33258/PI荧光染色,用荧光显微镜分析凋亡细胞比率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带。结果在倒置光学显微镜下观察1%DMSO处理细胞12h后细胞形态发生变化。约有50%以上的细胞变圆,细胞内有多泡小体形成。随DMSO浓度增加和作用时间的延长,细胞存活率明显下降,经MTT检测其IC_(50)值为1%;荧光显微镜下可见60%以上细胞核染色质凝集,核碎裂等凋亡细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder)。结论适当浓度的DMSO能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞凋亡及AMPK信号通路的影响

目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力。采用2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C。实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量。结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P 0. 05),且具有一定浓度依赖性。与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P 0. 05),显著下调Bcl-2水平(P 0. 05),上调Bax和caspase-3水平(P 0. 05),促进AMPK和P21蛋白表达。联合使用的效果优于单独使用。加入AMPK抑制剂可削弱此作用。结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡。此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关。