转染hIGF-1基因增强软骨细胞聚集蛋白多糖、Ⅱ型胶原的表达

目的探讨人胰岛素样生长因子(human insulin-like growth factor,hIGF-1)基因对软骨细胞分泌聚集蛋白多糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原的影响。方法构建并鉴定携带hIGF-1基因的重组腺病毒(Ad/CMV-hIGF-1),采用1、10、100及500感染复数单位(muldplicity of infection,MOD的Ad／CMV-hIGF-1转染软骨细胞,PBS为阴性对照,100μg／L hIGF-1生长因子为阳性对照,转染后4d进行aggrecan、Ⅱ型胶原免疫组化,参照文献分析免疫组化阳性单位。结果在1—100MOI范围内,随着Ad/CMV-hIGF-1滴度增加,aggrecan,Ⅱ型胶原表达递增,500MOI Ad／CMV-hIGF-1转染后,aggrecan表达骤减;Ⅱ型胶原表达下降不明显。结论hIGF-1基因对软骨细胞aggrecan,Ⅱ型胶原的表达有影响;100MOI Ad／CMV-hIGF-1优于100μg/L hIGF-1生长因子的作用。     

低强度脉冲超声促进人骨性关节炎软骨细胞合成细胞外基质

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人骨性关节炎(OA)软骨细胞的细胞外基质(ECM)的影响及相关作用机制。方法取膝关节置换术后废弃软骨组织,进行软骨细胞分离、培养、鉴定;取第2代软骨细胞随机分为OA对照组、30 m W/cm2LIPUS处理的OA组、30 m W/cm2LIPUS联合5μmol/L LY294002处理的OA组,除对照组外,其他组给予LIPUS刺激20 min/d×7 d;采用实时定量PCR法检测细胞中2型胶原蛋白(Col2)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)mRNA的水平,Western blot法检测细胞中Col2、aggrecan、MMP-13、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达。结果与OA对照组相比,LIPUS处理的OA组细胞内Col2、aggrecan mRNA和蛋白水平均增高,MMP-13表达降低,p-Akt蛋白的表达显著增加,Akt的表达则与OA对照组无显著性差异;与LIPUS处理的OA组细胞相比,LIPUS联合LY294002处理的OA组细胞中Col2、aggrecan mRNA和蛋白表达均降低,MMP-13表达增高,p-Akt蛋白的表达显著降低,Akt的表达则与LIPUS处理的OA组无显著性差异。结论 LIPUS促进人OA软骨细胞合成细胞外基质,并抑制其降解。     

转染hIGF-1基因增强兔退变椎间盘蛋白多糖的表达

目的 探讨人胰岛素样生长因子(hlGF-1)基因在退变椎间盘中的表达及对椎间盘中蛋白多糖(agglecan)的影响.方法 制备新西兰大白兔腰椎间盘退变(IDD)模型24只,随机分为Ad/CMV.hlGF-1、hlGF.1生长因子及PBS组,每组8只.IA-5、L5-6椎间盘中分别注射第2代Ad/CMV-hlGF-1(8×108PFU)、hlGF-1生长因子(100μg/L)、PBS均25μL.注射后1、2.4和8周,Western blot检测hlGF-1蛋白表达;RT-PCR检测aggrecan mRNA的表达.结果 hlGF-1蛋白带出现在7.6×103ku.Ad/CMV-hlGF-1组hIGF-I蛋白表达持续达4周以上,hIGF-1组表达持续约2周;PBS注射组无hIGF-1蛋白表达.aggrecan电泳条带出现在200～300 bp;在注射后1～4周,Ad/CMV-hlGF-I组内aggrecan mRNA相对表达量进行性增加,8周轻度下降,4个时期总的比较(F=8.51,P<0.05),注射后1～8周,hlGF-1组、PBS组aggrecan mRNA相对表达量进行性下降.结论 hlGF-1能够增强椎间盘aggrecan的表达.     

身材矮小伴多发性骨骼发育不良1例患儿的临床表型与遗传学分析

目的探讨1例身材矮小患儿的临床表型及遗传学特征。方法选择2021年10月7日因"生长迟缓伴鸡胸"就诊于湖州市妇幼保健院的1例患儿为研究对象, 回顾性分析患儿临床资料。患儿进行全外显子组测序(WES), 并对候选变异进行Sanger测序验证。结果患儿为1岁男性, 主要临床特点为轻度身材矮小(Z值为-2.03)、面中部发育不良及多发性骨骼发育不良, 包括鸡胸、椎体形态欠规则及腰椎前缘骨缺损等。患儿的母亲、外祖母、曾外祖父均身材矮小。WES结果显示患儿ACAN基因存在母源性c.2858dupA(p.Asp953GlufsTer476)杂合移码变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)变异相关指南, c.2858dupA(p.Asp953GlufsTer476)评级为可能致病性变异(PVS1+PM2_Supporting)。患儿从出生后20月龄开始接受约11个月的人重组生长激素治疗, 身高明显改善。结论 ACAN:c.2858dupA(p.Asp953GlufsTer476)考虑为该身材矮小患儿的致病原因。     

Marfan综合征FBN1基因突变研究进展

Marfan综合征是一种常染色体显性单基因遗传性结缔组织病，原纤蛋白基因突变是Marfan综合征的致病原因，本文将从蛋白、基因突变、基因突变与临床表型的关系及突变检测方法四方面概述Marfan综合征的分子生物学研究进展。     

Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1共转染人退变椎间盘髓核细胞对细胞外基质代谢的影响

目的探讨骨形态发生蛋白腺病毒表达载体（Ad—BMP-2）和转化生长因子-β1腺病毒表达载体（Ad—TGF—β1）共转染人退变椎间盘髓核细胞后对aggrecan和Ⅱ型胶原合成的影响。方法人退变椎间盘髓核细胞体外分离培养至第2代。为检测转入目的基因后蛋白表达情况,将其分为空白对照组、目的基因组和共转染组,细胞分别转染Ad—BMP-2（50MOI）、Ad-TGF-β1（50 MOI）及共转染（各50 MOI）,再用Western blot方法检测转染后细胞目的蛋白的表达;为探讨目的基因对细胞外基质代谢的影响,将研究对象分为空白对照组（A组）、Ad—BMP-2100 MOI（B组）、Ad-TGF—β1100 MOI（C组）、Ad-BMP-2和Ad-TGF—β1各50 MOI（D组）,用ELISA法分别检测转染第3天和第6天细胞上清液中aggrecan和Ⅱ型胶原的蛋白表达量。RT-PCR检测第6天髓核细胞内Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA的表达水平。应用方差分析比较组间差异,以P〈0．05表示差异有统计学意义。结果在转染目的基因载体后,目的蛋白表达增加。在转染后第3天和第6天各转染组细胞培养基中aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量高于对照组（P〈0．01）,与转染单个基因组相比,共转染组的aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量明显增加（P〈0．01）;并且在转染后第6天共转染组髓核细胞内aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA表达也明显增加（P〈0．01）。结论转染Ad-BMP-2、Ad-TGF-β1能促进aggrecan和Ⅱ型胶原合成,同时上调aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA的表达;共转染Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1对细胞外基质的mRNA和蛋白合成有协同作用。     

7个非综合征型耳聋家系患者的mtDNA A1555G突变分析

目的探讨非综合征型耳聋家系患者mtDNA A1555G突变及其临床特征。方法应用聚合酶链反应、限制性核酸内切酶酶切和DNA测序技术对7个非综合征型耳聋家系112个成员的mtDNA A1555G突变进行检测，并分析听力临床资料。结果7个家系中所有受检的母系成员mtDNA A1555G突变均为阳性，突变性质含同质性和异质性二种；非母系成员及配偶该突变为阴性。突变的性质与临床表型的有关。结论mtDNA A1555G突变可导致非综合征型耳聋和氨基糖苷类抗生素致聋，其突变性质含均质性和异质性两种，且与临床表型相关。     

染料木黄酮抑制生长板软骨细胞的增殖与基质合成

目的： 探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞（RGC）的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法： 原代培养RGC，1×10^－6 μmol/L-1×10^－4 μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h，观察RGC形态，同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合成，RT-PCR检测collagen Ⅱ和aggrecan基因表达。结果： 染料木黄酮改变了RGC的形态，随着浓度的升高，突起和漂浮细胞的数量增加。染料木黄酮剂量依赖性地抑制RGC的增殖、胶原和蛋白多糖的合成（P<0.05），以及collagenⅡ和aggrecan mRNA的转录。结论： 染料木黄酮抑制RGC的增殖和胞外基质的合成。     

FGFR2突变与囟门早闭的研究及进展

人类FGFR2基因的多种突变与囟门早闭综合征密切相关，主要包括Crouzon综合征，Pfeifer综合征，Apert综合征，Jackson—Weiss综合征，Beare-Stevenson综合征。目前研究FGFB2突变与囟门早闭综合征之间的关系已经成为分子遗传学领域的热点之一。本文从基因型和表型、可能的机制以及研究方法等几个方面回顾了近年来在二者关系的研究上取得的重要进展。     

Marfan综合征FBN1基因突变研究进展

Marfan综合征是一种常染色体显性单基因遗传性结缔组织病,原纤蛋白基因突变是Marfan综合征的致病原因,本文将从蛋白、基因突变、基因突变与临床表型的关系及突变检测方法四方面概述Marfan综合征的分子生物学研究进展。     

压力对髁突软骨细胞超微结构及可聚蛋白多糖分泌的影响

目的 探讨髁突软骨细胞超微结构及软骨可聚蛋白多糖(aggrecan)分泌随压力的变化过程。方法 体外培养髁突软骨细胞，采用可控液压细胞加载装置90kPa压强下分别加载60min、360min，透射电镜观察细胞的超微结构，原位杂交方法观察髁突软骨细胞(MCC)中软骨可聚蛋白多糖mRNA的表达。结果 对照组细胞在透射电镜下生长良好，未见到细胞凋亡现象；90kPa加压60min后细胞生长状态亦良好，多见到明显伸长盘绕的微绒毛；90kPa加压360min后细胞部分出现明显的细胞凋亡指征；软骨可聚蛋白多糖mRNA在受压60min后表达明显增强，加压时间延长到360min后表达弱于60min组但仍高于对照。结论适宜的压力可使MCC结构及功能都发生一定的变化，aggrecan代谢水平升高。     

POEMS综合征研究45年

目的：对POEMS综合征进行分析并进行相关文献复习；方法：论述POEMS综合征的临床特点。实验室检查及病理结果，治疗和预后，并就其发病机制及治疗方面对45年来的相关文献进行的阐述；结果：POEMS综合征分别有多发性神经病，脏器肿大、内分泌病，M-蛋白和皮肤病变，伴有多发性骨髓瘤等；结论：POEMS综合征是多系统的病变，临床表现复杂多样，应注意多系统的检查，特别是神经系统的检查，减少误诊，提高临床诊断率。     

督脉电针联合神经干细胞移植治疗脊髓全横断损伤后aggrecan的表达变化

目的:观察督脉电针联合神经干细胞( NSCs)移植治疗脊髓损伤对硫酸软骨素蛋白多糖aggrecan的表达影响.方法:成年SD大鼠随机分为脊髓损伤对照组、督脉电针组、NSCs移植组以及督脉电针联合NSCs移植组.建立成年大鼠第9～10胸椎段脊髓全横断模型.其中电针组和电针联合NSCs组于术后当天进行电针治疗.用免疫组织化...     

EPCAM基因缺失导致的Lynch综合征相关卵巢癌1例

本文报道1例35岁的卵巢癌患者, 有卵巢癌家族史, 病理诊断为右卵巢透明细胞癌。分子检测示高度微卫星不稳定(MSI-H)表型, 胚系EPCAM基因拷贝数缺失突变和MSH2基因甲基化, EPCAM蛋白和MSH2蛋白不表达, 最终诊断为Lynch综合征相关卵巢癌(LSAOC), 提示我们对于发病年龄较轻、有肿瘤家族史、非浆液亚型的卵巢癌患者需注意进行Lynch综合征相关基因筛查, 并关注Lynch综合征的非经典发病特征和致病因素, 必要时可使用高通量测序技术, 以减少漏诊、误诊。     

Marfan氏综合征的临床基础及遗传分析

目的通过对马凡综合征患者的临床特征、病因及病理变化的分析,提高其治疗预后水平。方法对患者进行症状、体征、实验室等项检查,得到患者的眼、骨骼、心血管等系统的临床资料,收集完整的家系资料进行遗传分析,判断发病情况并评估再发风险。结果得到一马凡综合征患者的家系,并进一步确定其常染色体显性的遗传方式,明确了患者的表型特征,总结了目前的诊治方法,给与家系中相关人员以必要的遗传指导。结论马凡综合征是编码原纤维蛋白-1(原纤蛋白-1,FIBRILLIN-1)的基因FBN1的突变所致,对该病的诊断治疗已经取得了一定的进展。早期诊断,预防心血管并发症,是降低死亡率的关键。     

1例携带长度为6.4 Mb大小的α突触核蛋白位点重复序列引起的额颞叶痴呆症与帕金森病表型--基因型的相关性分析

α-突触核蛋白位点重复序列与帕金森病各种临床特征相关，且与外显率的减低相关。然而这种突变的原因尚未明确。该文报道1例新型携带长度为6．4 Mb大小α-突触核蛋白位点重复序列的家系。该例家系患者出现非典型临床表现，强烈提示为额颞叶痴呆以及晚发型苍白球锥体综合征，并分析该例患者与帕金森病表型-基因型的相关性。报道该例患者的临床和神经病理学特征，为明确候选的疾病影响因子，实验进行了家系遗传学分析，并且采用回归模型对既往发表的携带有α-突触核蛋白位点重复的病例进行了统计学分析。同时本组还评估α-突触核蛋白重复的长度是否影响疾病的外显率以及严重程度，额外的重复序列是否具有疾病修饰的作用。实验在该家系中发现了一个α-突触核蛋白位点上6．4 Mb大小的重复。神经病理学分析显示广泛的α-突触核蛋白病理以及少量的磷酸化tau蛋白病理改变。遗传学分析显示帕金森病相关的危险因素以及疾病易感H1/H1微管相关蛋白tau单体型负荷增加。对既往发表的病例统计学分析显示重复序列大小增加，其疾病严重程度和外显率有增加的趋势。多元分析相应的风险比为1．17(95%CI：0．81~1．68)以及1．34(95%CI：0．78~2．31)。性别与疾病风险以及严重程度显著相关，与女性相比，男性疾病风险和严重程度增加，多元分析相应的风险比为8．36(95%CI：1．97~35．42)以及5．55(95%CI：1．39~22．22)。该研究发现进一步扩展了α-突触核蛋白位点复制的表型谱。然而，在无其他额外危险因素作用下，位于重复区内基因序列大小的增加不太可能增加疾病风险以及严重程度。明确α-突触核蛋白位点复制患者表型异质性的疾病影响因素有助于对α-突触核蛋白聚集的分子机制的理解。     

浅谈高血压药物治疗的现状

探讨降压治疗的策略的改变,重新评价降压药及降压目标。查阅相关资料及六年来的工作经验总结。在高血压百年的认识过程中,高血压不再被认为是局限于心血管系统受累的疾病,而是多种心血管危险因素聚集、遗传的综合征,可称之为高血压综合征。改变对高血压传统的认识,对于评价高血压治疗手段,重新评价降压药物有重要意义。     

视神经蛋白突变在肌萎缩侧索硬化症中的研究进展

视神经蛋白(OPTN)目前被认为是原发性开角型青光眼(POAG),肌萎缩侧索硬化症(ALS)等神经退行性疾病的病理学标记蛋白。OPTN参与不同的细胞功能,例如调控后高尔基体膜运输、分泌、胞内病原体自噬、抗病毒先天免疫反应、有丝分裂、核因子-κB(NF-κB)通路、基因表达等。在OPTN突变的ALS临床病例中,受损的运动神经元呈现出胞质内OPTN泛素化聚集改变,蛋白质包涵体形成以及与ALS相关病理蛋白铜锌超氧化物歧化酶1(SOD1)、反式激活-反应性DNA结合蛋白-43(TDP43)、肉瘤熔合基因(FUS)的共定位。本文着重阐述OPTN突变在肌萎缩侧索硬化症中的研究进展,探讨其致病机制、病理改变以及治疗方法。     

遗传印迹与疾病

印迹基因的调节失衡在很多疾病中都观察到,如Beckwith-Wiedemann综合征,Prader-Willi/Angelman综合征和肿瘤, 印迹疾病以复杂突变型式为特征,相关的表型有影响出生前和出生后生长的表型以及影响神经功能的表型, 印迹基因表达调节是由基因座位特异性DNA和染色质的表观修饰介导,这些修饰优先影响中央调节元件,这些元件顺式控制长距离附近几个基因座位特异性表达, 印迹基因疾病的研究对生物医学研究有重要影响,也为表观遗传基因控制的功能和机理研究提供了一个有趣的模型.     

妊娠相关血浆蛋白及遗传学方法早期诊断胎儿出生缺陷的临床研究

目的探讨妊娠相关血浆蛋白与唐氏综合征(Down's综合征)等出生缺陷儿之间的关系。方法采用ELISA和金标法对唐氏综合征等出生缺陷进行筛查,阳性病例进行羊水细胞染色体制备分析确诊。结果检测302例高危早、中期妊娠妇女,检出异常妊娠9例,异常检出率2.98%。结论妊娠相关血浆蛋白(PAPP-A)、AFP、β-hCG联合应用是筛查唐氏综合征等出生缺陷患儿的有效方法,减少大量的侵入性操作,方法稳定、经济,适用于大量的产前筛查。