低剂量亚硝酸钠诱导CHL细胞DNA损伤的适应性反应

目的： 研究低剂量亚硝酸钠（NaNO₂）诱导CHL细胞DNA损伤的适应性反应及其形成机制。方法: 采用单细胞凝胶电泳试验检测DNA的损伤程度。分别以浓度为0.01 mg /L、0.1 mg /L和1 mg /L的NaNO₂预处理CHL细胞6h后，观察细胞对随后的1 g/L冲击剂量NaNO₂的适应性反应；用3-氨基苯甲酰胺（3-AB）分别在低剂量预处理前和预处理6 h后抑制聚ADP核糖聚合酶（PARP-1）的活性，观察其对适应性反应的阻断情况。结果: 未经低剂量预处理的细胞，接触1 g/L的NaNO₂ 18 h后，DNA损伤较严重，其细胞拖尾率为7.87%，明显高于正常对照组（P<0.01）；浓度为0.01 mg/L和0.1 mg/L的NaNO₂预处理CHL细胞后，可明显缓解1 g/L冲击剂量的NaNO₂对CHL细胞DNA的损伤作用，其细胞拖尾率分别为3.55%和1.06％, 明显低于未经低剂量NaNO₂预处理组细胞的拖尾率（P<0.05；P<0.01）；而经1 mg/L的NaNO₂预处理的细胞，接触1 g/L的NaNO₂ 18 h后，DNA损伤较严重，其细胞拖尾率为6.09%，与未经低剂量NaNO₂预处理组细胞的拖尾率相比，差异无显著（P>0.05）。距离指标及复合指标也有相同趋势。在低剂量NaNO₂预处理细胞前采用3AB抑制PARP-1活性可阻断适应性反应的产生；而在低剂量NaNO₂预处理细胞6h后再用3AB抑制PARP-1活性，则不会阻断适应性反应的产生。结论: 浓度等于或低于0.1 mg/L的NaNO₂可通过激活PARP-1诱导CHL细胞DNA损伤的适应性反应，而且，能诱导适应性反应的剂量很可能对机体DNA不造成损伤。     

ERK1/2－STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用

目的：探讨ERK1/2-STAT3通路在H₂O₂预处理导致的适应性细胞保护中的作用。方法：在PC12细胞建立H₂O₂预处理对抗氧化应激（300 μmol/L H₂O₂）损伤细胞的模型。应用Hoechst33258核染色法观察细胞调亡的形态学改变；应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率；免疫印记法(Western blotting) 测定p-ERK1/2和p-STAT3的表达水平。结果：100 μmol/L H₂O₂预处理PC12细胞90 min可明显抑制300 μmol/L H₂O₂作用12 h引起的细胞凋亡，并激活ERK1/2和STAT3；ERK1/2抑制剂UO126和JAK2抑制剂AG-490（10 μmol/L）均可明显地阻断H₂O₂预处理引起的细胞保护作用；UO126（10 μmol/L）亦能明显地抑制H₂O₂预处理对STAT3的上调作用。结论：H₂O₂预处理能激活PC12细胞的ERK1/2-STAT3信号转导旁路，这可能是预处理的细胞保护机制之一。     

封闭枯否细胞对LPS诱导激活丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的： 利用小鼠LPS血症模型，探讨封闭枯否细胞（KCs）对LPS诱导MAPK信号转导通路的影响。方法： 雄性昆明种小鼠在注射LPS（5 mg/kg）前48 h及24 h，分别静脉注射GdCl₃（10 mg/kg）或等量的生理盐水，于LPS或生理盐水注射后30 min，分别取出肝脏或分离KCs；体外培养小鼠KCs经GdCl₃（100 μmol/L）预处理1 h，加入含LPS（100 μg/L）的DMEM培养基继续孵育30 min，分别检测肝脏及体内外KCs ERK1/2、p38MAPK蛋白表达和磷酸化水平，及GdCl₃对KCs吞噬、分泌功能的影响。结果： GdCl₃可抑制LPS 诱导KCs活化和TNF-α分泌，但不能抑制LPS诱导KCs或肝脏ERK1/2、p38MAPK磷酸化，也不能影响ERK1/2、p38MAPK蛋白表达，KCs 经GdCl₃单独短时间处理（1 h），可使其少量分泌TNF-α。结论： 封闭KCs并不能通过调节细胞内ERK1/2、p38MAPK信号转导途径，抑制LPS诱导的KCs活化及TNF-α释放，而可能是通过其它信号转导途径（JNK、NF-кB、GPCR等）间的相互作用减轻肝损伤。     

胸腺嘧啶核苷双阻断法诱导SGC-7901细胞周期同步化研究

目的: 探讨胸腺嘧啶核苷(TdR)双阻断法对人胃癌细胞SGC-7901细胞周期的影响。方法: 取对数生长期的SGC-7901细胞,加入2 mmol/L、4 mmol/L和8 mmol/L TdR孵育15 h,去除TdR孵育10 h,再次加入不同浓度的TdR孵育15 h后收集各组细胞,流式细胞术分析细胞周期各时相细胞百分比。经不同浓度TdR双阻断法诱导SGC-7901细胞后,再去除TdR孵育12 h,收集各组细胞分析细胞周期各时相细胞百分比。结果: SGC-7901细胞经2 mmol/L、4 mmol/L和8 mmol/L TdR双阻断法诱导,收获G₀/G₁期的细胞数分别为77.3%、77.5%和77.0%。再次去除TdR培养 12 h后,各期细胞百分比又可恢复正常范围。结论: 2 mmol/L TdR双阻断法诱导SGC-7901细胞即可在短时间内获得大量的G₀/G₁期细胞,是一种理想的获得大量处于"基态"的细胞的方法。     

rhTGF-β1及转染TGF-β1基因对兔角膜内皮细胞增殖的影响

目的： 探讨不同浓度的重组人转化生长因子-β₁(rhTGF-β₁)及TGF-β₁基因转染对体外培养兔角膜内皮细胞增殖的影响。方法: 用MTT法检测不同浓度rhTGF-β₁作用下角膜内皮细胞的增殖。用脂质体介导转染方法，将TGF-β₁基因转移入培养的兔角膜内皮细胞，HE染色法观察细胞组织形态学变化；ELISA法检测转染细胞培养上清中TGF-β₁表达量；流式细胞仪检测细胞生长周期变化；DNA电泳法检测转染细胞凋亡情况。结果: MTT检测示5-20 μg/L rhTGF-β1抑制角膜内皮细胞增殖；0.5-1 μg/L组对增殖无影响；0.05~0.1 μg/L组促进细胞增殖。TGF-β₁基因转染细胞形态无明显异常，细胞培养上清中TGF-β₁的浓度约为(98±3)ng/L。流式细胞仪检测示，基因转染组S期和G₂/M期细胞比例减少、PI值降低，但加入EGF后细胞生长基本正常。DNA电泳检测示基因转染组未见凋亡带。结论: rhTGF-β₁对角膜内皮细胞增殖的影响具有剂量依赖性；TGF-β₁基因转染影响角膜内皮细胞增殖、但不诱发凋亡，其抑制作用可被外源性EGF拮抗。     

去甲斑蝥素抑制乳腺癌SKBR3细胞增殖及侵袭转移的体外研究

目的： 探讨去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）抑制乳腺癌细胞SKBR3增殖及侵袭转移的机制。方法： 体外培养人乳腺癌SKBR3细胞株，采用MTT法检测NCTD对乳腺癌细胞SKBR3增殖抑制能力；流式细胞术测NCTD对SKBR3细胞周期和凋亡的影响；应用肿瘤细胞体外黏附实验、迁移实验和Transwell体外侵袭转移模型检测NCTD对SKBR3细胞黏附、运动、侵袭转移的抑制作用。结果： NCTD可抑制人乳腺癌SKBR3细胞增殖，具有明显量效和时间依赖性，24 h的IC₅₀为12.5 mg/L；10 mg/L NCTD 作用SKBR3细胞24 h、48 h后，特异地使SKBR3细胞发生G₂/M期阻滞，G2/M期细胞百分比分别为35.82%、38.70%，G₁期和S期细胞较对照组明显减少，亚G₁和G₀峰DNA含量逐渐增加, 24 h、48 h的凋亡率分别为3.44%和6.17%；SKBR3细胞的体外黏附、运动、侵袭转移能力随NCTD药物浓度提高而下降，表现在黏附抑制率增加，过河时间延长，过膜细胞数减少(P<0.05)。结论： NCTD可通过抑制乳腺癌细胞增殖，阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡，抑制肿瘤细胞对基质黏附、迁移运动、侵袭转移等途径抑制癌症的发展。     

ERK1/2信号通路参与瘦素促人γδT细胞增殖调控

为探讨ERK1/2信号通路在瘦素促进人γδT细胞增殖中的作用机制。我们用MTT法观察不同浓度瘦素促γδT细胞的增殖效应,以及用ERK1/2特异性抑制剂PD98059阻断ERK1/2信号通路对瘦素促细胞增殖效应的影响,Western blot法检测瘦素干预对ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达水平的影响。结果显示,瘦素在一定浓度范围内促进人γδT细胞增殖。瘦素可使ERK1/2信号通路中的靶蛋白发生磷酸化激活,用PD98059阻断ERK1/2信号通路可显著抑制瘦素促细胞的增殖效应,亦可抑制瘦素对γδT细胞ERK1/2蛋白磷酸化。因此,我们认为瘦素促人γδT细胞增殖效应可能与激活ERK1/2信号通路有关。     

As2O3诱导肿瘤细胞凋亡依赖H2O2途径

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，As₂O₃）对人乳头瘤病毒（HPV）阳性宫颈癌HeLa细胞和HPV阴性胰腺癌AsPC-1细胞的 凋亡诱导作用与细胞内H₂O₂水平的关系。方法：采用不同浓度的As 2O3处理HeLa细胞和AsPC-1细胞不同时段，显微镜下观察细胞的凋亡，噻唑蓝（MTT）法 测定细胞生长抑制情况；不同浓度的As₂O₃处理细胞2、5、8、12、24 h后，用DCFH-DA 标记检测细胞内的H₂O₂水平。结果：2 μmol/L As₂O₃处理HeLa 细胞48 h后细胞的生长受到明显抑制，表现出细胞凋亡的特征，随着As₂O₃浓度的增加 和作用时间的延长效果更加明显。而 1 μmol/L As₂O₃处理AsPC-1细胞24 h 即呈 现明显 的生长抑制和凋亡特征。As₂O₃处理HeLa细胞2 h细胞内H₂O₂的水平比对照组升高(1 0 μmol/L组达51.30%)，持续到8 h达到高峰（升高84.19%），12 h后下降，24 h水平与 对照组接近，并有明显的剂量依赖性。As₂O₃处理AsPC-1细胞2 h后，细胞内H₂O₂的 水平也明显升高（10 μmol/L组达79%），持续到5 h达到高峰（增高169%），且该细胞内H₂O₂水平升高比HeLa细胞更明显，12 h之后的变化情况与HeLa细胞类似。结论:As₂O₃诱导HeLa细胞和AsPC-1细胞凋亡与细胞内的H₂O₂水平改变有关,而与HPV的感染无明显相关性。H₂O₂积累是As₂O₃诱导细胞凋亡途径中的早期事件,H₂O₂可能在As₂O₃诱导肿瘤细胞凋亡途径中扮演类似第二信使的作用。     

氯化高铁血红素对血管内皮细胞Erk1/2磷酸化的诱导及维持作用研究

目的： 探讨氯化高铁血红素（hemin）是否可诱导人脐静脉内皮细胞Erk1/2的磷酸化，以及对磷酸化Erk1/2的维持时间。 方法： 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分别给予不同浓度的氯化高铁血红素或100 μmol/L H₂O₂刺激，收集不同时段的细胞，采用Western blotting测定细胞中总Erk1/2和磷酸化Erk1/2的表达。 结果： 氯化高铁血红素在1-10 μmol/L浓度范围内可诱导HUVECs Erk1/2的磷酸化，且可长时间维持Erk1/2的磷酸化，然而当氯化高铁血红素浓度≥25 μmol/L时，对HUVECs Erk1/2的磷酸化作用减弱甚至消失。H₂O₂对照组作用于HUVECs时仅引起Erk1/2短暂的磷酸化。 结论： 氯化高铁血红素可诱导并维持HUVECs Erk1/2长时间的磷酸化，提示对 Erk1/2 的磷酸化可能是氯化高铁血红素的作用机制之一。     

VEGF诱导血管内皮细胞产生H2O2及其促增殖作用

目的： 研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H₂O₂及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法: ① 以H₂DCFDA为H₂O₂指示剂，检测 500 μg/L VEGF刺激下，血管内皮细胞H₂O₂的产生；② 以MTT法检测3×10⁶ U/L过氧化氢酶（CAT），及外源性加入5-20 mmol/L H₂O₂对VEGF促增殖功能的影响。结果: ① 在VEGF刺激血管内皮细胞 15 min 后，细胞内开始出现逐渐增强的荧光，且随时间逐渐增强，至 45 min 左右最强，随后逐渐减弱；而同时加入过氧化氢酶组的细胞则仅有微弱荧光产生，且荧光强度不随时间变化；② 3×10⁶ U/L过氧化氢酶对VEGF的促增殖功能有明显的抑制作用（P<0.01）；③ 外源性加入5-10 mmol/L H₂O₂ 时对血管内皮细胞有明显促增殖作用（P<0.01），但其对VEGF的促增殖功能却有显著抑制作用（P<0.01）。结论: VEGF可刺激血管内皮细胞产生细胞外H₂O₂，在促细胞增殖中可能具有重要作用。而外源性H₂O₂对VEGF的生理功能可能具有抑制作用。     

维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的凋亡诱导作用

目的： 观察维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M的凋亡诱导作用。方法： MTT增殖抑制实验；吖啶橙染色检测细胞凋亡；流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化；NAC抗氧化试验；DCFH-DA荧光分光光度法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平；RT-PCR检测GSH-Px和CAT基因表达的改变。结果： 60 μmol/L剂量以上的VK3均可以有效抑制PC-3M细胞的增殖，并且呈时间剂量依赖性；联合应用不同剂量NAC（5、10、20、40、80 μmol/L）与VK₃（60 μmol/L）共同作用于PC-3M细胞后，结果显示与单独应用VK3相比各浓度的NAC能不同程度增加细胞存活率；吖啶橙染色证明在VK₃（60 μmol/L）作用12 h后，PC-3M细胞出现凋亡的形态学改变；流式细胞计数结果显示VK₃（60 μmol/L）作用12 h后细胞出现凋亡峰，细胞周期被阻滞于G₀/G₁期；DCFH-DA荧光染色，在VK₃作用后1-2 h，细胞内即出现了较强的荧光表达；RT-PCR结果显示，在VK₃作用后细胞内的CAT和GSH-Px两种主要的抗氧化酶类表达降低。结论： VK₃可能主要通过引起PC-3M细胞内氧化应激诱导细胞发生凋亡。     

普罗布考抑制bFGF和H2O2引起的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的： 研究普罗布考抑制碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和H2O2促大鼠主动脉平滑肌细胞（RASMCs）增殖的机制。方法: 采用MTT、［³H］-TdR掺入法、流式细胞术和RT-PCR观察普罗布考对bFGF和H₂O₂刺激条件下细胞周期、细胞增殖和凋亡的影响。结果: ①普罗布考抑制bFGF和H₂O₂刺激RASMCs增殖。细胞计数、A值和［³H］-TdR掺入量分别下降了40.0%、39.1%、45.5%和46.9%、45.0%、39.5%（P<0.05，P<0.01）。②普罗布考使RASMCs生长停滞在G₀/G₁期，抑制bFGF刺激的细胞增殖，通过诱导细胞凋亡和抑制细胞生长2种方式抑制H₂O₂刺激的细胞增殖。③bFGF和H₂O₂分别使ERK1mRNA表达量增加近4倍和6倍，MKP-1mRNA表达量下降了62.4%和82.2%。普罗布考抑制ERK1mRNA表达，使H₂O₂诱导的MKP-1表达下降上调，而对bFGF诱导MKP-1表达下降无明显影响。结论: 普罗布考通过降低ERK1mRNA表达抑制细胞周期运转和诱导RASMCs凋亡，从而抑制bFGF和H₂O₂刺激引起的细胞增殖。     

损害性因素对乳鼠心肌细胞甘氨酸受体α1亚基表达的影响

目的：研究脂多糖（LPS）、缺氧/复氧（H/R）、异丙肾上腺素(ISO)以及高糖（HG）对乳鼠心肌细胞甘氨酸受体α₁亚基（GlyRα₁）表达的影响。方法：体外培养乳鼠心肌细胞，分别用LPS、H/R、ISO以及HG处理，采用CCK-8试剂检测细胞活力，RT-PCR方法检测心肌细胞上GlyRα₁亚基mRNA的表达。结果：LPS（5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80mg/L）、ISO（20 μmol/L、100 μmol/L、500 μmol/L）以及HG（25 mmol/L、50 mmol/L）处理心肌细胞24 h与心肌细胞缺氧3 h/复氧3 h、单纯缺氧3 h对心肌细胞存活率无明显影响（P＞0.05）；LPS（5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L）、缺氧（3 h）/复氧（3 h）、单纯缺氧（3 h）以及ISO（20 μmol/L、100 μmol/L、500 μmol/L）组心肌细胞上GlyRα1亚基mRNA表达均高于对照组（P<0.01），而HG（25 mmol/L、50 mmol/L）组心肌细胞上GlyRα₁亚基mRNA表达均低于对照组（P<0.01）。结论：一定浓度的LPS、ISO与一定时间的H/R、单纯缺氧均可上调乳鼠心肌细胞GlyRα₁亚基mRNA的表达，而HG可下调乳鼠心肌细胞GlyRα₁亚基mRNA的表达。     

黄芩素通过抑制胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)促进HeLa细胞凋亡

目的探讨黄芩素和U0126对人宫颈癌He La细胞凋亡的影响及机制。方法 He La细胞先用(1、2、5、10、20、50、100、200、300)μmol/L黄芩素,(1、2、5、10、20、30)μmol/L U0126处理24 h后,CCK-8法筛选最佳的处理浓度。而后分别用200μmol/L黄芩素、10μmol/L U0126、200μmol/L黄芩素联合10μmol/L U0126处理He La细胞24 h,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数;实时定量PCR检测He La细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、Bax和Bcl-2的mRNA水平、Western blot法检测ERK1/2、Bax和Bcl-2蛋白水平。结果 He La细胞经不同浓度的黄芩素或经不同浓度的U0126处理后,CCK-8法证明黄芩素最佳抑制浓度为200μmol/L,U0126最佳抑制浓度为10μmol/L;He La细胞经200μmol/L黄芩素处理24 h后,G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显下降,采用200μmol/L黄芩素联合10μmol/L U0126处理He La细胞24 h,S期细胞比例显著降低;10μmol/L U0126和200μmol/L黄芩素单独处理He La细胞,引起明显细胞凋亡,二者联合处理凋亡更明显;He La细胞经200μmol/L黄芩素或10μmol/L U0126单独处理或联合处理24 h后,ERK1/2和Bcl-2的mRNA表达水平明显降低、而Bax的mRNA水平升高;蛋白水平上,ERK1/2的磷酸化水平明显降低,Bax蛋白水平增加,Bcl-2的蛋白水平降低。结论黄芩素和U0126均可抑制He La细胞增殖、诱导细胞凋亡,增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例,联合应用效果更明显。     

ERK1/2MAPK通路在Eca109细胞体外增殖和迁移中的作用及其机制

目的观察ERK1/2 MAPK通路在食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞系增殖和迁移中的作用并探讨其作用机制。方法使用MAPK(ERK1/2)抑制剂U0126处理Eca109细胞;细胞计数检测细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ERK1/2 mRNA;Western blot检测总ERK1/2(t-ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2);MTT和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;qRT-PCR检测MicroRNA-21(miR-21)。结果20μmol/L浓度的U0126可抑制Eca109细胞生长(P<0.05),破坏细胞正常形态,ERK1/2 MAPK通路的活化在蛋白质水平被抑制(P<0.05),Eca109细胞增殖和迁移明显减弱(P<0.05),显著下调miR-21的表达(P<0.05)。结论ERK1/2 MAPK信号通路抑制可减弱Eca109细胞增殖和迁移,其可能的作用机制之一与其抑制miR-21表达有关。     

硫唑嘌呤对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的: 研究硫唑嘌呤(AZA)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、凋亡和细胞周期的影响,为炎症性肠病的临床治疗提供实验依据。方法: 含10%FBS的低糖DMEM培养基培养大鼠MSCs,50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L的AZA分别作用于大鼠MSCs 24 h、48 h和72 h,用显微镜下直接计数法检测MSCs的增殖情况并绘制生长曲线,用流式细胞术检测MSCs凋亡和细胞周期。结果: MSCs经过3次传代后可纯化。在小于100 mg/L浓度下,AZA对MSCs的增殖、细胞周期与凋亡无显著影响(P>0.05),而AZA在大于200 mg/L浓度下作用72 h后,MSCs生长受到明显抑制,抑制率大于66%,凋亡率明显升高(P<0.05);在300 mg/L浓度下作用72 h时,MSCs的凋亡率则明显降低,而MSCs坏死率明显升高(P<0.05)。在大于200 mg/L的AZA作用下,随着作用时间延长,MSCs进入G₀/G₁期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。结论: 一定浓度的AZA对大鼠MSCs的增殖、细胞凋亡和细胞周期均有明显的影响。大剂量的AZA会直接造成MSCs死亡。     

核心蛋白聚糖对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的: 观察核心蛋白聚糖(DCN)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响,并对照观察丝裂霉素C(MMC)对HPF的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法: (1)取患者的翼状胬肉体部组织,采用组织块贴壁培养法原代培养HPF。(2)用0.01、0.1、1、5、10 mg/L DCN及 MMC分别作用于体外培养的HPF, 24 h、48 h、72 h后观察2种药物对HPF形态的改变,2种药物不同浓度分别作用12 h、24 h、48 h后 MTT法比较2种药物的作用效果,不同浓度的DCN作用48 h后免疫组织化学染色增殖细胞核抗原(PCNA)法检测细胞生长活性,流式细胞术测定细胞周期时相变化。结果: 10 mg/L DCN或1 mg/LMMC在12 h后均能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。1~10 mg/L DCN 作用48 h使G₀/G₁期细胞百分比上升(P<0.05),5~10 mg/LDCN 作用48 h使G₂/M期和S期百分比(G₂/M%+S%)显著下降(P<0.05),实验组和对照组均未检测到终末期凋亡细胞。1~10 mg/L DCN能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论: 核心蛋白聚糖能抑制HPF的增殖,阻滞细胞在DNA合成前期。     

尿IgG亚类对人肾小管上皮细胞表达巨噬细胞移动抑制因子的调节作用

目的： 探讨微小病变型（MCD）及膜性肾病型（MN）肾病患者尿IgG亚类对人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）表达巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的影响。方法: 收集MCD和MN肾病患者的尿液，分离纯化尿IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄ 4个亚类纯品，并加以鉴定。将这两种病理类型肾病患者的尿 IgG₃、IgG₄分别刺激HK-2细胞，用Western blotting的方法检测HK-2细胞MIF蛋白表达的量效关系（0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 g/L，刺激HK-2细胞24 h）和时效关系（1 g/L刺激HK-2细胞0 h、1 h、6 h、12 h、24 h、48 h）。结果: MN和MCD肾病患者的尿IgG₃、IgG₄均可上调HK-2细胞表达MIF蛋白，并呈明显的剂量和时间依赖关系。MN患者尿IgG₃刺激HK-2细胞随着剂量的增加,MIF蛋白表达逐渐增强，到1.0 g/L时达到峰值，时间效应则在1h即明显升高，12 h达到峰值；IgG4在0.1 g/L时即达到峰值，时间效应则6 h即明显升高，12 h达峰值。而MCD患者尿IgG₃刺激HK-2细胞表达MIF蛋白，在1.0 g/L时才开始明显升高，5.0 g/L达峰值，时间效应上则在12 h才明显升高；IgG₄在0.1 g/L时开始明显升高，0.5 g/L时达峰值，时间效应上则在48 h时才出现明显升高，并达峰值。结论: MN及MCD肾病患者的尿IgG₃、IgG₄均可上调HK-2细胞表达MIF蛋白，且MN患者尿IgG₃、IgG₄的作用强于MCD患者，提示这两种病理类型肾病患者尿IgG亚类可能存在结构或功能上的差异。     

ERK1/2信号蛋白在糖尿病小鼠肾组织中的表达

目的： 研究细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠肾组织中的表达及活化情况，从分子信号角度探讨糖尿病肾病肾纤维化的发病机制。方法：采用STZ腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型，并检测血糖、血肌酐、24 h尿白蛋白排泄率、肾重/体重、肾小球体积；用免疫组织化学方法检测糖尿病小鼠肾组织TGF-β₁、磷酸化ERK1/2和collagen Ⅲ的表达。结果： 腹腔注射STZ后，模型组小鼠均出现明显的多食、多饮、多尿和体重下降等糖尿病症状，血糖明显升高，血肌酐水平出现一过性增高，24 h尿白蛋白排泄率明显增加，肾重/体重比值增加，肾小球体积增大，肾小球细胞外基质明显增宽。正常肾组织有TGF-β₁和磷酸化ERK1/2的基础表达［分别为：5.26%±2.35%；（12.31±3.97）个/mm²］，糖尿病形成后，TGF-β₁、磷酸化ERK1/2水平在肾组织中的表达明显高于对照组，并持续增加到12周［分别为：15.63%±5.38% vs 对照组,P<0.01；（136.84±25.94）个/mm² vs 对照组,P<0.01］。正常肾组织有collagen Ⅲ的基础表达（1.58%±0.52%），糖尿病形成后collagen Ⅲ在肾组织中的表达均明显高于对照组，并持续增加到16周（15.28%±3.78% vs 对照组,P<0.01）。肾组织TGF-β₁、磷酸化ERK1/2的表达时相相似，并呈明显的正相关（r=0.87,P<0.01），并与肾组织collagen Ⅲ的表达相关（r=0.83,P<0.01）。结论： 细胞外信号调节激酶1/2的表达和活化可能参与小鼠糖尿病肾病肾纤维化的发病过程。     

CCKB受体诱发的小鼠神经元蛋白质磷酸化的研究

目的：从蛋白质可逆磷酸化修饰的角度初步勾勒出CCK_B型受体介导的胞内信号转导途径。方法:培养的小鼠大脑皮质神经元分为实验组、对照组和受体拮抗剂组，在无磷培养基加入 ［32P］-NaH₂PO₄标记细胞中的磷蛋白后，刺激组给予CCK₈（10^-7 mol/L），对照组加入等量的无磷培养基，受体拮抗剂组在分别加入CCK_A型、CCK_B型受体拮抗剂L364 718、L365 260以及L364 718＋L365 260，浓度均为10^-8 mol/L，孵育10 min后，再加入10^-7 mol/L CCK₈，37 ℃作用60 min，液氮中终止磷酸化反应。裂解细胞提取蛋白质，双向电泳分离，放射自显影7d后，获得磷酸化蛋白的放射自显影双向电泳图谱。采用PDQuest 2D分析软件对图谱进行差异分析，并在Swiss-Prot蛋白质数据库和自建磷蛋白数据库中查询定性。结果:CCK₈作用60 min后，小鼠神经元CCK₈信号转导相关磷酸化蛋白有：多种蛋白激酶、细胞信号分子、生长因子受体、转录因子等。加入L364 718后，神经元中PKCδ、P55G等的磷酸化水平降低，加入L365 260后， PKCα、PKGβ、OGFR、EGFR等的磷酸化水平呈现不同程度的降低，表明皮质神经元中CCK_B受体介导的信号转导更复杂。结论:CCK_A型、GGK_B型受体均可介导CCK₈在神经元的信号转导，但CCK_B型受体可能发挥了更重要的作用，其介导的信号途径可能包括：肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径、JNK途径、PI3K-PKB途径和cGMP-PKG途径。