骨髓基质干细胞联合rhBMP-2/rhVEGF治疗兔早期激素性股骨头缺血性坏死的实验研究

目的探讨BMSCs联合rhBMP-2/rhVEGF对早期激素性股骨头缺血性坏死的治疗作用。方法选取建立早期激素性股骨头坏死动物模型新西兰大白兔30只,随机分为5组,每组6只。A组:模型对照组;B组:单纯减压;C组:减压后植入BMSCs;D组:减压后植入BMSCs联合rhBMP-2;E组:减压后植入BMSCs联合rhBMP-2/rhVEGF。治疗后4、8周时各组取3只兔采用X线观察股骨头结构变化,病理组织学。结果 E组股骨头结构清晰,骨小梁结构完整,骨质破坏明显修复,空骨陷窝减少,大量新生的血管,其骨陷窝阳性数及与血管数目与各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BM-SCs联合rhBMP-2/rhVEGF治疗早期激素性股骨头坏死,促进作用血管形成,显著改善坏死股骨头的血运,促进骨修复。     

金葡液治疗兔早期股骨头缺血性坏死的研究

目的通过建立动物模型,观察金葡液治疗兔早期股骨头缺血性坏死的疗效。方法成功造模后,随机选取40只兔分为四组：A组,模型组;B组,单纯髓芯减压组;C组,髓芯减压＋金葡液组;D组,髓芯减压＋明胶海绵吸附金葡液组。于接受相应治疗后的第6周和12周每组随机各取5只实验动物处死,做髋关节X线检查、大体观察、组织学观察和血管内皮生长因子（VEGF）免疫组织化学检测。结果治疗6周和12周后,空骨陷窝阳性率和VEGF阳性表达各组组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论金葡液能有效促进兔早期激素性股骨头缺血性坏死的修复,用明胶海绵作为载体吸附金葡液后植入减压孔道,能够加快股骨头坏死的修复。     

烙灸对激素性股骨头坏死骨细胞凋亡与Bcl-2、Caspase-3表达影响的实验研究

目的:观察回医烙灸对激素性股骨头坏死家兔模型细胞凋亡及Bcl-2、Caspase-3表达的影响。方法:24只健康清洁级家兔随机分为烙灸组、模型组和空白组,每组各8只。糖皮质激素制造激素性股骨头坏死模型,4 w后取股骨头行组织形态学观察,TUNEL、免疫组化技术检测Bcl-2、Caspase-3。结果:烙灸能改善兔股骨组织形态学,凋亡指数低于模型组,Bcl-2表达相对增加、caspase-3表达相对减少(P0.05)。结论:烙灸能延缓兔激素性股骨头坏死骨细胞凋亡。     

富血小板血浆诱导骨髓基质干细胞联合软骨支架治疗兔激素性股骨头坏死

目的 观察自体富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)诱导骨髓基质干细胞联合同种骨软骨支架治疗早期兔激素性股骨头坏死的疗效,探索早期股骨头坏死治疗的新方法.方法 采用含有抗凝剂的真空采血管从实验兔的耳中央动脉采取动脉血5 mL,再通过离心方法获取PRP,用16号骨髓穿刺针从实验兔自体股骨髓腔抽取骨髓5 mL,把抽取的骨髓进行密度梯度离心,获取兔骨髓基质干细胞,并进行细胞原代培养和成骨诱导.对已获取PRP和骨髓基质干细胞的实验兔进行激素性股骨头坏死造模,取同种股骨髁部骨软骨制作软骨支架,最后以制备的软骨支架为载体,将经过成骨诱导的骨髓基质干细胞移植到软骨支架上,形成细胞-支架复合物,用16号骨髓穿刺针对坏死的股骨头进行髓芯减压术,术中将细胞-支架复合物植入坏死的股骨头下.实验动物共分为4组,每组20只,A组为空白对照;B组仅进行髓芯减压;C组髓芯减压后植入经过成骨诱导培养的细胞;D组髓芯减压后植入细胞-支架复合物.实验后在第2、4、8周各组分别处死6、6、8只,每只实验兔的股骨头行大体标本及组织学检查.结果 D组治疗效果最显著,通过空骨陷窝计数发现D组与其他各组的差异有统计学意义(P<0.05).结论 骨髓基质干细胞通过PRP的诱导向成骨细胞分化;软骨支架材料为骨髓基质干细胞向成骨细胞分化提供良好的空间结构,有利于其向成骨细胞分化;PRP和软骨支架材料联合应用可促进早期兔激素性股骨头坏死的修复.     

淫羊藿配合髓芯减压术治疗兔激素性股骨头坏死的实验研究

目的 观察淫羊藿配合髓芯减压术对兔激素性股骨头坏死的治疗效果并探讨其作用机制.方法 用改进的马血清加甲基泼尼松龙的方法诱导制备兔激素性股骨头坏死动物模型.将动物分为正常对照组、模型组、手术组（髓芯减压术）、中药组（淫羊藿）、综合组（髓芯减压术＋淫羊藿）.治疗后对各组股骨头的骨密度、病理组织学、IGF1、BMP2 mRNA和蛋白的表达进行检测.结果 与对照组相比,模型组骨密度明显下降,中药组、手术组、综合组均有所改善,综合组改善效果最好.HE染色综合组骨小梁饱满,排列规则整齐,骨细胞基本正常,造血细胞丰富,脂肪细胞较少.IGF1mRNA和蛋白水平,模型组高于对照组.BMP-2 mRNA和蛋白水平,模型组较对照组明显下降.IGF1、BMP-2 mRNA和蛋白的表达,中药组与综合组,手术组与模型组相比均无明显差异;而在中药组和综合组的表达显著高于模型组和手术组,且IGF1与BMP-2 mRNA及蛋白在股骨头的表达呈明显正相关.结论 淫羊藿可上调成骨相关蛋白IGF1和BMP-2的表达,其与髓芯减压术相结合可有效促进兔激素性股骨头坏死的损伤修复.     

血管内皮细胞生长因子体外修饰骨髓基质干细胞关节镜下回植治疗兔股骨头坏死的研究

目的 检测rAAV-2-hVEGF-165转染骨髓基质干细胞后的基因表达,研究髓芯减压关节镜监视下hVEGF基因转染骨髓基质干细胞在治疗股骨头缺血性坏死中的作用及价值.方法 制备rAAV-2-hVEGF-165,将病毒以感染被率(MOI)为1×10~5v.g./cell转染兔骨髓基质干细胞,应用腺相关病毒介导绿荧光蛋白转染兔骨髓基质干细胞检测转染情况.应用RT-PCR和免疫印迹检测转染BMSCs外源hVEGF基因的转录与表达,得出最佳的转染时间.关节镜监视并对坏死骨清除后植入骨髓基质干细胞,术后2、4、8周分别对各组兔股骨头行X线分析,生物力学分析,切片血管计数并行免疫组化检查,观察疗效.结果 rAAV-2-hVEGF-165转染的兔骨髓基质干细胞可有效表达hVEGF-165,RT-PCR和免疫印迹检测可见转染MSCs中外源hVEGF基因的转录与表达.转染后48 h即可有表达,10 d时表达最强.免疫组化检测发现植入转染的骨髓基质干细胞2周后出现阳性表达,8周后强阳性表达.生物力学分析显示植入转染细胞组股骨头强度接近正常股骨头.结论 hVEGF-165基因转染的兔骨髓基质干细胞可有效表达具有生物活性的hVEGF-165蛋白.通过关节镜监视可以彻底清除死骨,使hVEGF-165基因修饰的骨髓基质干细胞准确的回植入股骨头坏死处,可使股骨头缺血性坏死的修复加强.回植入兔股骨头的hVEGF-165基因可有效表达.     

基因修饰的成骨细胞经髓芯减压移植治疗早期股骨头缺血性坏死的实验观察

目的 评价重组人肝细胞生长因子(hHGF)基因修饰的成骨细胞经髓芯减压移植促进早期股骨头缺血坏死的血管新生及局部骨修复的效果.方法 二步酶消化法和差速贴壁法分离培养胎兔成骨细胞,利用脂质体介导hHGF基因转染成骨细胞,然后通过髓芯减压移植于兔缺血坏死的股骨头内,同时设置单纯细胞移植组和髓芯减压组,于术后第2、4、8周通过CT、组织学和微血管墨汁灌注等观察血管形成及成骨情况.结果 分离培养的胎兔成骨细胞经Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶鉴定纯度较高.hHGF基因转染成骨细胞体外及体内检测均有hHGF蛋白的表达.通过髓芯减压移植细胞8周后转基因组和单纯成骨细胞组的新生骨小梁与单纯髓芯减压组比较有差异性,而术后2、4周转基因组的新生血管数(29.5±1.6)和(34.0±1.7)较对照组(20.6±1.9)和(25.6±2.2)差异有统计学意义(P＜0.01).结论 转染hHGF基因的成骨细胞移植于缺血坏死的股骨头后,早期可促进血管新生,并增加骨形成,显著促进坏死骨修复.     

髓芯减压联合应用胰岛素样生长因子I治疗激素性股骨头坏死

目的　研究胰岛素样生长因子 (IGF I)在促进股骨头无菌性坏死自我修复中的生物学效应。方法　中国家兔 4 8只 ,分两次间隔 3周耳缘静脉注入马血清 (10ml/kg)。 2周后 ,泼尼松龙连续 3d腹腔内注射 ,建立股骨头无菌性坏死的动物模型。注射激素 2周后 ,行99mTc核素骨扫描 ,选择双侧股骨头血流量减少的动物 2 8只为下一步实验对象。动物随机分为 2组 ,每组 14只。对照组为单纯髓芯减压组 ,实验组为髓芯减压联合应用IGF I组。结果　实验组与对照组相比术后 1周 ,术后 2周骨钙素含量有显著性差异 ,术后 2周股骨头血流量有显著性差异。结论　IGF -I可有效促进成骨细胞转化 ,增加病变股骨头内血流量 ,促进了早期股骨头坏死的自我修复     

早期激素性股骨头坏死骨细胞凋亡与bcl-2和p53表达的实验研究

目的 探讨细胞凋亡及其调控基因在早期激素性股骨头坏死中发挥的作用.方法 健康兔30只,将实验动物随机分为实验组15只,对照组15只.模型成功后,进行组织形态学、骨细胞凋亡、免疫组织化学染色检测.结果 光镜下实验组较对照组骨小梁变细、稀疏,细胞核变形,骨细胞少见,空骨陷窝明显增多.实验组凋亡细胞明显多于对照组,bcl-2阳性细胞比率低于对照组,p53阳性细胞比率高于对照组.结论 早期激素性股骨头坏死是骨细胞坏死和骨细胞凋亡共同作用的结果,大剂量激素抑制了bcl-2蛋白的表达,促进了p53蛋白的表达,bcl-2与p53共同调控骨细胞的凋亡.     

联合用药预防激素性股骨头坏死对骨细胞凋亡和Bcl-2表达的影响

目的观察联合用药预防激素性股骨头骨细胞凋亡的可能性。方法30只兔随机分成三组：对照组同期肌注生理盐水;激素组是给予糖皮质激素肌注;治疗组在给予同剂量糖皮质激素同时,每日使用血塞通、脂必妥和阿仑膦酸钠;用末端原位标识（TUNEL）法及免疫组化技术分别检测骨细胞凋亡和bcl-2表达情况,电镜观察股骨头组织学变化。结果电镜下激素组骨细胞核体积缩小,染色质边聚和浓密多见于对照组和治疗组;激素组凋亡细胞比率显著高于治疗组,而其Bcl-2表达则较治疗组低。结论联合应用血塞通、脂必妥和阿仑膦酸钠能抑制兔激素性股骨头细胞凋亡。     

富白细胞和血小板纤维蛋白凝胶对BMSCs在兔股骨头缺血性坏死中成骨作用的影响

目的 观察富白细胞和血小板纤维蛋白凝胶(L-PRF)联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)在兔股骨头缺血性坏死(ANFH)试验中对成骨作用的影响.方法 48只新西兰白兔随机分为A、B、C、D 4组(各组12只),均造双侧ANFH模型.后给予ANFH修复方法:A组单纯行髓芯减压;B组行髓芯减压联合L-PRF凝胶移植;C组行髓芯减压联合BM-SCs移植;D组行髓芯减压联合BMSCs和L-PRF凝胶移植.A、B、C、D组于术后4、8、12周摄X片后,每组随机选取4只行相关组织学检查、新生骨体积分数、新生血管计数、X射线评分.结果 各组股骨头坏死中呈现不同程度的新骨形成.C、D组新骨的体积分数,血管计数及X射线评分较A、B组差异显著,其中D组比其余各组均高,B组强于A组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 L-PRF凝胶在医治兔AN-FH模型中对BMSCs成骨有促进作用,并拟使用L-PRF凝胶和BMSCs兼并髓芯减压治疗ANFH提供理论指导.     

干细胞体外培养关节镜下髓芯减压回植治疗早期股骨头坏死的实验研究

目的 研究髓芯减压关节镜监视下骨髓间充质干细胞在治疗股骨头缺血性坏死中的作用及价值.方法 建立兔右侧股骨头缺血件坏死模型,并分为3组,A组为空白骨坏死对照组,B组为单纯髓芯减压组,C组髓芯减压并植入骨髓间充质干细胞组.关节镜监视并对坏死骨清除后植入骨髓间允质干细胞,术后4周和8周对股骨头行组织学检查.结果 组织形态学检测发现术后4、8周C组术后各时相点血管数量及修复区新骨面积比显著高于两个对照组,差异有统计学意义(F=20.32、16.97,81.32、67.32;均P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞的成骨作用较强,可使股骨头缺血性坏死的修复加强,对股骨头缺血性坏死的治疗意义较大.     

VEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔激素性股骨头坏死的实验研究

目的以hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞移植治疗兔激素性股骨头坏死模型,通过影像学观察、病理学及免疫组织化学检查等方法评价疗效。方法使用马血清与醋酸泼尼松龙制备兔激素性股骨头缺血性坏死动物模型后分为4组,分别进行以下治疗：A组（不作任何处理）;B组（髓心减压＋自体骨移植）;C组（髓心减压＋骨髓间充质干细胞＋自体骨移植）;D组（髓心减压＋Ad-VEGF165转染骨髓间充质干细胞＋白体骨移植）。术后3周处死行病理学、免疫组织化学检查及Western Blot检测股骨头内VEGF的表达,比较各组间的差异。结果D组在软骨下血管、VEGF阳性面积百分比、股骨头内VEGF的相对浓度均高于其他各组;在VEGF平均灰度值、空骨陷窝率低于其他各组,且各组间差异有统计学意义。结论转染了Ad—VEGF165的骨髓间充质干细胞在宿主股骨头局部可以表达VEGF蛋白,且较单纯的骨髓间充质干细胞移植表达的强度更高,对激素性股骨头坏死进行早期治疗具有确切疗效。     

骨髓基质干细胞复合同种骨移植治疗创伤性股骨头坏死实验研究

目的探讨骨艇基质干细胞复合同种骨移植在治疗创伤性股骨头坏死中的成骨作用。方法6月龄SD大鼠36只,随机分为模型组、髓芯减压组及复合骨组。每组12只。取4周龄SD大鼠骨髓基质干细胞体外分离培养,取生长状态良好的第三代细胞复合同种骨粉;采用圆韧带离断方法制备大鼠创伤性股骨头坏死动物模型;于术后1、2、4、6周分别处死动物;光镜下观察三组间病理形态学改变;骨形态计量学参数测量及计算新骨生成量,得出骨小梁相对体积（BV／TV）、骨小梁厚度（Tb．Th）、骨小梁数量（Tb．N）、骨小梁分离度（Tb．Sp）。结果成功的复制出大鼠股骨头坏死模型,呈现出典型股骨头坏死不同时期病理改变;术后6周,骨形态计量学参数检测结果：复合骨组新骨生成量均多于模型组及髓芯减压组,其参数BV／TV、Tb．N、Tb．Th、Tb．Sp与其他二组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论BMSCs复合同种骨支架可作为“活骨”用于ONFH模型治疗并在其修复中可提高诱导成骨能力及股骨头坏死的骨修复能力,其作用优于单纯髓芯减压。     

骨髓间充质干细胞治疗早期股骨头坏死的实验研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)治疗早期股骨头坏死的疗效及机制. 方法:60只新西兰大白兔造模后选取其中确诊为股骨头坏死的36只,随机分为3组:对照组:不予以任何处理;单纯减压组和减压+MSC移植组.术后4周及8周各组随机挑选6只兔先行MRI扫描,之后处死动物取股骨头行常规H-E染色及CD34免疫组化染色,用扫描电镜观察超微结构. 结果:术后第8周,减压+MSC移植组MRI示低信号区明显缩小,组织病理学及扫描电镜表现空骨陷窝减少,成骨细胞多,新骨形成,空骨陷窝阳性数和微血管密度与单纯减压组和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论:MSC移植能促进兔股骨头坏死的修复.     

高压氧治疗激素性股骨头坏死的血液流变学改变与意义

目的:观察血液流变学在激素性股骨头坏死造模及高压氧治疗过程中的阶段性变化,探讨激素性股骨头坏死的发病机理。方法:健康日本成年大耳白兔60只,随机分模型组(42只)及对照组(18只)。模型组每周2次肌肉注射醋酸泼尼松龙10 mg/kg,对照组每周2次肌肉注射生理盐水2 ml,共6周。随后将模型组随机分高压氧治疗组(16只)及对照组(16只),治疗组行高压氧治疗,对照组呼吸常压新鲜空气。检测实验后2,4,6,8,10,12周兔血液流变学参数变化、组织病理学变化及影像学变化。结果:模型组实验2,4,6周全血黏度,血浆黏度均显著高于对照组;模型组股骨头骨质疏松,光镜下空骨陷窝数增多,脂肪细胞数增多,部分骨小梁断裂,透射电镜股骨头骨细胞体积缩小,核固缩,较多骨细胞已坏死溶解成碎片。高压氧治疗组全血粘度,血浆黏度均低于对照组,光镜下可发现坏死的骨细胞有修复现象,透射电镜可见新生骨细胞。结论:大剂量激素可造成兔血流变学特性恶化,可能是兔股骨头坏死的重要原因,高压氧可使恶化的血液流变学趋向好转,对股骨头坏死有治疗作用。     

Experimental Study on Gufusheng in Treatment of Steroid-Induced Ischemic Necrosis of Femoral Head in Rabbits

Objective： To explore.the mechanisim of compound Gufusheng in treatment of steroid-induced ischemic necrosis of femoral head （SINFH）. Thirty-two rabbits were randomly divided into a blank control group （n=12） and a model group （n=20）. The rabbits of the model group were established by intramuscular injection of prednisone acetate （0.32mg/kg/d） for 8 weeks, and 2 rabbits in each group were killed at the 6th and the 8th week respectively to investigate whether the model was successfully prepared. Then remainder in the model group was again randomly divided into group A （Gufusheng group, n=8） and group B （model group, n=8）, while the rest of rabbits in the blank group constituted group C （n=8）. The rabbits in group A were given Gufusheng Decoction （骨复生煎液） by intragastric perfusion, and the rabbits in group B and C were fed with normal saline. After treatment for 4 weeks, the serum insulin-like growth factor-1 （IGF-1） and tumor necrosis factor-~ （TNF-α） levels in the rabbits of the 3 groups were determined by radioimmunoassay （RIA）. The serum TNF-α decreased significantly and the IGF-1 level increased significantly in the Gufusheng group as compared with the model group （both P〈0.01）. Compound Gufusheng can prevent SINFH and promote repair of the tissue of necrosis of femoral head possibly via decreasing the TNF-α and increasing IGF-1 level.