定量PCR法测定人精子中DAZ基因的相对含量

目的 :建立测定人精子中DAZ基因相对含量的定量PCR法。　方法 :应用定量PCR法测定了 90例精子发生正常男性精子DNA中DAZ基因的相对含量 ,并确定其正常值范围。　结果 :以ZFX/ZFY基因为外部参照 ,精子发生正常男性精子DNA中DAZ基因的相对含量正常值为 1 47± 0 2 93。重复性试验结果表明其批内变异系数分别为 5 8%、6 5 % ,批间变异系数分别为 9 5 %、10 8%。　结论 :定量PCR法测定人精子中DAZ基因的相对含量是一种切实可行的检测方法。     

Y染色体微缺失与无精子症少精子症关系的研究

目的 探讨Y染色体微缺失与无精子症、少精子症的关系.方法 应用多重聚合酶链反应技术(PCR)对127例无精子症(80例)和严重少精子症(47例)的不育患者及60例正常生育男性进行Y染色体AZF基因、DAZ外显子检测.结果 无精子和严重少精子患者Y染色体微缺失7例,缺失率5.51%.其中AZFc缺失2例,DAZ外显子缺失5例.少精子症组缺失率8.51%,无精子症组缺失率3.75%,小睾丸组的缺失率6.54%,正常睾丸组缺失率4.94%,正常生育男性AZF基因和DAZ外显子均未检测到缺失.结论 (1)AZF因子、DAZ外显子微缺失可导致无精子症、严重少精子症:(2)绝大部分无精子、严重少精子患者Y染色体AZF因子、DAZ外显子并没有微缺失,有必要再去寻找新的精子发生基因.     

无精子症和严重少精子症患者AZF/DAZ基因微缺失的分子生物学检测

目的　用分子生物学方法检测无精子症和严重少精子症患者无精子基因 (AZF)AZF/DAZ基因微缺失。　方法　应用聚合酶链反应 (PCR)技术对无精子症 4 7例、严重少精子症 4例进行Y染色体AZFa、AZFb、AZFc/DAZ、SRY的微缺失检测。　结果　 5 1例患者缺失率为 35 .3% (18/ 5 1) ,其中AZFa、AZFb、AZFc的微缺失分别为 4例 (7.8% )、5例 (9.8% )和 4例 (7.8% )。无精子症患者 1例 (1.9% )为AZFa、AZFb的双重缺失 ,2例 (3.9% )为AZFb、AZFc的双重缺失 ;2例 (3.9% )为AZFa、AZFb和AZFc的三重缺失 ;5 1例SRY基因PCR扩增均为阳性。 5例已有生育的正常男性均无AZFa、AZFb、AZFc、SRY的微缺失。　结论　AZF/DAZ(包括AZFa、AZFb、AZFc/DAZ)基因的微缺失是引起无精子和严重少精子导致男性不育的重要原因之一。AZF/DAZ基因微缺失的分子生物学检测对不明原因的不育男性行胞浆内单精子注射 (ICSI)时有指导意义。     

特发性无精子症和严重少精子症患者Y染色体基因微缺失分析

目的：研究Y染色体基因微缺失与特发性无精子症和严重少精子症的关系，并建立一个灵敏、操作简便的分子检测方法。方法：应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对65例特发性无精子症患者、27例严重少精子症患者进行Y染色体YRRM1、DAZ、DYS1基因微缺失的检测。结果：65例特发性无精子症患者中，3例发生YRRM1基因微缺失，发生率为4．6％；5例发生DAZ基因微缺失，发生率为7．7％。27例严重少精子症患者中，1例发生YRRM1基因微缺失，发生率为3．7％；2例发生DAZ基因微缺失，发生率为7．4％。92例患者中均未发现DYS1基因微缺失。结论：YRRM1和DAZ基因位点的微缺失与特发性无精子症和严重少精子症有一定的相关性，DYS1基因缺失与男性生精障碍的相关性仍需进一步研究明确。应用荧光定量PCR法检测Y染色体微缺失具有灵敏、快速、操作简便的特点。     

特发性不育患者外周血和睾丸组织中无精子因子基因表达的比较研究

目的 探讨男性特发性不育患者外周血和睾丸组织中无精子因子(AZF)基因表达的临床意义.方法 特发性不育患者62例,其中严重少精子症29例.无精子症33例.抽取患者外周血样本检测,8对引物为sY84和sY86(AZFa区).sY127和sY134(AZFb区),sY254和sY255(AZFc区)及内对照SRY(sY14)和ZFY.PCR检测包括MixA:SRY(sY14)-ZFY-sY84-sY134-sY255和MixB:SRY(sY14)-ZFY-sY86-sY127-sY254;穿刺获得患者睾丸标本,Trizol方法提取总RNA,反转录为cDNA.PCR检测包括SRY(sY14)-DFFRY-RBM-DAZ-β-actin.结果 外周血PCR结果显示:62例患者中AZF基因微缺失12例(19.4%),其中无精子症组9例,严重少精子症组3例.睾丸组织RT-PCR结果显示:62例均可见SRY阳性表达;RBM mRNA无表达2例,RBM和DAZ mRNA无表达1例,DAZ mRNA无表达12例,其中3例外周血细胞内DAZ基因正常.结论 特发性不育患者睾丸组织存在AZF基因表达缺失,睾丸组织RT-PCR检测有助于确定患者病因,结合外周血PCR检测有助于指导睾丸精子穿刺一胞浆内单精子注射治疗.     

中国男性不育的重要遗传病因:染色体异常与Y染色体AZFc区DAZ基因拷贝缺失

目的:探讨染色体的结构与数目异常,以及位于Y染色体无精子症因子C区(azoospermiafactorC,AZFc)中无精子症缺失基因家族(deleted-in-azoospermia,DAZ)基因拷贝缺失与男性不育的关系。方法:运用染色体G显带、多重PCR与PCR-RFLP检测技术,对210例已生育男性、247例无精子症与206例严重少精子症患者Y染色体AZF区结构进行分析,并对453例患者进行外周血染色体检查。结果:在无精子症与严重少精子症患者中染色体数目与结构异常发生率分别为12.6%与8.3%。所有已生育男性中未检出DAZ基因全部或部分拷贝缺失,而在无精子症与严重少精子症患者中4个DAZ基因拷贝缺失率分别为7.7%和11.2%,DAZ1/DAZ2共缺失率分别为7.3%和4.9%。结论:在中国男性无精子症与严重少精子症患者中存在较高频率的染色体结构/数目异常与DAZ基因拷贝缺失现象,提示染色体结构/数目异常与Y染色体AZFc区DAZ基因拷贝缺失可能是中国男性不育的重要遗传病因。     

DAZ及DAZH基因与精子发生的相关性分析

ＤＡＺ基因（ｄｅｌｅｔｅｄｉｎａｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ）是无精子因子（ＡＺＦ）的重要候选成分，它的缺失可致无精子或严重少精子症。人第３号染色体上存在着ＤＡＺ的同源基因ＤＡＺＨ（ＤＡＺｈｏｍｏｌｏｇｕｅ），为探讨ＤＡＺ和ＤＡＺＨ基因在精子发生中的作用，我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了６６名正常生育男性和９０例原发性不育男性基因组ＤＮＡ的ＤＡＺ、ＤＡＺＨ基因。结果：原发性不育男性中１２例ＤＡＺ缺失（无精子症８例，严重少精子症４例）；正常男性ＤＡＺ无一缺失；在正常男性和不育男性中均有ＤＡＺＨ缺失。结果进一步证实ＤＡＺ为ＡＺＦ的候选成分，而ＤＡＺＨ基因与精子发生似无直接的相关性。     

多重聚合酶链反应技术检测严重少精及无精子症患者无精子因子的研究

遗传缺陷引起男性精子发生障碍是男性无精子症、严重少精子症的原因之一。业已证明 ,位于 Y染色体长臂的无精子因子 (azoospermiafactor,AZF)的基因缺失或突变引起精子发生异常 ,为调控精子发生的候选基因之一。本研究采用多重聚合酶链反应技术检测 5 0名正常男性及 36例严重少精及无精子症患者 AZF因子。一、材料与方法1 .对象 :5 0名正常生育男性 ,36例不明原因的严重少精、无精子症患者 (按照 WHO的标准 )。所有患者染色体核型分析正常 ,并排除克氏征及其他因素引起的无精、少精症 ,以及先天性输精管缺如、炎症性输精管梗阻及病毒性…     

谷胱甘肽S-转移酶基因遗传多态性与特发性男性不育症相关性研究

目的该研究旨在探讨谷胱甘肽S-转移酶基因(GST)M1、T1及P1基因多态性与特发性男性不育症的相关性。方法该病例-对照研究包括246例特发性少弱精子症男性不育患者及117例正常健康有生育史男性对照。采用聚合酶链反应(PCR)、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分别对GSTM1、GSTT1和GSTP1基因进行分型。结果 GSTM1基因缺失型在正常对照组和特发性少弱精子症不育患者组基因型频率分别为41.88%和60.57%,具有显著差异(P=0.001);GST T1基因缺失型在正常对照组和特发性少弱精子症不育患者组基因型频率分别为47.86%和62.60%,具有显著差异(P=0.008);GSTM1/T1基因缺失型在正常对照组和特发性少弱精子症不育患者组基因型频率分别为14.53%和38.62%,具有显著差异(P0.001);GSTP1基因突变型在正常对照组和特发性少弱精子症不育患者组基因型频率分别为27.35%和32.11%,无明显差异(P=0.847)。结论GSTM1、GSTT1基因缺失型分别是特发性男性不育症的危险因素。GSTP1基因突变型与特发性男性不育症患者无明显相关性。     

129例原发性男性不育患者的细胞遗传学分析

目前,育龄夫妇中约15%患有不育,其中近50%由男方因素造成.男性生殖是在中枢神经系统、下丘脑-垂体-睾丸性轴系的内分泌激素调节下,通过精子发生、精子成熟、精子运输、精子获能和精子顶体反应等一系列生理活动完成.精子发生受到诸多有序表达的基因控制,染色体结构、数目的畸变可影响这些基因的功能,进而影响精子发生[1].对原发性男性不育患者进行细胞遗传学分析,可明确不育病因,并为运用辅助生殖技术治疗男性不育提供遗传学依据.     

解脲支原体感染与男性不育

用高度纯化的人解脲支原体免疫家兔,获得兔抗人解脲支原体抗血清,以此抗血清(一抗)及羊抗兔 IgG 荧光抗体(二抗),分别处理20例正常生育男性和20例精液解脲支原体培养阳性的不明原因不育男性的精子,并在荧光显微镜下观察。结果显示:在不育男性部分精子的头部和(或)尾部有特异性的较强荧光结合,表明有解脲支原体吸附,并有大量畸形精子,多数为卷尾畸形。此外,用比浊法检测了正常生育男性与上述不育男性精液中快速运动相精子的百分含量(FRM)及平均速度(VRM)。不育男性组比生育组的 FRM 及 VRM 都显著降低(分别为 P<0.01和 P<0.001)。本研究首次用特异性方法证实解脲支原体吸附于不育男性精子表面,提示解脲支原体感染可能通过影响精子的形态、精子的运动和精卵识别过程而导致男性不育。     

男性生育力的研究：三种精子功能测定方法的比较

应用精液常规分析(SFA),精子尾部低渗肿胀试验(HOS)和去透明带地鼠卵穿透试验(HOP)对15名能宵男性和15名不育患者的精液样本进行了综合检测和相关分析。能育组SFA参数异常者占20％,不育组SFA参数正常者占27％;精子尾部低渗肿胀率在能育组与不育组间无显著性差异(P>0.05);精子穿透率和受精指数在两组间差异非常显著(P<0.005,P<0.001)这表明HOP试验用于男性生育力的评价是一种较为准确,可靠的手段。本文还对各实验参数间的相关关系进行了分析和讨论。     

Association of DAZ1/DAZ2 deletion with spermatogenic impairment and male infertility in the South Chinese population

Purpose

To investigate the effect of the deleted in azoospermia (DAZ) copy cluster deletion on spermatogenesis in the South Chinese population.

Methods

In this study, the prevalence and characteristics of different DAZ copy cluster deletions and their association with spermatogenic failure were analyzed. A total of 186 infertile men with different spermatogenic impairments and 190 normozoospermic fertile men were studied. Three DAZ-specific single nucleotide variant loci and seven AZFc-specific sequence-tagged sites were examined using polymerase chain reaction (PCR)–restriction fragment length polymorphism and routine PCR.

Results

Gr/gr deletions were observed in a total of 9 of the 190 normozoospermic fertile men, and 11 gr/gr deletions were found in 186 infertile men. In addition, 3 b2/b3 deletions were identified in the infertile, but not in the fertile men. DAZ-SNV loci analysis revealed 4 DAZ copies that had 8 gr/gr-DAZ3/DAZ4 deletions and 1 gr/gr-DAZ1/DAZ2 deletion in the fertile men (8/190 vs. 1/190, p = 0.037). Analysis of DAZ deletion copies in infertile men revealed 10 gr/gr-DAZ1/DAZ2 deletions, 1 gr/gr-DAZ3/DAZ4 deletion (10/186 vs. 1/186, p = 0.011) and 3 b2/b3-DAZ1/DAZ2 deletions (13/186 vs. 1/186, p = 0.002).

Conclusions

Analysis of DAZ gene copies in AZFc microdeletions suggests that the contribution of the different deletions to male infertility varies. Removing DAZ1/DAZ2 seems to be associated with spermatogenic impairment, whereas removing DAZ3/DAZ4 seems to have little or no effect on fertility in the South Chinese population.     

溶脲脲原体引起男性不育的机理研究——Ⅱ.对精子运动的影响

本研究观察了正常生育男性与精液溶脲脲原体培养阳性的不育男性的精子运动。用比浊法比较了两组男性精液中快速运动精子的百分率与其平均速度。此外,用血清型4溶脲脲原体人工感染正常生育男性的精子。结果表明,不育男性快速运动精子的百分率与平均速度均显著低于正常生育男性;而正常生育男性的精子受血清型4溶脲脲原体感染后,精子的活率及活力的下降。提示溶脲脲原体(血清型4)对人精子的运动具有抑制作用,可能是造成男性不育的一个因素。     

不同浓度低渗肿胀试验结合伊红染色对精子质量的评估

本文应用不同浓度精子低渗肿胀试验结合伊红染色法，对８例生育男性和１０例不育男性的精子膜功能进行评估。结果表明：１．活精子尾部低渗肿胀率均达到９０％以上，生育组与不育组无显著性差异；２．在１５０ｍＯｓｍ低渗溶液的稀释倍数为３～７倍之间，精子头部膜的损害程度在生育组与不育组之间存在显著性差异；３．在不同浓度的低渗溶液中，精子头部膜与精子尾部膜对低渗溶液的顺应性并不一致。实验证明不同浓度低渗肿胀试验结合伊红染色可正确评价精子膜的整体功能。     

男性不育症患者DAZ基因缺失研究

为探讨ＤＡＺ基因在男性生精过程中的作用及ＤＡＺ基因与男性不育症的关系。本文应用多重聚合酶链反应对男性不育症患者ＤＡＺ基因进行检测。并结合临床表型进行分析。结果在正常有生育力的男性、精子数正常不育男性、已知原因无精子少精子症患者中皆无ＤＡＺ基因缺失;在特发性无精子症患者中检测出ＤＡＺ缺失,缺失比例高达１５％（５／３４）,其中无精子症１７％（３／１８）,少精子症１３％（２／１６）。提示ＤＡＺ基因在生精过程中起重要作用,ＤＡＺ基因缺失是导致特发性无精子少精子症的原因之一。     

Relationship between sperm telomere length and sperm quality in infertile men

Telomeres, noncoding and repetitive DNA sequences play a significant function in chromatin integrity. Telomere length is age-dependent in somatic cells, while it increases in sperm cell with age. Therefore, we aimed to assess sperm chromatin, leucocyte and sperm telomere length (LTL, STL) in spermatozoon of 38 infertile and 19 fertile men aged between 20 and 50 years. Protamine deficiency (chromomycin A3 test), DNA fragmentation (TUNEL assay), lipid peroxidation (Bodipy probe) and telomere length (quantitative real-time PCR) were assessed. A significant decrease in mean of sperm concentration and motility and a significant increase in means of sperm abnormal morphology, DNA fragmentation, lipid peroxidation and protamine deficiency were observed in infertile compared with fertile men. In addition, the mean of LTL and STL were significantly shorter in infertile men compared with fertile individuals. We observed significant associations between telomere length with sperm concentration, DNA fragmentation and lipid peroxidation. We hypothesised that increased oxidative stress in spermatozoa of infertile men can result in abnormal packaging of chromatin, damage of DNA and shorter sperm telomere length. Together, these anomalies may account for fertility failure in these individuals.     

The presence of human papillomavirus in semen does not affect the integrity of sperm DNA

It remains unknown whether human papillomaviruses (HPVs) in semen affect sperm DNA integrity. We investigated whether the presence of these viruses in semen was associated with an elevated sperm DNA fragmentation index. Semen samples of 22 normozoospermic patients undergoing infertility treatment, nine fertile donors and seven fertile men with a risk of HPV infection (genital warts or condylomas) were included in the study. The samples were examined by an INNO‐LiPA test PCR‐based reverse hybridisation array that identifies 28 types of HPVs as simple or multiple infections. Sperm DNA integrity was determined by sperm chromatin dispersion assay (SCD). Our preliminary findings demonstrate an increase in HPV infection in infertile men with respect to fertile men. However, the sperm DNA fragmentation index was not increased in semen containing these viruses.