男性不育症患者DAZ基因缺失研究

为探讨ＤＡＺ基因在男性生精过程中的作用及ＤＡＺ基因与男性不育症的关系。本文应用多重聚合酶链反应对男性不育症患者ＤＡＺ基因进行检测。并结合临床表型进行分析。结果在正常有生育力的男性、精子数正常不育男性、已知原因无精子少精子症患者中皆无ＤＡＺ基因缺失;在特发性无精子症患者中检测出ＤＡＺ缺失,缺失比例高达１５％（５／３４）,其中无精子症１７％（３／１８）,少精子症１３％（２／１６）。提示ＤＡＺ基因在生精过程中起重要作用,ＤＡＺ基因缺失是导致特发性无精子少精子症的原因之一。     

无精子症和严重少精子症DYS240基因位点的分析

无精子因子的缺乏将导致无精子症和严重少精子症。本研究应用ＰＣＲ方法分析了６５例核型正常的无精子症和２５例核型正常的严重少精子症病人的ＤＹＳ２４０基因位点，结果显示，无精子症病人中６例缺乏ＤＹＳ２４０基因位点，严重少精子症病人中４例缺乏ＤＹＳ２４０基因位点，提示ＤＹＳ２４０基因是ＡＺＦ的一个重要的候选成分。     

无精子因子

无精子因子 (ａｚｏｏｓｐｅｒｍｉａｆａｃｔｏｒ ,ＡＺＦ)是在 1993年发现的 ,已被确认为精子发生所必需。ＡＺＦ基因位于Ｙ染色体 (Ｙｑ11)上 ,并在睾丸内特异性表达。目前发现ＡＺＦ缺失 (Ｙｑ11微小缺失 )约占原发性无精子症及严重少精子症的 10～ 15 %。在Ｙｑ11的 5～ 6间隔 (ｉｎｔｅｒｖａｌ)中 ,有许多位点与精子发生有关 ,被命名为ＡＺＦａ、ＡＺＦｂ及ＡＺＦｃ[1,2 ] 。一、ＡＺＦｃ在不育症患者中 ,最常见的Ｙｑ11间隔微小缺失是ＡＺＦｃ。现认为ＡＺＦｃ的最佳候选者是ＤＡＺ(ｄｅｌｅｔｅｄｉｎａｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ)基因 …     

无精子症和严重少精子症DYS240基因位点的分析

无精子因子（AZF）的缺失将导致无精子症和严重少精子症。本研究应用PCR方法分析了65倒核型正常的无精子症和25例核型正常的严重少精子症病人的DYS240基因位点。结果显示，无精子症病人中6例缺失DYS240基因位点，严重少精子症病人中4例缺失DYS240基因位点。提示DYS240基因是AZF的一个重要的候选成分。     

Y染色体微缺失与无精子症少精子症关系的研究

目的 探讨Y染色体微缺失与无精子症、少精子症的关系.方法 应用多重聚合酶链反应技术(PCR)对127例无精子症(80例)和严重少精子症(47例)的不育患者及60例正常生育男性进行Y染色体AZF基因、DAZ外显子检测.结果 无精子和严重少精子患者Y染色体微缺失7例,缺失率5.51%.其中AZFc缺失2例,DAZ外显子缺失5例.少精子症组缺失率8.51%,无精子症组缺失率3.75%,小睾丸组的缺失率6.54%,正常睾丸组缺失率4.94%,正常生育男性AZF基因和DAZ外显子均未检测到缺失.结论 (1)AZF因子、DAZ外显子微缺失可导致无精子症、严重少精子症:(2)绝大部分无精子、严重少精子患者Y染色体AZF因子、DAZ外显子并没有微缺失,有必要再去寻找新的精子发生基因.     

不育男性无精子因子微缺失的检测及评估

目的 探讨原发性无精及少弱精症患者与无精子因子(AZF)微缺失的关系。方法 检测未作特定限制的不育男性102例及10例正常男性的AZF基因，同时了解相关男性学病史、查体、精液特征和血清性激素水平。根据精液特征将患者分为无精症61例、严重少精症18例、少精症11例和弱精症12例4组；根据是否合并其他男科疾病，将其中79例无精或严重少精症患者分为原发性无精或严重少精症和非原发性无精或严重少精症者2组。分别比较各组AZF基因缺失率。结果 102例不育男性中检测出AZF基因缺失8例，其中无精症6例，严重少精症2例；原发性无精或严重少精症者6例，非原发性无精或严重少精症者2例。其余少精、弱精及正常对照等各组均未见AZF缺失。结论 AZF基因缺失检出率与患者分组有关；原发性无精或严重少精症患者是AZF基因异常的高危人群。     

多重聚合酶链反应技术检测严重少精及无精子症患者无精子因子的研究

遗传缺陷引起男性精子发生障碍是男性无精子症、严重少精子症的原因之一。业已证明 ,位于 Y染色体长臂的无精子因子 (azoospermiafactor,AZF)的基因缺失或突变引起精子发生异常 ,为调控精子发生的候选基因之一。本研究采用多重聚合酶链反应技术检测 5 0名正常男性及 36例严重少精及无精子症患者 AZF因子。一、材料与方法1 .对象 :5 0名正常生育男性 ,36例不明原因的严重少精、无精子症患者 (按照 WHO的标准 )。所有患者染色体核型分析正常 ,并排除克氏征及其他因素引起的无精、少精症 ,以及先天性输精管缺如、炎症性输精管梗阻及病毒性…     

Y染色体上热休克转录因子在无、少精子症患者精液、睾丸中的缺失研究

目的 通过检测无、少精子症不育患者睾丸、精液基因组HSFY基因缺失情况,探讨其病因的基因诊断方法.方法 选择35例特发性无、少精子症患者作为研究对象,其中少精子症18例、严重少精子症12例、无精子症5例;10例正常已生育健康男性作为正常对照.应用PCR技术,检测每例患者睾丸、精液中精子基因组中的Y染色体上特异性序列标签位点(STS)的引物扩增了解基因缺失情况.结果 35例患者中5例表现睾丸、精液中精子基因组微缺失,其中少精子症2例,严重少精子症3例;其余30例患者和10例正常对照睾丸、精液中精子基因组未见基因微缺失.结论 AZFb区热休克转录因子基因的部分缺失将会使精子数量明显减少.     

定量聚合酶链反应法对不育患者精子中DAZ基因缺失的诊断

目的 :建立测定人精子 DAZ基因相对含量的定量聚合酶链反应 ( PCR)法并应用于检测不育男性精子中 DAZ基因的相对含量 ,以分析其病因。方法 :应用定量聚合酶链反应 ( PCR)法测定了 90例精子发生正常男性和 50例少、弱、畸精子患者精子中 DAZ基因的相对含量。结果 :以 ZFX/ ZFY基因为外部参照 ,精子发生正常男性精子中 DAZ基因的相对含量正常值为 1 .47± 0 .2 93。重复性试验结果表明定量 PCR法批内、批间变异系数分别为 5.8%～ 6.5%、9.5%～ 1 0 .8%。对不育男性的检测结果发现其中 1例少精子症患者 DAZ基因相对含量为 0 .5,明显低于正常值下限 ,其他不育患者未见明显异常。结论 :定量 PCR法测定人精子中 DAZ基因的相对含量是一种切实可行的检测方法 ,部分精子中 DAZ基因的缺失可能为男性不育的病因。     

《亚洲男性学杂志》文摘摘译

无精子因子微缺失与特发性及非特发性隐睾症及精索静脉曲张的关系[ＲｉｍａＤａｄａ ,Ｎ .Ｐ .Ｇｕｐｔａ ,Ｋ .ＫｕｃｈｅｒｉａＡｓｉａｎＪＡｎｄｒｏｌ 2 0 0 2 ;4 :2 5 9- 2 63]　　目的　在特发性及非特发性男性不育症的印度患者中 ,鉴定无精子因子 (ＡＺＦ)的亚微间隙性缺失的位点。方法　 12 2名寡精子症或无精子症不育男性 ,通过精液分析确定精子密度 ,分为正常 (>千万 /毫升 ) ,寡精子症 (<千万 /毫升 )及无精子症三组。他们都经过详细的临床检查、内分泌学及细胞遗传学研究。 12 2例中分析了 30个Ｇ -分带中期 ,并对70例细胞遗传…     

DAZ1/DAZ2 cluster deletion mediated by gr / gr recombination per se may not be sufficient for spermatogenesis impairment： a study of Chinese normozoospermic men

Aim： To explore the possible effect of the deleted in azoospermia （DAZ） copy cluster deletion on spermatogenesis in the Chinese population, the deletion of the azoospermia factor c （AZFc） region was analyzed in 346 normozoospermic men. Methods： Three DAZ single nucleotide variant loci and seven AZFc-specific sequence-tagged sites were examined with polymerase chain reaction （PCR）-restriction fragment length polymorphism and routine PCR. Results： Five （1.4%） of the normozoospermic men were found to have deletion of grlgr-DAZ1/DAZ2. None of the men were found to have b2/b4--entire DAZ deletion. Conclusion： The presence of grlgr-DAZ1/DAZ2 deletion in five men with normozoospermia suggests that this deletion per se may not be sufficient for spermatogenic impairment in Chinese men. （Asian J Androl 2006 Mar; 8： 183-187）     

AZFc微缺失中不同gr/gr缺失亚型对精子发生的影响

目的 研究Y染色体AZFc部分缺失中不同类型gr/gr微缺失对精子发生的影响.方法 实验组选择少弱精子症患者278例,对照组选择符合卫生部标准的汉族合格的已捐精220例健康男性.所有受试者均采取外周血,抽取DNA,选择Y染色体序列标签点(STS),经多重PCR技术检测AZFc微缺失中的gr/gr缺失,对gr/gr缺失患者进一步检测gr/gr-DAZ1/DAZ2缺失和gr/gr-DAZ3/DAZ4缺失类型,对结果进行统计学分析.结果 实验组中278例患者,检测出gr/gr缺失27例,对照组中检测出gr/gr缺失17例,两组比较,差异无统计学意义;27例少弱精子症患者中gr/gr-DAZ1/DAZ2缺失23例,gr/gr-DAZ3/DAZ4缺失4例;正常精液组17例中gr/gr-DAZ1/DAZ2缺失1例,gr/gr-DAZ3/DAZ4缺失16例,两组相比,具有统计学差异(P＜0.05).结论 汉族人群中AZFc微缺失中不同gr/gr缺失亚型在精子发生中所扮演的角色可能不同,gr/gr-DAZ1/DAZ2缺失可能是精子发生障碍的危险因素之一.     

Association of DAZ1/DAZ2 deletion with spermatogenic impairment and male infertility in the South Chinese population

Purpose

To investigate the effect of the deleted in azoospermia (DAZ) copy cluster deletion on spermatogenesis in the South Chinese population.

Methods

In this study, the prevalence and characteristics of different DAZ copy cluster deletions and their association with spermatogenic failure were analyzed. A total of 186 infertile men with different spermatogenic impairments and 190 normozoospermic fertile men were studied. Three DAZ-specific single nucleotide variant loci and seven AZFc-specific sequence-tagged sites were examined using polymerase chain reaction (PCR)–restriction fragment length polymorphism and routine PCR.

Results

Gr/gr deletions were observed in a total of 9 of the 190 normozoospermic fertile men, and 11 gr/gr deletions were found in 186 infertile men. In addition, 3 b2/b3 deletions were identified in the infertile, but not in the fertile men. DAZ-SNV loci analysis revealed 4 DAZ copies that had 8 gr/gr-DAZ3/DAZ4 deletions and 1 gr/gr-DAZ1/DAZ2 deletion in the fertile men (8/190 vs. 1/190, p = 0.037). Analysis of DAZ deletion copies in infertile men revealed 10 gr/gr-DAZ1/DAZ2 deletions, 1 gr/gr-DAZ3/DAZ4 deletion (10/186 vs. 1/186, p = 0.011) and 3 b2/b3-DAZ1/DAZ2 deletions (13/186 vs. 1/186, p = 0.002).

Conclusions

Analysis of DAZ gene copies in AZFc microdeletions suggests that the contribution of the different deletions to male infertility varies. Removing DAZ1/DAZ2 seems to be associated with spermatogenic impairment, whereas removing DAZ3/DAZ4 seems to have little or no effect on fertility in the South Chinese population.     

精子生成障碍患者Y染色体AZFc区部分缺失分析

目的:探讨人类Y染色体无精子症因子C区(AZFc)部分缺失对男性精子生成的影响。方法:选择Y染色体AZFc区9个序列标签位点(STS)sY1258、sY1291、sY254、sY255、sY1201、sY1206、sY1161、sY1197、sY1191,以ZFX/ZFY(X/Y连锁锌指蛋白基因)和SRY(sY14)基因为内对照。对160例Y染色体微缺失筛查均未发现缺失的无精子症及严重少精子症患者,76例正常生育男性DNA进行多重PCR扩增。疑有DAZ基因缺失的个体,采用基因单核苷酸变异分析(single nucleotide variants,SNV)技术,对DAZ基因4个拷贝中的单核苷酸多态位点进行检测,以确定DAZ基因的拷贝缺失类型。结果:160例无精子症及严重少精子症患者(病例组)gr/gr(sY1291)缺失10例,占6.3%;b2/b3(sY1191)缺失14例,占8.8%;新发现sY1291,sY1197缺失1例,占0.6%;b1/b2缺失1例,占0.6%;b1/b3缺失1例,占0.6%。76例正常生育男性(对照组)检出gr/gr缺失4例,占5.3%;b2/b3缺失4例,占5.3%。gr/gr缺失和b1/b3缺失(对照组和病例组)SNV分析均为DAZ1/DAZ2缺失;b2/b3缺失(对照组和病例组)SNV分析均为DAZ3/DAZ4缺失。1例sY1291,sY1197缺失的DAZ-SNVsY587位点缺失,1例b1/b2缺失者DAZ基因未缺失。结论:b2/b3(sY1191)缺失、gr/gr(sY1291)缺失在我国正常人群中多见,为基因组多态性;b1/b2缺失、b1/b3缺失和sY1291,sY1197缺失可能是导致精子生成障碍的高风险因子。     

Screening for AZF deletion in a large series of severely impaired spermatogenesis patients

Recent investigations have pointed to a high prevalence of Y chromosome submicroscopic deletions in men with severely impaired spermatogenesis. We report on the incidence in 128 infertile men, in whom karyotype, sperm count, and hormonal parameters were evaluated. Patients with abnormal karyotype (other than an abnormal Y chromosome) or sperm concentration of more than 2 million/mL were excluded. Genomic DNA was extracted from the peripheral leukocytes of 57 men with azoospermia and 71 with severe oligospermia. Molecular analysis was performed by 3 multiplex polymerase chain reactions using a set of 9 sequence tagged sites (STSs) from 3 different regions of the Y chromosome: AZFa, AZFb, and AZFc. In 7% of the studied patients Yq microdeletions were detected, with a high prevalence in men with azoospermia (14%). No deletions were detected in the AZFa region. Deletions were present in AZFb, AZFc, or both regions. The deletion observed in 1 patient that did not overlap with the DAZ region demonstrates that genes other than DAZ may also be involved in the pathogenesis of some subsets of male infertility. Furthermore, common Yq deletions present different testicular pictures, suggesting that some unknown factors may be disturbing spermatogenesis. Because men with severe infertility suffer a high risk of Y chromosome deletion, screening for these men is recommended prior to treatment with assisted reproduction.     

中国男性不育的重要遗传病因:染色体异常与Y染色体AZFc区DAZ基因拷贝缺失

目的:探讨染色体的结构与数目异常,以及位于Y染色体无精子症因子C区(azoospermiafactorC,AZFc)中无精子症缺失基因家族(deleted-in-azoospermia,DAZ)基因拷贝缺失与男性不育的关系。方法:运用染色体G显带、多重PCR与PCR-RFLP检测技术,对210例已生育男性、247例无精子症与206例严重少精子症患者Y染色体AZF区结构进行分析,并对453例患者进行外周血染色体检查。结果:在无精子症与严重少精子症患者中染色体数目与结构异常发生率分别为12.6%与8.3%。所有已生育男性中未检出DAZ基因全部或部分拷贝缺失,而在无精子症与严重少精子症患者中4个DAZ基因拷贝缺失率分别为7.7%和11.2%,DAZ1/DAZ2共缺失率分别为7.3%和4.9%。结论:在中国男性无精子症与严重少精子症患者中存在较高频率的染色体结构/数目异常与DAZ基因拷贝缺失现象,提示染色体结构/数目异常与Y染色体AZFc区DAZ基因拷贝缺失可能是中国男性不育的重要遗传病因。     

染色体1;12平衡易位与精子发生相关性研究

目的 :对发现的不育伴染色体 1;12平衡易位的孪生兄弟进行研究 ,探讨与精子发生的关系。　方法 :对孪生兄弟进行染色体核型、精液常规、外周血激素测定和睾丸病理分析 ,并进行精子发生相关基因YRRM1、DAZ和DYS2 4 0位点的测定。　结果 :孪生兄弟的染色体核型均为 4 6 ,XY ,t(1;12 ) (q2 4 ;q2 4 ) ;精子密度 <1 0× 10 6/ml;外周血睾酮略低于正常 ,FSH和LH均正常 ;Y染色体长臂上的YRRM1、DAZ和DYS2 4 0基因未见缺失 ;睾丸病理分析显示生精阻滞 ,偶见精子。　结论 :染色体平衡易位t(1;12 ) (q2 4 ;q2 4 )可能是孪生兄弟精子发生障碍的原因 ,在染色体的断裂部位可能存在人精子发生相关基因