白藜芦醇通过抑制SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探究白藜芦醇通过抑制沉默信息调节因子3(Silent Information Regulator 3,SIRT3)/β-连环蛋白(β-catenin)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptorγ,PPARγ)信号通路对急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction, AMI)大鼠心肌细胞凋亡。方法:45只SD大鼠随机分为3组(n=15):假手术组,AMI组和白藜芦醇组。AMI组和白藜芦醇组建立AMI模型。白藜芦醇组大鼠舌静脉注射白藜芦醇干预。检测和比较各组大鼠心肌细胞损伤、凋亡情况并比较SIRT3、β-catenin、PPARγ蛋白水平。结果:AMI组大鼠细胞形状发生改变,排列紊乱,并出现炎性浸润和细胞坏死。白藜芦醇组细胞形态和排列恢复,细胞坏死显著减少。AMI组大鼠血清cTnT、CK-MB、IL-6和TNF-α水平显著高于假手术组(P0.05),白藜芦醇组大鼠血清cTnT、CK-MB、IL-6和TNF-α水平显著低于AMI组(P0.05)。AMI组大鼠心肌细胞凋亡率显著高于假手术组(P0.05),白藜芦醇组大鼠心肌细胞凋亡率显著低于AMI组(P0.05)。AMI组大鼠心肌组织中SIRT3、β-catenin、PPARγ蛋白水平高于假手术组(P0.05),白藜芦醇组大鼠心肌组织中SIRT3、β-catenin、PPARγ蛋白水平显著低于AMI组(P0.05)。结论:白藜芦醇通过抑制SIRT3/β-catenin/PPARγ通路缓解AMI引起的心肌细胞凋亡,并减少炎症反应改善心肌功能。     

壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

电针对肥胖大鼠白色脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α、解耦联蛋白1的影响

目的:研究电针对高脂饮食诱导的肥胖(DIO)大鼠白色脂肪组织(WAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α/解耦联蛋白1(PGC-1α/UCP-1)信号通路的影响,探讨针灸减肥的作用机制。方法:Wistar雄性大鼠随机分为对照组(10只)和造模组(40只),高脂饲料喂养建立营养型肥胖动物模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、穴位组和非穴位组(8只/组)。穴位组取“足三里”“天枢”穴,非穴位组取“足三里”“天枢”穴旁开5 mm区域的非穴位区进行电针,每次30 min,每周5次,共治疗8周。每周测量1次各组大鼠体质量、体长,并计算Lee's指数;采用生化法检测大鼠的血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDIL-C)水平;免疫组化法检测大鼠WAT中PGC-1α、UCP-1蛋白表达。结果:治疗后,与对照组比较,模型组大鼠的Lee's指数、TC、TG水平均显著升高(P0.05),HDL-C水平及PGC-1α、UCP-1蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组和非穴位组比较,穴位组大鼠的Lee's指数、TC、TG水平均显著降低(P0.05),HDL-C水平及PGC-1α、UCP-1蛋白表达显著升高(P0.05)。结论:电针可以有效调控WAT中PGC-1α、UCP-1的表达,这可能是电针通过促进WAT“棕色化”达到减肥效应的机制之一。     

复方地黄方调控GSK3β信号转导通路缓解帕金森病异动症模型大鼠的机制研究

目的:探讨复方地黄方对帕金森病(PD)异动症(LID)模型大鼠GSK3β信号转导通路的影响。方法:采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)偏侧损毁黑质制备PD大鼠模型,在成功制备PD大鼠模型基础上,腹腔注射左旋多巴+苄丝阱制备LID大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组、假手术组、PD组、LID组、复方地黄方组,在治疗4周后取纹状体,应用Real-time PCR和Western blot测定各组大鼠纹状体内GSK3βmRNA、GSK3β蛋白及pGSK3β表达及磷酸化情况。结果:PD组和LID组大鼠纹状体中GSK3βmRNA和GSK3β蛋白相对表达水平较正常对照组、假手术组均显著升高(P0.01),且LID组显著高于PD组(P0.01),复方地黄方干预后其GSK3βmRNA和GSK3β蛋白相对表达水平显著降低(P0.01)。PD组和LID组大鼠纹状体中p-GSK3β(phospho S9)蛋白相对表达水平较正常对照组、假手术组均显著降低(P0.01),且LID组显著低于PD组(P0.01),复方地黄方干预后其p-GSK3β(phospho S9)蛋白相对表达水平显著升高(P0.01)。结论:复方地黄方可能通过调控GSK3β信号通路,缓解GSK3β蛋白的激活,对β-catenin磷酸化作用减弱,游离的β-catenin转移进核内,与结合蛋白一起触发下游α-syn,使α-syn异常聚集和错误折叠受限,影响细胞凋亡,从而缓解帕金森病及异动症。     

电针对高脂饮食诱导的肥胖大鼠白色脂肪组织中白介素-6、波形纤维蛋白的影响

目的:观察电针对高脂饮食诱导的肥胖(DIO)大鼠白色脂肪组织(WAT)中白介素-6(IL-6)和波形纤维蛋白(vimentin)的影响,探讨针灸减肥的作用机制。方法:清洁级3月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组(10只)和模型组、电针组、假电针组(每组8只)。以高脂饲料喂养建立营养型肥胖动物模型。电针组电针"足三里""天枢"穴,疏密波,频率2Hz/15Hz,强度1mA,假电针组取"足三里""天枢"穴旁开5mm区域的非穴位区作为针刺点,不加电针,2组均30min/次,5次/周,共8周。治疗期间,对照组、模型组不做任何处理,所有大鼠均饲喂普通饲料,各组大鼠体质量每周测量1次。HE染色法观察WAT中脂肪细胞的形态学改变;蛋白免疫印迹法检测大鼠WAT中IL-6、vimentin蛋白含量。结果:治疗后,与对照组比较,模型组大鼠体质量显著升高(P0.05);与假电针组和模型组比较,电针组大鼠体质量显著降低(P0.05)。与对照组比较,模型组大鼠WAT的脂肪细胞直径显著增大(P0.05);与模型组、假电针组比较,电针组大鼠WAT的脂肪细胞直径显著减小(P0.05)。与对照组比较,模型组大鼠WAT中IL-6、vimentin蛋白含量显著升高(P0.05);与假电针组和模型组比较,电针组大鼠WAT中IL-6、vimentin含量显著降低(P0.05)。结论:电针能有效下调DIO大鼠WAT中IL-6、vimentin的表达,可能是电针通过调节肥胖模型慢性炎性反应以减轻体脂的效应机制之一。     

电针激活沉默信息调节因子2相关酶1调控下丘脑抑食欲肽对肥胖大鼠代谢的影响

目的:观察电针对肥胖大鼠下丘脑中沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、促黑素皮质素(POMC)含量以及体质量、进食量、血糖、血脂的影响,探讨电针治疗肥胖的中枢及外周机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、假电针组,每组10只。予高脂饲料喂养复制肥胖大鼠模型。电针组取双侧"足三里""中脘""关元""丰隆"穴,假电针组取电针组所选穴位旁浅刺,隔日电针1次,每次20min,连续治疗8周。观察大鼠体质量、进食量、血糖、血脂变化,Western blot和荧光定量PCR法检测大鼠下丘脑中SIRT1、POMC蛋白及mRNA的表达变化。结果:与正常组比较,模型组的体质量、进食量、血脂、餐后血糖均明显升高(P0.05,P0.01),下丘脑SIRT1蛋白及mRNA表达降低(P0.05)。与模型组、假电针组比较,电针组的体质量、进食量、血脂、血糖显著降低(P0.01,P0.05),且下丘脑SIRT1、POMC蛋白及mRNA表达明显增高(P0.05)。结论:电针可以调控肥胖大鼠体质量、进食量、血脂、血糖及下丘脑SIRT1、POMC的表达,且SIRT1、POMC变化趋势基本一致,说明电针调控下丘脑抑食欲肽从而改善肥胖大鼠体质量及代谢可能与下丘脑SIRT1的表达相关。     

电针对高脂饮食诱导的肥胖大鼠下丘脑沉默信息调节因子1、叉头状转录因子O1及阿黑皮素原的影响

目的:观察电针对高脂饮食诱导的肥胖(DIO)大鼠下丘脑沉默信息调节因子1(SIRT1)、叉头状转录因子O1(FoxO1)及阿黑皮素原(POMC)的影响,探讨电针调节中枢食欲肽减肥的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、电针+抑制剂组(针+抑组)、抑制剂组、假手术组,每组10只。采用高脂饮食喂养诱导DIO大鼠模型。电针组和针+抑组电针"丰隆""中脘""关元""足三里"穴,10min/次;针+抑组和抑制剂组予以第三脑室置管并注射SIRT1特异性拮抗剂EX-527;假手术组予以第三脑室内置管,并注射人工脑脊液;均每周治疗3次,共治疗8周。观察各组大鼠治疗前后体质量、进食量、Lee’s指数,全自动生化分析仪检测大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)含量,Western blot法检测大鼠下丘脑组织SIRT1、FoxO1、乙酰化FoxO1(AC-FoxO1)、POMC蛋白的表达水平。结果:治疗前,与正常组比较,模型组、电针组、针+抑组、抑制剂组、假手术组的体质量、进食量均明显升高(P0.01),模型组和假手术组Lee’s指数增高(P0.05)。治疗后,与模型组比较,电针组、针+抑组大鼠体质量、进食量、TC含量、AC-FoxO1表达量均显著降低(P0.01,P0.05),SIRT1、FoxO1和POMC表达量均明显升高(P0.01,P0.05);电针组Lee’s指数及血清TG、FFA含量显著降低(P0.05,P0.01);抑制剂组进食量,血清TC、TG、FFA含量显著升高(P0.01),SIRT1、FoxO1、POMC表达量显著降低(P0.01,P0.05)。与电针组比较,针+抑组与抑制剂组的体质量、进食量、Lee’s指数及TG、FFA含量,AC-FoxO1表达量均明显升高(P0.01,P0.05),SIRT1、FoxO1和POMC表达量均显著降低(P0.01);抑制剂组血清TC含量显著升高(P0.01)。与针+抑组比较,抑制剂组体质量、进食量及TC、TG、FFA含量,AC-FoxO1表达量显著增高(P0.01),SIRT1、FoxO1和POMC表达量明显降低(P0.01)。结论:电针能有效上调DIO大鼠下丘脑中SIRT1的表达,从而去乙酰化作用于FoxO1,并促进下游抑食欲肽POMC的表达,可能是电针减肥的效应机制之一。     

电针对高脂诱导胰岛素抵抗大鼠肝脏腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路相关蛋白表达的影响

目的:观察电针对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPARγ)蛋白的影响,探讨电针治疗IR的作用机制。方法:从40只雄性SD大鼠中随机选取8只做为空白组,其余通过高脂饮食诱导IR模型,选取24只造模成功的大鼠按随机区组原则分为模型组(8只)、西药组(8只)和电针组(8只)。西药组按大鼠体质量以吡格列酮10mg·kg-1·d-1灌胃,电针组取双侧"丰隆""三阴交"穴电针治疗,1次/d,均连续治疗2周。透射电镜观察大鼠肝组织线粒体结构,ELISA法检测大鼠血清C肽(C-P)、脂联素(ADP)、瘦素(LEP)、抵抗素(RES)含量,免疫蛋白印迹法检测肝组织AMPK、p38MAPK、PPARγ的蛋白表达。结果:电镜观察显示模型组肝细胞线粒体形态、结构受损;而西药、电针组线粒体结构得到恢复融合。与空白组比较,模型组大鼠血清C-P、LEP、RES含量显著升高(P0.01),ADP含量显著降低(P0.01),肝组织AMPK、PPARγ蛋白表达水平显著降低(P0.01),p38MAPK蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,电针组、西药组大鼠血清C-P、LEP、RES含量显著降低(P0.05,P0.01),ADP含量显著升高(P0.01,P0.05),肝组织AMPK、PPARγ蛋白表达水平显著升高(P0.01),p38MAPK蛋白表达水平显著降低(P0.01)。电针组与西药组各指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:电针可明显改善IR大鼠的脂质代谢紊乱,其作用机制可能与电针调节肝组织AMPK/p38MAPK/PPARγ通路相关,由此下调脂肪酸合成相关酶的活性,使肝组织内合成甘油三酯、胆固醇减少,改善肝组织IR。     

益气活血利水汤对肝纤维化模型大鼠Necdin-Wnt信号通路的影响

目的:观察益气活血利水汤对肝纤维化模型大鼠necdin-Wnt信号通路的影响,探讨益气活血利水汤抗肝纤维化的作用机制。方法:60只SD大鼠中随机抽取12只为正常组,造模成功的45只大鼠随机分为益气活血利水汤(9.6 g·kg~(-1))组(n=12),益气活血利水汤(14.4 g·kg~(-1))组(n=11),秋水仙碱组(Col组,n=11)和模型组(n=11)。正常组和模型组灌胃(ig)生理盐水,益气活血利水汤组ig益气活血利水汤9.6,14.4 g·kg~(-1)·d~(-1),Col组ig Col 0.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)。10周后观察两组的血清透明质酸(hyaluronan acid,HA),层黏蛋白(laminin,LN),Ⅲ型前胶原(typeⅢprocollagen,PCⅢ),Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,CⅣ)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察其病理表现,Masson染色观察胶原蛋白变化,观察各组necdin,β-链蛋白(β-catenin),过氧化物增殖激活受体(PPARγ)蛋白和mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,纤维化分期的标准(Metavir)评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,Col组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,METAVIR评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P0.01);与Col组比较,益气活血利水汤(9.6 g·kg~(-1))组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,METAVIR评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P0.01);与益气活血利水汤(9.6 g·kg~(-1))组比较,益气活血利水汤(14.4 g·kg~(-1))组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,Metavir评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P0.01)。与正常组比较,模型组PPARγ蛋白及mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组比较,Col组PPARγ蛋白及mRNA表达显著升高(P0.01);与益气活血利水汤(9.6 g·kg~(-1))组比较,益气活血利水汤(14.4 g·kg~(-1))组PPARγ蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:益气活血利水汤可抑制necdin-Wnt/β-catenin通路的活性,解除Wnt/β-catenin对PPARγ的抑制,具有抗肝纤维化的效果。     

电针调控SIRT1对肥胖大鼠肝脏炎症因子IL-6、TNF-α的影响*

摘要：目的 观察电针通过调控SIRT1通路对胰岛素抵抗肥胖大鼠肝脏炎症的影响,探讨电针改善大鼠肥胖状态的机制。方法：将70只Wistar雄性大鼠适应性喂养1周后,随机挑选10只大鼠给予标准饮食喂养,8周后随机抽取6只作为正常组。其余大鼠给予高脂饮食喂养8周建立肥胖大鼠模型,采用随机数字表法从造模成功的大鼠中抽取24只,分成模型组、电针组、针加抑组和抑制剂组,每组各6只。造模结束后,电针组选取“中脘”、“关元”、“足三里”和“丰隆”穴,其中“足三里”和“丰隆”穴左右交替针刺。采用HANSLH202H 型电针治疗仪,频率2Hz,强度1mA,连续波,留针10min。针加抑组和抑制剂组大鼠给予SIRT1 特异性抑制剂Sirtinol,1mg /kg,尾静脉注射给药,此外,针加抑组还另外实施与电针组相同的电针治疗。隔日1次,每周3次,共干预8周。分别在干预前和干预8周后测量大鼠体质量。各组大鼠处死前,心尖取血检测血清白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,采用Western blot法检测肝脏组织IL-6和TNF-α的蛋白表达。结果：与正常组相比,模型组大鼠体质量、肝脏组织中IL-6和TNF-α蛋白表达量均显著升高(P＜0.01),血清IL-6和TNF-α含量均明显升高(P＜0.05);与模型组相比,电针组、针加抑组大鼠体质量、肝脏组织中IL-6和TNF-α蛋白表达量在电针干预后显著降低(P＜0.01),血清IL-6、TNF-a含量均明显下降(P＜0.05);与抑制剂组相比,针加抑组大鼠体质量和肝脏组织中IL-6蛋白表达量降低(P＜0.05,P＜0.01),血清IL-6和TNF-α含量和TNF-α蛋白表达量均有下降趋势,但其差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：电针能够调控SIRT1改善大鼠肥胖状态,其机可能与改善外周炎症水平有关。     

标本配穴电针对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性及骨骼肌SIRT1蛋白表达的影响

目的观察标本配穴电针对胰岛素抵抗(IR)大鼠胰岛素敏感性及骨骼肌沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达的影响。方法 Wistar大鼠40只,其中24只采用高脂饲料喂养建立IR大鼠模型,其余16只予普饲喂养。将16只IR大鼠随机分为模型对照组8只、电针刺激组(针刺关元、足三里、中脘和丰隆穴,每天左右交替)8只,另8只普饲喂养大鼠为正常对照组。电针刺激6周和7周后,分别检测各组大鼠腹腔糖耐量(IPGT)和腹腔胰岛素耐量(IPIT)。电针刺激8周后称重,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PPG)、股四头肌SIRT1蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠IPIT升高、股四头肌SIRT1蛋白表达水平显著降低(P0.05);与模型对照组比较,电针刺激组大鼠体重减轻、IPIT显著降低、股四头肌SIRT1蛋白表达水平显著升高(P0.05或P0.01)。结论标本配穴电针能减轻IR大鼠体重、增强胰岛素敏感性,提高股四头肌SIRT1蛋白表达水平可能是其改善IR的重要机制之一。     

电针调节Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠膝骨关节炎软骨退变的研究

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨电针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:从50只2月龄SPF级雄性SD大鼠中随机抽取10只为假手术组,其余40只采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,造模4周后随机分为模型组、实验1组、实验2组、实验3组,每组10只。假手术组和模型组不作任何干预,实验1组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预15 min,实验2组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预30min,实验3组取双侧非经非穴电针干预15min。电针干预每天1次,每周5次,共12周。12周后,取大鼠膝关节软骨组织进行染色,光镜下观察关节软骨组织形态学改变;改良Mankin’s评分评价软骨退变程度;ELISA法检测滑膜组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Western blot检测关节软骨组织Wnt-4、β-catenin、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloprotein-13,MMP-13)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。与模型组比较,实验1组、实验2组大鼠软骨形态结构较整齐,细胞数量增多,基质染色加深,潮线较完整;Mankin’s评分显著降低(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著降低(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著降低(均P0.01)。与模型组比较,实验3组均未见改善。与实验1组比较,实验3组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。实验2组与实验1组大鼠软骨形态结构相似,Mankin’s评分、滑膜组织中IL-1β含量及Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:电针"内膝眼""犊鼻"可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,降低MMP-13的表达,减少炎性因子IL-1β的生成,从而抑制软骨基质的降解和软骨细胞的凋亡,改善软骨形态结构。     

葛根芩连汤促进糖尿病大鼠棕色脂肪分化改善糖脂紊乱的分子机制

研究葛根芩连汤(GQD)对糖尿病大鼠棕色脂肪组织(BAT)分化及能量代谢的影响。给药干预高脂喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠13周,在确认降糖药效基础上,提取大鼠肩胛骨周围BAT总RNA,qPCR法检测核转录基因Prdm16、Pparγc1α、Pparα、Pparγ和Sirt1,BAT标志基因Ucp1、Cidea、Dio2和能量消耗基因Ampkα2,脂肪分泌因子Adpn、Fndc5、Angptl8、IL-6和Rbp4表达。IPA通路软件分析qPCR数据干预差异。提取BAT总蛋白,Western blot法检测PRDM16、PGC1α、PPARγ、PPARα、SIRT1、ChREBP、AMPKα、UCP1、ADPN、NRG4、GLUT1和GLUT4等表达水平。结果显示,与模型组相比,GQD显著上调糖尿病大鼠Pparγc1α、Pparα、Pparγ、Ucp1、Cidea、Ampkα2、Dio2、Fndc5、Rbp4和Angptl8表达水平(P0.05),显著下调Adpn和IL-6表达水平(P0.05),Prdm16表达有上调趋势(P=0.182),而Sirt1表达有下调趋势(P=0.104)。IPA通路功能分析显示GQD促进脂肪组织棕色化,激活PPARα/RXRα和SIRT1信号通路,减少脂质积累。与正常组相比,模型组PRDM16、PGC1α、PPARα、PPARγ、SIRT1、ChREBP、AMPKα、UCP1、GLUT1、GLUT4和NRG4蛋白表达下调(P0.01),给药后表达上调(P0.05);与正常组相比,模型组ADPN蛋白表达上调(P0.01),给药后表达下调(P0.01)。研究表明GQD促进BAT分化成熟,增加能量消耗,有助于减轻机体糖脂代谢紊乱,改善糖尿病症状。     

电针对慢性肾功能衰竭大鼠肾功能及肾组织β-链蛋白表达的影响

目的:观察电针对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾功能及肾组织β-链蛋白(β-catenin)表达的影响,探讨电针对CRF的部分作用机制。方法:SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、电针组,每组10只。0.5%腺嘌呤饲料喂养制备CRF大鼠模型,持续喂养21d。造模成功后,电针组选取"三阴交""太溪""肾俞"电针20min,1次/d,持续治疗30d。治疗结束后采用酶法检测各组大鼠血清肌酐(Scr)含量,采用脱氧酶法检测血清尿素氮(BUN)含量,并观察肾组织形态学变化,采用Western blot法检测肾组织β-catenin的表达。结果:与正常组比较,模型组Scr、BUN含量及β-catenin表达均明显增高(P0.05);与模型组比较,电针组Scr、BUN含量及β-catenin表达均明显降低(P0.05)。模型组大鼠肾小管管腔增大,可见纤维化;电针组较模型组病变有所减轻。结论:电针可明显改善CRF大鼠的肾功能,这可能与降低肾组织β-catenin的表达有关。     

葛根芩连汤含药血清通过miR-146b/SIRT1信号通路改善HepG_2细胞胰岛素抵抗的研究

目的:探讨葛根芩连汤含药血清改善HepG_2细胞胰岛素抵抗的机制。方法:建立胰岛素抵抗HepG_2细胞模型,用葛根芩连汤含药血清、吡格列酮干预,并设空白对照组和模型组。比色法检测细胞糖原合成能力,实时定量PCR检测miR-146b的表达,Western blot和实时定量PCR检测SIRT1/FoxO1通路中相关蛋白及mRNA的表达。结果:葛根芩连汤含药血清能逆转胰岛素抵抗HepG_2细胞的糖原合成能力下降(P0.01)。与对照组比较,模型组miR-146b表达显著升高(P0.01),葛根芩连汤含药血清能显著抑制miR-146b的表达(P0.01)。Western blot显示,与空白对照组比较,模型组SIRT1、PPARγ蛋白表达显著降低,acetyl-FoxO1蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01);与模型组比较,葛根芩连汤含药血清组SIRT1、PPARγ蛋白表达显著升高,acetyl-FoxO1蛋白表达显著降低(P0.05或P0.01)。过表达的miR-146b能抑制SIRT1蛋白的表达,沉默miR-146b能增强SIRT1蛋白的表达(P0.05或P0.01)。结论:葛根芩连汤含药血清能改善棕榈酸诱导的HepG_2胰岛素抵抗模型,其机制与调控miR-146b/SIRT1信号通路有关。     

加味苓桂术甘汤对代谢综合征大鼠抗氧化作用及脂联素表达的影响

目的:加味苓桂术甘汤对代谢综合征大鼠肾周脂肪中脂联素表达水平的影响。方法:取3周龄断乳雄性Wistar大鼠,随机分为正常组,高脂高盐模型组,阿托伐他汀降脂组(8 mg·kg~(-1)),加味苓桂术甘汤高、中、低剂量组(18,12,6 g·kg~(-1)),每组10只动物,除正常组外,其他组均给予高脂高盐饲料,并于模型制作当日分别ig给予药物治疗,正常组、模型组给予同量生理盐水,每天1次,连续喂养12周。称体重、肾周脂肪质量,计算肥胖指数及Lee's指数,生化法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),苏木素-伊红(HE)染色观察肾周脂肪组织形态学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测脂肪中过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)和脂联素(adiponectin)mRNA基因表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠体重、肾周脂肪、肥胖指数及Lee's指数明显升高,脂肪细胞体积明显增加、数量明显减少,血清中MDA含量明显升高,SOD活性明显降低,脂肪组织中PPARγ和adiponectin mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01);与代谢综合征模型组比较,加味苓桂术甘汤各剂量组大鼠体重、肾周脂肪、肥胖指数及Lee's指数明显降低,脂肪细胞体积明显减少、数量明显增多,血清中MDA含量明显降低,SOD活性明显增加,脂肪组织中PPARγ和adiponectin mRNA表达均明显升高(P0.05,P0.01)。结论:加味苓桂术甘汤具有明显改善内脏肥胖和抗氧化作用,其改善代谢综合征大鼠糖脂代谢紊乱可能与增加PPARγ促进脂联素的表达有关。     

枸杞多糖改善去卵巢大鼠脂质代谢紊乱的作用研究

目的通过观察枸杞多糖对去卵巢大鼠血脂、肝脏形态及肝脏中P-GSK-3β和PPARγ蛋白表达的影响,探究枸杞多糖对去卵巢大鼠脂代谢的干预作用及机制。方法 30只SPF级健康雌性SD大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、补佳乐组、枸杞多糖高剂量组及枸杞多糖低剂量组(每组6只)。全自动生化分析仪检测大鼠血脂水平,HE染色检测各组大鼠肝脏组织形态学变化,Western Blot方法检测肝脏中P-GSK-3β和PPARγ蛋白表达。结果血脂检测发现,与假手术组相比,去卵巢组TC、LDL-C水平显著升高(P0.01),HDL-C水平显著降低(P0.01),与去卵巢组相比,补佳乐组与枸杞多糖高剂量组TC、LDL-C水平显著降低(P0.01),枸杞多糖低剂量组LDL-C水平降低(P0.05)。HE染色发现,去卵巢组可见散在的脂肪空泡,枸杞多糖高剂量组脂肪空泡减少。Western Blot结果显示,与假手术组相比,去卵巢组P-GSK-3β与PPARγ表达水平显著下调(P0.01);与去卵巢组相比,补佳乐组与枸杞多糖高剂量组P-GSK-3β与PPARγ表达水平升高(P0.05或P0.01)。结论高剂量枸杞多糖可能通过上调肝脏中p-GSK-3β与PPARγ表达改善脂代谢紊乱。     

不同化痰法对高脂饮食C57BL/6小鼠脂质代谢肝脏组织PPARγ基因表达的影响

目的观察不同化痰法对高脂饮食诱导C57BL/6小鼠脂质代谢的影响,分析小鼠肝脏组织中PPARγ基因表达的变化,初步探讨二陈汤燥湿化痰和四君子汤健脾化痰降脂的分子机制。方法将40只SPF级C57BL/6雄性小鼠分为正常组(n=8)和高脂组(n=32),分别给予正常饲料和高脂饲料喂养10周。第11周,将高脂组随机分成模型组、二陈汤组(8.7g·kg~(-1)·d~(-1))、四君子汤组(6.6g·kg~(-1)·d~(-1))和辛伐他汀组(2 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组8只。正常组和模型组以相同体积蒸馏水灌胃(10 mL·kg~(-1)·d~(-1)),其余3组给予相应药物灌胃,每日一次,连续4周。第4周和第10周记录各组体质量、体长和腹围,以及计算其Lee's指数;第10周小鼠眼眶静脉窦采血,测血清总胆固醇(TG)、甘油三酯(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。第14周采集标本,检测各组小鼠血清的TG、TC、HDL-C、LDL-C水平及肝脏组织中PPARγ基因和蛋白的表达量。结果第10周末,高脂组的体质量、腹围、Lee's指数、TG、TC、HDL-C和LDL-C均明显高于正常组(P0.05)。干预4周后,各治疗组的体质量、腹围、Lee's指数、TG和TC均显著低于模型组(P0.05)。同时在肝脏组织中,模型组的PPARγmRNA和蛋白表达均明显低于正常组(P0.05,P0.01);二陈汤组的PPARγmRNA和蛋白表达均显著高于模型组(P0.05,P0.01);四君子汤组的PPARγmRNA表达显著高于模型组(P0.05),蛋白表达有升高的趋势但无统计学意义。结论不同化痰法对高脂饮食小鼠的治疗作用主要表现在降低体质量、腹围、Lee's指数、TG和TC,上调肝脏组织中PPARγ的表达是两者化痰的共同作用机制之一。     

健脾补肾方对辐射损伤小鼠β-catenin、TCF及PPARγ蛋白表达的影响

目的研究健脾补肾方对辐射损伤模型小鼠β-链蛋白(β-catenin)、T细胞因子(TCF)及过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达的影响,探讨其对造血功能的调控机制。方法采用6.0 Gy X射线照射建立辐射损伤模型小鼠,然后将造模成功小鼠随机分为模型组、健脾补肾方小剂量组(100%浓度)、健脾补肾方大剂量组(200%浓度)、阿胶浆组,每组12只。另随机选取12只正常小鼠作为正常组。正常组、模型组给予生理盐水0.2m L/10 g灌胃,2次/d,其余3组分别用健脾补肾方小剂量、大剂量和阿胶浆混悬液0.2 m L/10g灌胃,2次/d。9 d后处死小鼠,取血检测外周血白细胞计数,收集骨髓检测β-catenin、TCF及PPARγ蛋白表达情况,制作骨髓病理切片观察骨髓病理改变情况,测定脂肪空泡面积。结果模型组外周血白细胞计数及β-catenin、TCF蛋白表达量明显低于正常组(P均0.05),PPARγ蛋白表达量及骨髓脂肪空泡面积均明显高于正常组(P均0.05);健脾补肾方小剂量组、健脾补肾方大剂量组、阿胶浆组外周血白细胞计数及β-catenin、TCF蛋白表达量均明显高于模型组(P均0.05),PPARγ蛋白表达量及骨髓脂肪空泡面积均明显低于模型组(P均0.05),尤以小剂量组明显。结论健脾补肾方可通过增强β-catenin/TCF通路的转导,抑制下游靶基因PPARγ的表达,从而抑制骨髓脂肪化,促进骨髓造血功能的重建。     

左归丸和右归丸对去卵巢大鼠股骨骨髓PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα蛋白表达的影响

目的探讨左归丸和右归丸治疗绝经后骨质疏松症的可能作用机制。方法 60只大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、补佳乐组、左归丸组、右归丸组,每组10只。除空白组、假手术组外,其余各组经双侧卵巢切除手术建立绝经后骨质疏松症大鼠模型。3天后,左归丸组、右归丸组、补佳乐组给予相应药物灌胃,剂量分别为9.45 g/(kg·d)、10.26 g/(kg·d)、0.09 g/(kg·d),空白组、假手术组、模型组灌胃2ml蒸馏水,各组均灌胃12周。灌胃结束后,HE染色观察股骨近端骨组织形态学变化,western blot法检测股骨骨髓过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT-增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、CCAAT-增强子结合蛋白α(C/EBPα)蛋白表达量。结果与空白组比较,模型组大鼠股骨脂肪细胞数目以及骨髓PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,补佳乐组、左归丸组、右归丸组大鼠股骨脂肪细胞数目以及骨髓PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα蛋白表达量均有不同程度降低,并且补佳乐组、左归丸组优于右归丸组(P0.05或P0.01)。结论左归丸与右归丸均能改善去卵巢大鼠骨髓微环境,其机制可能与抑制股骨脂肪分化和骨髓PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα蛋白表达有关。