骨靶向新化合物四环素 哌嗪雌酚酮的雌激素活性测定

为寻找副作用小而有抗骨质疏松作用的雌激素衍生物,用雌激素受体结合竞争抑制实验,小鼠阴道细胞学实验,幼雌小鼠子宫重量法分别研究了骨靶向新化合物四环素-哌嗪雌酚酮(XW630)的雌激素活性。结果表明:XW630与子宫组织雌激素受体的相对亲和力为0.011,而雌酚酮与雌二醇分别为0.325及1.000。XW630的雌激素活性指数及细胞学实验均表明XW630的雌激素活性明显小于雌酚酮及雌二醇。提示有抗骨质疏松活性的XW630由于其雌激素活性低,值得进一步研究。     

骨靶向新化合物四环素哌嗪雌酚酮的雌激素活性测定

为寻找副作用小而有抗骨质疏松作用的雌激素衍生物，用雌激素受体结合竞争抑制实验，小鼠阴道细胞学实验，幼雌小鼠子宫重量法分别研究了骨靶向新化合物四环素哌嗪雌酚酮（ＸＷ６３０）的雌激素活性。结果表明：ＸＷ６３０与子宫组织雌激素受体的相对亲和力为００１１，而雌酚酮与雌二醇分别为０３２５及１０００。ＸＷ６３０的雌激素活性指数及细胞学实验均表明ＸＷ６３０的雌激素活性明显小于雌酚酮及雌二醇。提示有抗骨质疏松活性的ＸＷ６３０由于其雌激素活性低，值得进一步研究     

哌嗪雌酚酮对去卵巢大鼠骨代谢的作用

目的研究哌嗪雌酚酮(一种新合成雌激素哌嗪类衍生物)对去卵巢大鼠骨代谢及子宫的作用。方法 雌酚酮(E) 0.75 mg·kg^-1·d^-1,哌嗪雌酚酮(P-E) 1和10 mg·kg^-1·d^-1,ig共90 d,骨形态计量学测量。结果去卵巢大鼠子宫萎缩,血清胆固醇升高,骨量减少伴骨高转化的改变。E组与去卵巢组比,子宫重量增加,血清胆固醇降低,骨高转化降低。P-E(1 mg)组与去卵巢组比,子宫重量轻微增加,骨量增加,骨形成和骨吸收均维持在去卵巢组的高水平。P-E(10 mg)组比低剂量组增加更多的骨量,但其作用机理与雌酚酮相同,明显地降低骨转化。结论哌嗪雌酚酮可预防去卵巢大鼠所致的骨丢失。低剂量(1 mg)组对子宫未见明显副作用。     

何首乌、骨碎补和淫羊藿的植物雌激素作用研究

目的:观察研究抗骨质疏松中药何首乌、骨碎补和淫羊藿三种中药的粗提物及其主要单体成分通过雌激素受体(estrogen receptor α/β,ERα/β)对靶基因的转录调节作用,发现这三种中药中植物雌激素作用的物质成分.方法:采用脂质体瞬时转染的方法,利用转染雌激素受体表达质粒的HeLa细胞,观察这三种中药的粗提物及其主要单体化合物对雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)报告基因的转录激活作用.结果:这三种中药粗提物及其主要成分均可不同程度的通过ERα和/或ERβ激活ERE报告基因的转录.结论:抗骨质疏松中药何首乌主要活性成分大黄素、骨碎补中的柚皮苷和淫羊藿中的淫羊藿苷具有显著的植物雌激素作用,并且对ERβ的选择性更强.     

E0703对雌激素受体(ER)不同亚型的选择性激活作用

目的探讨E0703(雌二醇衍生物)对雌激素受体不同亚型(α和β)的选择性激活作用。方法将报告基因质粒pTAL-SEAP-ERE和校正质粒pSV-β-gal共转染已稳定转染了雌激素受体α/β的人胚肾细胞(HEK293),加入E0703进行报告基因的诱导表达。采用EMSA试验观察E0703对ERα与雌激素反应元件(ERE)的结合增强作用。结果E0703对ERα具有较强的激活作用(最低激活浓度为10-8mol·L-1),激活强度略低于E2;E0703在10-10、10-9、10-8、10-7mol·L-1浓度下对ERβ没有激活作用;EMSA试验证明,E0703能够增强ERα与雌激素反应元件的结合增强作用。结论E0703对雌激素受体α具有选择性激活作用。     

雌激素上调小鼠长骨c-fos和c-jun表达水平

目的　考察雌酚酮对骨组织c fos和c jun表达的影响 ,为研究雌激素对骨的作用机制积累资料。方法　用体外培养胎鼠长骨考察了雌酚酮对骨生长的作用 ,并采用免疫组织化学方法测定了其对骺板静止区、增殖区和肥大区c fos和c jun蛋白质表达的影响。结果　雌酚酮在体外能促进长骨生长 ,并在 10 -9mol·L-1～ 10 -7mol·L-1浓度范围内以剂量依赖的方式上调 3个区c fos和c jun蛋白质表达水平。结论　提示雌酚酮可能通过上调c fos和c jun在软骨细胞的表达而促进含有AP 1结合位点的、与骨生长发育有关的基因转录和表达 ,从而促进骨生长     

四环素-哌嗪雌酚酮上调骺板c-fos, c-jun 的mRNA及其表达产物水平

目的：研究四环素-哌嗪雌酚酮(XW630)对软骨细胞c-fos和c-jun基因的mRNA及其表达产物水平的影响,初步探讨其对骨的作用机制。方法：用原位杂交法,测定体外培养小鼠胚胎长骨骺板c-fos和c-jun mRNA的水平,同时用免疫组织化学法,测定了相应的表达产物。结果：10^-7 mol.L^-1 XW630可显著上调骺板静止区、增殖区和肥大区c-fos和c-jun的mRNA及其表达产物水平,且其作用比雌酚酮强。结论：XW630可能通过上调软骨细胞c-fos, c-jun的表达,促进软骨细胞中含有AP-1位点的、与骨生长发育有关的基因表达,从而促进软骨内骨形成。     

雌激素受体与肿瘤发生的研究进展

雌激素属于类固醇激素家族,与受体结合后调节靶基因的转录,在生物体内对维持正常的生命活动起重要作用。雌激素受体(Estrogen receptor,ER)是雌激素作用的靶位点,在相关信号通路中起主要作用,参与调节和维持生命体的基本活动。但雌激素受体表达异常对其靶器官肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌等的发生有重大影响,还会影响雌激素非靶器官肿瘤的发生,如结肠癌、肺癌等。文章主要就经典的雌激素核受体ERα和ERβ与几种常见肿瘤的相关研究进展进行综述,为雌激素肿瘤防治及其靶向药物的开发提供理论依据。     

补骨脂酚通过上调上皮雌激素受体β和下调间质芳香化酶抑制大鼠良性前列腺增生

目的探讨补骨脂酚(Ba)对良性前列腺增生(BPH)的抑制作用及其机制。方法培养人前列腺间质细胞系WPMY-1和BPH上皮细胞系BPH-1,用MTT法、实时定量PCR和Western印迹法检测Ba对细胞增殖和PCNA表达的影响;建立雌二醇/睾酮诱导的BPH大鼠模型,计算假手术组、模型组和Ba组中前列腺指数(PI),用HE染色比较各组前列腺的病理改变;用IHC法分析各组前列腺中PCNA和平滑肌细胞标志物ɑ-SMA的表达和分布。进一步用IHC、实时定量PCR和Western印迹法研究Ba对前列腺上皮中雌激素受体β(ERβ)、间质中芳香化酶表达的影响。转染ERβ或ERα的siRNA,通过双荧光素酶报告基因法测定Ba对雌激素反应元件(ERE)的转录活性是否通过ERβ介导。结果 Ba以剂量依赖的方式显著抑制WPMY-1和BPH-1细胞增殖和PCNA表达;BPH模型组大鼠前列腺增大;Ba可以明显降低PI值、降低间质中平滑肌层厚度,下调PCNA和α-SMA的表达。此外,Ba可以明显促进BPH-1细胞中ERβ的表达、抑制WPMY-1细胞中本底水平和PGE2诱导的芳香化酶表达,这与体内的变化一致。沉默ERβ而非ERα,可以阻断Ba诱导BPH-1中的ERE转录活性。结论 Ba通过上调前列腺上皮中ERβ表达、下调前列腺间质中芳香化酶表达,维持雌激素和雄激素的平衡,抑制BPH进程,提示:Ba是中药补骨脂抗BPH的重要物质基础,可成为抗BPH的候选药物。     

葶苈子雌激素样活性筛选及其作用机制研究北大核心CSCD

目的筛选葶苈子水提物(Semen Descurainiae aqueous extracts,SD-ae)的雌激素样活性,确定其有效化学拆分组分,并研究其雌激素样作用机制。方法用动物实验即子宫增重实验和细胞实验即E-SCREEN实验筛选SD-ae及其化学拆分组分的雌激素样活性;雌激素受体拮抗剂ICI182,780干预阻断实验检测其雌激素样作用途径;以雌激素反应元件(ERE)与报告基因荧光素酶(luciferase,Luc)构建报告基因载体,与ERα、ERβ表达载体以阳离子脂质体转染法共同转入HEK293细胞中,以标准化Luc活性来评价其雌激素样作用的信号通路;实时荧光定量PCR检测雌激素受体ERα、ERβ及雌激素效应基因PR mRNA的表达。结果与正常组相比,SD-ae高、低剂量组均可明显提高小鼠的子宫系数(P<0.05),且葶苈子低聚糖拆分组分(SD-ae-Oli)和多糖拆分组分(SD-ae-Pol)也能明显提高小鼠的子宫系数(P<0.01或P<0.05);SD-ae、SD-ae-Oli、SD-ae-Pol对MCF-7细胞有明显的促增殖作用(P<0.01或P<0.05),ICI182,780干预可阻断其促增殖作用;报告基因结果表明,SD-ae、SD-ae-Oli和SD-ae-Pol分别经ERβ诱导时,其标准化Luc活性都明显高于正常组(P<0.01);且与正常组相比,SD-ae可明显促进小鼠子宫ERβ mRNA的表达(P<0.01),但对于ERα、PR mRNA的表达无影响。结论 SD-ae具有雌激素样活性,其有效雌激素样化学拆分组分是SD-ae-Oli和SD-ae-Pol,且SD-ae、SD-ae-Oli、SD-ae-Pol都是通过ERβ发挥雌激素样作用。SD-ae在体内发挥雌激素样作用的分子机制可能与促进ERβ mRNA的表达有关。     

沙利度胺联合甲氨蝶呤对关节炎大鼠炎症及细胞因子的影响

目的：研究沙利度胺联合甲氨蝶呤对大鼠Ⅱ型胶原诱导型关节炎症及细胞因子的影响。方法：建立类风湿性关节炎大鼠模型,自造模次日治疗组分别给予沙利度胺（150mg·kg^-1·d^-1）联合甲氨蝶呤（0．2mg·kg^-1·d^-1）和甲氨蝶呤（0．2mg·kg^-1·d^-1）单用,疗程均为6周。各组大鼠每周进行一次关节炎指数（AI）评分,于造模第6周取血清进行Western Blot检测大鼠体内IL-1β、TNF-α的表达并计算相对含量。结果：沙利度胺联合甲氨蝶呤、单用甲氨蝶呤均能降低模型大鼠AI评分,沙利度胺联合甲氨蝶呤作用强于单独使用甲氨蝶呤,使AI评分明显下降。沙利度胺联合甲氨蝶呤、甲氨蝶呤均可抑制IL-1β、TNF-α的表达,治疗后两种因子表达均与模型组有统计学差异（P〈0．05）,但仍不能达到正常水平（P〈0．05）。结论：沙利度胺联合甲氨蝶呤可能通过抑制IL-1β、TNF-α的表达而达到抗关节炎症的作用,沙利度胺与甲氨蝶呤有协同作用。     

Effects of several dioxin-like compounds on estrogen metabolism in the malignant MCF-7 and nontumorigenic MCF-10A human mammary epithelial cell lines

In human breast tissue, estrone (E(1)) and estradiol (E(2)) are mainly hydroxylated by cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) and 1B1 (CYP1B1) to 2-hydroxyestrogens (2-OHE(1/2)) and 4-hydroxyestrogens (4-OHE(1/2)), respectively. Several studies show that 4-OHE(1/2), but not 2-OHE(1/2), may act as a carcinogen and a high estrogen 4-/2-hydroxylation ratio appears to be a marker for the presence of neoplasms. In this study, we investigated the effects of several dioxin-like compounds on estrogen 2- and 4-hydroxylation in a malignant (MCF-7) and a nontumorigenic (MCF-10A) human mammary epithelial cell line. 2- and 4-methoxyestrogen (MeOE(1/2)) formations were used as measures of the 2- and 4-hydroxylation pathways, respectively. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD), 2,3,4,7,8-pentachlorodibenzofuran (PCDF), 3,3',4,4',5-pentachlorobiphenyl (PCB 126), and 3,3'4,4',5,5'-hexachlorobiphenyl (PCB 169) concentration dependently induced 2-MeOE(1/2) formation and ethoxyresorufin-O-deethylation (EROD) activity through induced CYP1A1 expression in MCF-7 and MCF-10A cells. 2,3',4,4',5-pentachlorobiphenyl (PCB 118) had no such effect. Effects on CYP1B1 expression and 4-MeOE(1/2) formation were less pronounced; only TCDD caused an induction, whereas PCB 169 was a potent and selective inhibitor of 4-MeOE(1/2) formation (IC(50) 0.7 and 2.2 nM PCB 169 in MCF-7 and MCF-10A cells, respectively). MCF-10A cells were less responsive toward dioxin-like compounds and the apparent EC(50) values for CYP1A1 and CYP1B1 induction in this study were 10-100 fold higher than in MCF-7 cells. The constitutive 4-/2-MeOE(1/2) ratios were 2.99 +/- 0.78 and 0.93 +/- 0.40 in MCF-7 and MCF-10A, respectively. Incubation with dioxin-like compounds resulted in a concentration-dependent decrease in the 4-/2-MeOE(1/2) ratio, but an increase in potentially carcinogenic estrogen metabolites in both MCF-7 and MCF-10A cells. This indicates that even though the 4-/2-OHE(1/2) ratio may be used as indicator for the presence of neoplasms, it is readily lowered by dioxin-like compounds and its value as a prognostic parameter for cancer risk should be further examined.     

非诺贝特对全脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用

目的探讨非诺贝特对大鼠全脑缺血/再灌注损伤(I/R)的保护作用及机制。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压方法建立全脑缺血/再灌注大鼠模型。药物非诺贝特(fenofibrate,FF;33、100、300mg.kg-1)在缺血前30min灌胃给药,PPARα受体拮抗剂MK886(6mg.kg-1)在给予非诺贝特300mg.kg-1前腹腔注射。Morris水迷宫测定大鼠空间学习能力变化,病理切片HE染色观察海马神经元形态结构变化,免疫组化染色检测海马组织核转录因子NF-κBp65蛋白的表达,生化酶学方法观察超氧歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α含量变化。结果非诺贝特能明显缩短全脑缺血/再灌注大鼠的寻台潜伏期,减轻全脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤,降低海马神经元NF-κB p65蛋白表达,明显阻遏缺血/再灌注大鼠海马IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量的升高和IL-10含量及SOD活性的降低;预先给予MK886能取消非诺贝特的作用。结论非诺贝特对缺血/再灌注脑损伤有明显保护作用,其机制与激活PPARα,抑制NF-κB活性,抑制CNS炎症反应和氧化应激有关。     

1,8-桉油精对卵白蛋白致哮喘豚鼠的气道高反应性和炎症的抑制作用

目的探讨1,8-桉油精(1,8-cineol)对哮喘豚鼠肺功能的改善作用及其机制。方法豚鼠第0天和第7天ip给予0.5ml含卵白蛋白(OVA)20μg的氢氧化铝凝胶致敏,28d后OVA攻击制备哮喘模型。观察豚鼠OVA攻击后1h,1,8-桉油精10,30和100mg.kg-1对豚鼠吸入OVA后1,2,3,4,10,20和30min时气道阻力(Raw)和肺顺应性(Cdyn)变化及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数和细胞分类的影响,并测量豚鼠肺组织中嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)、白细胞介素4(IL-4)、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。观察豚鼠OVA攻击后17h再吸入乙酰甲胆碱(MCh)后,1,8-桉油精10,30和100mg.kg-1对Raw和Cdyn及BALF中白细胞数和细胞分类的影响,并测量豚鼠肺组织中ECP,IL-4,IL-8和TNF-α的含量。结果与正常对照组比较,豚鼠OVA攻击后1h,在4min时模型组Raw达到高峰;与模型组比较,1,8-桉油精30和100mg.kg-1明显抑制Raw增加(P<0.05);在3min时模型组Cdyn达到高峰,与模型组比较,1,8-桉油精10,30和100mg.kg-1均能明显抑制Cdyn降低(P<0.05);模型组豚鼠肺组织ECP,IL-4和TNF-α含量明显高于正常对照组(P<0.05);1,8-桉油精100mg.kg-1组ECP,IL-4和TNF-α含量均明显低于模型组(P<0.05),模型组与正常对照组豚鼠肺组织IL-8含量无明显差异。与模型组比较,1,8-桉油精100mg.kg-1能明显减少BALF中白细胞数和嗜酸性粒细胞比例(P<0.05)。致敏豚鼠OVA攻击17h后,模型组豚鼠Raw与正常对照组比较显著升高(P<0.05),模型组豚鼠Cdyn与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01),1,8-桉油精100mg.kg-1对MCh引起的Raw的增加有明显的抑制作用,1,8-桉油精10,30和100mg.kg-1对MCh引起的Cdyn降低有明显的改善作用;与模型组相比,1,8-桉油精100mg.kg-1能明显减少BALF中白细胞数和中性粒细胞比例,降低肺组织ECP,IL-8和TNF-α含量(P<0.01);模型组与正常对照组豚鼠肺组织IL-4含量无明显差异;1,8-桉油精30mg.kg-1也能降低哮喘豚鼠肺组织中ECP和TNF-α含量(P<0.01)。结论在哮喘急性发作时,1,8-桉油精通过减少嗜酸性粒细胞,下调嗜酸性粒细胞的活性,从而抑制了哮喘的急性发作。在哮喘迟发相阶段,1,8-桉油精可通过下调IL-8水平,降低TNF-α活性,从而抑制或改善由IL-8水平升高导致的中性粒细胞聚集于支气管肺泡而直接引起的哮喘加重和持续状态。     

小鼠周边活动累积数据比率法评价药物镇静效应

目的建立一种基于累积周边活动时间/周边时间的比值(accumulate peripheral active time percent,APATP)的行为学评价模型。方法利用视频跟踪系统检测戊巴比妥钠和地西泮诱导小鼠自发活动并提取相应数据,并计算得到APATP。采用DAS软件对数据进行处理,得到小鼠活动趋稳半衰期((T_1/2)α)、对数曲线下面积(lgAUC0-60)和对数尾点回归值(lgPmin)进行统计学分析。结果各组小鼠的APATP随时间的延长而逐步下降,均符合方程P=Ae-αt+Be-βt。与正常组比较,PB5mg.kg-1组T12α、lgAUC0-60和lgPmin略有下降,而PB10mg.kg-1组(均为P<0.01)和PB15mg.kg-1组(P<0.01,P<0.01和P>0.05)均能不同程度的抑制3参数;与PB10mg.kg-1组比较,PB15mg.kg-1组3参数有所回升(P>0.05,P<0.05和P<0.05)。本模型参数lgAUC0-60和lgPmin与总路程具有较好的一致性(r2=1.0000和r2=0.9995,均为P<0.01)。应用地西泮进一步证实了模型的可行性,具有类似的特点;与正常组比较,地西泮2、4mg.kg-1组3参数均下降(均为P<0.01),认为两组的镇静效应与正常等同;与PB10mg.kg-1比较,地西泮2、4mg.kg-1组的3参数差异均无显著性,认为两组地西泮镇静作用与之等同。结论ICR小鼠累积周边活动时间占比模型可用于评价小鼠自发活动及药物干预效果。     

雌酮芳杂环腙化合物的合成及抗肿瘤活性评估

目的设计合成某些雌酮芳杂环腙类化合物,并进行体外抗肿瘤活性测试。方法以雌酮为原料,通过雌酮与水合肼反应,生成雌酮-17-肼,然后该化合物与不同的芳香醛反应,得到雌酮芳杂环腙类化合物,并采用MTT法对目标化合物进行体外抑制肿瘤细胞增殖活性实验。结果与结论设计合成了5个雌酮芳杂环腙类化合物,活性研究表明,化合物7对宫颈癌细胞He La选择性地表现出较好的抑制增殖活性,IC50值为12.1μmol·L-1(顺铂的IC50值为10.1μmol·L-1)。