SNP-9对鱼藤酮所致帕金森病细胞模型的作用及机制研究

本文研究SNP-9对帕金森病（Parkinson’s disease, PD）细胞模型的作用和机制。使用鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型;通过MTT法检测鱼藤酮和SNP-9对细胞活力的影响;Hoechst/PI双染法检测鱼藤酮和SNP-9对细胞凋亡的影响;DCFH-DA探针检测鱼藤酮和SNP-9对细胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平的影响;Western blot检测鱼藤酮和SNP-9对酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase, TH）、α-突触核蛋白（α-synuclein, α-syn）、Bcl-2、Bax蛋白水平的影响。研究结果显示,SNP-9能够缓解鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞活力、TH和α-syn水平、细胞凋亡、ROS水平,以及细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的异常。研究结果提示SNP-9可能通过调控凋亡相关通路,进而缓解鱼藤酮导致的神经细胞损伤。     

瘦素减轻6-羟基多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的探讨瘦素对6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）所诱导的人神经母细胞瘤细胞（SH—SY5Y）凋亡的抑制作用。方法建立6-OHDA诱导的SH—SY5Y细胞损伤模型,用瘦素进行干预,采用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,LDH法检测细胞损伤,台盼蓝检测细胞死亡率,流式细胞术检测细胞凋亡率,并用免疫荧光检测activecaspase-3的荧光强度,Westernblot检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果成功建立了6-OHDA诱导的SH—SY5Y细胞损伤模型。在模型的基础上,瘦素干预后,细胞凋亡率降低约15％,细胞存活率提高约14％,细胞损伤降低率和死亡率,activecaspase-3的浓度下降,Bcl～2／Bax的比值显著提高（P〈0．05）。结论瘦素对6-OHDA诱导的SH—SY5Y细胞凋亡具有一定的抑制作用,这对瘦素可能参与帕金森病的保护作用提供了证据。     

氯化钴诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤作用的研究

目的探讨氯化钴(Co Cl2)诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤的作用及相关机制。方法用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察不同浓度Co Cl2对SH-SY5Y细胞生长情况影响;ELISA法检测细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3及缺氧相关蛋白HIF-1α的表达情况。结果 Co Cl2可以诱导SH-SY5Y细胞损伤,并呈现浓度和时间依赖性;Co Cl2作用于SH-Y5Y细胞导致HIF-1α、Caspace-3和Bax的表达增多(P<0.05),Bcl-2表达减少(P<0.01)。结论 Co Cl2诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤与上调HIF-1α表达、促进细胞凋亡有关。     

FGF21对鱼藤酮导致神经细胞损伤的作用及其机制

采用鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞损伤建立帕金森病样病变细胞模型，探讨成纤维细胞生长因子21（fibroblast growth factor 21，FGF21）对其作用及机制。以不同浓度的FGF21对鱼藤酮诱导的神经细胞损伤模型进行干预，MTT法检测神经细胞活性；采用Annexin V-FITC/PI双染法分析神经细胞凋亡情况；Western blot检测FGF21及鱼藤酮对神经细胞酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）和α-突触核蛋白（α-synuclein，α-syn）表达的影响；采用DCFH-DA荧光探针检测FGF21及鱼藤酮对神经细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平的作用。结果显示：FGF21能够减少鱼藤酮致神经细胞的损伤，抑制神经细胞凋亡，缓解鱼藤酮引起的神经细胞TH和α-syn水平的异常，同时降低神经细胞内异常ROS水平，提示FGF21可能通过调控氧化应激进而缓解鱼藤酮导致的神经细胞损伤。     

利福平对鱼藤酮诱导的神经细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用

目的 探讨利福平对鱼藤酮所诱导的人多巴胺能神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用.方法 采用100 nmol/L鱼藤酮作用SH-SY5Y细胞24 h,建立SH-SY5Y细胞凋亡模型;再用100、200、300 μmol/L不同浓度的利福平进行干预,采用MTT比色法检测细胞活性,采用流式细胞术(FCM)及原位缺口末端标记染色法(TUNEL)检测细胞凋亡, Western blot法检测前凋亡蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的表达水平.结果 用100 nmol/L鱼藤酮作用SH-SY5Y细胞24 h,能够诱导该细胞产生凋亡并降低其活性;利福平干预后,鱼藤酮所诱导的SH-SY5Y细胞凋亡被抑制,并且这一抑制作用与利福平浓度有明显的剂量-效应关系;而且利福平干预后能降低GAPDH蛋白的表达水平.结论 利福平对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有明显的抑制作用,这一抑制作用可能是通过下调GAPDH蛋白的表达而得以实现.     

Tideglusib 对MPP+ 诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡的保护作用及其机制研究

目的：研究特异性GSK-3β抑制剂Tideglusib 对1- 甲基-4- 苯基- 吡啶离子（1-methyl-4- phenylpyridinium ion,MPP+）诱导SH-SY5Y 神经细胞凋亡的保护作用及其可能的作用机制。方法：通过MPP+ 诱导SH-SY5Y 细胞凋亡建立体外帕金森病细胞模型,采用MTT 筛选出对SHSY5Y起保护作用的Tideglusib 有效浓度;采用免疫化学染色方法检测Tideglusib 对SH-SY5Y 的神经保护作用;分别采用Hoechst33258 核染方法和流式细胞仪检测Tideglusib 的抗凋亡作用;通过Western-blot 检测经Tideglusib 处理后,SH-SY5Y 细胞中与神经元凋亡密切相关的磷酸化 tau蛋白（p-tau）及其上游激酶磷酸化糖原合成激酶（p-GSK-3β）的表达水平。结果：300 μmol·L-1 的MPP+ 处理SH-SY5Y 细胞48 h 构建体外帕金森细胞模型,通过MTT 及免疫化学染色方法筛选Tideglusib 的有效保护浓度发现5 μmol·L-1 的Tideglusib 可对SH-5Y 细胞产生保护作用,细胞存活率与MPP+ 处理组相比差异具有统计学意义（P<0.01）;通过Hoechst33258 和流式细胞仪发现MPP+ 可导致SH-SY5Y 产生凋亡,5 μmol·L-1 的Tideglusib 可有效改善SH-SY5Y 的凋亡情况,差异具有统计学意义（P<0.01）;Western-blot 结果显示MPP+ 可引起 GSK-3β的活化并诱导 tau 的异常磷酸化;而Tideglusib 可下调 GSK-3β的活性,降低磷酸化 tau 的水平（P<0.05）。结论：Tideglusib可抑制MPP+ 引起的SH-SY5Y 神经细胞凋亡,作用机制可能是通过抑制GSK-3β从而降低tau 蛋白的磷酸化水平,进一步发挥神经元保护作用。     

消栓通络有效成分组对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺损伤的影响

目的研究消栓通络有效成分组(XECG)对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,将细胞随机分为正常组、氧糖剥夺模型组和XECG组(1、3、10mg·L-1),建立体外OGD/R细胞模型。倒置显微镜观察细胞形态;MTT法测定细胞存活率;酶标法试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果与模型组相比,XECG能明显改善OGD/R引起的SH-SY5Y细胞的损伤,提高细胞存活率(P<0.05),减少LDH的释放量(P<0.05),能提高缺糖缺氧神经元Bcl-2/Bax比值。结论 XECG对OGD/R引起的SH-SY5Y细胞损伤有保护作用,其机制可能与影响凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达有关。     

稳定表达β-synuclein的SH-SY5Y细胞株的构建

【摘要】 目的 构建稳定表达β-synuclein的SH-SY5Y细胞株。方法 利用脂质体转染技术将质粒pcDNA3.1-β-synuclein转染SH-SY5Y细胞,通过Zeocin进行抗性筛选。采用原位免疫荧光、免疫组织化学染色及Western杂交检测β-synuclein在SH-SY5Y细胞中的表达情况;通过MTT比色法检测β-synuclein稳定表达对SH-SY5Y细胞增殖的影响。 结果 原位免疫荧光、免疫组织化学染色及Western检测结果显示β-synuclein在SH-SY5Y细胞中的表达水平较对照组明显升高; 稳定表达β-synuclein的细胞增殖程度较对照组明显增高（P<0.05）。结论 β-synuclein在SH-SY5Y细胞中稳定表达,对细胞具有明显的保护作用。这为进一步研究β-synuclein对帕金森病发病神经保护作用的研究奠定了良好的基础。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对稳定表达淀粉样前体蛋白的SH-SY5Y细胞抗炎抗凋亡作用研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)对稳定表达淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的SH-SY5Y细胞抗炎抗凋亡的保护作用.方法 将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组(稳定表达APP的细胞)和EGCG组(APP+10、20、30 μmol/L的EGCG).免疫荧光细胞化学法观察APP在各组细胞中表达;MTT法检测细胞存活能力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3表达;ELISA法测定IL-6和TNF-α浓度.结果 模型组中,APP高表达;与模型组比较,给予20 μmol/L EGCG的EGCG组明显提高SH-SY5Y细胞的存活率,减少细胞凋亡数目,下调Bax/Bcl-2比例及Caspase-3 mRNA表达,减少IL-6和TNF-α浓度.结论 EGCG对稳定表达APP的SH-SY5Y细胞有一定保护作用,可能是通过抗炎以及减少细胞凋亡发挥治疗作用.     

藁本内酯预处理对Aβ25-35诱导人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用

目的探讨藁本内酯(Z-ligustilide,LIG)对β淀粉样蛋白(Aβ)25-35引起的人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用。方法 0.1、1.0、2.5、5.0μg/mL LIG作用于SH-SY5Y细胞,24h后以50μmol/LAβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立阿尔茨海默病体外模型,MTT法检测细胞活性,Western blot法检测细胞中凋亡蛋白含量。结果经Aβ25-35处理后,细胞存活率下降,细胞内凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8表达上调,但Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.05)。细胞经过LIG一定浓度预处理,细胞存活率提高,凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8蛋白表达下降,Bcl-2表达上升(P均<0.05)。结论 LIG具有对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞毒性的保护作用,其机制可能是抑制Aβ诱导的细胞凋亡。     

瘦素抑制冈田酸诱导的SH-SY5Y细胞Cdk5的表达

目的探讨瘦素（1eptin）与阿尔茨海默病的联系。方法将人神经纤维母细胞瘤细胞系（SH—SY5Y）分为3组：对照组、冈田酸（okadaic acid,OA）损伤模型组（40nmol／LOA诱导12h）和Leptin处理组。用OA诱导SH—SY5Y,建立阿尔茨海默病细胞模型。Leptin处理组是在模型组基础上,给予外源性leptin（0．4仙g／m1）处理6h,用WesternBlot检测细胞周期依赖性蛋白激酶5（Cdk5）和β-actin蛋白表达水平。瘦素受体（ObR）和Cdk5的共定位情况用双重免疫荧光染色检测。结果模型诱导成功后,Westel33 Blot显示Cdk5表达明显升高（p〈0．01）;给予leptin后,Cdk5蛋白表达显著降低（p〈0．01）。双染法免疫荧光实验表明,SH—SY5Y细胞中ObR和Cdk5蛋白均主要在细胞质中表达,并且红色和绿色标记重叠为橙色荧光,可认为两种蛋白共定位,提示ObR和Cdk5之间可能存在相互作用。结论Leptin能够在体外降低阿尔茨海默病相关的Cdk5表达,为其治疗提供了新靶点。     

胰岛素对APPsw细胞内tau蛋白磷酸化的影响及其机制研究

目的 采用过度表达APPsw基因的SH-SY5Y细胞（APPsw细胞）,体外观察不同浓度的胰岛素对APPsw细胞内tau蛋白磷酸化的影响.方法 应用Western blot技术检测APPsw细胞内tau蛋白磷酸化的表达;应用免疫荧光双标与共聚焦激光扫描显微镜检测APPsw细胞内p-GSK-3β和p-tau的共表达.结果 Western blot结果显示,与对照组相比,1 000 nM的胰岛素使APPsw细胞内Thr231和Ser396位点上的tau蛋白磷酸化表达水平分别降低到（68.91±13.55）和（45.53±22.16） （P＜ 0.05）;共聚焦显微镜检测结果显示p-tau和p-GSK-3β主要分布于细胞质中,而且在APPsw细胞中二者的表达有一定关系.结论 胰岛素抑制APPsw细胞内tau蛋白的过度磷酸化,其机制可能与GSK-3β蛋白活性减小有关.     

补阳还五汤对氧化应激诱导心肌细胞凋亡及5-LOX表达的影响

目的探讨补阳还五汤对氧化应激诱导乳鼠心肌细胞凋亡及5脂氧合酶(5-LOX)表达的影响。方法 SD乳鼠心肌细胞原代培养,不同剂量补阳还五汤预处理24 h后过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞氧化损伤。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,Western-blot检测5脂氧合酶(5-LOX)、Bax和Bcl-2的表达。结果 MTT结果显示,与对照组及补阳还五汤组比较,H2O2组心肌细胞活力显著降低(P0.01);与H2O2组相比,补阳还五汤组心肌细胞活力显著提高(P0.01)。流式细胞仪分析显示,H2O2组心肌细胞凋亡率为(19.47±1.31)%,明显高于对照组的(1.36±2.30)%,差异有统计学意义(P0.01);补阳还五汤低、中、高剂量组的细胞凋亡百分率分别为(13.25±2.84)%、(11.50±3.43)%、(9.94±4.01)%,明显低于H2O2组(19.47±1.31)%,差异有统计学意义(P0.01)。Western-blot结果显示,H2O2组心肌细胞Bcl-2蛋白表达比对照组及补阳还五汤组减少,5-LOX及Bax蛋白表达比对照组及补阳还五汤组高,差异均有统计学意义(P0.01)。不同剂量的补阳还五汤组Bcl-2蛋白表达高于H2O2组,5-LOX及Bax蛋白表达比H2O2组少(P0.01)。结论补阳还五汤能显著抑制氧化应激诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,并且呈剂量依赖性,补阳还五汤抑制心肌细胞凋亡的作用可能与抑制5-LOX表达有关。     

丙烯酰胺对SH-SY5Y神经细胞凋亡和 miR-21表达的影响

目的:探讨丙烯酰胺(AA)对人SH-SY5Y神经细胞凋亡和miR-21表达的影响?方法:不同浓度丙烯酰胺作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定丙烯酰胺对SH-SY5Y细胞活力的影响,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡,real-time PCR检测miR-21表达水平,Western blot检测PTEN?p-AKT?AKT?Bcl-2?Bax?caspase 9 和caspase 3蛋白表达?结果:丙烯酰胺剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活性,Hoechst 33258染色显示明显细胞凋亡形态变化;丙烯酰胺显著降低SH-SY5Y细胞miR-21的表达,同时升高PTEN?Bax?caspase 9?caspase 3水平并降低p-AKT和Bcl-2表达?结论:丙烯酰胺可通过线粒体途径诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡,其机制可能与丙烯酰胺引起miR-21表达下调有关?     

乌司他丁对失血性休克大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的观察乌司他丁（UTI）对失血性休克大鼠肾脏细胞凋亡的影响。方法将30只成年雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、休克组和UTI组,每组10只。建立失血性休克大鼠模型,于再灌注后6h取血,测定血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的含量。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口端标记法检测细胞凋亡指数（AI）,免疫组化法测定肾小管上皮细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与对照组比较,大鼠失血性休克再灌注6h后,休克组和UTI组血清BUN、Cr含量显著升高（均P〈0．01）。与休克组比较,UTI组的血清BUN、Cr含量显著降低（均P〈0．05）。与对照组比较,休克组和UTI组AI值、Bax、Bcl-2蛋白表达均显著升高（均P〈0．01）,休克组Bcl-2／Bax显著降低（P〈0．01）,UTI组Bcl-2／Bax显著升高（P〈0.01）。与休克组比较,UTI组AI显著降低（P〈0．05）,Bax蛋白表达显著减弱（P〈0．05）,Bcl-2蛋白表达显著增强（P〈005）,Bcl-2／Bax比值显著升高（P〈0．01）。结论大鼠失血性休克再灌注后,肾功能下降,肾脏细胞凋亡增加。UTI对失血性休克大鼠肾脏有一定的保护作用。通过调节Bcl-2和Bax蛋白表达抑制。肾脏细胞凋亡是其可能的机制之一。     

依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注海马细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的观察依达拉奉预处理对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及bcl-2、Bax表达的影响。方法将45只健康雄性sD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉预处理组,各15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血再灌注前12h,预处理组给予依达拉奉3mg／kg,对照组给予等量生理盐水分别腹腔注射。脑缺血再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法及原位细胞凋亡检测脑缺血再灌注后海马组织bcl-2、Bax表达及凋亡细胞。结果依达拉奉预处理组术后24h原位末端标记（TUNEL）、bcl-2、Bax阳性细胞明显增加,与假手术组比较差异有显著性（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hTUNEL、Bax阳性细胞数明显少于对照组（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hbcl-2阳性细胞数较对照组明显增加（P〈0．01）。结论凋亡机制参与了脑缺血再灌注后继发性损伤的过程,依达拉奉可能通过上调bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减轻脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤应激耐受性保护和神经损伤起保护作用。     

松果菊苷对MPP＋诱发的线粒体碎片化、自噬及细胞凋亡的影响

目的：观察松果菊苷对1-甲基-4-苯基吡啶（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP＋）引起的SH-SY5Y细胞线粒体碎片化、自噬及细胞凋亡的影响。方法：通过MPP＋诱导SH-SYSY细胞线粒体损伤及细胞凋亡,并设对照组,松果菊苷低、中、高剂量组;比较SH-SY5Y细胞线粒体的形态;检测细胞线粒体膜电势的变化及线粒体自噬;观察细胞凋亡的改变。结果：MPP＋可引起SH-SY5Y细胞线粒体碎片化,线粒体膜电势显著下降,线粒体自噬及细胞凋亡增加。低、中、高剂量松果菊苷都能明显抑制MPP＋诱导的线粒体膜电势下降,使线粒体自噬及细胞凋亡增加（P〈0．05）,高、中剂量组的效应比低剂量组的更好。然而,松果菊苷三个剂量组对MPP＋诱导的线粒体碎片化都没有明显效应。结论：松果菊苷可以减轻MPP＋诱发的SHSY5Y细胞线粒体损伤和细胞凋亡,但对线粒体形态变化没有显著影响。     

甘氨双唑钠对人神经母细胞瘤细胞株SH—SY5Y放射敏感性的影响

目的探讨甘氨双唑钠（CMNa）在常氧和缺氧条件下对人神经母细胞瘤细胞株（SH—SY5Y）放射敏感性的影响。方法在常氧和缺氧条件下,以不同浓度的CMNa处理SH—SY5Y,CCK-8法检测细胞存活率为50％时的药物浓度（IC50）及其95％可信区间Ic,。（95％CI）。在常氧和缺氧条件下,分别给予0、1、2Gy单次吸收剂量照射经1mmol／LCMNa处理的SH—SY5Y（CMNa组）和未经CMNa处理的SH—SY5Y（对照组）,观察克隆形成情况,流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率,Westernblotting分析细胞周期和凋亡相关蛋白的表达变化。结果常氧和缺氧条件下,SH·SY5Y的IC50（95％CI）分别为3．62（3．07—4．26）和1．59（1．20—2．12）mmol／L。在常氧状态下,CMNa组克隆形成数量显著少于对照组;与常氧状态比较,缺氧状态下的克隆形成数量明显减少。在缺氧条件下,与对照组比较,CMNa组细胞凋亡率和细胞G,期比例升高,S期比例降低;促凋亡蛋白Caspase3／8／9和Bax表达增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少;细胞周期相关蛋白CyclinD1表达减少,p16表达增加。结论CMNa对缺氧状态下的SH—SY5Y有特异的放疗增敏作用。     

复方丹参滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨复方丹参滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响。方法：30只Wistar雄性大鼠随机分3组：假手术组、缺血再灌注组、复方丹参滴丸组。采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型,以缺口末端标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡程度,以链霉菌蛋白-过氧化物酶（SP）P免疫组化法检测心肌细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspsase-3蛋白的表达。结果：与假手术组比较,模型组心肌细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2和Caspsase-3基因蛋白表达明显增多（P〈0.01）;与模型组比较,复方丹参滴丸组心肌细胞凋亡指数、Bax和Caspsase-3基因蛋白表达明显减少（P〈0.01）,Bcl-2基因蛋白表达显著增多（P〈0.01）。结论：复方丹参滴丸可通 过上调Bcl-2、下调BaxCmCaspsase-3基因蛋白表达,抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡。