骨髓间充质干细胞移植膝类风湿关节炎兔:关节滑膜体积和软骨厚度的MRI评价

背景:骨髓间充质干细胞具有显著的免疫调节功能和多向分化潜能,可抑制类风湿关节炎的炎症反应,促进软骨损伤的修复。目的:用骨髓间充质干细胞治疗兔早期类风湿关节炎,运用MRI观察软骨厚度及滑膜体积的改变,评价治疗效果。方法:选取42只新西兰大白兔,用卵蛋白制造类风湿关节炎模型,造模第4周(治疗前)取6只兔行MRI和病理检查以对照,余36只兔随机分模型组和骨髓间充质干细胞治疗组,两组于治疗后1,2,3个月分别选取6只兔行MRI和病理检查。对病变膝关节的滑膜体积和软骨厚度进行MRI测量及病理学评分。结果与结论:治疗1,2,3个月,类风湿关节炎组滑膜进行性增厚,软骨厚度变薄,病理学评分增加;骨髓间充质干细胞治疗组滑膜增厚程度减轻,关节软骨厚度恢复,病理学评分减低。MRI测量数据和病理学评分有相关性。提示MRI可用于评价骨髓间充质干细胞对早期类风湿关节炎的疗效。     

骨髓间充质干细胞治疗兔膝RA模型软骨损伤的MRI评价

目的：用骨髓间充质干细胞治疗兔早期类风湿关节炎,运用MRI测量软骨厚度,观察前后改变,评价治疗效果。方法：选取42只新西兰大白兔,用卵蛋白造模,造模第4周（治疗前）取6只兔行MR和病理检查以对照,余36只兔随机分为RA模型组和BMSCs治疗组,每组18只,两组于治疗后1、2、3个月分别选取6只兔行MR和病理检查。对病变膝关节的软骨厚度进行MRI测量及病理学评分,并对数据进行统计学分析。结果：RA组经1、2、3个月后,软骨厚度变薄,病理学评分增加。BMSCs治疗组治疗1、2、3个月后,关节软骨厚度恢复,病理学评分减低。MRI测量数据和病理学评分有相关性。结论：MRI可用于评价BMSCs治疗早期类风湿关节炎关节软骨的改变。     

磁共振评价关节腔内注射骨髓间充质干细胞治疗早期骨性关节炎

背景:作者已对FS-3D-FISP序列诊断骨性关节炎做出研究评价,该序列对早期骨性关节炎的分级与病理有较好的一致性.目的:用骨髓间充质干细胞治疗兔早期骨性关节炎,运用MR观察软骨厚度及信号的改变评价治疗效果.方法:将新西兰大白兔随机分成对照组、骨性关节炎模型组和骨髓间充质干细胞组.骨髓间充质干细胞组在造模后第4周左膝关节腔内注射骨髓间充质干细胞.分别在术后第2周,1,2及3个月行膝关节核磁共振检查,每次每组随机选3只实验兔;扫描使用FS-3D-FISP序列测量膝关节软骨厚度,T2-FSE双回波序列测量T2值治疗前后改变,并取膝关节标本行病理观察进行Mankin's评分,评价兔膝关节骨性关节炎治疗的效果.结果与结论:与骨性关节炎组相比,骨髓间充质干细胞组MRI示关节软骨厚度接近正常,T2值减低,无关节腔积液.提示MR显示膝关节软骨厚度及信号的改变可用于评价骨性关节炎治疗前后的改变.     

骨髓间充质干细胞治疗早期骨性关节炎软骨T2值及相关因子的表达

背景：血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β作为炎症递质,其水平与骨性关节炎病情相关。而骨髓间充质干细胞治疗骨性关节炎报道较少。目的：川骨髓间充质干细胞治疗兔早期骨性关节炎,观察关节软骨T2值及血清肿瘤坏死闪子α和白细胞介素1β水平并进行分析。方法：将36只新西兰大白兔随机均分成对照组、模型组和治疗组。模型组兔仅建立骨性关节炎模型,治疗组在造模后笫4周左膝关节腔内注射骨髓间充质干细胞;对照组膝关节腔内注射等量生理盐水。分别在治疗后第2周,1,2,3个月行左后膝关节核磁共振及血消肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β水平检查。结果与结论：与模型组比较,治疗组T2值降低,无关节腔积液;血清肿瘤坏死因了α和白细胞介素1β水平降低：软骨T2值变化与二者呈正相关。MRI能够反映早期关节软骨的生物学改变,可用于评价骨性关节炎治疗前后的改变：骨髓间充质干细胞在关节腔内可向软骨分化,为早期骨性关节炎患者提供了一种新的有效疗法。     

Flk-1＋骨髓间充质干细胞移植上调白细胞介素6水平：是否同时加重了胶原诱导性关节炎小鼠的症状？

背景：间充质干细胞的免疫调节作用是被大家普遍认可的,在以往实验中也对Flk-1＋骨髓间充质干细胞体外抑制T/B淋巴细胞增殖的能力进行了确认。目的：验证Flk-1＋骨髓间充质干细胞对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用。方法：健康10周龄雄性DBA-1（H-2Kq）小鼠18只,随机分为3组：初次免疫后细胞移植组、加强免疫后细胞移植组、模型对照组,3组小鼠均通过尾皮下注射牛Ⅱ型胶原进行初次免疫,21d后同法进行加强免疫,建立胶原诱导性关节炎模型。密度梯度离心法和贴壁筛选法体外分离DBA-1（H-2Kq）小鼠Flk-1＋骨髓间充质干细胞,初次免疫后细胞移植组小鼠在初次免疫后立即经尾静脉输注Flk-1＋骨髓间充质干细胞（1～2）×106个/只,加强免疫后细胞移植组小鼠在加强免疫时同法输注等量Flk-1＋骨髓间充质干细胞,模型对照组小鼠于初次免疫后0或21d尾静脉输注等量生理盐水。观察初次免疫后和加强免疫后各组小鼠的爪垫增厚情况、临床评分,检测小鼠关节病理学变化及血清因子质量浓度的动态变化。结果与结论：与模型对照组比较,初次免疫后细胞移植组爪垫增厚程度及平均临床疾病得分均无明显差异（P0.05）,均可见明显的滑膜组织损伤和炎症细胞浸润,各血清细胞因子质量浓度基本相似;而加强免疫后细胞移植组爪垫明显增厚（P0.01）,平均临床疾病得分高达3.35分,滑膜损伤严重,毛细血管增生,在初次免疫后28d白细胞介素6血清浓度急剧上升（P0.1）,初次免疫后35d白细胞介素6血清浓度又明显下降（P0.1）。提示在胶原诱导性关节炎小鼠模型中,Flk-1＋骨髓间充质干细胞移植不但未取得预期的治疗效果,还在加强免疫后细胞移植组观察到显著地关节炎症状恶化现象,其可能通过上调白细胞介素6血清浓度加重类风湿关节炎小鼠的行为症状。     

Flk-1~+骨髓间充质干细胞移植上调白细胞介素6水平:是否同时加重了胶原诱导性关节炎小鼠的症状?

背景:间充质干细胞的免疫调节作用是被大家普遍认可的,在以往实验中也对Flk-1~+骨髓间充质干细胞体外抑制T/B淋巴细胞增殖的能力进行了确认.目的:验证Flk-1~+骨髓间充质干细胞对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用.方法:健康10周龄雄性DBA-1(H-2K~q)小鼠18只,随机分为3组:初次免疫后细胞移植组、加强免疫后细胞移植组、模型对照组,3组小鼠均通过尾皮下注射牛Ⅱ型胶原进行初次免疫,21 d后同法进行加强免疫,建立胶原诱导性关节炎模型.密度梯度离心法和贴壁筛选法体外分离DBA-1(H-2K~q)小鼠Flk-1~+骨髓间充质干细胞,初次免疫后细胞移植组小鼠在初次免疫后立即经尾静脉输注Flk-1~+骨髓间充质干细胞(1～2)×10~6个/只,加强免疫后细胞移植组小鼠在加强免疫时同法输注等量Flk-1~+骨髓间充质干细胞,模型对照组小鼠于初次免疫后0或21 d尾静脉输注等量生理盐水.观察初次免疫后和加强免疫后各组小鼠的爪垫增厚情况、临床评分,检测小鼠关节病理学变化及血清因子质量浓度的动态变化.结果与结论:与模型对照组比较,初次免疫后细胞移植组爪垫增厚程度及平均临床疾病得分均无明显差异(P > 0.05),均可见明显的滑膜组织损伤和炎症细胞浸润,各血清细胞因子质量浓度基本相似;而加强免疫后细胞移植组爪垫明显增厚(P < 0.01),平均临床疾病得分高达3.35分,滑膜损伤严重,毛细血管增生,在初次免疫后28 d白细胞介素6血清浓度急剧上升(P < 0.1),初次免疫后35 d白细胞介素6血清浓度又明显下降(P < 0.1).提示在胶原诱导性关节炎小鼠模型中,Flk-1~+骨髓间充质干细胞移植不但未取得预期的治疗效果,还在加强免疫后细胞移植组观察到显著地关节炎症状恶化现象,其可能通过上调白细胞介素6血清浓度加重类风湿关节炎小鼠的行为症状.     

兔自体骨髓间充质干细胞移植覆盖骨膜修复关节软骨缺损:与单纯骨膜覆盖及空白对照的比较

背景：目前软骨缺损主要通过自体软骨移植来治疗，患者不易接受。随着组织工程的兴起，间充质干细胞成为研究的焦点。多数学者认为动态应力、低氧环境和一些生长因子是骨髓间充质干细胞向软骨方向分化的有利因素，这使人自然地想到关节腔微环境。目的：建立一种骨髓间充质干细胞的分离培养方法，将自体骨髓间充质干细胞移植于兔关节软骨损伤区并用骨膜覆盖，建立关节腔微环境，观察损伤修复的效果。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2005—07／200707在山西医科大学第二医院骨科实验室完成。材料：选用24只新西兰大白兔，制备全层关节软骨损伤模型。方法：采集兔骨髓间充质干细胞，密度梯度离心法对其进行分离纯化，体外贴壁培养扩增。将24只大白兔按随机数字表法分为3组（n=8），未诱导的骨髓间充质干细胞＋骨膜覆盖组在关节软骨缺损区植入未诱导的骨髓间充质干细胞并用骨膜覆盖；单纯骨膜覆盖组用骨膜覆盖缺损区；空白对照组不作处理。主要观察指标：分别于术后6，12周取材，观察兔软骨损伤的修复情况。结果：①白体骨髓间充质干细胞移植后6周，未诱导的骨髓间充质干细胞＋骨膜覆盖组软骨损伤区已由透明软骨样修复组织填充，术后12周软骨和软骨下骨得到良好修复，修复组织进一步改建，免疫组织化学结果证实修复组织内产生了Ⅱ型胶原。②单纯骨膜覆盖组损伤区有部分修复，基底和表面细胞成分较多。③空白对照组由纤维组织修复，但基底也可见少量软骨样细胞。结论：3组结果比较后，认为以体外培养扩增的兔骨髓间充质干细胞复合骨膜移植可促进关节软骨损伤的修复，在尚无更为完善的治疗方法出现之前，利用此法修复损伤关节软骨不失为一种有效的技术。     

滑膜间充质干细胞分离纯化后的生物学特性

背景：大量的研究报道证明滑膜间充质干细胞在细胞形态、免疫表型、集落形成能力和分化潜能等方面与骨髓间充质干细胞相似,但在向软骨分化的能力上,滑膜间充质干细胞明显优于骨髓间充质干细胞。目的：探讨滑膜间充质干细胞作为半月板软骨组织工程种子细胞的可行性。方法：通过有限稀释单克隆培养法将滑膜间充质干细胞从兔滑膜组织中分离出来并加以纯化,在体外培养条件下对其形态学、超微结构、分子表型、增殖动力学、核型以及致瘤性等进行分析。结果与结论：从兔滑膜细胞中分离纯化出滑膜间充质干细胞,体外单层培养具有极强的增殖能力,在第6天时达到生长的最高峰,倍增时间为（30．2±2．4）h。流式细胞术检测滑膜间充质干细胞表达间充质干细胞一些分子标记CD44、CD90。DNA含量检测、染色体核型分析、荷瘤实验结果表明,分离纯化的滑膜间充质干细胞是正常的二倍体细胞,无致瘤性,因此可作为半月板组织工程的种子细胞。     

类风湿性关节炎手腕关节MRI弥散加权成像与滑膜病理相关性分析

目的分析类风湿性关节炎手腕部MRI及弥散加权成像(DWI)表现,并与临床滑膜病理指标作相关性分析,探讨MRI对评估双手、腕类风湿关节炎的严重程度及临床活动性的价值。方法对15例确诊RA患者行双手MRI检查,并与临床症状和实验室检查进行相关性分析,测量DWI上滑膜ADC值,与滑膜穿刺活检的病理学指标进行相关性分析。结果 MRI滑膜炎评分、骨侵蚀评分、骨髓水肿评分及总分均与C反应蛋白(CRP)、可视化量表(VAS)有相关性;DWI的ADC值与滑膜病理评分具有负相关。结论 MRI能清楚显示RA手腕部小关节的病理改变。MRI可对RA的滑膜炎、骨侵蚀、骨髓水肿进行半定量化分级评分,MRI评分与临床指标有一定相关性,对双手、腕类风湿关节炎的活动性评估具有重要价值。DWI结合ADC值测量,可更加直接地反映病变关节的活动程度。     

软骨源形态发生蛋白基因转染自体骨髓间充质细胞修复关节软骨缺损

背景:以支架或干细胞在一定程度上能够修复软骨缺损,但是研究中发现较大块的缺损修复效果还达不到令人满意的程度.基因转染后的干细胞能够不断的释放生长因子有可能够为软骨缺损研究带来突破.目的:进一步验证软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞是否会促进体内兔软骨修复.方法:从兔骨髓内分离获得骨髓间充质干细胞,脂质体感染的方法将软骨源形态发生蛋白基因转染到骨髓间充质干细胞中.实验组移植转染后的细胞;单纯骨髓间充质干细胞组移植未转染的骨髓间充质干细胞;空白对照组缺损区不移植细胞.术后行组织学检测及组织学评分分析修复情况.结果与结论:体内修复过程中,软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞促进了软骨再生.透明软骨填充了软骨缺损区,并且深部区域显示了软骨下成骨.透明软骨的重建区域优于单纯骨髓间充质干细胞移植组.组织学评分实验组高于骨髓间充质干细胞对照组和空白组.提示转染软骨源形态发生蛋白基因的骨髓间充质干细胞能够促进和提高关节软骨的改建和修复.     

同种异体脱钙松质骨基质材料复合自体骨髓间充质干细胞修复全层关节软骨缺损

背景：到目前为止，还没有一种十分有效的方法治疗关节软骨缺损。许多治疗方法都只能缓解临床症状，而不能有效促进软骨的再生，也不能恢复软骨表面的承重功能。目的：观察脱钙骨基质复合骨髓间充质干细胞修复兔膝关节全层软骨缺损的疗效。设计、时间及地点：随机对照动物实验，分别于2005—01／03在兰州大学第二医院骨科研究所和2008-05／08在桂林医学院中心实验室完成。材料：取新西兰兔四肢骨干骺端及椎体松质骨，脱钙制备脱钙松质骨基质材料；体外分离培养同种新西兰兔骨髓间充质干细胞种植于脱钙骨基质支架上体外培养。36只新西兰兔随机分成骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨填充组（简称复合组）、同种异体脱钙骨填充组及空白对照组，每组12只。方法：在髁间窝髌面上用直径4mm的钻头钻孔深约3mm造成膝关节全层软骨缺损模型。复合组双侧股骨髁间窝软骨缺损处植入脱钙骨基质吸附体外分离培养的自体骨髓间充质干细胞复合物；同种异体脱钙骨填充组单纯植入脱钙骨基质；空白对照组不作任何植入。主要观察指标：分别于植入后4，8，12周取材进行组织学及免疫组化染色观察，根据关节软骨组织学计分标准进行评分。结果：36只新西兰兔均进入结果分析。复合组所修复组织为透明软骨样修复：而同种异体脱钙骨填充组和空白对照组为纤维性修复。植入后12周复合组大体评分及组织学评分明显低于同种异体脱钙骨填充组和空白对照组（P〈0．05）；同种异体脱钙骨填充组低于空白对照组（P〈0．05）。结论：运用软骨组织工程的原理，以脱钙骨基质为支架材料的自体骨髓间充质干细胞移植是一种修复软骨缺损的行之有效的方法。     

3D-Watsc成像动态观察兔膝骨性关节炎与病理改变的对照研究

目的：通过对照分析兔膝骨性关节炎MRI和病理分级,探讨兔膝关节骨关节炎软骨退变影像学特征的病理学基础。材料和方法：健康新西兰大白兔35只,随机分为5组,除对照组外其他动物均采用前交叉韧带切断术建立骨性关节炎模型,在术后2周、4周、6周、8周分别对另外4组进行MRI 3D-Watsc成像检查和病理学观察,组织标本行HE染色观察退变软骨的组织病理变化。结果：正常对照组兔膝关节软骨在3D-Watsc上软骨呈高信号,与周围组织对比良好。随着术后时间延长,MRI和HE显示软骨破坏日趋明显,MRI分级与病理学分级存在较好的一致性（Kappa值=0.80）。各实验组不同MRI分级间的差异有统计学意义（P<0.05）。不同分级间的两两比较发现对照组-2周组,4周组-6周组,6周组-8周组之间差异无统计学意义（P>0.05）,其余各组两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：兔膝关节软骨退变的模型随时间延长软骨退变的病理学评分和MRI分级逐渐升高,3D-Watsc序列能在早期显示软骨改变。     

超顺磁性氧化铁纳米颗粒体外标记兔骨髓间充质干细胞的安全性以及MRI成像特征

背景：传统的干细胞标记方法常需要病理组织学等侵袭性手段检测,无法动态观察整个实验过程,也不适合临床研究。目的：观察超顺磁性氧化铁纳米颗粒体外标记对兔骨髓间充质干细胞生物学特性的影响以及标记兔骨髓间充质干细胞的体外MRI成像特征。方法：采用红细胞裂解贴壁法培养扩增兔骨髓间充质干细胞。采用不同浓度超顺磁性氧化铁纳米颗粒（100,50,25,12.5mg/L）联合多聚赖氨酸（0.75mg/L）标记兔骨髓间充质干细胞。对标记兔骨髓间充质干细胞进行MRI检测,观察其成像特征。结果与结论：25mg/L的超顺磁性氧化铁纳米颗粒联合0.75mg/L多聚赖氨酸标记兔骨髓间充质干细胞具有较好的安全性和有效性。此浓度对细胞的生长活性没有影响,不影响骨髓间充质干细胞的成骨成脂分化能力。MRI扫描在T2^＊WI序列上能明显有效地显像超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记的兔骨髓间充质干细胞。     

超声引导下腔内注射雷公藤甲素纳米粒治疗兔类风湿关节炎的实验研究

目的应用超声引导下关节腔内注射雷公藤甲素纳米粒(TPN)治疗兔类风湿关节炎,探讨超声评估兔关节炎疗效的应用价值。方法选取27只健康新西兰大白兔,建立诱导类风湿关节炎模型后随机分为4组:对照组(6只)仅穿刺但不注射药物;TPN组、雷公藤甲素(TP)组和倍他米松(BS)组(每组各7只)分别于超声引导下兔膝关节腔内注射TPN、TP、BS,观察兔膝关节肿胀程度,应用超声评估兔膝关节滑膜增生、滑膜血流信号及骨侵蚀情况;分析超声指标与病理结果的相关性。结果与对照组比较,TP组、BS组和TPN组滑膜血流的超声评分均降低,骨侵蚀的超声评分和病理评分也均降低,差异均有统计学意义(均P0.05);与TP组比较,BS组和TPN组滑膜增生的超声评分和病理评分均降低,差异均有统计学意义(均P0.05);TP组、BS组和TPN组滑膜血流的超声评分和骨侵蚀的超声评分比较,差异均无统计学意义。相关性分析显示,滑膜和骨侵蚀的超声评分与其病理评分均呈正相关(r=0.832、0.859,均P0.001)。结论超声引导下关节腔内注射TPN治疗类风湿关节炎疗效好且副作用小,超声在评估治疗兔关节炎疗效中具有重要的价值。     

自体骨膜复合骨髓间充质干细胞移植修复免关节软骨缺损

背景:自体骨髓间充质干细胞及骨膜移植等方法可促进关节软骨缺损的修复,但其各自的成软骨能力有限,治疗效果欠佳.目的:观察自体骨膜复合向软骨细胞诱导的骨髓间充质干细胞移植修复软骨缺损的疗效.设计、时间及地点:随机分组对照动物实验,于2005-08/2007-03在山西医科大学第二医院骨科实验室完成.材料:6～8月龄新西兰白兔18只,按随机数字表法分为3组,即骨膜复合骨髓间充质干细胞组、单纯骨膜组及空白对照组,每组6只12个膝关节标本.方法:骨膜复合骨髓间充质干细胞组采用胰酶消化法采集骨髓间充质干细胞进行贴壁培养,加入转化生长因子β1向软骨细胞进行诱导分化,同时进行PKH-26细胞膜免疫荧光标记.在全部兔双侧股骨内侧髁造成直径3 mm,深度3 mm的全层软骨缺损,骨膜复合骨髓间充质干细胞组、单纯骨膜组取同侧胫骨上段内侧骨膜,骨膜生发层朝向骨髓腔覆盖软骨缺损,骨膜复合骨髓间充质干细胞组先期缝合3针,向缺损区注入1×109L-1骨髓间充质干细胞细胞悬液20μL,植入细胞后缝合最后1针.单纯骨膜组只进行单纯骨膜覆盖缺损处理;空白对照组只钻孔不作任何处理.主要观察指标:术后6,12周时,对缺损部位进行大体观察、组织学观察、Wakitani评分以及Ⅱ型胶原免疫组化及原位杂交检测.结果:所有缝合骨膜未发现脱落,骨膜复合骨髓间充质干细胞组6周时,软骨缺损已由透明软骨样修复组织填充,12周时修复组织进一步改建,且修复组织中细胞主要为带有PKH-26荧光标记的植入细胞.单纯骨膜组缺损区修复组织为乳白色,表面光滑稍微凹陷,与周围正常软骨组织之间界限清晰;空白对照组缺损区多数比较凹陷,或缺损部位形状不规则,周围软骨组织断裂.术后6,12周时,骨膜复合骨髓间充质干细胞组Wakitani组织学评分均优于单纯骨膜组和空白对照组(P＜0.05),单纯骨膜组的评分优于空白对照组(p＜0.05).同时,骨膜复合骨髓间充质干细胞组修复组织内细胞周围基质Ⅱ型胶原免疫组化及原位杂交染色阳性,证实修复组织内的细胞为植入细胞.结论:自体骨膜复合向软骨细胞诱导的骨髓间充质干细胞移植可形成透明软骨样修复组织修复关节软骨缺损.     

滑膜间充质干细胞修复软骨损伤：具有临床转化机制的话题

背景：软骨损伤目前仍然是临床上难以完全治愈的一大难题。近来,滑膜间充质干细胞的发现为该病变的治疗带来了新的希望。 目的：综合近几年文献探讨滑膜间充质干细胞的特性、培养条件、临床前及临床研究等关于软骨修复的研究进展。 方法：应用计算机检索1993年1月至2013年5月PubMed数据库和SpringerLink数据库中的相关文章,检索词为＂synovial mesenchymal stem cells, cartilage repair＂,并参阅其他相关的著作及高影响因子的相关文献. 结果与结论：最终纳入符合标准的文献37篇。滑膜间充质干细胞较之其他间充质干细胞具有更强的增殖、集落形成和软骨化能力。骨关节炎、类风湿关节炎等疾病可影响其细胞特性。已有大量文献集中于其体外细胞培养及动物体内细胞移植方面的研究。然而,该治疗方法的研究尚处于初步阶段。关于其细胞鉴别特性、理想培养条件及高质量临床研究方面的报道仍相当缺乏。总而言之,尽管研究有待深化,滑膜间充质干细胞仍不失为一种未来修复软骨损伤领域有前景的细胞资源。     

兔骨髓间充质干细胞体外培养定向诱导分化为软骨细胞

背景：骨髓间充质干细胞具有分化为骨、软骨、肌腱、脂肪等组织的多分化潜能。目的：体外培养兔骨髓间充质干细胞并定向诱导分化为软骨细胞,探讨体外诱导分化为软骨的方法和条件。方法：取兔股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,碱性成纤维生长因子体外培养后,取第3代细胞在培养基中添加不同质量浓度转化生长因子β1的软骨分化诱导剂,2周后倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色,RT-PCR技术检测Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达。结果与结论：可以从兔骨髓中培养出骨髓间充质干细胞,碱性成纤维生长因子能明显的促进骨髓间充质干细胞增殖。经软骨诱导分化后骨髓间充质干细胞呈软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达阳性。10μg/L的转化生长因子β1诱导成软骨分化能力最强。     

壳聚糖-胶原凝胶复合骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的组织学变化

背景:大块软骨损伤目前临床上尚无方法治疗,干细胞技术出现后为解决这一难题提供了理论支持.采用新型的支架材料"壳聚糖-胶原蛋白"结合干细胞诱导分化移植给动物模型是一种较新的尝试.目的:观察壳聚糖-胶原凝胶复合骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的组织学变化.方法:体外培养扩增兔骨髓间充质干细胞.采用软骨诱导分化培养基对P2代细胞进行成软骨诱导.同时制备"壳聚糖-胶原蛋白"支架和兔关节软骨缺损模型.缺损用含有骨髓间充质干细胞的壳聚糖-胶原凝胶填充,另一条关节用没有细胞的支架或不做处理.其中12个关节作为实验组(接受骨髓间充质干细胞+支架),8个关节作为空白对照组(不做处理),8个关节作为单纯支架组(未植入细胞).造模后于2,4,8,16周进行组织学评分并处死动物行组织学染色.结果与结论:造模后16周移植的细胞一致分化为软骨细胞,大部分软骨缺损区被新生软骨修复,组织学评分实验组关节修复良好.提示应用骨髓间充质干细胞结合"壳聚糖-胶原蛋白"复合物可以修复关节软骨缺损.     

兔膝关节类风湿关节炎模型MR不同序列的表现与病理变化

目的 观察兔膝关节类风湿关节炎(RA)模型建立过程中各阶段不同序列的MRI表现与病理变化.方法 14只健康新西兰大白兔随机分成五组,采用卵蛋白诱导建立RA模型,分别于注药后1、2、4、6及8周行MR和病理检查.采用FS-3D-FISP、FS-3D-FLASH序列平扫和增强MR扫描.结果 第一阶段MRI表现为关节腔积液,与大体标本相符合.第二、三阶段MRI表现为滑膜增厚和软骨的破坏,与病理检查相一致(Kappa值>0.75).结论 MRI能够显示兔膝关节RA模型早中期的病理变化.     

兔激素性股骨头坏死模型骨髓间充质干细胞的培养

背景：自体干细胞移植治疗已经成为目前组织工程和再生医学研究的重点。但对于兔激素性股骨头坏死模型自体骨髓移植中骨髓间充质干细胞的体外培养研究鲜有报道。目的：抽提兔激素性股骨头坏死模型的骨髓间充质干细胞,并行体外扩增和表型鉴定。方法：取成年大耳白兔10只,对照组2只不给任何药物;模型组8只每周2次臀肌注射甲基强的松龙8mg/kg制备兔激素性股骨头坏死模型。体外分离培养骨髓间充质干细胞;应用流式细胞仪分别检测第4代骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD34、CD44的表达。结果与结论：经过大量激素作用后,MR灌注成像及病理切片结果显示兔激素性股骨头坏死模型组造模成功。模型组原代骨髓间充质干细胞4h内仅有少量细胞贴壁,12d左右细胞铺满瓶底的85%-90%,传代培养生长良好;第4代骨髓间充质干细胞生长曲线呈典型S型,第4-7天处于高速增殖期,与对照组生长曲线相近;经流式细胞术鉴定,第4代骨髓间充质干细胞表面抗原CD34表达呈阴性,CD29,CD44表达呈阳性,证明所培养的细胞为较纯的骨髓间充质干细胞。提示兔激素性股骨头坏死模型的骨髓间充质干细胞具有较强的生长和增殖能力,可用于干细胞标记及进一步自体移植治疗。