胃癌患者外周血中调节性T细胞和CTLA-4的表达及临床意义

目的 研究胃癌患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)和共刺激分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4,CD152)的表达水平,并探讨细胞频数的变化与肿瘤临床分期的相关性,从而探讨在胃癌肿瘤免疫过程中Treg细胞对免疫效应细胞的调节作用,共刺激通路是否异常及其在胃癌的发病机制中的作用.方法 用流式细胞仪检测49例胃癌患者外周血淋巴细胞表面的CD152及CD4+ CD25+调节性T细胞的表达,并与健康对照组及胃良性肿瘤组作比较.结果 胃癌患者外周血中CD4+ CD25+和CD3+CD152+水平显著增高,高于健康对照组及良性肿瘤组;胃癌临床分期越晚CD4+CD25+和CD3+ CD152+水平越高,在临床Ⅰ、Ⅱ期患者与临床Ⅲ、Ⅳ期患者之间存在显著差异,统计学有显著差异.结论 胃癌患者外周血淋巴细胞高表达CTLA-4分子,Treg细胞的数量较正常人明显增高,影响了T细胞彻底清除肿瘤细胞,从而使肿瘤逃避机体的免疫监视、与胃癌的发病有关.     

CD28／CD152：CD80／CD86分子在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞上的表达

目的探讨共刺激分子CD28／CD152：CD80／CD86在强直性脊柱炎（AS）患者外周血淋巴细胞上的表达及与免疫功能的关系。方法流式细胞仪检测AS患者及健康体检者T细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD19的表达及CD28／CD152和CD80／CD86在外周血T、B淋巴细胞上的表达水平；采用速率散射比浊法、酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM及C-反应蛋白（CRP）和白细胞介素-6（IL-6）水平。结果CD3^＋CD4^＋T细胞及CD4^＋／CD8^＋比值明显高于健康对照组（P〈0．05），而CD3^＋CD8^＋T细胞则明显低于健康对照组（P〈0．05）；CD4^＋和CD8^_T细胞上CD28和CD19^＋B细胞上CD80、CD86的表达均较健康对照组增高（P〈0．05），而CD152在CD4^＋T淋巴细胞上的表达也比健康对照组显著增加，但在CD8%＋T淋巴细胞上的表达却显著降低（P〈0.05）；血清IgG、IgA及CRP、IL-6水平均较健康对照组显著增高（P〈0．05）。结论AS患者外周血淋巴细胞CD28／CD152：CD80／CD86分子的异常表达与其免疫功能紊乱有密切关系。     

共刺激分子CD28和B7在胃肠道肿瘤的表达

目的 检测胃肠道肿瘤患者外周血中CD28^＋T细胞数量及原代细胞表面B7表达水平,以探讨胃肠道肿瘤患者共刺激通路是否异常。方法 采用流式细胞术检测胃肠道肿瘤患者外周血中CD28^＋T细胞与胃肠道肿瘤患者原代细胞B7分子表达,并与胃肠道良性疾病进行比较。结果 胃肠道肿瘤患者CD28^＋T细胞数明显低于对照组（P〈O．01）;其原代细胞表面B7-1、B7-2表达水平低于对照组（P〈O．01）。结论胃肠道肿瘤患者外周血T细胞低表达CD28分子,胃肠道肿瘤细胞低表达B7分子,从而影响B7-CD28共刺激通路,使T细胞不能有效地清除肿瘤。     

骨髓增生异常综合征CD3^＋CD4^＋T细胞共刺激分子表达的研究

本研究检测骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes，MDS）CD3^＋CD4^＋T细胞共刺激分子的表达，为进一步探讨MDS发病机制积累信息。以38例初治MDS患者为研究对象，依据FAB分型将他们进一步划分为RA／RARS、RAEB／RAEB-t组；以11例献血员为正常对照，应用流式细胞术检测两组外周血CD3^＋CD4^＋T细胞共刺激分子CD28、CD154、CTLA-4、PD-1、CD25的表达。结果表明：MDS组CD28表达下降，CD154升高，CTLA-4、PD-1、CD25表达明显升高。随着疾病恶性程度的增高，RAEB／RAEB-t组CTLA-4、PD-1的表达以及CTLA-4／CD28比值亦较RA／RARS组升高。结论：MDS患者CD3^＋CD4^＋T细胞共刺激分子表达存在异常改变，其表达异常可能在MDS的发病机制中起一定作用。     

胃癌患者B7-CD28共刺激通路的研究

目的　探讨胃癌患者外周血中CD28 T细胞数量和患者胃癌原代细胞表面B7的表达水平,以探讨胃癌患者共刺激通路是否异常。方法　采用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD28 T细胞与胃癌患者原代细胞B7分子的表达,并与胃良性疾病作比较。结果　胃癌患者CD28 T细胞数低于对照组(P<0. 01)。胃癌患者原代细胞表面B7 -1(CD80)、B7- 2(CD86)表达水平低于对照组(P<0. 01)。结论　胃癌患者外周血T细胞低表达CD28分子,胃癌细胞低表达B7分子,从而影响B7- CD28共刺激通路,使T细胞不能有效地清除肿瘤。     

胃癌患者肿瘤组织和外周血中细胞毒性T细胞的相关性分析

目的研究胃癌患者肿瘤浸润淋巴细胞CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞数量与外周血CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞数量的相关性。方法采用流式细胞术对60例胃癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞及外周血淋巴细胞的CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞进行检测，采用直线相关分析两者的相关性。结果胃癌患者外周血淋巴细胞CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞分别为（26．13±8．17）％和（8．15±4．00）％；肿瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞分别为（36．98±15．30）％、（6．02±4．37）％。两者之间具有正相关性（r分别为0．602、0．387，P〈0．01）。结论胃癌患者外周血CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞的检测对了解患者的免疫状况具有一定的价值。     

ALL病儿T淋巴细胞CD28表达及意义

目的探讨儿童B细胞型急性淋巴细胞白血病（ALL）治疗前后外周血T淋巴细胞表面CD28的表达及临床意义。方法采用流式细胞术,检测27例初发的B细胞型AI。L病儿化疗前后外周血T淋巴细胞表面CD28的表达,其中经化疗后达到完全缓解（cR）21例,未缓解（NR）6例。以同期23例健康体检儿童作为正常对照组。结果与正常对照组比较,治疗前初发ALL病儿外周血CD4^＋T淋巴细胞表面、CD8^＋T淋巴细胞表面CD28的表达均显著降低（t=21．56、44．02,P〈0．05）。化疗后CR组病）LPb周血CD4^＋T淋巴细胞表面、CD8^＋T淋巴细胞表面CD28较治疗前均显著升高（t=10．84、25．30,P〈0．05）,而NR组病儿CD4^＋T淋巴细胞表面、CD8^＋T淋巴细胞表面CD28与治疗前比较差异无显著性（P〉0．05）。结论CD28是参与AI。L发病的重要共刺激分子,其表达异常可能是ALL的发病因素之一;其表达水平可能是判断ALI。预后及化疗敏感性的因素之一。     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4分子表达的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4分子和CD28/CTLA-4mRNA的表达。方法研究对象为SLE患者49例(活跃期30例、缓解期19例)及对照组23例。外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)经梯度密度离心法分离后分佛波醇乙酯(PMA)(10ng/ml)及伊屋诺霉素(500ng/ml)刺激组和不加刺激剂组两组培养。将PBMCs分别培养24、48、72及96小时。应用流式细胞计量术(flow cytometry,FCM)检测外周血淋巴细胞培养前后CD28及CTLA-4分子的表达。采用RT-PCR方法检测CD28mRNA和CTLA-4mRNA的表达。结果刺激前后SLE患者CD3+及CD8+T细胞上CD28分子表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。刺激前活跃期SLE患者CD3+T细胞上CTLA-4分子表达量较对照组明显降低[(0.78±0.51)%vs(1.34±0.76)%,P<0.05]。刺激后72小时SLE患者CD3+T细胞及CD8+T细胞上CTLA-4分子表达量仍低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。刺激前后PBMCs中CD28mRNA及CTLA-4mRNA表达情况与刺激前后CD3+T细胞上CD28及CTLA-4分子变化情况相似。刺激前SLE患者CD3+T细胞上CTLA-4分子表达量与SLE活动指数(SLEDAI)呈显著的直线负相关关系(P<0.001)。结论 SLE患者T细胞CTLA-4分子存在表达及上调机制障碍,提示CD28分子及CTLA-4分子存在功能失衡,这种失衡可能通过一定的机制参与SLE的发病过程。     

CD28分子在系统性红斑狼疮患者Tc/Ts淋巴细胞上异常表达的研究

目的：研究CD28^＋、CD8^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^-淋巴细胞在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞中的表达情况.方法：应用CD3CD4CD8三标抗体和CD8CD28双标抗体对SLE患者淋巴细胞进行标记,用流式细胞仪测定CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD28^＋、CD8^＋CD28^＋和CD8^＋CD28^-淋巴细胞的表达.结果：SLE患者外周血CD3^＋淋巴细胞明显高于健康对照组（P＜0.05）.CD4/CD8T淋巴细胞比例明显倒置（P＜0.01）,CD3^＋CD8^＋淋巴细胞比健康对照组显著增加（P＜0.01）,其中以CD8^＋CD28^-的T淋巴细胞增加为主（P＜0.01）,而CD8^＋CD28^＋淋巴细胞增加不明显（P＞0.05）,SLE患者外周血CD28^＋T淋巴细胞比健康对照组明显降低（P＜0.05）.结论：SLE患者存在明显的T细胞功能失调.CD28^＋、CD8^＋CD28^＋（Tc）、CD8^＋CD28^-（Ts）T淋巴细胞在SLE的发病机制和组织损伤中起重要作用.     

幼年特发性关节炎病儿T淋巴细胞CTLA-4表达检测

目的探讨幼年特发性关节炎（JIA）病儿外周血细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪分别检测36例JIA病儿和39例健康儿童（对照组）外周血T淋巴细胞上CTLA-4表达及淋巴细胞亚群变化。结果JIA病儿CD4^＋T和CD8^＋。T细胞上CTLA-4的表达较对照组均显著增高,差异有显著性（t=27．10、26．28,P〈0．01）;CD3＋CD4^＋。T细胞较对照组显著增加,CD3＋。CD8＋T细胞较对照组显著降低,差异有显著性（t=8．01、4．47,P〈O．01）。结论JIA病儿外周血T淋巴细胞CTLA-4的表达异常可能是JIA发病的重要机制之一。     

肺癌患者围手术期免疫功能动态检测及临床价值

目的探讨肺癌患者围手术期T淋巴细胞亚群、NK细胞和可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)的动态变化其临床价值。方法应用荧光免疫法和酶联免疫吸附法(ELISA)对15例健康对照组、15例肺良性肿瘤和60例肺癌患者围手术期T淋巴细胞亚群、NK细胞和sIL-2R进行检测。结果肺癌患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞明显低于肺良性肿瘤患者和健康对照组(P<0.05),sIL-2R高于肺良性肿瘤患者和健康对照组(P<0.01);肺癌患者术后第二天的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞较术前更低(P<0.01),sIL-2R迅速降低(P<0.01),至术后7～14天除sIL-2R外其它指标恢复到术前水平(P>0.05),术后28天CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞较术前升高,sIL-2R接近术后2天水平(P>0.05);肺癌患者CD3+、CD4+水平无论早期或晚期均比正常对照组下降(P<0.05),CD4+/CD8+比值只有晚期比对照组下降(P<0.01),早期与对照组相似(P>0.05);术后28天根治性切除和姑息性切除CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞较剖腹探察组升高(P<0.01),sIL-2R明显降低(P<0.01)。结论围手术期T细胞亚群、NK细胞和sIL-2R的动态监测是反映肺癌患者免疫功能变化的客观指标,对指导患者的临床治疗有重要的参考价值。     

肾移植急性排斥反应时B7-2/CD28信号通路的表达

背景:以往动物研究表明,在器官移植急性排斥反应时共刺激分子的表达与急性排斥反应密切相关.目的:观察急性排斥反应时患者移植肾脏组织和外周血中B7-2/CD28信号通路的表达.方法:对53例同种异体肾移植患者于移植前1 d、移植后1,3,7,14,21,28 d分别取外周血以及在临床诊断急性排斥反应当天和抗排斥治疗1周后额外采血,用流式细胞仪检测共刺激分子B7-2/CD28在外周血淋巴细胞中的表达;同时,行经皮肾穿刺活检供肾修整结束时、移植后7 d、1个月、6个月、1年或以上获取活检肾脏组织,用免疫组织化学方法检测活检组织中B7-2/CD28的表达情况.结果与结论:移植后1,3 d内所有患者外周血中CD28+,CD4+/CD28+,CD8+/CD28+细胞比率均有显著下降(P < 0.05),一二周后恢复到术前水平;移植后7 d未发生急性排斥反应的患者肾脏组织B7-2阳性表达率显著上升(P < 0.05),1个月后下降至移植前水平(P > 0.05).移植后发生急性排斥反应的患者外周血CD28+,CD4+/CD28+,CD8+/CD28+细胞比率及肾脏组织B7-2阳性表达率明显上升(P < 0.05),经抗排斥治疗1周后均好转.结果证实,在肾移植后出现急性排斥反应时,肾脏组织以及外周血中共刺激分子B7-2/CD28的表达上调与急性排斥反应的发生密切相关.     

Effect of CD3+, CD4+, CD8+ T lymphocytes and CD19+ B lymphocytes on the pathogenesis of acute respiratory distress syndrome北大核心CSCD

Objective To investigate the roles of CD3+, CD4+, CD8+ T lymphocytes and CD19+ B lymphocytes on the pathogenesis of acute respiratory distress syndrome(ARDS). Methods According to Berlin definition Of ARDS in 2012, 34 patients with ARDS admitted in the Department of ICU of Central Hospital of Baoji from January, 2016 to January, 2017 were enrolled in this study as study group(ARDS group). At the same time, 22 healthy subjects were recruited as control group. Clinical data of ARDS patients were collected, and the survivors were followed up. The ARDS patients were divided into moderate group(n=20) and severe group (n=14) according to clinical settings on the first day after diagnosis of ARDS and Berlin Definition of ARDS in 2012, and at the same time they were also divided into two groups according to the outcome followed up for 28 days: non-survival group(n=14) and survival group(n=20). Sample of 3 mL peripheral venous blood of ARDS patients was collected on an empty stomach in the early morning on the first day after diagnosis of ARDS and the blood samples of healthy subjects were also collected on the first day to measure the level of CD3+, CD4+ CD8+ T cells and CD 19+ B cell in peripheral venous blood by flow cytometry. Comparison of CD3+, CD4+ CD8+ T cells and CD19+ B cell numbers were carried out between ARDS group and control group on the first day after diagnosis of ARDS, and between moderate group and severe group as well as between survival group and non-survival group. The risk factors associated with ARDS were analyzed using logistic regression analysis. Results On the first day after diagnosis of ARDS, there were significant differences in serum Lac and pre-albumin between survival group and non-survival group(P<0.05). The numbers of CD3+, CD4+ T cells and CD19+B cell of peripheral venous serum in ARDS group were significantly lower than those in control group(P<0.05), while there was no significant difference in CD8+ T cell number between ARDS group and control group (P>0.05). There were statistically significant differences in numbers of CD3+, CD4+, CD8+ T cells and CD19+B cell between moderate group and severe group and as well as between survival group and non-survival group(P<0.05). Logistic regression analysis showed that CD19+B cell (OR=0.614, 95%Cl:0.416-0.907, P=0.014) level on the first day after diagnosis of ARDS was related with the risk of prognosis of ARDS. The ROC of CD19+B cell had area under curve(AUC) of 0.907, and the cut-off value of CD19+B cell in the survival followed up for 28 day's was 12.59%. Conclusions CD3+, CD4+ CD8+T cells and CD19+B cell level of peripheral venous serum in ARDS patients can be helpful for the assess of ARDS severity of patients in the early stage, and for prognosis judgment, especially CD19+B cell is more remarkable. © 2018 Chinese Medical Association. All rights reserved.     

三阴性乳腺癌组织PD-1/PDL-1表达与肿瘤临床特征和T淋巴细胞免疫功能的相关性分析

目的探讨三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)患者肿瘤组织程序性死亡分子-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PDL-1)的表达水平,及其与肿瘤临床特征和T淋巴细胞免疫功能的相关性。方法选择2018年6月—2020年2月入我院经病理确诊的TNBC患者76例(TNBC组),非TNBC患者124例(非TNBC组),乳腺良性肿瘤50例(良性组)。分别检测3组肿瘤组织中PD-1和PDL-1表达,T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+和调节性T细胞(Treg)百分比;探讨3组PD-1和PDL-1定量表达与CD4+、CD8+和Treg百分比的相关性;分析TNBC组PD-1和PDL-1表达与肿瘤临床特征的关系。结果TNBC组PD-1和PDL-1阳性表达率和定量表达水平均明显高于非TNBC组和良性组,非TNBC组亦明显高于良性组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNBC组CD4+、CD8+和Treg百分比均明显低于非TNBC组和良性组,非TNBC组亦明显低于良性组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析发现,PD-1和PDL-1定量表达水平与CD4+、CD8+和Treg百分比呈负相关性(P<0.01)。TNBC组PD-1和PDL-1阳性表达率在肿瘤TNM分期、组织学分级和淋巴结转移方面有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论TNBC患者肿瘤组织中PD-1/PDL-1异常高表达可能与T淋巴细胞免疫功能抑制和肿瘤恶性生物学行为有关。     

CD127用于特异性识别调节性T淋巴细胞的方法建立及临床应用评价

目的 建立用膜表面标志CD4+ CD25high CD-/low127界定调节性T淋巴细胞的方法,并评价其临床应用意义.方法 五色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD127-PE/CD4-PerCP/CD25-APC/CD3-PC7抗体组合鉴定调节性T淋巴细胞,分选CD4+CD25highCD-/low127细胞鉴定Foxp3 mRNA和蛋白水平的表达情况,比较CD-/low127与Foxp3+界定调节性T淋巴细胞的相关性.用该膜表面标志分析20名健康对照者外周血及35例胃癌患者不同部位CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)细胞的分布特点及意义.结果 用CD4+CD25highCD-/low127界定调节性T淋巴细胞的Foxp3蛋白表达率为87.1%,Foxp3 mRNA高表达.用膜表面抗原CD4+CD25highCD-/low127界定调节性T淋巴细胞与CD4+CD25highFoxp3+具有相关性(r=0.985,P＜0.01).胃癌患者外周血CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为(8.67 ±3.52)%,高于健康对照组[(5.12±2.46)%,t=2.542,P＜0.05].胃癌患者腹腔积液、肿瘤浸润性淋巴细胞、癌旁淋巴结中CD4+CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血(分别为t=2.357,P＜0.05;t=6.174,P＜0.01;t=5.481,P＜0.01).胃癌Ⅰ期+Ⅱ期患者外周血CD25high CD-/low127Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为(6.04±2.31)%,Ⅲ期+Ⅳ期患者为(10.16±2.29)%,其分期差异具有显著统计学意义(t=2.473,P＜0.05).结论 CD4+CD25highCD-/low127抗体组合可用于鉴定调节性T淋巴细胞.胃癌患者CD4+CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞的比例升高,且增高程度与肿瘤临床分期相关.     

消化系肿瘤T细胞亚群NK B细胞表面抗原检测的意义

目的 了解消化系统肿瘤患者的免疫状态,探讨T细胞亚群、NK细胞、B细胞表面抗原与消化系统肿瘤的关系。方法 采用流式细胞仪分别检测34例消化系统肿瘤患者外周血T细胞亚群：CD3＋、CD4＋、CD8＋,以及CD19＋、CD16＋CD56＋的淋巴细胞百分数,其中食道癌10例,胃癌8例,肝癌6例,大肠癌10例,并与20例政党对照比较。结果 消化系统肿瘤患者CD3＋、CD4＋、CD16＋CD56＋均较正常对照组低（P＜0．05）,CD8＋高于对照组（P＜0．05）,CD19＋与正常对照无显著差异（P＞0．05）,各免疫指标在消化系统肿瘤之间无显著差异（P＞0．05）。结论 消化系统肿瘤患者细胞免疫功能普遍低下,T细胞亚群、NK细胞、B细胞表面抗原检测可作为消化系统肿瘤患者免疫功能的监测指标。     

CD28-B7共刺激通路对外周血单个核细胞移植治疗重症肌无力的作用

背景:有研究表明,CD28-B7共刺激通路与重症肌无力的发生密切相关,但在干细胞移植治疗重症肌无力过程中的作用机制至今少有报道。目的:观察CD28-B7共刺激通路在重症肌无力大鼠模型中的表达情况。方法:40只雌性Lewis大鼠等分为正常组、模型组、佐剂组和移植组。后3组大鼠腹腔注射重症肌无力患者血清制备重症肌无力模型。移植组大鼠连续5d皮下注射粒细胞集落刺激因子10μg/(kg?d)动员骨髓中造血干细胞进入外周血,颈动脉采血10mL,分离获得单个核细胞,加入适量生理盐水调节核细胞浓度至2×109L-1;环磷酰胺50mg/kg于移植前第4,3,2天从尾静脉注入,1次/d,移植当天用胰岛素注射针吸取单个核细胞自尾静脉注入,移植成功。佐剂组给予等量生理盐水和环磷酰胺。结果与结论:移植组大鼠血清抗乙酰胆碱受体滴度、CD28、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4、B7.1及B7.2的表达均显著低于模型组(P<0.01);模型组和移植组大鼠血清抗乙酰胆碱受体滴度滴度与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4呈正相关(r=0.236,P=0.001和r=0.215,P=0.013);移植组大鼠Lennon评分显著低于模型组(P<0.01)。提示干细胞移植可以通过抑制CD28-B7共刺激信号通路以调节机体的免疫系统。