体外诱导小鼠胚胎干细胞血管形成

目的探讨体外定向诱导胚胎干细胞向内皮细胞分化的条件,模拟体内血管生成和血管新生过程,为研究新血管的形成提供一种新思路.方法体外培养小鼠胚胎干细胞诱导形成胚胎小体,将11 d的胚胎小体种植到胶原中诱发出芽性血管新生;通过免疫组织化学染色方法检测胚胎小体及其出芽向内皮细胞和功能血管的分化.结果胚胎干细胞在体外能自发形成胚胎小体,其内部含有血管样结构,并伴有平滑肌的分化;种植到胶原中的胚胎小体能再现出芽性血管新生.结论胚胎干细胞在体外不但能定向分化成内皮细胞,还能再现体内血管生成、血管新生及动脉生成过程.     

胚胎干细胞诱导的内皮细胞对自身向成骨细胞分化的影响

目的探讨由胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）诱导的内皮细胞（endothelial cells,Ec）与自体胚胎干细胞联合培养时对ESCs成骨作用的影响。方法提取小鼠的胚胎干细胞和胚胎成纤维细胞,诱导胚胎干细胞生成Ec,培养细胞分为四组。A组：胚胎干细胞诱导组;B组：胚胎干细胞诱导组;C组：胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞（Ec）诱导组;D组：ESCs和诱导的EC联合培养诱导组。通过干细胞形态的观察、免疫荧光、细胞的增值、碱性磷酸酶以及骨钙素含量的测定从酶学、组织学及生化学等不同方面观测骨髓基质细胞对胚胎干细胞向成骨细胞诱导转化的影响。结果通过细胞免疫荧光染色证实C组培养诱导的细胞为EC。D组ESCs和诱导的Ec联合培养组MTT检测结果各组细胞生长差异没有显著意义（p〉0.05）,骨钙素和碱性磷酸酶测定D组有明显差异高于其他3组（p〈0.05）。结论以胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞对胚胎干细胞的成骨有明显的促进作用。     

人胚胎干细胞关键节点文献演进的可视化分析

运用CiteSpace可视化软件绘制人胚胎干细胞研究领域的共引网络图谱,分析图谱中的关键节点,并探讨人胚胎干细胞的获取分化、培养、更新及发展演化。随着科技的发展,干细胞的获得及培养将更简便,更多地用于临床治疗疾病。     

干细胞循环及其潜在应用前景

干细胞(stemcell)是胚胎发育过程中产生的或在个体成长中存留的一些能无限自我更新(self-renewing)并同时又能定向分化生成一系列组织的原始细胞。目前，据其来源分为胚胎干细胞和成体干细胞；按其分化能力分为全能干细胞(totipotent stem cell，TSC)和多能干细胞(multipotent stem cell，MSC)。一般认为胚胎干细胞为全能干细胞，而成体干细胞则多为多能干细胞。     

可视化软件应用分析

以妊娠与甲状腺功能减退的关系为例,介绍可视化软件Histcite各项统计分析功能、引文编年图以及如何结合Pajek进行主路径分析,指出其在中国医科大学图书馆参考咨询服务工作中的应用,并探讨可视化软件在传统参考咨询服务向知识服务转化过程中的作用和意义。     

两种条件培养基促进鼠胚胎干细胞分化为造血干细胞

目的:从鼠胚胎干细胞获得具有造血重建功能的造血干细胞.方法:将ES-D3细胞形成4天拟胚体(4dEBs),再用骨髓内皮细胞条件培养液(mBMEC-CM)和/或胎肝基质细胞条件培养液(FLSC-CM)诱导4dEBs生成造血干细胞.实验为mBMEC-CM FLSC-CM组、mBMEC-CM组、FLSC-CM组,对照组.检测诱导生成的细胞造血干细胞特异抗原表达、造血相关基因表达、造血集落的形成以及造血重建能力.结果:从诱导ES-D3细胞生成造血干/祖细胞的数量和生成的集落总数看,mBMEC-CM FLSC-CM组诱导效率显著高于其他3组.mBMEC-CM FLSC-CM组诱导生成的细胞能重建照射鼠的造血系统.结论:骨髓内皮细胞条件培养液联合胎肝基质细胞条件培养液可促进鼠胚胎干细胞分化为具有造血重建能力的造血干细胞.     

干细胞治疗神经系统疾病的研究进展

<正>干细胞是一类未分化的具有高度自我更新和多向分化潜能的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞胚胎干细胞是全能性、无限增殖的干细胞,具有形成所有类型细胞的潜能,包括胚胎干细胞、胚胎生殖干细胞;成体干细胞包括神经干细胞、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、表皮干细胞等,成体干细胞具有自我更新和分化为组织特异细胞的能力,即分化为相应组织和器官中细胞的专能细胞,它是存在于人体组织中的多潜能干细胞。按其分化潜能的大小,干     

体外诱导人胚胎干细胞定向分化为神经干细胞

目的:探讨体外定向诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)生成高纯度神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法.方法:模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境,分三阶段诱导hESCs定向生成NSCs.形态学观察结合免疫荧光细胞化学、流式细胞术和RT-PCR检测胚胎干细胞标志和神经干细胞标志;NSCs分化实验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测.结果:体外培养的hESCs在胚胎成纤维细胞饲养层上连续传代培养50代,仍保持SSEA-4,TRA-1-81阳性,表达Nanog基因,流式细胞术检测SSEA-4阳性表达率为83.44%;经三步法最终可诱导形成纯度高达90%以上的nestin阳性细胞,表达nestin基因,流式细胞术检测nestin阳性表达率为89.38%;诱导生成的细胞反复传代,仍表现为nestin阳性,并可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞.结论:模拟体内神经分化过程的三步诱导法,可诱导hESCs生成较高纯度的NSCs,并能较好维持其干细胞特性和具有进一步分化的能力.     

鼠尾胶原三维诱导E14小鼠胚胎干细胞分化为甲状腺类似细胞的初步研究

目的 在体外贴壁诱导E14小鼠胚胎干细胞分化为甲状腺细胞的基础上,不改变诱导因子,探索鼠尾胶原三维结构体外诱导胚胎干细胞分化为甲状腺细胞的可行性。方法 E14小鼠胚胎干细胞半固体培养基悬浮培养6d生成拟胚体,随后在鼠尾胶原三维结构中继续诱导分化11d,全程添加诱导因子促甲状腺素及胰岛素,第14天时开始添加碘化钾。结果 拟胚体在鼠尾胶原上生长状态良好,分化细胞贴壁后逐渐陷入鼠尾胶原;电镜下诱导细胞高尔基体、内质网丰富,部分诱导细胞胞质内见不典型分泌颗粒,与人成体甲状腺细胞超微结构类似。结论 胚胎干细胞在鼠尾胶原三维结构中可以分化为甲状腺类似细胞,并具备合成、分泌的功能;三维结构为体外诱导胚胎干细胞分化为甲状腺细胞提供了新的方法。 [关键词] 胶原; 胚胎; 干细胞 ;细胞分化; 甲状腺     

成体干细胞移植研究现状

干细胞是指具有进一步分裂和分化潜能的细胞，其分化潜能因其来源不同而有很大差异。有的干细胞能分化为机体几乎所有的细胞类型，如胚胎干细胞，有的干细胞只能分化出一种细胞，如单能造血干细胞。在个体发育过程中，细胞的分化潜能逐渐变窄。根据其来源和发育阶段不同，可将干细胞分为4类：即胚胎癌细胞（embryonal stern cell，EC）、胚胎干细胞（embryonic stern cells，ES）、胚胎生殖细胞（embryonic germ cells，EG）和成年组织干细胞。从理论上讲，胚胎干细胞为全能干细胞，而成体组织干细胞则应为多能和／或单能干细胞。     

兔胚胎干细胞的早期培养条件初步研究

目的探索小鼠胚胎内胚层细胞和鸡胚提取物（CEE）对兔胚胎干细胞早期培养的影响。方法用全新的方法对兔胚胎干细胞的建系条件进行探讨。将分离到的囊胚期内细胞团接种到丝裂霉素C灭活的小鼠胚胎内胚层细胞饲养层和几种不同的培养液构成的培养体系中,观察内细胞团的贴壁和生长状况,并对由内细胞团生长出的具有胚胎干细胞形态的细胞集落进行传代。结果以灭活的小鼠胚胎内胚层细胞作为饲养层,以78％D-MEM／F-12＋20％Knockout SR＋2mmol／L L—Glutamine＋1％MEM NAA＋O．1mmol／L β-mercaptoethanol＋8ng／ml hrbFOF＋2％CEE做培养液,兔内细胞团可以很好的贴壁,生长成具有标准的胚胎干细胞（ESC）形态的细胞集落。结论小鼠内胚层细胞和CEE联合使用可以很好的支持原代兔胚胎干细胞（RESC）的生长,小鼠内胚层细胞和CEE中可能含有某些抑制RESC分化的因子。     

胚胎干细胞诱导分化机制及方法

胚胎干细胞是来源于附植前胚胎的内细胞团或附植后胎儿的原始生殖细胞具有发育全能性的细胞。近年来在胚胎干细胞分化机制研究和定向诱导分化方面都有长足进展，但其分化机制和定向分化的方法一直是人们需要解决的难点问题，本文主要就胚胎干细胞的定向分化机制、方法及目前存在的问题等方面进行概括性论述。     

Establishment and characterization of two new human embryonic stem cell lines, SYSU-1 and SYSU-2

Background Human embryonic stem cells can propagate indefinitely in vitro and are able to differentiate into derivatives of all three embryonic germ layers. The excitement surrounding human embryonic stem cells lies largely in their potential to produce specialized cells that can be used for transplant therapies. However, further investigation requires additional cell lines with varying genetic background. Therefore, efforts to derive and establish more human embryonic stern cell lines are highly warranted. Methods Surplus embryos （blastocysts） from donors were used to isolate the inner cell mass by immunosurgery. All cells were cultured continuously on irradiated murine embryonic fibroblasts feed layer and likely human embryonic stem cell colonies were subsequently characterized by cell surface marker staining, karyotyping and teratoma formation. Results Two human embryonic stern cell lines （SYSU-1 and SYSU-2） were established from surplus embryos. The two lines express several pluripotency markers including alkaline phosphatase, SSEA- 4, Tra-1-60, Oct-4, Nanog and Rex-1. They remain in undifferentiated state with normal karyotype after prolonged passages and can form embryoid bodies in vitro and teratoma in vivo. Conclusion Two new human embryonic stem cell lines have been established from surplus embryos. They can be used to understand selfrenewal and differentiating mechanisms and provide more choices for regenerative medicine.     

Derivation and characterization of Chinese human embryonic stem cell line with high potential to differentiate into pancreatic and hepatic cells

Background  Human embryonic stem cells have prospective uses in regenerative medicine and drug screening. Every human embryonic stem cell line has its own genetic background, which determines its specific ability for differentiation as well as susceptibility to drugs. It is necessary to compile many human embryonic stem cell lines with various backgrounds for future clinical use, especially in China due to its large population. This study contributes to isolating new Chinese human embryonic stem cell lines with clarified directly differentiation ability.

Methods  Donated embryos that exceeded clinical use in our in vitro fertilization-embryo transfer (IVF-ET) center were collected to establish human embryonic stem cells lines with informed consent. The classic growth factors of basic fibroblast growth factor (bFGF) and recombinant human leukaemia inhibitory factor (hLIF) for culturing embryonic stem cells were used to capture the stem cells from the plated embryos. Mechanical and enzymetic methods were used to propogate the newly established human embryonic stem cells line. The new cell line was checked for pluripotent characteristics with detecting the expression of stemness genes and observing spontaneous differentiation both in vitro and in vivo. Finally similar step-wise protocols from definitive endoderm to target specific cells were used to check the cell line’s ability to directly differentiate into pancreatic and hepatic cells.

Results  We generated a new Chinese human embryonic stem cells line, CH1. This cell line showed the same characteristics as other reported Chinese human embryonic stem cells lines: normal morphology, karyotype and pluripotency in vitro and in vivo. The CH1 cells could be directly differentiated towards pancreatic and hepatic cells with equal efficiency compared to the H1 cell line.

Conclusions  This newly established Chinese cell line, CH1, which is pluripotent and has high potential to differentiate into pancreatic and hepatic cells, will provide a useful tool for embryo development research, along with clinical treatments for diabetes and some hepatic diseases.

     

人类胚胎干细胞研究中的伦理学问题

目的 探讨人类胚胎干细胞研究中的伦理学问题。方法 由人类胚胎干细胞研究所引发的伦理学争论及带来的伦理忧患，导出应注意的医学伦理方面的问题。结果 人类胚胎干细胞研究应遵循一定的伦理原则。结论 医学伦理学应规范和引导人类胚胎干细胞研究。     

对人类胚胎干细胞来源的伦理审视

伦理审查的重点之一:胚胎干细胞的来源是否符合了伦理要求,2003年出台的《人胚胎干细胞研究的伦理指导原则》没有提供可操作的审查要求。结合我国国情,审视了人胚胎干细胞来源中若干伦理问题,并提出了四点审查要点:①在目前的情况下,"冷冻的多余的胚胎"可以作为胚胎干细胞研究的主要来源,但研究者不可过度依赖多余的胚胎;②在接受自愿捐献的卵子时,研究者要实现对捐卵者的伤害最低化,不得采取胁迫、引诱的方式获取卵子;③在使用"流产胎儿"时,要获得孕妇或家庭的知情同意,不可为获得一个研究用的流产胎儿,而让一个妇女先怀孕。④为达治疗性克隆研究之目的,研究者可以通过体细胞核移植技术制造胚胎干细胞,但研究中胚胎要在14天内销毁。     

胚胎干细胞或诱导性全能干细胞自我更新和分化机制研究进展

“211工程”三期建设遗传发育与生殖医学重点学科建设的子项目——胚胎干细胞或诱导性全能干细胞定向分化机制的研究,在2008-2011年建立了着床后人胚胎早期发育的全基因组表达谱式;揭示了calcineurin/NFAT信号通路对细胞谱系决定的调控机制;揭示以Oct4为核心的胚胎干细胞命运决定的分子调控机制,其中包括发现并系统研究了对胚胎干细胞自我更新起重要作用的转录因子Oct4的蛋白质翻译后修饰;揭示Oct4的重要合作蛋白Sox2的蛋白质翻译后修饰及在胚胎干细胞中的作用;发现共激活因子p300直接调控胚胎干细胞中Nanog的表达及调控机制;发现Oct4新的下游基因Stk40并揭示Stk40在胚胎干细胞中的功能及作用机制;首次提出核仁蛋白在胚胎干细胞自我更新维持中的重要作用.2011年“胚胎干细胞及早期胚胎发育的分子调控机制研究”项目获得教育部高等学校科学研究优秀成果奖——自然科学奖二等奖.     

人胚胎多能干细胞研究中的几个问题

目前在人胚胎多能干细胞的研究中存在材料来源不足、培养体系复杂和自发性分化的问题.这3个基本问题限制了人胚胎多能干细胞的基础和临床应用研究.要建立新的胚胎多能干细胞系应利用细胞核移植和细胞质重新编程功能建立新的途径,并探讨其中的机制和可能的关键因子;干细胞培养时主要进行简化培养体系和抑制细胞分化的研究;对干细胞分化进行临床应用研究时,主要将多种方法联合应用来诱导和筛选目的细胞并对其形态和功能进行评价.     

胚胎干细胞与再生医学

由于胚胎干细胞具有分化能力,再生性强;同时由于处于低分化状态,它还具有分化成多种细胞、组织和器官的能力。科学家普遍认为胚胎干细胞的研究将为临床医学提供广阔的应用前景,可以解决长期困扰临床的供体不足和免疫排斥的难题,从而实现人类用人工培养的组织和器官更换疾病组织和器官的目标。本文重点介绍胚胎干细胞在心肌细胞、胰腺细胞、神经细胞等方面的再生研究。