HIF-2α-VEGF-Notch信号通路在高强度聚焦超声不完全消融后肝癌中的作用

目的 探讨HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch等基因在高强度聚焦超声不完全消融肝癌血管新生中的表达及其作用.方法 实验共分5组,HIFU残留肝癌细胞亚系为实验组,未处理肝癌细胞为对照组,转染HIF-2α基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制HIF-2α组,转染VEGF基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制VEGF组,转染空载慢病毒残留肝癌细胞为空载组.免疫荧光检测实验组与对照组的VEGF表达.低氧(1％O2)处理实验组与对照组细胞0、6、12、24 h,荧光定量PCR和Westernblot检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达水平.荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4 mRNA和蛋白表达水平.结果 VEGF蛋白在对照组与实验组细胞中均有表达.HIF-1α在低氧处理12 h达到顶峰,随后下降,而HIF-2α、VEGF随着低氧处理时间增加而呈上升趋势,且实验组HIF-2α、VEGF表达较对照组明显增高(P＜0.05).转染慢病毒后,抑制HIF-2α组HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),抑制VEGF组VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),实验组HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均高于对照组(P＜0.05).结论 HIF-2α-VEGF-Notch信号通路参与调控高强度聚焦超声残余肝癌血管新生.     

VEGF、HIF-1α在大鼠慢性哮喘模型中的表达及地塞米松的干预效应

目的 观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)在慢性哮喘大鼠中的表达水平,探讨其在慢性哮喘气道重塑中的作用.方法 以卵清清蛋白(OVA)致敏及反复激发建立大鼠慢性哮喘模型,激发前30 min胃内灌注地塞米松1 mg/kg,最后一次激发12 h内处死大鼠,常规病理切片观察大鼠肺内炎症情况、总气管壁厚度、气管内壁厚度及气道平滑肌厚度.免疫组化检测气道壁HIF-1α、VEGF蛋白的表达,RT-PCR观察大鼠肺部HIF-1α、VEGF mRNA的表达.结果 慢性哮喘模型组大鼠气道支气管及血管周围大量炎症细胞聚集,总气管壁、气管内壁及气道平滑肌增厚,肺组织HIF-1α、VEGF mRNA及HIF-1α、VEGF蛋白的表达增高(P＜0.01).哮喘大鼠致敏前使用地塞米松后气道炎症较轻,减轻总气管壁、气管内壁及气道平滑肌增厚.各组大鼠肺组织内HIF-1α、VEGF蛋白的表达与气道壁厚度呈正相关.结论 HIF-1α、VEGF可能参与了慢性哮喘大鼠的气道重塑,早期使用地塞米松可以预防气道重塑.     

HIF-1α与VEGF在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的:研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α) 、血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学SABC法检测54例HCC组织及14例正常肝组织中HIF-1α、VEGF的表达情况,研究这2个因子与HCC临床病理学资料及生物学行为的关系.结果:HIF-1α、VEGF蛋白在HCC组织及正常肝组织中阳性表达率比较,差异有显著性(P＜0.05).HCC组织中HIF-1α蛋白与VEGF 蛋白的表达呈正相关(P＜0.05).HIF-1α、VEGF的表达与HCC、病理学分级、AFP无明显关系(P＞0.05).而与肿瘤的侵袭转移能力密切相关(P＜0.05).结论:HCC组织中HIF-1α、VEGF呈过量表达.肝癌组织中HIF-1α、VEGF表达可反映肝癌的生物学行为,可作为预测肝癌浸润转移的一项重要指标.     

姜黄素对佐剂性关节炎模型大鼠HIF-1α、VEGF及VEGFR表达的影响

目的 :探讨姜黄素(CUR)对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)表达的影响和CUR治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:40只健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤组和姜黄素组。造模9 d后甲氨蝶呤组和姜黄素组分别给予腹腔注射甲氨蝶呤0.5 mg/kg,3 d 1次,连续5次;姜黄素50 mg/kg-1,1 d 1次,连续14 d。第23天引颈处死大鼠,取膝关节滑膜组织,分别采用免疫组织化学染色及PCR技术检测HIF-1α、VEGF及VEGFR的表达。结果 :与正常对照组比较,模型组HIF-1α、VEGF、VEGFR表达明显增加(P0.0l,P0.05);与模型组比较,姜黄素组HIF-1α及VEGFR表达明显减少(P0.01,P0.05)。且佐剂性关节炎大鼠滑膜中HIF-1α与VEGF呈明显正相关关系(r=0.910,P0.01)。结论:姜黄素能够抑制AA大鼠滑膜血管新生,其机制可能与其降低HIF-1α表达而下调靶基因VEGF、VEGFR的表达有关,这可能是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

缺氧诱导因子在高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织中的动态变化及意义

目的 观察缺氧诱导因子(hypoxia inducible factors,HIFs)在高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织的动态表达,探讨HIF-1 α、HIF-2α在高肺血流性肺动脉高压形成过程中的作用.方法 64只6周龄雄性健康SD大鼠采用随机数字法均分为假手术组与肺动脉高压组,肺动脉高压组大鼠通过腹主动脉-下腔静脉分流法建立高肺血流性肺动脉高压模型,在两组大鼠术后第4、8、12、16周测量平均肺动脉压力(mean pulmonary artery pressure,mPAP)、右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI)及肺血管形态学观察,Western blot检测肺组织HIF-1α、HIF-2α蛋白表达,RT-PCR检测HIF-1αmRNA、HIF-2αmRNA的表达.结果 肺动脉高压组大鼠术后mPAP及RVHI随时间延长持续增高,肺动脉形态学变化与mPAP变化一致;肺动脉高压组大鼠肺组织HIF-1α、HIF-2α蛋白表达在术后随着时间的延长,均呈现先升高后下降的趋势,于术后8、12周明显高于同时间点对照组(P＜0.05);HIF-1 αmRNA、HIF-2αmRNA的表达亦呈现先升高后下降的趋势,于术后8、12周明显高于同时间点对照组(P＜0.05).结论 HIF-1α和HIF-2α可能在大鼠高肺血流性肺动脉高压形成过程中的肺血管病变可逆阶段发挥了一过性的血管保护作用,但仍无法遏制肺动脉高压的形成.     

硫化氢对大鼠MIRI心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨H2S后处理对大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡及缺氧诱导因子- 1α (Hypoxia-inducible faetor-1alpha,HIF-1α)/血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响.方法:以硫氢化钠(Sodium hydrosulfide,NaHS)作为外源性H2S供体.健康雄性SD大鼠24只,随机平均分为3组:假手术(Sham)组、缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,IR)组、H2S后处理组.用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(Apoptoticindex,AI),RT-PCR法检测心肌组织HIF-1α和VEGFmRNA表达,Westernblot检测HIF-1α和VEGF蛋白的表达情况.结果:相对于IR组,H2S组心肌细胞AI明显下降(P＜0.01),HIF-1αmRNA及蛋白表达水平明显增加(分别为P＜0.01和P＜0.05),VEGF mRNA和蛋白表达水平亦显著增加(均为P＜0.01).结论:H2S后处理能促进HIF-1α/VEGF的高表达,对心肌缺血-再灌注损伤(Myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)诱导的心肌细胞凋亡有抑制作用.     

胰岛素外用对糖尿病大鼠深Ⅱ度烧伤创面HIF-1α及VEGF表达的影响

目的:观察胰岛素外用对糖尿病大鼠深Ⅱ度烧伤创面中缺氧诱导因子-lα(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨胰岛素外用促进糖尿病创面愈合的可能机制.方法:SD大鼠42只,雌雄不限,建立链脲菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠深Ⅱ度烧伤模型,完全随机分为胰岛素外用组及空白对照组,即分别用胰岛素及生理盐水敷料每日换药两次.于治疗1、2、3周后,取创面全层组织,通过RT-PCR和免疫组化分别检测创面组织中HIF-1αmRNA的含量的变化和HIF-1α及VEGF的阳性表达情况以及微血管密度.结果:与对照组相比较,胰岛素干预1、2、3周后,创面愈合率明显增大,创面组织中HIF-1αmRNA相对含量和HIF-1α的阳性细胞数明显减少,而VEGF的阳性表达细胞数则明显增多(P＜0.05),且微血管密度也显著增高(P＜0.05).结论:胰岛素外用能促进糖尿病大鼠创面的愈合,其机制与下调HIF-1α的水平、上调VEGF的表达水平,进而促进创面血管生长,改善创面的血供有关.     

糖尿病大鼠视网膜缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子的表达

目的:探讨链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠视网膜组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达规律.方法:Wister大鼠60只,分为实验组(T组,45只)和对照组(C组,15只).实验组建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型,并随机分为T1,T3,T5三个组,每组15只,分别代表糖尿病模型1,3,5 mo;对照组同样随机分为C1,C3,C5三个组,每组5只.分别采用免疫组织化学法检测视网膜VEGF表达、免疫印迹法检测视网膜HIF-1α表达,结果以平均吸光度值进行定量比较.结果:糖尿病模型成功率86.67%～93.33%.VEGF检测结果:对照组各组间差别无统计学意义(P＞0.05);T1与对照组间差别无统计学意义(P＞0.05),但T3,T5与对照组间差别均有统计学意义(t值分别为6.12,8.67,P＜0.01),并且T3,T5两组间差别也有统计学意义(t=3.45,P＜0.05).HIF-1α检测结果:对照组各组间差别无统计学意义(P＞0.05);T1,T3,T5分别与对照组相比,其差异均有统计学意义(t值分别为4.35,5.01,5.34,P＜0.01),但实验组各组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:STZ糖尿病大鼠视网膜内可观察到VEGF和HIF-1α的高表达,后者早于前者,提示在视网膜病变时HIF-1α的表达可能是VEGF表达的始动因素.     

EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF HIF-1α AND VEGF IN OVARIAN CANCER

目的:探讨卵巢癌缺氧诱导因子-1α(HIF-1 α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学S-P法检测不同卵巢组织HIF-1 α和VEGF的表达情况.结果:交界性卵巢肿瘤和卵巢癌HIF-1 α、VEGF的表达明显高于正常卵巢和良性卵巢肿瘤,差异有统计学意义(P ＜0.01,P＜0.05).卵巢癌HIF-1 α表达与肿瘤病理分级有关(P＜0.01),卵巢癌HIF-1 α表达与VEGF表达呈明显正相关(rs=0.439,P ＜0.01).HIF-1 α和VEGF表达共同阳性卵巢癌患者的3年存活率明显低于二者均阴性表达患者(P＜0.01).结论:HIF-1 α可通过调节VEGF促进卵巢癌新生血管形成,促使卵巢癌的生长及转移,导致患者预后不良.     

中药三七抑制二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌血管生成的研究

目的：研究中药三七抑制二乙基亚硝胺（ DEN ）诱发大鼠肝癌血管生成的作用。方法82只Wistar雄性大鼠,根据随机数字表法分为中药组、西药组、联合组、模型组,每组18只;空白组10只,以100 ppm DEN饮水法诱发大鼠肝癌模型。中药组用三七水煎剂灌胃,西药组静脉注射贝伐单抗,联合组给予三七灌胃、贝伐单抗静脉注射,模型组和空白组均给予等量的生理盐水灌胃。分别于12周末和18周末分批处死大鼠,分析中药组、西药组、联合组、模型组和空白组大鼠肝标本,检测大鼠肝细胞癌血管内皮生长因子（ VEGF ）、血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）、血管生成素-2受体（Tie-2）、缺氧诱导因子-1α（Hif-1α）表达水平及肝癌组织微血管密度（ MVD）。结果12周末及18周末时Ang-1 mRNA在中药组、西药组、联合组较模型组肝癌组织中表达均上调,而Ang-2、Tie-2、HIF-1α及VEGF mRNA表达均下调（ P＜0．05）。联合组、西药组、中药组的MVD也均较模型组明显减少（ P＜0．05）。结论三七在HCC肿瘤血管生成和进展中可能通过抑制Ang-2、Tie-2 HIF-1α及VEGF而发挥预防作用。