苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞增殖凋亡及JAK-STAT信号通路的影响

目的：观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡及JAK-STAT通路的影响。方法：苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，MW法检测对肝癌细胞增殖的影响，双荧光染色观察细胞凋亡率，RT-PCR法检测其对SMMC-7721细胞Stat3、Star5 mRNA的影响。结果：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制肝癌细胞增殖，促进其凋亡，并呈时间与剂量依赖性；二者均能下调Star3、Star5 mRNA表达水平。相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌细胞Stag、Star5 mRNA下调作用更显著。结论：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖、促进其凋亡，其机制可能与下调stat3、stat5的基因表达，抑制细胞信号转导通路有关。     

不同浓度苦参碱对肝癌细胞增殖及JAK-STAT信号通路的影响

目的:观察不同浓度苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖和JAK-STAT通路的影响。方法:苦参碱作用于肝癌SMMC-7721细胞,用MTT法检测不同浓度苦参碱对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;RT-PCR法检测不同浓度苦参碱对SMMC-7721细胞stat3、stat5、c-jun mRNA的影响,Western blot法检测不同浓度苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达的影响。结果:苦参碱能够抑制SMMC-7721细胞增殖,呈时间-剂量依赖性。苦参碱能下调stat3、stat5、c-jun mRNA表达水平,降低STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达量,有剂量依赖性。结论:苦参碱不仅能直接杀伤肿瘤细胞,而且能抑制JAK-STAT信号通路,从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT信号通路的影响

目的 观察苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT通路的影响.方法 苦参碱和/或JAK-STAT途径特异性抑制剂AG490培养肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞株增殖的影响,RT-PCR法检测苦参碱对SMMC-7721细胞stat3、 stat5 mRNA表达的影响,Western blotting法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达的影响.结果 苦参碱对肝癌细胞增殖的抑制率呈剂量和时间依赖性.苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平(P<0.05、0.01),降低STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量(P<0.05、0.01).AG490作用于SMMC-7721细胞后,star3、 stat5 mRNA和STAT3、STAT5蛋白的表达量与对照组比较无显著差异(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量与对照组比较显著降低(P>0.05、0.01).与AG490组比较,AG490 苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量显著降低(P<0.05),STAT3、STAT5蛋白表达量显著降低(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).与苦参碱组比较,AG490 苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量无显著差异(P>0.05),STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).结论 苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平,因而能降低STAT3、STAT5蛋白表达水平,抑制细胞JAK-STAT信号转导通路,从而抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖.     

苦参碱和氧化苦参碱对人肝癌细胞株 SMMC-7721凋亡的影响

目的：探讨苦参碱与氧化苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测SMMC-7721细胞增殖,并采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测SMMC-7721细胞凋亡。结果苦参碱与氧化苦参碱浓度为0.50～2.00 mg/ml时,细胞增殖抑制率均逐渐上升,呈药物浓度和作用时间的依赖性;同样浓度下（1.00 mg/ml）,苦参碱增殖抑制作用强于氧化苦参碱[24 h、48 h和72 h时苦参碱组分别为（42.39±0.04）%、（51.69±0.03）%、（78.98±0.05）%,氧化苦参碱组分别为（21.36±0.02）%、（36.16±0.02）%、（61.24±0.13）%;P均＜0.05]。苦参碱与氧化苦参碱浓度为0.25、0.50、1.00 mg/ml时SMMC-7721细胞凋亡率显著增高;同样时间点（48 h）,苦参碱对细胞凋亡的诱导强于氧化苦参碱[0.25、0.50、1.00 mg/ml时,苦参碱组凋亡率分别为（4.08±0.20）%、（4.32±0.19）%、（9.93±0.18）%,氧化苦参碱组分别为（2.20±0.18）%、（3.08±0.26）%、（9.01±0.20）%;P均＜0.05]。结论苦参碱和氧化苦参碱可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡。     

苦参碱抗肝癌细胞增殖的~1H-NMR代谢组学研究

目的采用~1H-NMR代谢组学方法,研究苦参碱抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用。方法应用CCK8法检测苦参碱抑制SMMC-7721细胞增殖的作用,并对细胞裂解液及细胞培养上清液进行~1H-NMR检测,结合多元统计分析和代谢通路分析探讨其作用机制。结果 1、2、4 mg/m L苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖。与对照组相比,苦参碱作用于SMMC-7721细胞后,细胞内外共发现21种差异代谢物。苦参碱能显著调节细胞内外亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸等差异代谢物的量,对SMMC-7721细胞的氨基酸代谢起到一定的调控作用。结论苦参碱可能通过调控氨基酸代谢、能量代谢等途径发挥抗肝癌作用。本研究从代谢组学角度为阐释苦参碱抗肝癌的作用机制提供了科学依据。     

苦参碱诱导SMMC-7721细胞分化过程中侵袭转移相关指标的实验研究

目的：研究苦参碱诱导人肝癌SMMC-7721细胞分化过程中对其侵袭转移能力的抑制作用。方法：SMMC-7721细胞体外培养，0．5g/L、0．8g/L、1．0g/L浓度的苦参碱分别处理细胞，通过生长曲线测定、细胞形态观察、细胞粘附试验、运动试验、侵袭试验全面观察苦参碱对该细胞株的生长增殖、形态变化、侵袭转移等各方面的诱导分化作用。结果：经0．8g/L和1．0g/L浓度的苦参碱处理后，SMMC-7721细胞的生长增殖明显减缓，恶性细胞形态逐渐向成熟细胞分化，肿瘤细胞与FN的粘附力、细胞穿膜运动力、对基底膜的降解力等侵袭转移相关指标均受到显著抑制。结论：苦参碱是一种较好的诱导分化剂，不仅抑制细胞的生长增殖，诱导细胞形态分化，而且从细胞的粘附、运动、降解等多环节全面抑制SMMC-7721细胞的侵袭转移能力。     

氧化白藜芦醇对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和自噬的研究

目的:探讨氧化白藜芦醇对人肝癌细胞的抑制作用。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和CCK-8法检测氧化白藜芦醇对人肝癌Hep G2、SMMC-7721细胞增殖的影响;划痕实验、Transwell侵袭实验观察氧化白藜芦醇对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响; Western Blot检测氧化白藜芦醇处理肝癌细胞后p62和LC3蛋白的表达。结果:氧化白藜芦醇对人肝癌Hep G2、SMMC-7721细胞的IC50值分别为38. 5μg/m L、20. 6μg/m L,且增殖抑制效果呈剂量依赖性。氧化白藜芦醇12. 5μg/m L以上剂量能够显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和自噬。结论:氧化白藜芦醇能够显著抑制体外人肝癌Hep G2、SMMC-7721细胞增殖、迁移、侵袭,抗癌作用与自噬无关。     

蛇床子素诱导内质网应激抑制SMMC7721人肝癌细胞增殖的机制研究＊

目的 研究蛇床子素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法 采用20 - 100 μM蛇床子素干预SMMC7721人肝癌细胞24 h、48 h和72 h，运用MTT方法检测细胞增殖；采用20 - 80 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞24 h，运用流式细胞术检测细胞凋亡及Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达；采用 60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h，运用流式细胞术检测细胞周期，以实时荧光定量PCR技术检测GRP78、DDIT3、GADD34、ATF4、EIF2A、GDF15、CDKN1B、FOXO3、RICTOR、SGK1基因表达，Western blot方法检测CyclinD1、CyclinE1、p27^Kip1和CDK4细胞周期蛋白及GRP78、GRP94、PERK、XBP-1s、CHOP、p-eIF2α(Ser51)内质网应激蛋白表达。各实验均以0.1% DMSO为对照组，并以0.1 μM毒胡萝卜素为内质网应激诱导剂组。结果 与对照组比较，100 μM蛇床子素干预24 h显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，其抑制率为36.76%（P < 0.05）；60 - 100 μM蛇床子素干预48 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为30.84%-52.49%（P < 0.05）；40 - 100 μM蛇床子素干预72 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为32.7%-73.15%（P < 0.05）。大于60 μM蛇床子素可诱导SMMC7721肝癌细胞晚期凋亡且显著抑制促凋亡蛋白Bax表达（P < 0.05）。60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h后，G1期细胞数增加、G2期和S期减少，且CyclinD1、CyclinE1和p27^Kip1蛋白表达显著被抑制（P < 0.05）。20 - 80 μM蛇床子素处理SMMC7721肝癌细胞24 h后，均显著促进GRP78、DDIT3（CHOP）、ATF4、FOXO3、RICTOR和SGK1基因表达（P < 0.05）； 20 μM蛇床子素显著促进GADD34和EIF2A基因表达（P < 0.05）；80 μM蛇床子素显著促进GDF15基因表达（P < 0.05），且CHOP、XBP-1s蛋白表达显著增强。结论 蛇床子素通过诱导内质网应激反应以抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，从而发挥抗肝癌活性。     

熊果酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用的实验研究

目的:评定熊果酸对肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用,流式细胞术研究对肝癌细胞凋亡的影响。方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞的增殖作用,流式细胞术研究其对肝癌细胞的凋亡。结果:熊果酸对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01),呈时间-剂量依赖关系,24 h和72 h半数抑制浓度(IC50)分别为12.59,8.32μg·mL-1;对肝癌细胞凋亡率为14.07%,药物浓度与凋亡率呈正相关。结论:熊果酸对肝癌细胞SMMC-7721增殖有明显抑制作用,该抑制作用可能与诱导肝癌细胞凋亡有关。     

没食子酸体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的机制研究

目的 研究没食子酸(gallic acid,GA)体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其作用机制。方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖;Hoechst-33258、AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法研究凋亡抑制基因Survivin mRNA的变化。结果 6.25～50 μmol·L-1 GA可抑制SMMC-7721细胞的生长,并呈剂量依赖性;不同剂量的GA作用48 h后,SMMC-7721细胞出现明显的凋亡形态,细胞凋亡率有显著的剂量依赖性。RT-PCR法检测结果显示,GA能明显抑制肝癌细胞中Survivin mRNA的表达。结论 GA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,这可能与下调凋亡抑制基因Survivin有关。     

苦参素与顺铂联合应用诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制

目的:探讨苦参素和顺铂联合应用诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,RT-PCR方法检测fas和caspase-3基因mRNA表达水平。结果:与单药组相比,联合用药对肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),并表现明显的协同作用,细胞fas和caspase-3基因mRNA表达水平明显上升(P<0.05)。结论:苦参碱与顺铂联合应用能明显诱导肝癌SMMC-772 l细胞凋亡并有协同作用,其机制可能与上调细胞fas和caspase-3基因表达有关。     

原卟啉钠体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用

目的:研究原卟啉钠(NAPP)体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用。方法:通过对人正常肝细胞株QSG-7701细胞的药物毒性实验筛选出NAPP对人正常肝细胞无明显毒性的最大无毒浓度(TC0)。以TC0为起始浓度,10倍梯度稀释成5个不同的NAPP浓度,作用于体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,通过MTT比色法测定NAPP对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;经倒置光学显微镜和Hoechst33258染色倒置荧光显微镜进行形态学观察,计数凋亡细胞,并计算凋亡指数(AI);采用AnnexinⅤ-FITC/PI双标流式凋亡检测试剂盒经流式细胞仪检测SMMC-7721细胞凋亡和坏死率。结果:不同浓度NAPP作用后,SMMC-7721细胞的增殖明显受到抑制,A值明显降低(P<0.05或P<0.01),且抑制率呈一定的浓度-时间依赖性;光学显微镜下见细胞个数明显减少,细胞密度明显变稀,细胞形态发生了明显变化,很多细胞间的连接消失,细胞变圆、皱缩或见细胞外形变长呈长梭形;荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变,AI显著升高(P<0.05或P<0.01);经流式细胞仪检测,可见SMMC-7721细胞凋亡和坏死率不同程度升高。结论:NAPP在体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有一定的抑制增殖、促进凋亡和坏死的作用。     

苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及Survivin基因表达的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制.方法:应用不同浓度的苦参碱作用于人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin基因表达.结果:苦参碱对Hela细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.60 g·L-1.经流式细胞仪检测表明,苦参碱能使Hela细胞G0-G1期逐渐增加,G2-M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,Hela细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).苦参碱对Hela细胞Survivin 基因表达有一定的抑制作用(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论:苦参碱能有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Survivin基因的表达有关.     

熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

赤芍总苷对人肝癌SMMC-7721细胞迁移的影响及作用机制探讨

目的:探讨赤芍总苷对肝癌细胞SMMC-7721细胞迁移能力的影响及对血管内皮生长因子(VEGF),环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:体外培养SMMC-7721细胞,随机分组,不加药物作用的为空白组,其他各组为赤芍总苷低、中、高剂量组,将不同质量浓度(200,400,600 mg·L-1)的赤芍总苷作用于细胞24 h后,采用MTT法检测赤芍总苷对细胞抑制作用,细胞划痕实验测定迁移能力,RT-PCR检测COX-2 mRNA表达,Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果:与空白组比较,赤芍总苷能够明显的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈现量效关系(P<0.01),并能够抑制细胞的迁移(P<0.01),RTPCR及Western blot结果显示,赤芍总苷作用细胞24 h后,可使COX-2 mRNA和VEGF蛋白的表达明显下降(P<0.01)。结论:赤芍总苷能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、迁移,其机制可能是通过下调COX-2,VEGF的表达来实现,从而为赤芍总苷治疗肝癌的发展及其临床应用提供理论和实验依据。     

PUMA在EGCG调节肝癌细胞生长中的作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及其可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理SMMC-7721细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测抑癌基因PUMA mRNA表达水平的变化,Western-Blot检测PUMA蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后SMMC-7721细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性,凋亡细胞比例明显上升。抑癌基因PUMA的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,诱导其凋亡;其可能机制为上调抑癌基因PUMA的表达水平,从而促进细胞凋亡。     

苦参碱及氧化苦参碱抑制肿瘤作用机制研究进展及展望

苦参在我国药用历史悠久。苦参碱及氧化苦参碱是苦参的主要成分,对各类肿瘤细胞均有较强的抑制作用。通过相关文献的筛选和分析,对苦参碱及氧化苦参碱在抑制肿瘤的作用机制方面进行总结和展望。苦参碱及氧化苦参碱抑制肿瘤的分子机制包括调节细胞周期进程、促进细胞凋亡、抑制肿瘤的侵袭转移能力、诱导肿瘤细胞发生自噬、逆转肿瘤细胞的多药耐药性及调控肿瘤细胞的代谢水平等。通过对苦参碱及氧化苦参碱作用机制的发掘,并以此为基础进行更加深入的研究,可不断揭示苦参碱及氧化苦参碱参与的信号网络及基因调控位点,从而发现更为精确的肿瘤治疗靶点,为肿瘤的新药研发与临床应用提供有益启示。