HMGB1联合MSCs移植对急性心肌梗死大鼠心脏血管生成影响

目的 通过高迁移率组蛋白1（High Mobility Group Box-1,HMGB1）预处理骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）,观察HMGB1能否增强MSCs旁分泌效应;在大鼠急性心肌梗死的模型上,HMGB1同时联合移植MSCs,观察HMGB1联合MSCs移植是否能进一步增加梗死区域局部新生血管数量.方法 贴壁离心法培养大鼠MSCs,HMGB1的受体TLR4和RAGE检测;不同浓度梯度HMGB1分别干预MSCs后,ELISA法检测VEGF的表达情况;SD雄性大鼠分为4组：模型组、MSCs移植组、HMGB1注射组、HMGB1注射＋MSCs移植组（n=24只）,制备大鼠急性心肌梗死模型;术后3、7、28 dELISA法检测血清VEGF浓度水平;术后28d免疫组化测定梗死区新生血管密度.结果 ①MSCs有TLR4和RAGE的表达;②浓度为12.5、25、50、100和200ng/mL HMGB1干预MSCs后,VEGF的分泌较对照组显著增加,当浓度为400和800ng/mL时,VEGF的分泌量较对照组减少（P＜0.05）;③术后3、7d时间点血清VEGF测定：HMGB1注射＋MSCs移植组＞MSCs移植组＞HMGB1注射组＞模型组（P＜0.05）;④HMGB1注射＋MSCs移植组的CD31染色新生血管数明显增多.结论 HMGB1联合MSCs移植对急性心肌梗死大鼠心梗区及交界区新生血管生成有益.     

MODS小鼠脾脏高迁移率族蛋白B1表达变化与树突状细胞功能的关系

目的 探讨多器官功能障碍综合症发生、发展过程中脾脏树突状细胞功能状态与HMGB1表达变化的关系.方法 腹腔注射酵母多糖复制小鼠MODS模型,检测MODS痛程中小鼠脾脏HMGB1表达水平及树突状细胞数量和功能相关分子CD205、CD86表达的变化.结果 正常小鼠脾脏有较低水平HMGB1表达,伤后3h表达增加(P<0.05);伤后24～48h表达量达峰值,随后减少;伤后5～7 d HMGB1表达降至接近正常水平;伤后10～12 d HMGB1表达再次增多(P<0.05).脾脏FLMGB1 mRNA与蛋白表达变化趋势基本一致,在伤后24～48h和伤后10～12 d形成两次高峰(P<0.01).在MODS病程前期,脾脏树突状细胞数量及活性与HMGB1含量呈同向变化,但在病程晚期两者变化规律不同.结论 MODS小鼠脾脏HMGB1上调表达可能参与调节树突状细胞的功能状态和免疫活性,从而影响MODS的发生和发展.     

高迁移率族蛋白B1和α平滑肌肌动蛋白在博莱霉素诱导肺纤维化中的表达

目的 检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在博莱霉素(BLM)致小鼠肺纤维化模型肺内的表达水平,探讨HMGB1在肺纤维化发病机制中的作用.方法 取20只4～6周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为BLM组和生理盐水(NS)对照组,每组10只.分别向气管内灌注BLM(3 mg/kg)和NS,10 d后处死小鼠.应用RT-PCR法检测两组肺组织HMGB1和α-SMA的mRNA表达水平,应用免疫组织化学检测两组肺组织中HMGB1和α-SMA的蛋白表达水平.结果 RT-PCR半定量和免疫组织化学半定量分析结果显示,BLM组HMGB1的mRNA和蛋白表达均较NS对照组显著增加(0.61±0.08比0.15±0.02,13.12±1.33比7.92±1.10,P均<0.01);BLM组α-SMA的mRNA和蛋白表达均较NS对照组显著增加(0.89±0.12比0.60±0.07,13.66±1.01比8.18±1.33,P均<0.01).结论 在BLM诱导的肺纤维化中肺组织的HMGB1和α-SMA表达增加.肺纤维化病理过程可能与HMGB1表达增加并活化α-SMA的表达有关.     

大鼠心肌梗死后心肌高迁移率族蛋白HMGB1的时程变化

目的 探讨大鼠心肌梗死模型后不同时间高迁移率族蛋白(HMGB1)的时程变化.方法 结扎SD大鼠左冠状动脉前降支造成左室大面积心梗,分别于术后1、2、4、8周测心功能判断造模是否成功后开胸取心脏.分别运用实时荧光定量PCR和Western蛋白印迹技术观察心肌梗死后不同时间点HMGB1在mRNA和蛋白水平的表达变化.结果 心功能检测提示造模成功,心梗大鼠术后早期(1 w)HMGB1 mRNA表达上调(P＜0.01),而心梗后期(8周)则表达显著减少(P＜0.01).与mRNA水平变化类似,HMGB1蛋白水平在心肌梗死组大鼠术后早期(1～2周)表达水平增加(P＜0.01),而心梗后期(8周)则显著下调(P＜0.05).结论 HMGB1作为炎症调节因子,在心梗早期对心肌的炎性反应进行调控;并在心梗后期参与调节基因转录,进行心肌修复.在心梗的不同阶段对HMGB1的表达进行干预有望减少心梗并发症,改善预后.提高患者长期存活率.     

HMGB1和GPX3在甲状腺癌中的变化及其与病理特征的关系

目的 探讨血浆高迁移率蛋白I(HMGB1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX3)在甲状腺癌中的变化及其与病理特征的关系.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定甲状腺癌组(153例)、甲状腺良性结节组(120例)及健康对照组(120例)血浆HMGB1、GPX3水平,分析血浆HMGB1、GPX3在甲状腺癌患者中的变化;应用受试者特异性曲线(ROC)分析血浆HMGB1、GPX3在甲状腺癌中的应用价值.结果 甲状腺癌组血浆HMGB1、HMGB1水平及其阳性表达率均高于甲状腺良性结节组及健康对照组(P＜0.05),血浆GPX3水平及GPX3阳性表达率低于甲状腺良性结节组及健康对照组(P＜0.05).甲状腺良性结节组及健康对照组血浆HMGB1、GPX3水平及HMGB1、GPX3阳性表达率比较均差异无统计学意义(P＞0.05).甲状腺癌血浆HMGB1表达与浸润程度、TNM分期、淋巴转移有密切关系(P＜0.05),GPX3表达与TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).经ROC分析可知,HMGB1、GPX3在甲状腺癌中诊断灵敏度及特异度分别为76.3％、85.5％、70.8％和82.2％.结论 血浆HMGB1、GPX3表达水平与甲状腺癌发生及病情进展有密切关系.     

高迁移率蛋白-1用于评估及预测急性冠脉综合征危险

目的 探讨HMGB1在不同类型冠心病中的表达及意义,以以及对冠心病预后的预测作用。方法 收集237例住院冠心病病人,分为心肌梗死组、不稳定性心绞痛组、稳定性心绞痛组、稳定性心绞痛组。并且选取80例造影阴性患者作为对照组。采用ELISA 法检测血清HMGB1水平, 同时检测各组生化指标, 如空腹血糖、TC、FBG、LDL-C、HDL-C 等。结果 急性心肌梗死组、不稳定型心绞痛组、稳定性心绞痛组中血清HMGB1浓度均高于对照组,其中心肌梗死组最高;logistic 多元逐步分析显高HMGB1浓度与ACS 发生独立相关。生存曲线显示HMGB1表达越高,死亡风险越大。结论 血清HMGB1可能是评估冠心病的新的独立危险因素, 可能与ACS 的发生有关,并且可以预测死亡率。     

人脑胶质瘤组织中HMGB1基因的表达及其意义

目的 通过检测人脑胶质瘤组织中HMGB1基因的表达水平,探讨其与胶质瘤发生发展的关系.方法 采用荧光实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,检测了42例人脑胶质瘤组织和20例正常脑组织中HMGB1 mRNA表达水平,分析其与胶质瘤的关系.结果 HMGB1 mRNA在胶质瘤组、Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组、Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组及对照组中的表达量分别为21.460％±3.185％、24.300％±6.673％、19.710％±3.179％、7.616％士1.449％.统计显示HMGB1 mRNA表达水平在胶质瘤组明显高于对照组(P＜0.05),且在Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组及Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组中均明显高于对照组(P＜0.05),但HMGB1 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组与Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组中的表达水平无显著差异(P＞0.05).结论 HMGB1基因在人脑胶质瘤组织中有高表达,说明HMGB1基因与胶质瘤的发生、发展过程密切相关.     

心肌梗死后Neurturin动态表达与心脏迷走神经重构的相关性

目的 探讨Neurturin (NRTN)在心肌梗死后的动态表达及其与迷走神经重构的关系.方法 选用SPF级Wistar健康雄性大鼠54只,随机分为心肌梗死3d组(n=10)、心肌梗死1周组(n=10)、心肌梗死4周组(n=10)和各自对应的假手术组(n=8).利用结扎冠状动脉左前降支的方法制备大鼠心肌梗死模型.从各组大鼠梗死周边及左室游离壁(LVFW)取材,采用RT-PCR、Western blot法检测NRTN的mRNA及其蛋白表达,RT-PCR、免疫组织化学法检测迷走神经的表达及支配.结果 心肌梗死1周组大鼠梗死周边心肌中NRTN mRNA及蛋白的表达显著增加,且高于心肌梗死3d组及心肌梗死4周组(P＜0.01).心肌梗死3d组梗死灶周边ChAT阳性神经纤维密度及mRNA含量低于假手术组,而心肌梗死1周组及4周组ChAT阳性神经纤维密度及mRNA含量明显高于相应假手术组,且高于心肌梗死3d组(P＜0.01).结论 心肌梗死后NRTN的动态表达与迷走神经重构密切相关,通过调节NRTN的表达可能有利于纠正心肌梗死后心脏自主神经失衡并改善预后.     

HMGB3对胎儿生长受限患者胎盘滋养层细胞增殖及凋亡的影响与机制分析

目的 观察HMGB3在胎儿生长受限患者胎盘中的表达,探讨其对滋养层细胞增殖及凋亡的影响与机制分析.方法 选取分娩的产妇90例,49例健康产妇为正常组,41例FGR患者为FGR组,采用实时荧光定量PCR检测2组胎盘组织中HMGB3 mRNA的表达.将HMGB3过表达质粒(HMGB3组)或空质粒(对照组)分别转染入人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo中,转染24 h后检测2组细胞的增殖、迁移和凋亡情况.采用String生物信息数据库分析与HMGB3相互作用的蛋白,用实时荧光定量PCR和免疫共沉淀检测2组细胞中预测的结合蛋白mRNA的表达及其与HMGB3的结合情况.结果 HMGB3 mRNA在FGR组胎盘组织中的表达显著低于其在正常组胎盘组织中的表达(P ＜ 0.001).与对照组相比,HMGB3组细胞的增殖活性和细胞迁移率显著增加(P＜0.05,P ＜ 0.001),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).经String软件预测共有10个蛋白与HMGB3相结合,分别为NDNL2、HMGN2、NUMA1、NUCKS1、GM2A、H2AFZ、SUPT16H、SSRP1、BTAF1 和NPL.在HMGB3组细胞中,GM2A和NPL表达无变化,NDNL2下调,其余蛋白均上调.结论 HMGB3在FGR患者胎盘组织中低表达,且HMGB3过表达可促进滋养层细胞增殖及迁移,抑制凋亡.HMGB3介导的DNA、组蛋白、染色质等活动异常可能是导致FGR发病的机制之一.     

高迁移率族蛋白1在子宫肌瘤中的表达及临床意义

目的 探讨高迁移率族蛋白I(High mobility group box1,HMGB1)在子宫肌瘤中的表达及临床意义.方法 应用实时荧光定量PCR技术、Western blotting法及免疫组织化学SP法检测子宫肌瘤和相应肌瘤旁组织HMGB1 mRNA及该蛋白的表达情况.结果 HMGB1 mRNA在子宫肌瘤组中表达量高于相应肌瘤旁肌层组,差异有统计学意义(2-△△0α=12.38＞2);子宫肌瘤组HMGB1蛋白水平及阳性表达率均比对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05),且在肌瘤组中其阳性反应主要定位在细胞核,细胞质未见或仅见轻微的阳性表达.结论 HMGB1及HMGB1 mRNA在子宫肌瘤中表达上调,该蛋白可能与子宫肌瘤的发生、发展存在密切关系;HMGB1阳性反应主要定位在细胞核,HMGB1可能通过核内作用促进子宫肌瘤细胞增殖.     

牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的：观察牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1（high-mobility group box-1 protein,HMGB1）表达的影响。 方法：30只SPF级Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、内毒素组和牛珀至宝微丸组。牛珀至宝微丸组大鼠每天以含生药量3mg的牛珀至宝微丸生理盐水悬液3mL灌胃,连续7d,正常组予生理盐水。模型组和牛珀至宝微丸组大鼠用静脉注射内毒素（1.5mg/kg）联合腹腔注射D-氨基半乳糖（100mg/kg）方法建立内毒素休克模型。采用二氨基联苯胺（diaminobenzidine,DAB）显色和异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）荧光标记的免疫组织化学染色以及蛋白印迹等方法检测大鼠肺组织内HMGB1的表达。 结果：正常组HMGB1表达较弱,仅有少量细胞呈阳性,阳性部位多在细胞核;内毒素组HMGB1表达增加,阳性部位主要在细胞质;牛珀至宝微丸组HMGB1表达更高,阳性部位主要在细胞核。 结论：牛珀至宝微丸能使HMGB1定位于细胞核内,从而可能避免被分泌出胞,产生毒性,这可能是其治疗感染性休克的作用机制之一。     

脑梗死患者HMGBl和IL-1水平动态变化研究

目的观察急性脑梗死患者血清HMGBl和IIL-1表达水平的动态变化,探讨HMGBl和IL-1在急性脑梗死发病机制中的临床意义。方法实验分为急性脑梗死实验组和对照组,实验组和对照组脑梗死患者分别于发病1d、7d、15d和30d取空腹静脉血,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法fELISA）测定血清HMGBl和IL-1表达水平。结果急性脑梗死实验组1d、7d、15d和30d时血清HMGBl和IL-1表达水平显著高于正常对照组（P〈0．05）;其中急性脑梗死实验组中患者在发病1d、7d、15d和30d四个时间段血清HMGBI表达水平持续升高,而患者在发病1d和7d两个时间段IL-1表达升高．而在15d和30d两个时间段IL-1表达水平均出现明显下降（P〈0．05）。结论HMGBl和IL-1作为重要的炎症因子介导了急性脑梗死的炎症反应;HMGBl还与脑损伤后的组织修复过程有关。     

子痫前期患者胎盘和母血中高迁移率族蛋白1及TLR4的表达

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1和Toll样受体(TLR)4与子痫前期的关系。方法:选取60例子痫前期患者(其中轻度30例,重度30例)作为研究对象,以30例正常晚孕妇女作为正常对照,采用RT-PCR及免疫组化法测定胎盘组织中HMGB1及TLR4mRNA和蛋白的表达,ELISA法测定母血血浆中HMGB1和TLR4蛋白水平。结果:HMGB1主要定位于滋养细胞的胞质中,TLR4主要定位于胎盘合体滋养细胞的胞膜及胞质中。3组胎盘组织中HMGB1、TLR4mRNA和蛋白的表达水平、母血中2种蛋白的水平差异均有统计学意义(F=79.143、35.155、6.030、10.080、12.493和11.856,P均<0.05);轻、重度子痫前期患者胎盘组织中HMGB1及TLR4mRNA和蛋白的表达水平、母血中HMGB1和TLR4蛋白水平均高于正常晚孕妇女(P<0.05),但轻、重度子痫前期组之间差异无统计学意义(P<0.05)。子痫前期患者胎盘组织中HMGB1与TLR4mRNA相对表达量、母血中2个蛋白的表达水平呈正相关(r分别为0.862和0.783,P<0.001),胎盘组织中2个蛋白的表达亦呈正相关(rs=0.825,P<0.001)。结论:HMGB1和TLR4表达增高与子痫前期发病密切相关,可能是子痫前期的发病机制之一。     

血红素加氧酶-1在高氧肺损伤小鼠中的表达及作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在高氧造成的肺损伤转基因小鼠和正常小鼠中的肺部表达水平及其作用.方法 把32只新生小鼠分成4组:野生型组(WT组),特异性转基因小鼠全身高水平表达HO-1组[HO-1-FL(H)组,细胞质]、特异性转基因小鼠全身低水平表达HO-1组[HO-1-FL(L)组,细胞质]和切去C末端HO-1(Nuc-HO-1-TR组,细胞核).把4组小鼠暴露在高氧环境中3d,然后放到正常空气环境中,通过免疫组织化学、免疫荧光等实验技术来观察小鼠3d、7d和14 d肺泡发育情况及HO-1在小鼠肺部表达情况.结果 HO-1在HO-1-FL(H)组小鼠肺部高表达,高氧暴露3d后4组小鼠肺部肺泡发育都受到了损害,在正常空气环境中7、14 d时HO-1-FL(H)组小鼠的肺泡发育恢复得最好.结论 小鼠肺部适度高水平的HO-1表达有助于高氧环境造成的小鼠肺损伤的恢复.     

P53和高迁移率族蛋白-1在不同程度慢性乙型肝炎后肝纤维化组织中的含量及其意义

目的：探讨P53和高迁移率族蛋白-1(high mobility group protein 1,HMGB1)表达在慢性乙型肝炎肝纤维化中的作用。方法：将103例经病理活检证实为肝纤维化的慢性乙型肝炎患者按照非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)量表进行肝纤维化评分,分为3组：无纤维化组(n=18)、低纤维化组(n=49)和高纤维化组(n=36)。检测患者血清HMGB1水平,根据HMGB1水平和肝纤维化的程度绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线。采用CCl4法诱导肝纤维化大鼠模型后于第6周和第12周处死部分大鼠,Masson染色法观察各组大鼠肝纤维化程度,Western印迹测定大鼠肝组织中HMGB1和P53蛋白水平,酶联免疫吸附法检测组蛋白去乙酰化酶活性以及外周血炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6含量。结果：低纤维化组及高纤维化组患者血清HMGB1水平均明显高于无纤维化组(P<0.01);ROC曲线示血清HMGB1诊断肝纤维化程度的cut off值为74 pg/mL,特异性为65%,敏感性为87%。与正常组比较,低、高度肝纤维化组大鼠肝组织蛋白中,核内HMGB1减少,胞质HMGB1增多,而P53蛋白表达量明显增加(P<0.01),组蛋白去乙酰化酶活性降低,外周血炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6水平升高。结论：慢性乙型肝炎后肝纤维化组织中P53和HMGB1表达均明显增加;HMGB1水平与肝纤维化水平呈正相关,可作为辅助诊断肝纤维化的指标。     

BRCA1蛋白在原发性上皮性卵巢癌中的表达

目的探讨卵巢癌乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白在原发性上皮性卵巢癌中的表达。方法取本院妇产病理研究室1996年1月~2003年8月的原发性上皮性卵巢癌存档蜡块,共81例。用鼠抗人BRCA1蛋白C端单克隆抗体检测原发性上皮性卵巢癌BRCA1蛋白的表达,以同侧或对侧卵巢的正常生发上皮、同期12例良性上皮性卵巢肿瘤标本的BRCA1蛋白的表达作为对照。结果81例原发性上皮性卵巢癌中,仅44例(54.3%)BRCA1蛋白在细胞核中正常表达,34例(42.0%)在细胞浆中错位表达,3例(3.7%)表达完全缺失。13例原发性上皮性卵巢癌患者找到正常卵巢生发上皮,有2例BRCA1蛋白表达异常,异常表达率为15.4%。BRCA1蛋白在12例良性上皮性卵巢肿瘤的上皮细胞中未见异常表达。结论原发性上皮性卵巢癌中BRCA1蛋白异常表达率高,表达异常包括细胞核中表达下降甚至缺失,以及细胞浆中错位表达,这可能与卵巢癌的发生发展密切相关。     

多发性骨髓瘤患者APE1蛋白表达的临床意义

目的　检测多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者脱嘌呤 脱嘧啶核酸内切酶(apurinic apyrimidinicendonu clease,APE1)基因表达,探讨其临床意义。方法　采用免疫细胞化学、Westernblot分析在MM细胞系KM3、32例MM患者 和10例正常自愿者骨髓标本中检测APE1蛋白表达及定位,并且通过图像分析系统计算其积分光密度值。结果　在阳性 对照的MM细胞系KM3中胞核、胞核 胞浆、胞浆均有APE1表达,其中尤以胞核明显。APE1胞浆阳性分度在正常对照组、 初治组、复发或难治组间依次增高(P<0.01,0.05)。结论　APE1蛋白表达强度与MM疗效有关,APE1基因表达增强可能 是MM患者预后不良的指标之一。     

IL-1β诱导支气管上皮细胞高迁移率族蛋白1主动释放

目的：研究IL‐1β对健康人支气管上皮细胞（HBE）高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达和释放的影响。方法培养HBE135‐E6E7,四唑盐（MTT）法检测不同浓度IL‐1β对支气管上皮细胞活力的影响,荧光定量PCR检测IL‐1β刺激HBE后HMGB1mRNA表达,双抗体夹心ELISA法检测细胞上清液中HMGB1水平,蛋白免疫印迹方法检测IL‐1β刺激HBE总蛋白、胞核、胞质HMGB1表达。免疫荧光观察IL‐1β刺激后对HBEHMGB1的移位的影响。结果0．1、1．0、10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h对其活力无影响。IL‐1β以浓度和时间依赖性方式刺激HBE的HMGB1mRNA水平升高,IL‐1β增加HBE的HMGB1蛋白表达水平。在浓度依赖性实验,与对照组比较,1．0、10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h后培养上清液HMGB1水平显著增加;在时间依赖性实验中,与对照组比较,10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE12h、24h后细胞上清液中的HMGB1显著升高（P＜0．05）;10．0ng／mLIL‐1β刺激HBE24h后,HBE胞质蛋白明显增加,胞核蛋白减少。免疫荧光检测显示,HMGB1主要表达正常HBE的细胞核内,少量分布于细胞质,IL‐1β（10．0ng／mL）刺激HBE24h,HMGB1明显从HBE胞核向胞质转位。结论IL‐1β可以显著诱导支气管上皮细胞HMGB1的表达和主动释放,提示HMGB1可能参与了IL‐1β介导慢性气道炎症过程。