铜绿假单胞菌分泌蛋白Pec1抑制肺巨噬细胞吞噬功能的初步研究

目的：探讨铜绿假单胞菌分泌蛋白Pec1对小鼠肺泡巨噬细胞株MH?S吞噬功能的影响。方法：通过PCR扩增、质粒构建、原核表达及蛋白纯化等过程制备重组蛋白Pec1;CCK?8法检测Pec1蛋白对MH?S细胞增殖的影响;中性红染色检测MH?S细胞的吞噬功能;荧光显微镜观察MH?S细胞对铜绿假单胞菌标准菌株PAO1灭活菌的吞噬能力。结果：成功构建重组质粒pET?30a?pec1,原核表达并纯化后得到重组蛋白Pec1,其分子量为30.5 kDa。Pec1对MH?S细胞的增殖有抑制作用,Pec1浓度越高,对细胞增殖的抑制作用越明显;Pec1能减少MH?S细胞对中性红的内吞,抑制MH?S细胞对铜绿假单胞菌灭活菌的吞噬作用。结论：铜绿假单胞菌分泌蛋白Pec1对MH?S细胞的吞噬功能有抑制作用。     

黄芩苷联合头孢他啶对铜绿假单胞菌生物膜的影响

目的 通过在体外建立铜绿假单胞菌生物膜模型,研究黄芩苷联合头孢他啶对生物膜的协同杀菌效果.方法 选取临床分离的呼吸道铜绿假单胞菌,采用LB肉汤-吸痰管系统建立体外生物膜模型,连续稀释法进行活菌计数,微量稀释法测定药物的最低抑菌浓度(MIC).结果 15.65 mg/L的黄芩苷可抑制和破坏生物膜,并增强头孢他啶对生物膜内铜绿假单胞菌的抗菌活性.结论 黄芩苷能增强头孢他啶对生物膜内铜绿假单胞菌的清除作用.     

降钙素基因相关肽抑制铜绿假单胞菌外膜囊泡致炎作用

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对铜绿假单胞菌外膜囊泡（OMVs）诱导炎症反应的影响。方法培养铜绿假单胞菌并提取OMVs,取1、5、10μg·mL-1 OMVs刺激鼠巨噬细胞RAW264.7,采用ELISA法检测细胞中促炎性细胞因子[包括白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]含量,采用CCK-8法及流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用10μg·mL-1 OMVs与1、5、10 nmol·L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,并检测细胞中促炎细胞因子水平;采用20μg·mL-1 OMVs与10 nmol·L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,检测细胞增殖与凋亡;培养人中性粒细胞,采用脱颗粒实验检测CGRP对其分泌中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白（NGAL）及弹性蛋白酶活性的影响。结果不同浓度OMVs均能显著刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β（P<0.05）,而CGRP则能够抑制RAW264.7细胞分泌促炎细胞因子,且呈剂量依赖性（P<0.05）;20μg·mL-1 OMVs则能够显著降低细胞活性,并促进细胞凋亡（P<0.05）,10 nmol·L-1 CGRP与OMVs共同处理能显著增加RAW264.7细胞活性,抑制凋亡发生（P<0.05）;不同浓度OMVs均能提升NGAL表达水平以及弹性蛋白酶活性（P<0.05）,而10 nmol·L-1 CGRP则能够显著抑制OMVs引起的脱颗粒效应（P<0.05）。结论 CGRP可有效下调铜绿假单胞菌OMVs诱导的鼠巨噬细胞RAW264.7促炎因子分泌水平、减少凋亡率以及特异性中性粒细胞释放,进而抑制炎症反应。     

槲皮素和黄芪甲苷对多药耐药铜绿假单胞菌抗菌活性的研究

目的：测定槲皮素和黄芪甲苷对多药耐药铜绿假单胞菌是否具有抑菌活性。方法微量稀释法药敏试验TTC染色用于定量检测中药单体对多药耐药铜绿假单胞菌的体外最低抑菌浓度MIC。结果槲皮素MIC为63．5μM,黄芪甲苷对铜绿假单胞菌无明显抑制作用。结论槲皮素对于耐药铜绿假单胞菌具有良好的抑菌活性,且呈浓度依赖性。对于槲皮素的进一步开发利用,在临床治疗和新药研制方面都具有深远意义。     

多壁碳纳米管抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能

目的 观察多壁碳纳米管（MWCNT）对巨噬细胞吞噬功能的影响.方法 采用常规细胞培养技术培养RAW264.7巨噬细胞;用流式细胞术定量检测RAW264.7巨噬细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌（FITC-tagged E.coli k-12）的情况.结果 MWCNT剂量依赖性地抑制RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌,随着MWCNT浓度的增加,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量（用平均荧光强度表示）降低.此外,MWCNT抑制RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌亦呈时间依赖性：用MWCNT（75 μg/ml）孵育RAW264.7细胞12h后,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量与对照组相比降低了约70.4％ （P ＜0.01）,同时参与吞噬活动的RAW264.7细胞的百分比也从对照组的98.6％降低到了92.4％ （P＜0.05）.即使用低剂量的MWCNT（25 μg/ml）孵育RAW264.7细胞较长时间（24h）后,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量与对照组相比仍降低了约77.1％ （P ＜0.01）,同时参与吞噬活动的RAW264.7细胞的百分比也从71.2％降低到了43.4％ （P ＜0.01）.用脂多糖（LPS,10μg/ml）激活RAW264.7细胞后,其吞噬能力明显增强,而MWCNT仍可剂量依赖性地抑制LPS激活的RAW264.7细胞的吞噬能力,与LPS组相比,MWCNT（75 μg/ml）和LPS共孵育组吞噬大肠杆菌的量降低了70.9％ （P ＜0.01）.结论 MWCNT可明显抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能.     

GITR调控巨噬细胞自噬在铜绿假单胞菌感染中的作用

目的探讨糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)在铜绿假单胞菌(PA)感染中的作用。方法在小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中过表达PSG5-GITR,PA感染、异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)或Alexa Fluor 488荧光素标记的酵母多糖生物微粒处理。免疫荧光和蛋白印迹检测PA感染细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达,免疫荧光、平板计数试验或流式细胞术检测细胞吞噬能力。结果过表达PSG5-GITR促进PA感染后RAW264.7细胞LC3Ⅱ的表达,上调LC3斑点数量;抑制细胞对PA和FITC-Dextran的吞噬作用,下调吞噬溶酶体的数量;3-甲基腺嘌呤抑制自噬后,GITR抑制的RAW264.7细胞吞噬作用被有效回复。结论 GITR通过促进PA诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬,从而抑制其吞噬功能。     

金盏花苷E通过ROS介导的JAK1-stat3信号途径抑制LPS诱发的炎症反应

目的探讨金盏花苷E对脂多糖（LPS）诱导炎症反应的抑制作用及可能的分子机制。方法CCK-8实验检测不同浓度（0、 2、4、6、8、10、20、25、30 μg/mL）的金盏花苷E对RAW264.7 细胞活力的影响;不同浓度的金盏花苷E（0、6、8、10 μg/mL）预处理 RAW264.7细胞2 h,然后用LPS（100 ng/mL）刺激细胞特定的时间,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β释放;Western blotting检 测iNOS、COX-2的表达水平及JAK-stats、MAPKs及NF-кB信号途径的磷酸化;ROS检测试剂盒检测RAW264.7 细胞内ROS含 量;激光共聚焦实验检测转录因子stat3的核转位。结果CCK-8结果显示,金盏花苷E浓度在低于20 μg/mL时对RAW264.7细 胞无明显毒性作用;金盏花苷E浓度依赖性地下调LPS诱导的iNOS和COX-2的表达（P<0.01 vs LPS组）;抑制LPS诱导的促炎 细胞因子TNF-α及IL-1β的释放,且1 0 μg/mL组抑制作用尤为显著（P<0.01 vs LPS组）;抑制LPS诱导的JAK1-stat3信号途径激 活及stat3的核转位;降低LPS诱发的ROS产生（P<0.01 vs LPS组）。结论金盏花苷E通过抑制ROS介导的JAK1-stat3信号途 径,抑制LPS诱导的炎症反应。     

EMA-PCR方法快速检测铜绿假单胞菌活菌研究

目的 探讨将叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)选择渗透性与PCR技术相结合（EMA-PCR）,建立有效快速检测铜绿假单胞菌活菌的方法。方法 以铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检测靶基因,纯培养物提取模板进行PCR,检测PCR灵敏度、EMA使用浓度和曝光时间优化试验。结果 PCR检测灵敏度为3×103 CFU/mL;曝光处理时间为10 min;EMA浓度≤5 μg/mL对活菌DNA扩增没有明显抑制,终浓度为1 μg/mL EMA能有效抑制3×106 CFU/mL死菌扩增;1%活菌混合体系检测结果阳性。结论 EMA-PCR方法能有效快速检测铜绿假单胞菌活菌,能避免PCR检测可能造成的假阳性结果。     

鱼腥草素钠增强妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜作用及抗菌协同作用

目的：研究鱼腥草素钠增强妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用。方法：微量倍比稀释法测定鱼腥草素钠、妥布霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度（MIC）,棋盘稀释法测定两者联合抗菌作用,结晶紫染色法测定单药及联合用药对铜绿假单胞菌生物被膜的最小抑膜浓度（SMIC）,扫描电镜下观察药物对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响,采用倾注平板法进行菌落数计数。结果：鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MIC为512μg/mL,妥布霉素对铜绿假单胞菌的MIC为4μg/mL,两药联合后MIC分别为64μg/mL和1μg/mL,分级抑菌浓度指数（FIC）为0.375,提示两药协同作用明显。妥布霉素对铜绿假单胞菌生物被膜SMIC50黏附期为8μg/mL,早期生物被膜阶段为16μg/mL,成熟期生物被膜阶段为32μg/mL,两药联合后铜绿假单胞菌生物被膜SMIC50黏附期为8μg/mL,早期为0.5μg/mL,成熟期为8μg/mL,鱼腥草素钠对妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜有增强作用。结论：鱼腥草素钠与妥布霉素抗菌协同作用明显,鱼腥草素钠对妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜有增强作用。     

低强度脉冲超声对脂多糖诱导炎性活化的RAW264.7巨噬细胞迁徙和吞噬的影响

目的 探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对脂多糖（LPS）活化和未经活化的RAW264.7细胞迁徙和吞噬能力的影响。方法 LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立体外炎症活化模型;通过CCK-8法研究LIPUS对不同环境下RAW264.7细胞活力的影响,划痕实验观察LIPUS对RAW264.7巨噬细胞迁徙的影响,Transwell实验观察LPS作为趋化因素时RAW264.7细胞趋化迁徙能力的变化情况,共聚焦显微镜及流式细胞术分析细胞内FITC荧光强度以探究巨噬细胞吞噬pHrodo Green标记的大肠埃希菌生物颗粒的能力。结果 成功构建活化RAW264.7炎症模型,筛选LPS浓度为100 ng/mL;LIPUS抑制未活化的RAW264.7巨噬细胞向划痕区域内迁徙和未活化巨噬细胞的趋化迁徙;但在当前参数下LIPUS不影响巨噬细胞的细胞活力和吞噬能力。结论 LIPUS抑制经LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的迁徙,但不影响其吞噬作用。     

Investigation of Extracts from Tunisian Ethnomedicinal Plants as Antioxidants,Cytotoxins, and Antimicrobials

Objective To determine the medicinal potential of various plants and their parts extracted with different solvents. Methods The total phenolic content of acetonitrile/water(60%-40%)(ACN/W) and aqueous(W) extract fractions was determined by high-performance liquid chromatography(HPLC), and terpenic compounds were detected by gas chromatography/mass spectrometry(GC/MS). Antioxidant activity of the samples was evaluated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH) assay and β-carotene bleaching method. Cell viability was investigated by thiazolyl blue tetrazolium bromide [3-(4,5-dimethylthiazol)-2-yl 2,5-diphenyltetrazolium bromide](MTT) assay. The mechanisms involved in cytotoxic activity were investigated in a murine macrophage cell line(RAW 264.7) and cancer lines. Results Our findings show that 11 plant species exhibited biological activity. In addition, moderate antibacterial activity was reported against one or more of the tested bacterial strains at two concentrations: 300 μg and 3 mg/disc. Furthermore, our data reveal that among all plants investigated, some extract and hydrophobic fractions were potent scavengers of the DPPH radical(6.78 μg/m L EC50 8.55 μg/mL). Taken together, our results show that Nerium oleander(NOACN/W) and Pituranthos tortuosus(PTACN/W) were highly cytotoxic against RAW 264.7 cells with IC80 values of 0.36, and 1.55 μg/mL, respectively. In contrast, murine macrophage cell lines had low growth and were significantly sensitive to water extracts of Thymus hirtus sp. algeriensis(THW), Lavandula multifida(LMW), and ACN/W extract of Erica multiflora(EMACN/W) at doses 400, 47.20, and 116.74 μg/m L, respectively. The current work demonstrates that RAW 264.7 cell proliferation was inhibited by samples in a dose-dependent manner. Conclusion Our findings, validated through free radical scavenging activity, agar diffusion assay, and cytotoxicity of essential oils towards cancer cells, show that ethnomedicinal plants used in this work have a novel application as a tumor suppressor.     

白杨素通过JAK-STATs 信号通路抑制内毒素诱导的巨噬细胞炎症反应

目的探讨白杨素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的调控机制。方法分别用不同浓度（0、5、10、20、40、60、80、100、150、 200 μg/mL）白杨素作用RAW264.7 细胞24 h 后,采用CCK-8 检测细胞活力值;分别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理 RAW264.7细胞2 h后,用LPS刺激RAW264.7细胞18 h后,采用ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放水平;分 别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理RAW264.7 细胞2 h 后,用LPS刺激RAW264.7 细胞4 h 后,运用Western blotting 法检测 JAK-1、JAK-2、STAT-1、STAT-3 的磷酸化水平;分别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理RAW264.7 细胞2 h 后,用LPS 刺激 RAW264.7 细胞15 min 后,运用CM-H2DCFDA荧光探针检测RAW264.7 细胞内活性氧簇水平;运用ROS清除剂NAC处理 RAW264.7细胞,检测ROS对LPS诱导RAW264.7细胞JAK-STATs信号和炎症反应的影响;运用激光共聚焦显微镜观察转录因 子STAT-1和STAT-3核转位情况。结果在白杨素浓度低于60 μg/mL时,对RAW264.7细胞活力没有显著影响,因此我们选择 10、30、60 μg/mL白杨素作为抑制炎症作用的低、中、高剂量组;白杨素剂量依赖性地抑制LPS诱导的炎症蛋白iNOS的表达;白 杨素剂量依赖性的下调LPS诱导的RAW264.7细胞中促炎因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放（P<0.01）;白杨素抑制RAW264.7 细胞中JAK-STATs信号活化并抑制STAT-1和STAT-3核转位;白杨素抑制RAW264.7细胞内ROS的产生;ROS作为上游信号介 导JAK-STATs信号通路的活化。结论白杨素能有效阻断ROS介导的JAK-STATs信号活化,从而抑制LPS诱导的RAW264.7 细胞炎症反应。     

负载骨髓干细胞来源外泌体的3D水凝胶通过调节免疫促进损伤软骨的修复

目的 分探究负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶对软骨损伤的修复情况。方法 首先利用超速离心法分离提取出骨髓干细胞上清液中的外泌体,并通过外泌体透射电镜、粒径分析以及Western blot检测外泌体表面marker。检测负载外泌体的GelMA水凝胶相关性能（包括流变以及电镜）。通过BCA测蛋白法检测外泌体的释放情况,以及通过PKH26红色荧光染料标记外泌体,观察外泌体被RAW264.7细胞吞噬情况。将RAW264.7细胞种在孔板表面,分为空白对照组（Control组）、单纯外泌体组（Exo组）、单纯水凝胶组（GelMA组）、负载外泌体的水凝胶组（GelMA-Exo组）。通过q-PCR以及免疫荧光检测负载外泌体的GelMA水凝胶对于RAW264.7细胞极化的影响。建立材料/RAW264.7细胞/软骨细胞Transwell共培养模型,上室为软骨细胞,下室为材料/ RAW264.7细胞,分组与上面一致,通过q-PCR以及免疫荧光检测损伤软骨细胞的修复情况。构建大鼠膝关节软骨损伤模型,分为假手术组（Sham组）、单纯损伤组（SI组）、单纯水凝胶组（GelMA组）以及负载外泌体的水凝胶组（GelMA-Exo组）,通过HE和Masson染色检测软骨修复情况。结果 通过对提取的细胞进行多系分化能力的检测,成功获取了骨髓干细胞。通过透射电镜、粒径分析以及Western blot检测,成功分离出骨髓干细胞外泌体。负载外泌体的GelMA水凝胶明显促进RAW264.7细胞向M2型极化（P<0.05）。体外共培养模型表明负载外泌体的GelMA水凝胶能显著促进损伤软骨细胞的修复通过调节RAW264.7细胞由M1型向M2型转化（P<0.05）。HE和Masson染色表明负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶明显促进软骨损伤的修复。结论 负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶能够通过改善免疫微环境明显促进大鼠软骨损伤的修复。     

不同浓度熊果酸对破骨细胞增殖分化的作用及其意义

目的：研究熊果酸（UA）对破骨细胞（OC）增殖分化的影响,探讨其在正畸力致牙根吸收过程中的作用以及与OC间的关系。方法：对小鼠单核/巨噬系细胞RAW264.7进行OC诱导,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法及骨吸收陷窝观察鉴定诱导是否成功。采用CCK-8法选取对RAW264.7无细胞生物毒性适宜浓度的UA,观察其对RAW264.7增殖分化的影响。实验组在培养液中加入梯度浓度为1.0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0μmol·L^-1 UA,对照组不加UA。结果：TRAP染色及骨吸收陷窝观察,诱导培养RAW264.7细胞5 d后,可见TRAP染色阳性细胞;扫描电镜下吸收陷窝呈圆形和椭圆形等,底壁较粗糙,边界较清晰。表明RAW264.7细胞成功向OC分化。CCK-8检测,高浓度UA（>10.0μmol·L^-1）显著抑制OC的增殖;适宜浓度UA（5.0μmol·L^-1）既在生物安全浓度范围内,又抑制OC的增殖;低浓度UA（< 2.5μmol·L^-1）无作用。结论：RANKL可诱导RAW264.7细胞分化成熟。UA与OC增殖分化有关联,其在适宜浓度（5.0μmol·L^-1）时对OC增殖有抑制作用,且呈时间依赖性。     

Effects and potential mechanisms of Danzhi Xiaoyao Pill (丹栀逍遥丸) on proliferation of MCF-7 human breast cancer cells in vitro

Objective： To investigate the effects of 50% ethyl alcohol （EtOH） extracts from Danzhi Xiaoyao Pill （丹栀逍遥丸, DXP） on the proliferation of MCF-7 human breast cancer cells and potential mechanisms. Methods： ATP-Lite assay was performed to test the proliferation of the MCF-7 breast cancer cell line; and antioxidant activity was measured by the oxygen radical absorbance capacity （ORAC）. The effects of DXP on nitric oxide （NO） production were tested by lipopolysaccharide （LPS）- stimulated RAW 264.7 murine macrophages using the Griess reaction. Results： The 50% EtOH DXP extracts displayed a cytotoxic response on MCF-7 cells at 0.10, 0.25 and 0.50 mg/mL dosedependently with the proliferation inhibited by more than 85%. The ORAC value of the DXP was 820μ moL Trolox equivalent/g, about 40% of the vitamin C value. DXP extracts had significant inhibitory effect on NO production at the concentration from 0.0625 mg/mL to 0.5 mg/mL （P〈0.05, P〈0.01）. Conclusion： The extracts of DXP could significantly inhibit the proliferation of MCF-7 cells, with the effect possibly related to its antioxidant activity and the inhibition of NO production.     

不同相对分子质量一年生膜荚黄芪多糖对RAW264.7细胞炎症相关因子表达的影响

目的：观察不同相对分子质量的一年生膜荚黄芪多糖（APSⅠ）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7炎症模型分泌促炎因子和抗炎因子的影响,探讨APSⅠ的抗炎作用。方法：体外培养RAW264.7细胞,APSⅠ作用于未经刺激的RAW264.7细胞及LPS（1 mg/L）刺激后RAW264.7细胞,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、APSⅠ组及LPS+ APSⅠ不同相对分子质量组(APSⅠ-A,APSⅠ-B,APSⅠ-C),采用CCK-8法检测不同相对分子质量、不同浓度的APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）的分泌量。结果：与空白对照组比较,APSⅠ单独处理组RAW264.7细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）,NO及IL-10表达水平明显增加（P<0.05）,TNF-α的分泌量降低（P<0.05）;与LPS模型组比较, LPS+APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力显著升高（P<0.05或P<0.01）,NO、TNF-α的表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,IL-10的分泌增加（P<0.05或P<0.01）;3种不同相对分子质量APSⅠ之间比较,APSⅠ-C对NO、TNF-α的抑制更为明显,且APSⅠ-C促进IL-10分泌的作用强于APSⅠ-A及APSⅠ-B。结论：APSⅠ　可以拮抗LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应;不同相对分子质量APSⅠ的抗炎作用有差异,APSⅠ的生物活性与其相对分子质量存在一定的关联性。     

京尼平苷对大鼠前列腺成纤维细胞增殖的影响

【目的】研究京尼平苷对大鼠前列腺成纤维细胞增殖的影响,并探讨其机制。【方法】培养SD大鼠前列腺成纤维细胞,取对数生长期的细胞随机分成4组：对照组、京尼平苷10mg/L、20mg/L和40mg/L组。不同浓度的京尼平苷孵育大鼠前列腺成纤维细胞48h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA法测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白的含量。【结果】与对照组比较,京尼平苷20mg/L和40mg/L可显著抑制大鼠前列腺成纤维细胞的增殖（P〈0.01）,促进其凋亡（P〈0.01）,同时减少TGF-β1的分泌和胶原的合成（P〈0.05或P〈0.01）。【结论】京尼平苷可抑制大鼠前列腺成纤维细胞的增殖,可能与其减少TGF-β1的分泌和胶原的合成、促进前列腺成纤维细胞的凋亡有关。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、IL-10表达的影响

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及抗炎性细胞因子IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK.-8)对其表达的影响.方法 LPS诱导RAW 264.7细胞不同时间(0、...     

单增李斯特菌膜囊泡的提取及其表征与免疫效应分析

  目的  建立提取单增李斯特菌膜囊泡（Listeria monocytogenes membrane vesicles, LM-MVs）的方法,对LM-MVs表征及诱导固有免疫应答的能力进行分析,为LM-MVs作为疫苗载体和药物递送平台的研究奠定基础。  方法  通过培养→离心→过滤→超滤浓缩→超速离心的方法提取单增李斯特菌分泌的膜囊泡,通过透射电子显微镜观察其形态特征,通过动态光散射分析测量其粒径分布,采用SDS-PAGE和Western blot分析其蛋白表达情况,采用CCK-8细胞增殖与毒性实验分析其对固有免疫细胞增殖能力的影响,采用实时荧光定量PCR对其刺激的固有免疫应答进行分析。  结果  成功建立提取LM-MVs的方法。透射电子显微镜下,LM-MVs呈现近圆形的膜状结构,动态光散射分析显示其大小为65～190 nm。SDS-PAGE和Western blot结果表明LM-MVs含有单增李斯特菌溶血素等蛋白。CCK-8细胞增殖与毒性实验中,10、20和50 μg/mL的LM-MVs干预小鼠树突状细胞（DC 2.4）24 h后的增殖指数均高于未干预的DC 2.4细胞（P<0.05）;0.1、1、10、20和50 μg/mL的LM-MVs干预小鼠巨噬细胞（Raw 264.7）24 h后的增殖指数均高于未干预的Raw 264.7细胞（P<0.01）。实时荧光定量PCR结果显示,50 μg/mL的LM-MVs干预Raw 264.7细胞后肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白细胞介素（interleukin, IL）-1β、IL-6和IL-10的表达量均高于未干预对照（P<0.05）。  结论  本研究建立的方法能够提取出单增李斯特菌分泌的膜囊泡,提取的LM-MVs直径为65～190 nm近圆形膜状结构,能分泌多种蛋白组分,能刺激固有免疫应答。