乳腺癌凝血纤溶指标与生物学行为关系的研究

目的 研究乳腺癌凝血纤溶异常与其转移、激素受体状态、分期等生物学行为的密切关系.方法 检测30例乳腺癌血浆6项凝血和纤溶指标,统计分析其变化与淋巴结转移、细胞增殖、受体状态等的关系.结果 良性对照组与乳腺癌组FiB由(3.05±0.44)g/L增高至(3.39±0.52)g/L(P＜0.05)、D-Di由(0.27±0.06)μg/ml增高至(0.36±0.16)μg/ml(P＜0.05)、PAI-1由(26.14±3.30)ng/ml增高至(34.59±3.68)ng/ml(P＜0.01),差异均有统计学意义.腋窝淋巴结转移阳性者的血浆FiB(3.70±0.47)g/L和PAI-1(37.36±2.71)ng/ml较无转移者增多(P＜0.05);细胞增殖抗原Ki67表达≥30%者PAI-1含量增加(36.40±3.57)ng/ml(P＜0.05).t-PA含量在不同激素受体状态下的差别有统计学意义(P＜0.05).不同TNM病理分期乳腺癌患者之间APTT(P＜0.01)、FiB(P＜0.01)、D-Di(P＜0.05)和PAI(P＜0.05)差异有统计学意义.结论 凝血纤溶指标与乳腺癌增殖、转移、分期等生物学行为有密切关系,可作为判断预后和术后复发转移的监测指标,并有利于血栓前状态的判断.     

胸腺修饰诱导大鼠心脏移植耐受与白细胞介素-2,10的关系

目的在手术当天进行胸腺修饰,诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受,并对其可能机制作初步分析.方法通过胸腺注射和围手术期短程使用FK506来诱导心脏移植耐受,观察供心存活天数、混合淋巴细胞反应及受体鼠血清中白细胞介素(IL)-2、IL-10水平的变化.结果无处理组、对照组、经典诱导组和实验组供心存活时间分别为(6.8±1.9)、(17.4±5.1)、(73.8±8.6)、(55.0±24.7)d,实验组与经典诱导组比较差异无统计学意义(P＞0.05).无处理组、经典诱导组和实验组的供受体脾细胞混合淋巴细胞培养刺激效应分别为198.72%、95.80%、67.94%,实验组和经典诱导组较无处理组增殖反应均明显降低(P＜0.05),而两者间增殖反应差异无统计学意义(P＞0.05).IL-10水平在无处理组移植心脏被排斥时为(48.10±5.14)ng/L较移植前(52.60±10.14)ng/L差异无统计学意义(P＞0.05);而在实验组早期呈低水平表达,为(36.10±2.30)ng/L,术后中期(281.80±65.44)ng/L晚期(80.90±12.39)ng/L较移植前水平高得多,差异有统计学意义(P＜0.05).受体IL-2水平在无处理组发生排斥时为(159.80±59.19)ng/L较移植前(54.80±8.42)ng/L明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论心脏移植手术当日胸腺内注射供体同种抗原,与术前21 d胸腺注射的经典诱导组同样能诱导宿主对移植物的低反应状态;IL-2的水平与排斥反应的发生有关,而IL-10可能是免疫耐受的特异性指标,IL-10更可能与免疫耐受的维持有关.     

氟比洛芬酯术后镇痛对血浆皮质醇、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的影响

目的 观察氟比洛芬酯用于髋关节置换术后患者静脉自控镇痛(patient-controlled intravenous analgesia,PCIA)的临床效果及其对机体血浆皮质醇(cortisol,Cor)、白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的影响.方法 选择40例单侧髋关节置换术患者,ASA Ⅰ级～Ⅱ级,按抽签方法随机分为两组,每组20例,Ⅰ组为枸橼酸芬太尼1.2mg/24ml+0.9%生理盐水76ml,负荷量为枸橼酸芬太尼0.001 mg/kg;Ⅱ组为氟比洛芬酯300mg/30ml+0.9%生理盐水70 ml,负荷量为氟比洛芬酯1 mg/kg.分别于麻醉前(T1)、术后第4 h(T2)、24 h(T3)、36 h(T4)和48 h(T5)5个时点抽取静脉血测定血浆Cor、IL-10和TNF-α浓度,于术后4、24、36、48 h用视觉模拟评分法(visual analogue scales,VAS)行静止和活动评分,均由同一麻醉医生在不知道到具体镇痛方式情况下进行.结果 术后各时点VAS评分两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但Ⅰ组尿潴留、恶心和呕吐发生率40%高于Ⅱ组(P＜0.01).两组在T2时血浆Cor值(275±28.6)μg/I和(276±30.5)μg/L均升高,与T1(203.5±22.3)μg/L和(192.3±21.3)比较差异有统计学意义(P＜0.01),Ⅰ组在T3时血浆Cor水平(256±28.3)μg/L仍明显高于T1值(203.5±22.3)μg/L(P<0.05),在T3(256±28.3)μg/L和T4(235±23.3)μg/L时均高于Ⅱ组水平(176±22.3)μg/L和(172±20.5)μg/L(P＜0.05);两组T3(60.23±3.65)ng/L和(62.35±5.02)ng/L和T4(60.12±3.31)ng/L和(61.34±4.23)ng/L时血浆IL-10水平均高于T1值(55.32±2.61)ng/L和(55.65±2.53)ng/L(P<0.05),组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅱ组在T3、T4和T5时血浆TNF-α浓度(52.56±4.31 ng/L,58.42±5.64 ng/L和59.53±6.02ng/L)均比T1(43.31±1.52)ng/L明显升高(P＜0.01),同时明显高于Ⅰ组(45.12±2.32)ng/L,(42.23±2.21)ng/L和(42.52±2.35)ng/L(P＜0.01).结论 髋关节置换术患者术后行PCIA,氟比洛芬酯与芬太尼的镇痛效果相似,副作用明显减少,且在一定程度上改善机体免疫力.     

弥散加权磁共振联合经直肠超声定位的前列腺穿刺活检诊断前列腺癌的价值

目的 探讨DWI在前列腺穿刺活检中的运用价值.方法 回顾性分析2009年1月至2010年12月在我院行常规经直肠超声(TRUS)定位下经直肠前列腺穿刺(A组)的410例患者和DWI联合TRUS定位下行前列腺穿刺(B组)的141例患者资料,按前列腺特异性抗原(PSA)＜10μg/L、10 μg/L≤PSA ＜20 μg/L、20 μg/L≤PSA ＜50 μg/L和PSA≥50 μg/L将A、B两组各分为4个亚组,分别比较DWI联合TRUS定位与单纯TRUS定位下经直肠前列腺穿刺活检的诊断率.结果 A组PSA＜ 10 μg/L、10μg/L≤PSA ＜20 μg/L、20 μg/L≤PSA＜ 50 μg/L和PSA≥50 μg/L的患者穿刺诊断率分别为12.1％、31.1％、48.0％和91.2％,B组中对应的患者穿刺诊断率分别为23.7％、35.5％、66.7％和96.3％,两种穿刺方法的诊断率在PSA＜ 10 μg/L的患者中有统计学差异(x2=4.405,P＜0.05).结论 对于PSA＜ 10 μg/L的可疑患者,建议行DWI及TRUS联合定位的可疑病灶加系统穿刺法,从而提高前列腺穿刺的诊断率.     

纳米金抑制血管内皮细胞增殖的分子机制

目的 观察纳米金能否抑制血管内皮细胞增殖,以及作用的分子机制.方法 在96孔板内,无血清培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)24 h,分别加入预先孵育过夜的纳米金(1000 nmol/L)+血管内皮生长因子(VEGF)165(10μg/L)、VEGF165各100μl,噻唑蓝(MTT)比色法观察纳米金对HUVEC增殖的影响.取3种浓度(250、500、1000 nmol/L)纳米金各0.5 ml,分别与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF,10 mg/L)0.5 ml,4℃孵育24 h;再加入过饱和浓度的肝素-琼脂糖凝胶,离心后用bFGF抗体检测上清液和沉淀物中bFGF含量变化.无血清培养HUVEC 5孔,每孔加入VEGF165(10μg/L)100μl;再加入不同浓度纳米金(125、250、500 nmol/L),100μl,作用5 min,用Western blot方法测定磷酸化PLC-γ1蛋白.用AFM(原子力显微镜)表征纳米金与VEGF165作用后粒径大小.结果 纳米金+VEGF165组与VEGF165组的增殖倍数分别为1.75和4.25,表明纳米金抑制HUVEC的增殖(t=14.421,P<0.01).纳米金能够与具有肝素结合位点的bFGF结合.VEGF165浓度不变(10μg/L),随着纳米金溶液浓度的增加,从125、250到500 nmol/L,纳米金抑制PLC-γ1磷酸化越来越明显.AFM观察到纳米金与VEGF165作用后,粒径普遍大于30 nm.结论 纳米金与具有肝素结合位点的VEGF165结合,抑制了VEGF165的信号传导,从而抑制血管内皮细胞增殖.     

富组蛋白1对人表皮细胞株HaCaT增殖和迁移功能的影响

目的 了解富组蛋白1( Hst1)对人表皮细胞株HaCaT增殖、迁移功能的影响. 方法 (1)常规培养HaCaT细胞,按照随机数字表法(分组方法下同)分为对照组与100、30、3μg/mL Hst1组以及10 ng/mL重组人表皮生长因子(rhEGF)组、30 μg/mL Hst1+ 10 ng/mL rhEGF组,每组样本数为27.对照组不添加刺激因素,后5组分别加入相应浓度Hst1和(或)rhEGF,培养24、48、72 h采用细胞计数法检测各组细胞增殖水平.(2)将HaCaT细胞分为对照组与100、30、3μg/mL Hst1组,每组样本数为27.对照组不添加刺激因素,后3组分别加入相应浓度Hst1,培养24、48、72 h采用流式细胞术检测各组细胞周期,计算增殖指数(PI).(3)将HaCaT细胞分为对照组、30 μg/mL Hst1组、10 ng/mL rhEGF组、30 μg/mL Hst1+10 ng/mL rhEGF组、15 μg/mL Hst1+5 ng/mL rhEGF组、15 iμg/mL Hst1+ 10 ng/mL rhEGF组,每组样本数为10.对照组不添加刺激因素,后5组分别加入相应浓度的Hst1和(或)rhEGF培养.将各组细胞分为2份,一份用丝裂霉素C处理2h,另一份不作处理,均行划痕实验,划痕后0(即刻)、16、24 h观测细胞迁移情况并计算划痕愈合面积百分比.对数据行方差分析、LSD-t检验或Dunnettt检验. 结果 (1)培养24 h,10 ng/mL rhEGF组、30 μg/mLHst1+ 10 ng/mL rhEGF组细胞数显著高于对照组(t值分别为3.813、5.410,P＜0.05或P＜0.01).与培养48 h时30、3 μg/mL Hst1组比较除外,其余各Hst1和(或)rhEGF处理组培养48、72 h细胞数均显著高于对照组(t值为7.754～24.979,P值均小于0.01).培养72 h,100 μg/mL Hst1组细胞数为(19.21±0.59)×104个,明显高于30 μg/mL Hst1组的(16.19±0.53) ×104个及3 μg/mL Hst1组的(15.38±0.13)×104个(t值分别为11.391、19.017,P值均小于0.01);30.μg/mLHst1+ 10 ng/mLrhEGF组细胞数高于30、3μg/mL Hst1组及10 ng/mL rhEGF组(t值为4.579 ～34.884,P＜0.05或P ＜0.01).各组细胞数均随培养时间的延长而增加.(2)与对照组培养24、48 h比较,100、30 μg/mL Hst1组G0/G1期细胞百分比降低,S期细胞百分比提高(30 μg/mL Hst1组与对照组培养24 h比较除外),PI值显著提高(t值为4.752 ～16.104,P值均小于0.01).3μg/mL Hst1组仅在培养48 h时PI值较对照组显著增加(t=4.609,P＜0.01).培养72 h,仅100 μg/mL Hst1组PI值显著高于对照组(t =8.005,P＜0.01).各Hst1处理组组间比较,各时相点随Hst1浓度降低,G0/G1期细胞百分比呈升高趋势,S期细胞百分比及PI值均呈下降趋势.各Hst1处理组组内比较,随着培养时间的延长,G0/G1期细胞百分比先降低后增加,S期细胞百分比、PI值均先增加后降低.(3)未用丝裂霉素C处理:划痕后16h,30 μg/mL Hst1组划痕愈合面积百分比为(75.9±3.9)％,显著高于对照组、10 ng/mL rhEGF组[(53.0±3.5)％、(61.7±2.5)％,t值分别为12.241、7.598,P值均小于0.01],低于30 μg/mL Hst1+10 ng/mL rhEGF组、15 μg/mL Hst1+5 ng/mL rhEGF组、15 μg/mLHst1+ 10 ng/mL rhEGF组[(95.0±4.1)％、(97.0±3.7)％、(80.5±5.9)％,t值为-11.324～-2.502,P＜0.05或P＜0.01].丝裂霉素C处理:划痕后16h,30 μg/mL Hst1组划痕愈合面积百分比为(54.1±4.5)％,高于对照组[(35.8±5.7)％,t =7.790,P＜0 01],但较未用丝裂霉素C处理时明显下降(t=- 10.863,P＜0.01);与其他Hst1和rhEGF联合处理组相近(t值为0.061 ～2.030,P值均大于0.05).未用丝裂霉素C处理时及丝裂霉素C处理后各组内划痕后24 h与16 h划痕愈合面积百分比相近(F值为0.856～3.062,P值均大于0.05). 结论 Hst1能促进HaCaT细胞增殖和迁移,与rhEGF联合应用时对细胞增殖有协同促进作用,但对细胞迁移无明显协同作用.     

电针足三里对脓毒症大鼠凝血和纤溶功能的影响

目的 观察电针足三里(ST36)对脓毒症大鼠凝血和纤溶功能的影响.方法 取雄性SD大鼠192只,随机分为6组:生理盐水组(SHAM)、脂多糖组(LPS)、电针非经非穴组(Non-EA)、电刺激足三里组(EA)、迷走神经切断组(VGX)、银环蛇毒素组(α-BGT).分别于注射脂多糖前(0时)、注入后2、4、6h4个时点取8只大鼠经腹主动脉取血后处死,离心取血浆用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、D-二聚体、纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)的水平,用发色底物法检测抗凝血Ⅲ(AT-Ⅲ)的活性.结果 在予以LPS2h后,LPS组(332.71 ±8.23) ng/L和VGX组(449.70±13.74) ng/L和α-BGT组(448.89±16.50) ng/L血浆TNF-α水平较EA组(268.64±5.48) ng/L升高(P＜0.05);4h时,LPS组(681.27±7.72)ng/L和VGX组(776.29±3.23) ng/L和α-BGT组(769.97±5.50) ng/L与EA组(487.21±5.42) ng/L比较,血浆PAI水平升高(P＜0.05);2h时,LPS组(22.51±0.47)ng/L和VGX组(27.10 ±0.30)ng/L和α-BGT组(27.01 ±0.57) ng/L与EA组(10.83 ±0.12) ng/L比较,血浆t-PA水平升高;2h时,LPS组(50.94 ±3.33) ng/L和VGX组(73.48 ±4.45) ng/L和α-BGT组(70.10±2.80) ng/L与EA组(29.47±3.58) ng/L比较,血浆D-二聚体水平升高(P＜0.05);2h时,LPS组(368.76±13.83)和VGX组(244.69 ±4.88)和α-BGT组(241.85 ±5.51)与EA组(426.78 ±3.07)比较,血浆AT-Ⅲ的活性降低(P＜0.05).结论 电针足三里能有效抑制脓毒症大鼠血浆TNF-α的水平,并能减轻炎症反应,对于凝血和纤溶功能紊乱也有明显的改善作用.     

异丙酚预先给药对内毒素诱导大鼠肾小球血管内皮细胞通透性升高的影响

目的 探讨异丙酚预先给药对脂多糖(LPS)诱导大鼠肾小球血管内皮细胞通透性升高的影响.方法 分离、培养SD大鼠肾小球血管内皮细胞,以1×106/ml的密度接种于24孔培养板(200 μl/孔)和transwell小室(100 μl/室),采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=10),正常对照组(C组)不作任何处理;脂肪乳对照组(I 组)加入10%脂肪乳4 μg/ml;异丙酚组(P组)加入异丙酚4μg/ml;LPS组(L组):加入LPS 10μg/ml;LPS+脂肪乳组(L+I组)加入10%脂肪乳4 μg/ml及LPS 10μg/ml;LPS+异丙酚组(L+P组)加入异丙酚4μg/ml 及LPS 10 μg/ml.于加入LPS前30 min加入脂肪乳或异丙酚,药物的浓度均为终浓度.加入LPS后6 h,收集细胞,采用逆转录-聚合酶链反应测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达水平;收集上清液,采用酶联免疫吸附法测定VEGF浓度;测定血管内皮细胞通透性.结果 与C组比较,L组、L+I组和L+P组VEGF mRNA表达上调,上清液中VEGF浓度和血管内皮细胞通透性增加(P＜0.05),而I组和P组上述指标差异无统计学意义(P＞O.05).与L组比较,L+P组VEGF mRNA表达下凋,上清液中VEGF浓度和血管内皮细胞通透性降低(P＜0.05),L+I组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).上清液中VEGF浓度与血管内皮细胞通透性呈正相关(r=0.833,P＜0.05).结论 异丙酚预先给药可抑制LPS诱导大鼠肾小球血管内皮细胞通透性升高,其机制与下调VEGF表达有关.

Abstract：

Objective To investigate the influence of propofol pretreatment on the increased glomerular endothelial cell permeability induced by lipopolysaccharide (LPS) in rats.Methods Glomerular endothelial cells isolated from SD rats were cultured in 24-well plates(200 μl/well) and transwell filters (100 μl/filter) at 1×106/ml and assigned into 6 groups (n=10 each):control group (group C) , introlipid group (group I), propofol group (group P) , LPS group (group L), LPS+introlipid group (group L+I) and LPS+propofol group (group L +P). In group I, 10% introlipid 4 μg/ml was added. In group P, 4 μg/ml propofol was added. In group L, 10 μg/ml LPS was added. In group L+I, 10% introlipid 4 fig/ml combined with 10 μg/ml LPS was added. In group L+ P, 4 μg/ml propofol combined with LPS 10 μg/ml was added. Introlipid or propofol was added 30 min before the administration of LPS and the corresponding concentrations mentioned above were all final concentrations.After 6 h incubation with LPS, the cells were collected for measurement of vascular endothelial growth factor (VEGF) mRNA expression using RT-PCR. The supernatant was collected for determination of the VEGF concentration by ELJSA. The endothelial cell permeability was determined. Results Compared with group C, the expression of VEGF mRNA was up-regulated and the VEGF concentration and endothelial cell permeability were significantly increased in L, L+I and L + P groups (P＜0.05 ) ,but no significant change was found in the parameters mentioned above in I and P groups (P＞0.05). Compared with group L, the expression of VEGF mRNA was downregulated and the VEGF concentration and endothelial cell permeability were significantly decreased in L+P group (P＜0.05), but no significant change was found in the parameters mentioned above in group L+I(P＞0.05). A positive correlation existed between the concentration of VEGF and the permeability of endothelial cells(r= 0.833,P＜0.05).Conclusion Propofol pretreatment can decrease the increased glomerular endothelial cell permeability induced by LPS probably through down-regulation of VEGF expression.     

RFA联合ＴＡＣＥ和HFH对兔肝VX2肿瘤的作用

目的 探讨肝细胞癌(HCC)伴脾功能亢进患者肝脾联合切除术后免疫功能和肝功能的变化.方法 回顾性分析126例HCC伴脾功能亢进患者的临床资料.根据不同手术方式分2组肝脾联合切除58例(A组),单纯肝癌切除68例(B组).比较两组术后血清总胆红素、转氨酶及免疫功能状况.结果 术后7 d血清总胆红素A,B组分别为(25±6)μmol/L和(3 8±12)μmol/L,差异有显著性(P＜0.05);术后7 d,A组和B组谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)分别为(49.8±35.8)U/L和(71.8±57.4)U/L,(45.6±39.3)U/L和(61.4±41.2)U/L,两组差异均有显著性(P＜0.05).A,B组两个月后CD4和CD4/CD8分别为(41.7±4.2)和(32.6±3.5),(1.9±0.21)和(1.1±0.18),差异均有显著性(P＜0.05).A,B组术后并发症发生率分别为7.24%(10/58)和16.18%(11/68),差异无显著性(P＞0.05),A,B组3和5年无瘤生存率分别为50.0%(14/28)和32.26%(10/31),37.50%(3/8)和20.0%(2/10),差异均有显著性(P＜0.05).结论 肝脾联合切除治疗HCC伴脾功能亢进可促进机体T细胞亚群恢复平衡,改善机体抗肿瘤免疫功能,并可减轻术后肝脏胆红素代谢的负担,促进肝功能恢复.术后并发症发生率并不增加,3年和5年无瘤生存率明显提高.     

主要组织相容性一类相关链A基因抗体与慢性移植肾功能减退的相关性研究

目的 探讨肾移植术后主要组织相容性一类相关链A基因(MICA)抗体对稳定期移植肾功能的影响.方法 采用免疫荧光液相芯片技术检测57例肾移植术后超过半年患者的MICA抗体水平及特异性.并同时检测SCr水平,分析MICA抗体对移植肾功能的影响. 结果 57例患者中HLA抗体和MICA抗体均为阴性者38例,HLA抗体阳性、MICA抗体阴性者11例,HLA抗体阴性、MICA抗体阳性者5例,HLA抗体和MICA抗体均阳性者3例.在MICA特异性抗体不同类型中,MICA019抗体5例、MICA027抗体3例、MICA018抗体2例、MICA004和017抗体各1例,MICA抗体阳性值≥6分者9例,占75%(9/12).MICA抗体阳性组8例与MICA抗体阴性组49例在术前输血史、淋巴毒试验、冷缺血时间、术后时间方面差异均无统计学意义(P＞0.05);而在术时年龄方面差异有统计学意义[(32.5±7.9)岁与(43.0±10.4)岁(P=0.008)3.MICA抗体阳性HLA抗体阴性组SCr水平[(117.20±12.30)μmol/L]及SCr异常比例(5/5)均高于HLA抗体和MICA抗体均阴性组[(89.40±28.95)μmol/L及23.7%(9/38),P＜0.05].结论 肾移植术后监测MICA抗体可作为肾移植HLA阴性患者预后重要的标志物,并且MICA抗体与慢性移植肾功能减退存在明显的相关性.     

致敏肾移植受者抗MICA抗体的表达对术后早期排斥反应和肾功能的影响

目的 探讨致敏肾移植受者抗主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因A(MICA)抗体的表达对术后早期排斥反应和肾功能的影响.方法 致敏患者(群体反应性抗体＞20%)29例,肾移植前采用蛋白A免疫吸附柱进行处理,检测吸附前后患者体内的抗MICA抗体表达情况.受者术后采用他克莫司+吗替麦考酚酯+糖皮质激素预防排斥反应.分析抗MICA抗体表达水平与排斥反应和移植肾功能的相关性.结果 29例受者中,抗MICA抗体阳性者8例(27.6%,8/29),表达6种抗体者1例,表达3种抗体者1例,仅表达1种抗体者6例.抗MICA抗体阳性组急性排斥反应发生率为37.5%(3/8),抗MICA抗体阴性组为38.1%(8/21),二者间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).群体反应性抗体(PRA)≥40%者抗MICA抗体的表达率为43.8%(7/16),明显高于PRA＜40%者的7.7%(1/13,P＜0.05).抗MICA抗体阳性受者的血肌酐水平在术后1周时为(135.4±21.4)μmol/L,明显高于抗MICA抗体阴性者的(108.6±31.6)μmol/L(P＜0.05);术后2周时,抗MICA抗体阳性者的血肌酐降至正常范围,与阴性者比较,差异无统计学意义(P＞0.05).全部患者经蛋白A免疫吸附处理后,其抗MICA抗体持续降低.结论 抗MICA抗体在致敏患者中表达率升高,对术后早期移植肾功能的恢复有影响;蛋白A免疫吸附可有效去除致敏患者体内的抗MICA抗体.     

长托宁对脂多糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的 观察长托宁(PHC)对脂多精(LPS)引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用,并探讨其机制.方法 将体外培养HUVEC分为5组:空白对照组、LPS组、LPS/PHC( 10μg/L)组、LPS/PHC(25μ/L)组、LPS/PHC(50μg/L)组噻唑蓝(MTT)比色法测定内皮细胞的存活率:化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)浓度;硝酸还原酶法测定一氧化氮(N0)浓度;定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达;Western blot法检测iNOS蛋白质含量;酶联免疫吸附试验( ELISA)测定核因子-KB (NF-KB)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)活性 结果 与空白对照组比较,LPS组细胞存活率[(60.31±8.76)％比(100.00±0.00)％]明显下降、LDH含量[(326±52) μmol/L比(125±25) μmol/L]和NO浓度[(55.49±10.16) μmol/L比(12.13±11.02) μmol/L]明显增加(P＜0.01);而PHC可以逆转上述效应(P＜0.05).同时PHC可以降低LPS导致的内皮细胞iNOS转录和蛋白质表达水平,下调NF-KB和STAT3的表达(P＜0.05) 结论 长托宁可以减轻LPS对内皮细胞的损伤,其作用可能是通过抑制NF-KB和STAT3信号系统,减少NO生成实现的.     

肿瘤坏死因子-α对人脐静脉血管内皮细胞结构和功能的影响

目的 观察人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉血管内皮细胞EA.hy926结构和功能的影响,并探讨其作用机制.方法 培养人脐静脉血管内皮细胞EA.hy926,分组加入1、10、100 μg/L TNF-α培养24 h,或加入100 μg/L TNF-α培养3、8、12、24 h,Western blot检测细胞中血管扩张刺激磷蛋白(VASP)的表达水平;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞中VASPmRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化.结果 TNF-α干预24h不同浓度组VASP mRNA水平分别为0.993±0.045(对照组)、0.801±0.022(1 μg/L)、0.626 ±0.018(10 μg/L)、0.529±0.017(100 μg/L);蛋白水平分别为0.849±0.021(对照组)、0.788±0.028(1μg/L)、0.364 ±0.018(10 μg/L)、0.317±0.023(100 μg/L);细胞凋亡率分别为(2.5±1.0)％(对照组)、(14.0±1.1)％(1 μg/L)、(24.4±3.8)％(10 μg/L)、(36.0±2.5)％(100 μg/L).100 μg/L TNF-α干预不同时间组VASP mRNA表达分别为0.829 ±0.051(3 h)、0.741±0.029(8 h)、0.669 ±0.026(12 h)、0.528 ±0.017(24 h),蛋白水平分别为0.528±0.201(3 h)、0.470±0.016(8 h)、0.299±0.015(12 h)、0.298±0.016(24 h);细胞凋亡率分别为(5.4±0.9)％(3 h)、(11.4±1.2)％(8 h)、(21.2±1.4)％(12 h)、(36.3±2.1)％(24 h).VASPmRNA及蛋白水平均呈时间及剂量依赖表达降低(P＜0.05),细胞凋亡率呈时间及剂量依赖升高(P＜0.05).结论 TNF-α通过破坏血管内皮细胞结构和功能导致血管内皮细胞通透性增高,呈时间与剂量依赖性.     

多次鞘内注射CREB反义寡核苷酸对神经病理性痛小鼠脊髓NR2A表达的影响

目的 评价多次鞘内注射cAMP反应元件结合蛋白(CREB)反义寡核苷酸对神经病理性痛小鼠脊髓含2A亚基的NMDA受体(NR2A)表达的影响.方法 鞘内置管成功的C57BL/6雄性小鼠40只,体重20 ～ 25 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):生理盐水组(NS组)、CREB同义寡核苷酸组(S组)、CREB错义寡核苷酸组(M组)和CREB反义寡核苷酸组(A组).采用结扎坐骨神经的方法制备小鼠神经病理性痛模型,结扎坐骨神经后第1～6天,4组分别鞘内注射生理盐水5μl、同义寡核苷酸5 μg/5μl、错义寡核苷酸5μg/5μl、反义寡核苷酸5μg/5μl,1次/d.于术前1d、造模后1、3、5、7d时测定小鼠结扎侧足底的机械缩足阈值(PWMT)和热辐射刺激潜伏期(PWTL).于结扎坐骨神经后7、14 d时各取5只小鼠断头处死,取L3～5脊髓,采用Western blot和RT-PCR法测定NR2A的表达水平.结果 与基础值相比,A组小鼠结扎坐骨神经1～7d时PWMT和PWTL差异无统计学意义(P＞0.05),NS组、S组和M组PWMT和PWTL降低(P＜0.05).与NS组、S组和M组相比,A组小鼠结扎坐骨神经后7、14 d时脊髓NR2A mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).与结扎坐骨神经后7d时相比,4组结扎坐骨神经后14 d时小鼠脊髓NR2A mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05).结论 在神经病理性疼痛形成阶段多次鞘内注射CREB反义寡核苷酸可减轻神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓NR2A表达有关.     

硫酸乙酰肝素对乳鼠颅骨成骨细胞增殖及分化成熟的影响

目的探讨硫酸乙酰肝素(heparin sulfate,HS)对乳鼠颅骨成骨细胞增殖及分化成熟的影响。方法酶消化法分离乳鼠颅骨的成骨细胞,培养并进行鉴定。取生长情况良好的成骨细胞制成浓度为2.0×10~4个/m L的细胞悬液,依据在成骨细胞培养基中添加不同浓度的HS,将实验分为A组(0μg/m L)、B组(1μg/m L)、C组(5μg/m L)、D组(10μg/m L)、E组(25μg/m L)、F组(50μg/m L)、G组(100μg/m L)。以A为对照组,其余组为实验组。采用噻唑蓝(MTT)法检测48 h及96 h不同HS浓度下细胞的增殖情况,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)检测试剂盒测定细胞24 h和48 h的AKP活性,Western Blot法定量24 h和48 h成骨标志蛋白I型胶原蛋白(Collagen I)和Runx-2蛋白的表达,茜素红染色法计数14 d成骨细胞基质矿化结节量。结果 MTT检测示,硫酸乙酰肝素在48 h、96 h均抑制成骨细胞的增殖,相比于对照组差异有统计学意义(P0.05)。AKP活性检测示,24 h和48 h的E组和F组的AKP活性相比于A组明显增高(P0.05),且F组的AKP活性最高。Collagen I和Runx-2蛋白表达检测显示,50μg/m L HS作用24 h和48 h后与对照组相比,Runx-2和Collagen I蛋白的表达均升高;100μg/m L HS作用24 h和48 h后与对照组相比,Runx-2和Collagen I蛋白的表达均降低。矿化结节染色示,B、C、D、E、F组均能促进矿化结节的生成,F组对成骨细胞基质矿化作用最强,B、C、D、E和F组相比于A组差异均有统计学意义(P0.05)。而G组的矿化结节数量低于A组。结论 HS的成骨作用显著,且50μg/m L HS促进成骨细胞成熟分化的能力显著优于其他浓度。     

IL-6在人胆管上皮细胞损伤修复中的作用

目的 探讨IL-6在人胆管上皮细胞(BECs)损伤修复中的作用机制.方法 IL-6按浓度分为5组:0 ng/L组,10 ng/L组,50 ng/L组,100 ng/L组,1000 ng/L组,将不同浓度的IL-6分别干预体外培养的BECs,并检测IL-6对转录激活子3(STAT3)磷酸化和三叶因子3(TFF3)表达的影响;将BECs分为未处理组、STAT3-RNAi组(细胞中转入STAT3 RNAi腺病毒)和Control-RNAi组(细胞中转入空RNAi腺病毒),检测行干扰后,IL-6对TFF3表达的影响;分别用未处理组、STAT3-RNAi组、Control-RNAi组BECs制备体外损伤模型,观察IL-6、TFF3对各组细胞的影响.两组数据间比较采用Student's t检验,多组间比较采用单因素方差或Sidak检验.结果 添加IL-6的50 ng/L组、100 ng/L组、1000 ng/L组磷酸化STAT3( p-STAT3)的表达水平分别为0.240±0.052、0.714 ±0.124、0.327± 0.069,明显强于0 ng/L组的0.033±0.011(q=5.246,17.260,7.451,P＜0.05).TFF3 mRNA及其蛋白表达水平随着IL-6浓度的增高而显著增加(q=12.045,9.889,P ＜0.05);IL-6浓度为1000 ng/L时,TFF3 mRNA及其蛋白表达有所回落.行干扰后,STAT3-RNAi组BECs TFF3蛋白表达水平为0.037±0.005,明显低于Control-RNAi组的0.267±0.038和未处理组的0.301 ±0.042(q=12.135,13.929,P＜0.05).体外损伤模型中,IL-6干预BECs 12 h后,STAT3-RNAi组BECs移行速度为(9.1±1.5)μm/h,慢于Control-RNAi组的(25.1±3.8)μm/h(q=7.737,P＜0.05);而STAT3-RNAi组中加入外源性人重组TFF31 g/L后,BECs移行速度为(39.2±4.7)μm/h,比Control-RNAi组显著提高(q=14.507,P＜0.05).结论 IL-6主要通过激活STAT3,继发上调TFF3表达,从而促进人胆管上皮细胞移行和损伤修复.     

复合TCI异丙酚时瑞芬太尼抑制纤维支气管镜检查患者气道反应的半数有效血浆靶浓度

目的 确定复合TCI异丙酚时瑞芬太尼抑制纤维支气管镜检查患者气道反应的半数有效血浆靶浓度(EC50).方法 择期行纤维支气管镜检查患者40例,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,随机分为2组(n=20).两组均以TCI瑞芬太尼和异丙酚麻醉,异丙酚效应室靶浓度3μg/ml,瑞芬太尼效应室靶浓度采用序贯法确定,第1例患者瑞芬太尼的效应室靶浓度5μg/L,相邻靶浓度之比为1.1.A组以检查过程中BIS≤60为合适麻醉深度,B组以检查过程中气道反应≤Ⅱ级为合适麻醉深度.分别计算两组瑞芬太尼抑制气道反应的EC50及其95%可信区间(CI).结果 A组和B组瑞芬太尼的EC50及其95%CI分别为4.50μg/L(95%CI 3.88～5.36μg/L)和4.10ug/L(95%CI 3.31～5.00μg/L),A组EC50高于B组(P＜0.05).结论 复合TCI异丙酚(效应室靶浓度为3μg/L)时,瑞芬太尼抑制纤维支气管镜检查患者气道反应的EC50为4.10μg/L.BIS不适宜作为反映异丙酚复合瑞芬太尼麻醉深度的指标.     

抑肽酶在体外循环心脏手术中的局部应用

目的 探讨体外循环(CPB)心脏手术中在采取综合性血液保护措施的基础上(转流中预充小剂量抑肽酶4～5万KIU/kg、手术失血和术后机器余血回输),再局部应用抑肽酶的血液保护效果.方法 体外循环心脏手术病人20例随机分为对照组(C组10例)、局部应用抑肽酶组(A组10例).手术后0、2、6h分别测定纵隔心包引流液中D-二聚体(D-D)含量、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活性、组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性、蛋白C(PC)含量,记录各组术后纵隔心包引流量、24h血红蛋白丢失量.结果 局部应用抑肽酶组引流液中D-D含量、t-PA活性、PC含量均显著低于对照组(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01),PAI活性高于对照组(P＜0.05),术后24h纵隔心包引流量、血红蛋白丢失量也较对照组明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 在常规采用综合性血液保护措施的基础上,局部应用抑肽酶可收到更佳的血液保护效果.     

氯胺酮对大鼠全肝缺血/再灌注后肺损伤的保护作用及机制

目的 观察10 mg/kg氯胺酮对于大鼠全肝缺血/再灌注诱发的急性肺损伤保护作用及其机制.方法 30只9～10周龄雌性SD大鼠以区组随机法随机分为3组(每组10只),假手术组(Sham组),全肝缺血/再灌注组(IR组)以pringle's法阻断门静脉和肝动脉30 min后再灌注1h.全肝缺血/再灌注氯胺酮预处理组(Ket组),以10 mg/kg氯胺酮于全肝血流阻断前20 min经尾静脉注射预处理.测定各组肺组织干湿重比值(W/D比值);血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量;逆转录/实时聚合酶链式反应( RT-PCR)法测定肺组织中血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、细胞间黏附分子-1( ICAM-1 )mRNA含量;Western blot法测定肺组织中核因子-kb( NF-kJ )/P65含量;各组肺组织HE染色后病理评分.结果 血清AST、ALT含量:IR组[AST:(91±25)U/ml,ALT:(67.0±19.4) U/ml]和Ket组[AST:(85±12) U/ml,ALT:(51.3±9.9) U/ml]均高于Sham组[AST:(29±9) U/ml,ALT:(7.8±2.7) U/ml] (P＜0.05).血清TNF-α、ICAM-1含量:IR组[TNF.α:(23.1±4.8) μg/L,ICAM-1:(34±9)μg/L]和Ket组[TNF-α:(19.1+5.8)μg/L,ICAM-1:(41±7) μg/L]均高于Sham组[TNF-α:(8.7±2.4) μg/L,ICAM-1:(13±5)μg/L](P＜0.05).而Ket组和IR组之间无统计学差异(P＞0.05).W/D比值:IR组(6.9±1.7)和Ket组(5.1±1.1)高于Sham组(3.7±0.7)(P＜0.05),IR组高于Ket组(P＜0.05).肺组织中TNF-α mRNA、ICAM-1 mRNA和NF-kb/P65含量:IR组[TNF-α mRNA:(2.91±0.49)μg/L,ICAM-1 mRNA:(2.39±0.58) μg/L,NF-kb/P65:(1.97±0.17) μg/L]高于Sham组[TNF-αmRNA:(1.75±0.29) μg/L,ICAM-1 mRNA:( 1.63±0.33) μg/L,NF-kb/P65:(1.06±0.24) μg/L]和Ket组[TNF-α mRNA:(2.19±0.52) μg/L,ICAM-1 mRNA:(1.78±0.28)μg/L,NF-kb/P65:(1.33±0.30μg/L](P＜0.05).Sham组和Ket组之间无统计学差异(p＞0.05).肺组织病理评分:Sham组低于IR组和Ket组(P＜0.05),Ket组低于IR组(P＜0.05).相关性:TNF-α mRNA与NF-kb/P65正相关,R=0.849(P＜0.05),ICAM-1 mRNA与NF-kb/P65正相关,R=0.639(P＜0.05).结论 10 mg/kg氯胺酮20 min前预处理对于全肝缺血/再灌注肺损伤有保护作用.     

DCD供者CYP3A5基因型对肝移植受者术后他克莫司个体化用药的指导意义

目的 研究心脏死亡器官捐赠(DCD)供者的CYP3A5基因型对肝移植受者术后早期Tac起始用量的指导意义,为Tac的使用提供个体化方案.方法 选择2010年3月至2013年3月接受DCD供肝移植,且与供者CYP3A5基因型不相同的受者36例,将受者分为实验组和对照组.两组受者术后均采用Tac+吗替麦考酚酯+泼尼松的三联免疫抑制方案,实验组受者根据供者CYP3A5基因型的不同调整Tac的起始用量,对照组受者按照传统方法经验给药.两组受者吗替麦考酚酯和泼尼松的使用无差别.结果 术后7d,实验组受者的血Tac浓度为(7.47±1.83)μg/L,达目标血Tac浓度的受者占72.2％(13/18),对照组为(8.68±5.14)μg/L,达目标血Tac浓度的受者占38.9％(7/18),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组需要调整Tac剂量的受者占22.2％,而对照组受者占55.6％,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).术后3个月内,实验组与对照组急性排斥反应发生率分别为22.2％(4/18)和27.8％(5/18),Tac不良反应发生率分别为11.1％(2/18)和22.2％(4/18),实验组均低于对照组,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 根据DCD供者CYP3A5基因型的不同,可以科学调整Tac的初始剂量,使肝移植受者术后尽早达到目标血Tac浓度,减少排斥反应发生率和降低Tac不良反应,实现Tac的个体化用药.