猕猴血清B病毒抗体三种检测方法的比较

目的对B病毒(B virus)抗体检测的3种方法进行比较,寻求准确、可靠、经济的检疫方法。方法对以HSV-1为抗原的玻片酶免疫法、B病毒为抗原的玻片酶法(EIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)的猕猴血清B病毒抗体检测结果进行比较。结果HSV-1为抗原的EIA与B病毒为抗原的EIA、ELISA检测结果符合率分别为97.7%和95.5%。结论HSV-1为抗原EIA的检测结果与B病毒抗原EIA和ELISA的检测结果一致性较好,可以做为初筛手段,且检测效果较好,投入资金相对最低,达到节约成本的目的。     

B病毒抗原片在猕猴B病毒抗体检测中的应用

目的 建立8病毒玻片免疫酶法（BVEIA）。方法 与HSV－1玻片免疫酶法（HSV－1 EIA）及美国生产的B病毒DIA dot（BV DIA dot)试剂盒进行比较。结果 BV EIA法的阳性检出率比HSV－1 EIA法提高18．10％，比BV DIA dot法提高7．90％，达到国外同类产品的水平。结论 建议在临床上推广应用B病毒抗原片。     

猴B病毒抗体及B病毒相关抗体ELISA检测结果比较

比较了以HSV-1为抗原的ELISA法检测B病毒相关抗体与相同标本在国外以B病毒为抗原检测B病毒抗体的结果。HSV-1相关抗体阳性率为65％(13/20)。B病毒抗体阳性率为77.3％(17/22),另外,作者将经ELISA 和EIA二种方法检测HSV-1相关抗体为阴性的70份猕猴血清送国外作B病毒抗体检查,查出7例阳性(7/70),表明B病毒抗原用于检查受B病毒感染动物的检出率要高于用HSV-1作抗原的相关抗体的检出率。这一结果与国内报道的用HSV-1作抗原和用B病毒作抗原检查B病毒感染动物结果相一致的结论不完全相符,有待于进一步探讨。s     

两种方法检测猕猴B病毒抗体的初步探讨

【摘要】用BV DIAdot Kit和BV EIA抗原片对本中心100份经HSV-1抗原片检测为阳性,150份HSV1抗体阴性的食蟹猴血清进行B病毒抗体检测。结果发现,BV DiAdot Kit对150份阴性血清的阳性检测出率为8．7％,而B、EIA的阳性检测率为18．o％,二者的符合率90．7%。后者阳性检测率明显高于前者。用上述两种方法对100份HSV-1抗体阳性血清（ - )进行检测发现,BV DLAdotKit和BV EIA的阳性检出率均为100％。后者价格低廉且对HSV-1抗体阴性血清的阳性检出率较高,值得在国内猕猴生产和出口单位大力推广。     

猴B病毒抗体不同检测方法的比对

目的猴B病毒(monkey B virus,BV),也称猴疱疹病毒I型(Cercopithecine herpesvirus 1),是重要的人兽共患病原。根据国家标准,猴B病毒作为抗原检测抗体,但由于生物安全问题,抗原制备受到很大限制,因此使用替代抗原进行抗体血清学检测并进行比对验证。方法应用2种ELISA方法(抗原分别为BV和HVP2)和1种免疫酶法EIA方法(抗原为HSV-1)对本实验室135份送检恒河猴血液样品进行筛查,对阳性及可疑样品再以免疫荧光法IFA和Western blot方法(抗原为HSV-1)以及以HSV-1 g C1纯化糖蛋白为抗原的免疫印迹方法验证。结果HVP2-ELISA、BV-ELISA和HSV-1-EIA阳性检出率分别为32.6%、37.8%和34.8%;3种方法检测结果一致的样品占91.1%(123/135),阳性结果可被IFA和WB确证;可疑样品12份,33.3%(4/12)的样品经验证检验为阳性。结论与BV抗原相比,替代抗原HSV-1的敏感性和特异性较HVP2更为接近;阳性样品及可疑样品的确证检验应使用多种方法,避免漏检。     

小鼠泰泽菌抗体IFA检测方法的建立及其与ELISA方法的初步比较

目的 建立小鼠血清中泰泽菌抗体的IFA检测方法。方法 采用IFA方法以泰泽菌抗原片检测人工感染和人工免疫的ICR小鼠血清中抗泰泽菌抗体，并与日本的泰泽菌抗体ELISA检测试剂盒检测结果进行初步比较。结果 用阳性对照血清，抗原片出现特异性蓝绿色荧光，清晰显示出泰泽菌形态，而阴性血清只出现橘红色的本底。在12份人工感染泰泽菌的小鼠早期血清标本中，IFA方法检出4份阳性，8份阴性，阳性检出率33．3％；而ELISA方法检测12份样本均为阴性。另外，在66份人工免疫泰泽菌的小鼠晚期血清样本中，IFA方法检出44份阳性，22份阴性，阳性检出率66．7％；而ELISA方法检出50份阳性，16份阴性，阳性检出率75．7％，结论 建立的小鼠泰泽菌抗体IFA检测方法能够用于小鼠血清中泰泽菌抗体的检测，特别是早期感染的检测。     

病毒性心肌炎患者柯萨奇B组病毒特异性IgM抗体检测的应用

目的 早期诊断成人病毒性心肌炎柯萨奇B组病毒IgM抗体（CBVIgM)。方法 采取免疫酶染色法（酶染玻片法）测患者血清CBVIgM抗体，并与病毒分离和微量细胞中和抗体测定相比较。结果 129例心肌炎患者血清CBVIgM阳性82例，阳性率63.6%;46例心肌炎患者咽拭子作病毒分离，分离出CBV12株，其CBVIgM阳性有11例；46例病毒分离患者的双份血清26份与单份血清（为急性期血清）20份，其中和抗体≥4倍升高和单份血清≥1:320者有31例，31例中CBVIgM阳性为29例。40例健康对照组病毒分离和中和抗体均阴性，其CBVIgM阳性2例。结论 免疫酶染色法检测CBVIgM，方法简单，快速，可靠，其结果与对照组相比有非常显著差异。与病毒分离阳性符合率为91.7%。与血清中和抗体阳性符合率为93.5%。     

小鼠诺如病毒间接免疫荧光检测方法的建立

目的建立小鼠诺如病毒(MNV)的间接免疫荧光试验(IFA)的检测方法。方法将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36 h收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID50的MNV-1灌胃接种BALB/c小鼠,收集感染血清做阳性对照血清。收集人工感染后不同时间点的血清样品,以1:10的稀释度使用IFA法测定感染血清MNV抗体滴度。选取80份送检小鼠血清样品,以IFA和ELISA方法测定,差异样品使用Western blot方法进行验证。结果 MNV-1感染RAW264.7细胞(36~48)h,细胞感染率为60%,以36 h感染细胞状态为佳;IFA法测定感染小鼠血清,小鼠感染1周后抗体水平逐渐提高,在4周时抗体滴度达到最高值,之后维持稳定,采集感染4周的动物血清做IFA方法的阳性质控品;80份血清中,IFA法测定阳性27份,阴性53份,ELISA法测定阳性32份,阴性48份;Western blot方法对差异样品验证,其中阳性3份,阴性2份,IFA法和ELISA法检测符合率分别为96.0%和97.5%。结论 IFA方法检测小鼠诺如病毒基本可以反应小鼠的感染情况,偶有假阴性的出现,可以选择IFA方法和ELISA方法作为初筛,差异样品用Western blot方法验证。     

鼠痘诊断试剂盒研制

本文报告以痘苗病毒为抗原、用以检测鼠痘和痘苗病毒抗体的间接免疫荧光试验(IFA)和酶免疫试验(EIA)试剂盒的实验室研制结果。作者通过阻断试验,与国内同类试剂的比较,以及与其它小鼠病毒免疫血清的反应结果证实试剂盒的特异性好;分别用痘苗病毒抗原和鼠痘病毒抗原进行检测,其阳性检出率无显著差别;比较了IFA、EIA和HI(血凝抑制试验)3种方法检测鼠痘抗体的敏感性,IFA与EIA的阳性血清检出率分别为58％±8.2％和48％±8.3％,均明显高于HI(13％±5.6％),测得的阳性血清滴度,IFA和EIA分别是HI的22.4倍和18.4倍。IFA和EIA检测结果的相符率为92％。试剂盒的重复性尚好,IFA和EIA检测重复率分别为93.1％和93.3％。试剂盒抗原在4℃中1个月内稳定,在-25℃中6个月仍稳定。该试剂盒操作简便、快速,适用于实验小鼠中鼠痘病的诊断和流行病学调查。     

免疫酶染色法检测心肌炎患者柯萨奇Ｂ组病毒特异性ＩgM抗体的研究

目的：研究早期诊断成人病毒性心肌炎柯萨奇Ｂ组病毒ＩgM抗体（ＣＢＶＩgM）的检测方法。方法：用免疫酶染色法（酶染玻片法）测定患者血清ＣＢＶＩgM,并与病毒分离和微量细胞中和抗体检测相比较。结果：129例住院心肌炎患者血清CBVIg 阳性82例（63.5%)、46例心肌炎咽拭子分离出CBV12例，（其CBVIgM阳性11例），病毒分离患者血清（双份26例、单份20例）其CBVIgM阳性者32例，中和抗体≥4倍升高和单份血清≥1：320者共27例。40例健康对照组病毒分离和中和抗体均阴性，CBVIgM阳性２例。结论：酶染玻片法检测ＣＢＶＩgM，方法简单、快速、可靠，其结果与对照组相比有非常显著差异。与病毒分离阳性有９１.6%相符，与血清中和抗体阳性有８４.3%相符。     

B型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用2

目的 制备和鉴定B型流感病毒核衣壳（N）蛋白单克隆抗体（mAb）,建立双抗体夹心捕获抗原ELISA,用于B型流感病毒感染的早期诊断。方法 用重组B型流感病毒N蛋白和B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠制备mAb,采用ELISA间接法、免疫荧光（IFA）和免疫印迹（WB）进行筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验建立双抗体夹心捕获抗原ELISA法检测B型流感病毒 N抗原。结果 获得12株特异性针对B型流感病毒 N蛋白的mAb,识别8个不同的抗原位点,根据mAb识别抗原表位,对mAb进行多种组合的配对试验,筛选出2株单抗BN4和BN8混合作为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的单抗BN1 和BN5混合作为测定抗体,建立了双抗体夹心ELISA法,测定新鲜的漱口液标本的灵敏度达100％,而对冻融的漱口液标本检测灵敏度为83.9％,与其他呼吸道病毒如A型流感病毒、副流感病毒等无交叉反应,特异度达100％。结论 获得特异性好的mAb,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的B型流感病毒抗原的ELISA捕捉法,可用于B型流感病毒感染的早期实验室诊断及流行病学研究。     

含乙型肝炎表面抗原基因重组腺相关病毒的构建及其基因的表达和功能初步研究

OBJECTIVE: To construct recombinant adeno-associated virus (rAAV) carrying hepatitis B surface antigen (HBsAg) gene and study the function of the expressed HBsAg. METHODS: HBsAg gene (subtype ayw) was amplified from PTHBV-1 by PCR and cloned into the adeno-associated virus vector pSNAV to form the recombinant pSNAV-HBsAg, which was transfected into BHK-21 cells by means of lipofectamine. Using G418 selection, a mixed cell line, BHK-HBsAg, was isolated, which was capable of HBsAg expression and was subsequently infected with HSV-1-HSV1-rc/Delta UL2 that was able to package the rAAV. After purification, rAAV-HBsAg was obtained. The expression of HBsAg in BHK-21 cells and 293 cells infected with rAAV-HBsAg were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and the HBsAg antibodies in the sera of rAAV-HBsAg-immunized BalB/C mice were assayed by radio immunoassay. RESULTS: As detected by ELISA, the expressed HBsAg in mixed cell line mounted to 28.6+/-6.72 ng per 5 x 10(6) cells. The BHK-21 cells and 293 cells infected with rAAV-HBsAg were both capable of HBsAg expression, the amount of which augmented with the increase of multiplicity of infection (MOI). BalB/C mice immunized with rAAV-HBsAg produced anti-HBsAg antibodies. CONCLUSIONS: rAAV-HBsAg can induce humoral immune response against HBsAg and therefore can be a promising candidate hepatitis B vaccine, and in addition, it may serve the purpose of exploring possible immunotherapy for chronic HBV infection.     

Evaluation by indirect immunofluorescent assay and enzyme linked immunosorbent assay of the dynamic changes of serum antibody responses against severe acute respiratory syndrome coronavirus

Background Severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) is a newly emerging virus that gives rise to SARS patients with high rates of infectivity and fatality. To study the humoral immune responses to SARSCoV, the authors evaluated lgG and IgM specific antibodies in patients‘ sera.Methods Two methods, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescent assay (IFA) , were used to detect specific serum IgG and IgM against SARS-CoV in 98 SARS patients and 250 controls consisting of patients with pneumonia, heahh-care professionals and healthy subjects. The serum antibody profiles were investigated at different times over one and a half years in 18 of the SARS patients.Results The sensitivity and specificity of ELISA for detecting IgG against SARS-CoV were 100.0% and 97.2% and for IgM 89. 8% and 97.6% respectively; the figures using IFA for IgG were 100.0% and 100.0% and for IgM 81.8% and 100.0% respectively. During the first seven days of the antibodies trace test, no IgG and IgM were detected, but on day 15, IgG response increased dramatically, reaching a peak on day 60,remaining high up to day 180 and decreasing gradually until day 540. On day 15,IgM was detected, rapidly reached a peak, then declined gradually until day 180 when IgM was undetectable.Conclusion The detection of antibodies against SARS virus is helpful in the clinical diagnosis of SARS.     

Production of a fragment of glycoprotein G of herpes simplex virus type 2 and evaluation of its diagnostic potential

INTRODUCTION

Herpes simplex virus type 2 (HSV-2) is the most common cause of genital herpes. Glycoprotein G (gG) is a prototype antigen for type-specific serodiagnosis distinguishing between HSV type 1 (HSV-1) and HSV-2 infections. As immunological diagnosis kits for accurate differentiation between HSV-1 and HSV-2 antibodies can be expensive, there is a need to develop a convenient, sensitive, specific and cost-effective serodiagnostic kit.

METHODS

We successfully expressed a fragment of gG comprising residues 321–580 of HSV-2 with histidine tag (gG_321–580His) in a Bac-to-Bac baculovirus expression system, which had an antigenicity similar to its native counterpart. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using gG_321–580His as the diagnostic antigen and evaluated by comparison with a commercial HerpeSelect 2 ELISA immunoglobulin G kit as reference.

RESULTS

In testing 318 field serum samples, the diagnostic relative sensitivity and specificity of the developed gG_321–580His-ELISA test in qualitative comparison with the commercial kit were 93.81% and 96.74%, respectively, and the accuracy was 94.65%.

CONCLUSION

The study indicates that gG_321–580His has a high diagnostic potential for HSV-2 virus serodiagnosis in humans.     

生殖器溃疡患者杜克雷氏链杆菌、梅毒螺旋体及人类单纯疱疹病毒2型抗体血清学检测及其与HIV感染的关系

目的：检测女性生殖器溃疡患者血清杜克雷氏链杆菌抗体、梅毒螺旋体血清学、人类单纯疱疹病毒2型抗体，并探讨其与人类免疫缺陷病毒(HIV)感染之间的关系。方法：将102例女性生殖器溃疡患者作为研究对象。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清HIV抗体，并以蛋白印迹试验(western blot)进行确认；采用快速血浆反应试验(RPR)筛查梅毒，对螺旋体感染患者进一步进行梅毒螺旋体红细胞凝集试验(TPHA)；采用Westem blot测定人类单纯疱疹2型特异糖蛋白抗体；采用酶免法(EIA)测定抗杜克雷氏链杆菌抗体IgA及IgG。结果：杜克雷氏链杆菌IgG或／及IgA阳性共计30例(30．61％)；梅毒RPR或／及TPHA阳性51例(52．04％)；单纯疱疹2型特异糖蛋白抗体阳性17例(17．35％)。98例患者中，HIV抗体阳性47例(47．96％)。30例软下疳患者中19例HIV抗体阳性(63．33％)，51例梅毒病例中21例(41.18％)呈HIV感染，17例单纯疱疹病毒2型特异糖蛋白抗体阳性者中7例(41．18％)HIV抗体阳性；三者之间HIV抗体阳性率无显著差异，但均有易感倾向。结论：杜克雷氏链杆菌、梅素螺旋体及单纯疱疹2型感染所致的女性生殖器溃疡与HIV感染有密切联系。     

非SARS患儿体内SARS冠状病毒抗体的检测分析

目的探讨非急性重症呼吸综合征(SARS)患儿体内是否存有SARS冠状病毒相关抗体。方法采用国家药品生物制品检定所正式检定通过的2种SARS抗体诊断试剂(间接免疫荧光检测试剂和双抗原夹心ELISA试剂),对广州地区1 060例非SARS患儿血清样本进行检测。结果1 060例非SARS患儿血清样本,间接免疫荧光法检测IgM、IgG均为阴性。双抗原夹心ELISA法检测也仅有2例出现弱阳性。结论非SARS患儿体内并未存在SARS病毒相关抗体。     

间接免疫荧光法检测麻疹抗原在麻疹早期诊断中的临床应用

目的:探讨间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence Assay,IEA)检测麻疹病毒抗原对儿童麻疹病毒(measles virus,MV)感染的早期诊断价值.方法:观察86例临床诊断麻疹的患儿,在发病的不同阶段IFA检测痰液MV抗原和酶联免疫吸附试验(engymelinked imgmunosorbent assay,ELISA)检测血清中MV特异性LgM抗体,采集30份上呼吸道感染患者痰液进行IFA麻疹病毒抗原检测,比较分析检测结果.结果:86例中发病7 d内IFA测抗原ELISA测抗体两种方法的阳性率为分别为97.1%和16.2%;7 d后为33.3%和88.9%,P均＜0.01.IFA测抗原阳性率与检测时间的相关系数为-0.91,P=0.02;ELISA测抗体阳性率与检测时间的相关系数为0.97,P=0.04.30份对照组的标本MV抗原检测均为阴性,IFA测抗原的特异性与敏感性分别是100%和97.1%.结论:IFA测抗原在疾病早期检出阳性率高,阳性检出率与检测时间成负相关,IFA测抗原痰液麻疹病毒抗原是一种早期快速、特异敏感的实验室检测方法.     

ELISA快速诊断小儿呼吸道合胞病毒感染

用ELISA双夹心法、病毒分离和IFA法,平行检测了72例急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物中呼吸道合胞病毒(RSV)抗原,结果诊断RSV感染的阳性率分别为72.2％(52例)、81.9％(53例)和81.1％(44例)。同病毒分离比较,ELISA的敏感性、特异性和诊断符合率分别为86.4％,92.3％和87.57％,IFA的敏感性、特异性和诊断符合率分别为74.6％、100.0％和79.2％。患儿年蛉,病情和标本采集时间等因素,对ELISA敏感性有一定影响。ELISA检测RSV抗原特异、敏感、快速(收到标本后7 h内可获得结果),适用于婴幼儿,尤其9月龄以内小儿RSV感染的早期诊断。