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1.
目的评价xTAG呼吸道病毒群快速检测(Respiratory Virus Panel Fast Array,RVP Fast)技术检测呼吸道病毒的临床应用价值。方法选取经实时荧光定量PCR/RT-PCR筛查的74份呼吸道病毒阳性和4份阴性鼻拭子标本,用RVP Fast和RTPCR同时检测78份标本的8种呼吸道病毒及其亚型(共19型),运用McNemarχ2检验,Kappa检验和线性回归方法对检测结果进行统计处理。结果两种方法检测78份标本有71份结果完全相符,包括55份单个病毒感染标本,12份混合病毒感染标本和4份阴性标本。两种方法检测结果总体比较无统计学差异(P0.05),一致性较好(Kappa=0.960,P0.01),RVP Fast荧光强度中位数(MFI)与实时荧光PCR/RT-PCR阈值循环数(Ct)呈负相关(r=-0.529,P0.01)。结论 RVP Fast芯片技术的检测性能准确可靠,可应用于国内呼吸道病毒感染的快速、高通量检测,具有推广价值。 相似文献
2.
目的 制备和鉴定B型流感病毒核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心捕获抗原ELISA,用于B型流感病毒感染的早期诊断。方法 用重组B型流感病毒N蛋白和B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠制备mAb,采用ELISA间接法、免疫荧光(IFA)和免疫印迹(WB)进行筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验建立双抗体夹心捕获抗原ELISA法检测B型流感病毒 N抗原。结果 获得12株特异性针对B型流感病毒 N蛋白的mAb,识别8个不同的抗原位点,根据mAb识别抗原表位,对mAb进行多种组合的配对试验,筛选出2株单抗BN4和BN8混合作为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的单抗BN1 和BN5混合作为测定抗体,建立了双抗体夹心ELISA法,测定新鲜的漱口液标本的灵敏度达100%,而对冻融的漱口液标本检测灵敏度为83.9%,与其他呼吸道病毒如A型流感病毒、副流感病毒等无交叉反应,特异度达100%。结论 获得特异性好的mAb,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的B型流感病毒抗原的ELISA捕捉法,可用于B型流感病毒感染的早期实验室诊断及流行病学研究。 相似文献
3.
禽流感病毒非结构蛋白1单克隆抗体的制备及其特异性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
为研制禽流感病毒(H5N1)非结构蛋白1(NS1)的特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性,本研究在分别表达了具有良好抗原性的A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白基础上,用A/Viet-nam/1194/04(H5N1)-NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光和免疫印迹对抗体的特异性进行鉴定,通过竞争抑制实验对单抗识别的抗原位点进行分析。结果共获得19株能识别4个H5N1-NS1蛋白不同抗原位点的mAb,亚类测定显示,5株为IgG2a、1株为IgG2b,另外13株为IgG1。这些mAb均与A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白特异性结合,免疫荧光检测均与A型流感病毒(H1N1和H3N2)有交叉反应,而与B型流感病毒无交叉现象。表明成功获得特异性针对H5N1-NS1蛋白的mAb,为进一步研究禽流感病毒NS1蛋白的结构与功能奠定基础。 相似文献
4.
目的 精确分析登革病毒(dengue virus,DENV)非结构蛋白1(non-structural protein 1, NS1)氨基(N)端抗原性和免疫原性,探讨NS1 N端多肽用于分型检测DENV感染可行性。方法 合成4型DENV 标准株NS1蛋白 N端1-15氨基酸残基序列多肽(D-1 P1、D-2 P1、D-3 P1和D-4 P1),采用ELISA方法检测多肽同DENV NS1 血清型特异性单抗和各型DENV分别免疫小鼠血清的反应性,竞争抑制法进一步验证单抗和对应多肽反应特异性。分析4型DENV 标准株NS1 N端1-15氨基酸残基序列多肽在Pubmed中已报道的各型DENV分离株中的保守性。结果 6株DENV 1型特异性单抗(5A48A3, 5A65A2, 5B29A1, 5B71A8, 5C29A3和5E68A17)特异性的同D-1 P1;6株DENV-2 NS1型特异性单抗(5D21A1、5E19A5、 5A62A12、5A70A4、5E30A5和5E48A15)特异性的同D 2 P1反应。D-1 P1仅识别DENV 1免疫小鼠血清, 其他多肽同各型DENV 1免疫小鼠血清反应无差异。DENV-1、2、3、4 NS1 N端保守性依次为98.96%、89.09%、83.58%和57.81%。结论 DENV-1 NS1 N端是DENV-1血清型特异性优势线性表位,该多肽可用于研制诊断DENV-1感染试剂盒;DENV-2 NS1 N端是DENV-2血清型特异性表位,以上研究有助于DENV亚单位疫苗和DENV感染分型诊断试剂盒的研制。 相似文献
5.
Ⅲ型登革病毒NS1单克隆抗体的制备及鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研制Ⅲ型登革病毒(DV3)非结构蛋白1(NS1)单克隆抗体,鉴定其血清型特异性.方法 以具有良好抗原性的重组DV3-NS1蛋白与DV3交替免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光(IFA)和Weatern Blot对抗体的特异性进行鉴定.结果 经交替免疫法免疫Balb/c小鼠,共获得14株抗DV3-NS1单抗,其亚类测定1株为IgG2a,余为lgG1.其中3株特异性结合DV3及DV3-NS1蛋白,4株能同时结合4型登革病毒NS1蛋白,其余7株与其他3型登革病毒NS1蛋白存在交叉反应.结论 成功获得了针对DV3-NS1的特异性单抗及交叉性单抗,将为进一步研究登革病毒NS1蛋白的结构与功能及临床诊断试剂的研发奠定基础. 相似文献
6.
目的建立两种不同循环参数的实时荧光定量PCR,检测包括流感病毒、冠状病毒等18种(型/亚型)呼吸道病毒。方法引用文献报道的18种(型/亚型)呼吸道病毒引物和探针,建立两种不同循环参数的实时荧光定量PCR法,考核方法的敏感性、特异性和准确性,并用临床标本进行验证。结果成功建立了可检测18种(型/亚型)呼吸道病毒的两种不同循环参数的实时荧光定量PCR法;该法特异性较好,最低检测限为10拷贝数/μL,变异系数(CV)为1.26%~3.43%,重复性良好;408份临床标本中,用该法检测鼻拭子标本阳性率为63.2%(225/356),肺泡灌洗液标本阳性率为25.0%(13/52)。结论建立的实时荧光定量PCR法简便、特异、敏感、稳定,适用于临床常见呼吸道病毒感染的早期诊断。 相似文献
7.
目的 分析急性上呼吸道感染儿童患者的病原学及临床特征。方法 以南方医科大学珠江医院2009年11月至2015年9月收治的2 665例急性上呼吸道感染儿童为研究对象,采用qRT-PCR方法检测临床上常见的8种呼吸道病毒(流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒、人类博卡病毒、人类冠状病毒、人类偏肺病毒、鼻病毒)。结果 共检测患儿标本2 665份,其中阳性标本1 566份,总阳性率为58.8%。四个季节中8种呼吸道病毒检出率存在明显差异,并以春季最高,夏冬季次之,秋季最低。儿童呼吸道病毒感染率随着年龄增加而逐渐降低,并以0~1岁婴幼儿病毒检出率最高64.5%。男童呼吸道病毒感染率高于女童,住院患儿呼吸道病毒检出率高于门诊患儿。混合感染标本260份,占阳性标本数的16.6%,主要集中于0~3岁儿童患者标本中,并因季节而异,秋冬季节较少,而春夏季节较为普遍。咳嗽为呼吸道病毒感染的主要临床症状,咳痰和流涕次之,临床症状在8种呼吸道病毒感染患儿中存在差异。结论 本调查分析了急性上呼吸道感染患儿中8种常见呼吸道病毒的病原学及临床特征,为指导临床治疗及防控提供相关数据。 相似文献
8.
基孔肯雅病毒属于披膜病毒科甲病毒属,主要通过携带病毒的蚊媒叮咬感染人类引起基孔肯雅热,表现为自限性发热、皮疹、肌痛、关节痛,其中关节疼痛可延续数月至数年,甚至导致关节畸形。由于基孔肯雅病毒与登革病毒、寨卡病毒等虫媒病毒具有相同的传播媒介,且急性期临床症状相似,但治疗原则与疾病结局完全不同,因此,实验室的确切诊断是基孔肯雅热防治的关键。本文就近几年基孔肯雅病毒在实验室诊断方面的进展作一综述。 相似文献
9.
目的 建立基于单克隆抗体的甲型流感病毒非结构蛋白1(NS1)抗原检测的酶联免疫吸附(ELISA)法.方法 用甲型流感病毒NS1特异性单克隆抗体,通过抗体的优化组合,建立双抗体夹心抗原捕获ELISA,检测不同来源的流感病毒及副流感病毒.结果 对多种抗体组合进行反复筛选,最终确定了特异性检测到甲型流感病毒的NS1蛋白,而与乙型流感病毒和副流感病毒不发生交叉反应的最佳抗体组合.该方法 检测重组H5N1-NS1[A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1和A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1]蛋白的灵敏度最低检测值分别为15.6 ng/ml和240 pg/ml.结论 成功建立了甲型流感病毒NS1抗原捕获ELISA,为建立甲型流感病毒感染早期诊断新方法 奠定基础. 相似文献
10.
目的分析急性上呼吸道感染患者中呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的流行特征及临床特点。方法以南方医科大学珠江医院2009年11月至2016年6月收治的具有发热呼吸道症状患者为研究对象,采集鼻拭子标本3446份,提取标本RNA,采用qRT-PCR方法进行RSV检测,并对RSV阳性标本进行临床上常见的7种(14个亚型)呼吸道病毒的检测,以了解混合感染情况。结果共检测患者标本3446份,其中RSV阳性标本672份,总阳性率为19.5%。4个季节中RSV检出率差异具有统计学意义(χ2=133.184,P<0.001),并以春节最高,冬季次之,夏秋两季最少。RSV感染患者随着年龄的增长检出率逐渐降低,并以3岁及以下儿童检出率最高,占RSV阳性标本数的90.8%(610/672),儿童患者检出率明显高于成年患者(χ2=266.433,P<0.001),男性患者检出率明显高于女性患者(χ2=4.940,P=0.026),住院患者检出率明显高于门诊患者(χ2=60.433,P<0.001)。混合感染标本160份,其中双病毒感染标本143份,3种病毒混合感染16份,4种病毒混合感染1份,并以鼻病毒和呼吸道合胞病毒混合感染率最高,住院患者混合感染率高于门诊患者(χ2=20.896,P<0.001)。与非RSV感染者相比,RSV感染者咳嗽、咳痰、气促/呼吸困难等临床症状发生率均较高(χ2_(咳嗽)=108.934,χ2_(咳痰)=60.626,χ2_(气促/呼吸困难)=38.139,均P<0.001),而咽喉痛、头痛、乏力、寒战/畏寒和肌肉酸痛等发生率相对较低(χ2_(咽喉痛)=46.499,χ2_(头痛)=29.516,χ2_(乏力)=16.972,χ2_(寒战/畏寒)=9.616,χ2_(肌肉酸痛)=8.801,均P<0.001)。此外,RSV感染组与非RSV感染组在临床诊断上也存在统计学差异(χ2=212.157,P<0.001)。结论RSV是引起3岁以下儿童呼吸道病毒感染的主要病原体,也是引起3岁以下儿童呼吸道病毒感染住院的主要原因,咳嗽、咳痰及气促/呼吸困难的发生率较高,临床上应加强对该年龄段儿童的防护。 相似文献